CN101663037A

CN101663037A - 新的1,8-二氮杂萘化合物

Info

Publication number: CN101663037A
Application number: CN200880012665A
Authority: CN
Inventors: D·圭亚迪恩; J·J·黑尔; S·科坦达拉曼
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 2007-04-18
Filing date: 2008-04-14
Publication date: 2010-03-03
Also published as: EP2136810A1; AU2008241503A1; WO2008130527A1; US20100056563A1; JP2010524935A; CA2683758A1; EP2136810A4

Abstract

本发明涉及用作HIF脯氨酰羟化酶抑制剂以治疗贫血和类似病症的二氮杂萘化合物。

Description

新的1，8-二氮杂萘化合物

背景技术

细胞和组织供氧不足与贫血和局部贫血有关，贫血被定义为血液携氧能力不足，局部贫血则是由于血管收缩或堵塞导致供血被限制。造成贫血的原因包括红细胞减少(出血)、红细胞被过度破坏(溶血)或红细胞生成缺陷(由骨髓中的前体细胞生成红细胞)。贫血症状包括虚弱、眩晕、疲劳、苍白、认知功能障碍和生活质量整体下降。慢性和/或严重贫血可导致心肌衰弱加重、脑或周围血管局部贫血并导致心力衰竭。局部贫血被定义为某组织或器官的绝对或相对缺氧，造成局部贫血的原因包括动脉硬化症、糖尿病、血栓栓塞、低血压等疾病。心脏、脑和肾对供血不足造成的局部贫血应激特别敏感。

贫血的主要药物治疗为使用一些重组人促红细胞生成素(EPO)变体。对于与肾病有关的贫血、化疗引起的贫血、HIV治疗引起的贫血或失血造成的贫血，使用重组EPO可以提高激素供应量、增加红细胞数量以及提高血液的携氧能力。EPO替代治疗不总是足以达到最佳的促进红细胞生成的效果(例如，对于缺铁性贫血患者)，并且具有一定风险。

缺氧诱导因子(HIF)已被认为是低氧环境中细胞反应的主要调节因子。HIF是一种异二聚体基因转录因子，包含一个高度受控的α-亚基(HIF-α)和一个组成型表达的β-亚基(HIF-β，也被称为ARNT，或芳香烃受体核转运)。据报道，HIF目标基因涉及红细胞生成(例如，促红细胞生成素(EPO)和EPO受体)、糖酵解和血管生成(例如，血管内皮生长因子(VEGF))的各个方面。涉及铁的吸收、转运和利用以及血色素合成的蛋白质的基因也是HIF的目标基因。

在正常的氧化作用下，HIF-α是与分子氧发生反应的底物，此反应受亚铁-、2-酮戊二酸-和抗坏血酸依赖型双加氧酶催化，它们被分别称为PHD-1(EGLN2，或产卵异常9同源2，PHD2(EGLN1)，和PHD3(EGLN3)。HIF-α的脯氨酸残基被羟基化(例如，HIF-1α的Pro-402和Pro-564残基)，所得产物是抑癌蛋白von-Hippel Lindau的靶物，此蛋白质是参与蛋白质泛素化的E3泛素连接酶多蛋白复合体的一个组分。在低氧化作用下，HIF-α羟基化反应的效率较低，HIF-α会与

发生二聚化HIF二聚体被转运到细胞核内与HIF靶基因的缺氧反应增强子元件结合。

已知在缺氧条件下以及暴露于缺氧模拟剂后，HIF的细胞水平会增加。缺氧模拟剂包括但不限于具体金属离子(例如，钴、镍、锰)、铁螯合剂(例如，去铁胺)和2-酮戊二酸类似物(例如，N-乙二酰甘氨酸)。本发明的化合物可以抑制HIF脯氨酰羟化酶(PHD-1，PHD-2，PHD-3)，还可以调控HIF水平。因此这些化合物可用于治疗和/或预防需要调控HIF的疾病或症状，例如贫血和局部贫血。作为重组促红细胞生成素疗法的替代疗法，本发明的化合物提供了一种更简单、适用面更广的贫血治疗方法。

发明概述

本发明涉及抑制HIF脯氨酰羟化酶的化合物，以及它们在增强促红细胞生成素的内源生成，治疗与红细胞生成素的内源生成降低相关的病症(例如贫血和其他类似病症)中的用途，以及含有此化合物和药物载体的药物组合物。

发明详述

一方面，本发明提供了具有式I的化合物：

I

或其可作药用的盐或溶剂化物，其中

m为0或1；

n为1或2；

p为0、1或2；

R¹、R²和R³独立地选自：

i)氢，

ii)-C₁-C₁₀烷基，所述-C₁-C₁₀烷基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代，

iii)-C₃-C₁₀环烷基，所述-C₃-C₁₀环烷基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代，

iv)-C₂-C₁₀烯基，所述-C₂-C₁₀烯基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代，

v)-C₅-C₁₀环烯基，所述-C₅-C₁₀环烯基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代，

vi)-C₂-C₁₀炔基，所述-C₂-C₁₀炔基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代，

vii)芳基，所述芳基任选被1-3个独立地选自R^b和羟基的基团取代，

viii)卤素，

ix)氰基，

x)杂芳基，所述杂芳基任选被1-3个独立地选自R^b的基团取代，

xi)-O-C₁-C₁₀烷基，所述-O-C₁-C₁₀烷基任选被1-5个独立地选自下列的基团取代：氟、羟基、氧代基、氰基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、-C₁-C₆烷氧基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、-CO₂R⁷、-NR⁸R⁹、-CONR⁸R⁹、-OCO₂R⁷、-OCONR⁸R⁹、-NR¹⁰CO₂R⁷、-NR¹⁰CONR⁸R⁹和-S(O)_pR¹⁰；

xii)-O-芳基，所述-O-芳基任选被1-3个独立地选自R^b和羟基的基团取代，

xiii)-O-杂芳基，所述-O-杂芳基任选被1-3个独立地选自R^b的基团取代；

xiv)-SO_P-C₁-C₁₀烷基，所述-SO_P-C₁-C₁₀烷基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代；

xvi)-SO_P-芳基，所述-SO_P-芳基任选被1-3个独立地选自羟基和R^b的基团取代；或

R¹和R²，或R²和R³连接以形成5到8元环，所述环任选被1-3个独立地选自下列的基团取代：氟、苯基、取代的苯基、杂芳基、取代的杂芳基、-CONR⁸R⁹、-CO₂R³和-NR⁸R⁹；其中所述环为部分或完全不饱和环，具有0、1或2个独立地选自-NR⁷-、-O-和-S(O)_p-的杂原子；

R⁴选自：

i)氢；

ii)-C₁-C₁₀烷基，所述-C₁-C₁₀烷基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代；

iii)-(C₀-C₁₀烷基)C₃-C₁₀环烷基，所述-(C₀-C₁₀烷基)C₃-C₁₀环烷基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代，

iv)-C₂-C₁₀烯基，所述-C₂-C₁₀烯基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代；

v)-(C₀-C₁₀烷基)C₅-C₁₀环烷基，所述-(C₀-C₁₀烷基)C₅-C₁₀环烷基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代；

vi)-C₂-C₁₀炔基，所述-C₂-C₁₀炔基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代；

vii)-(C₀-C₁₀烷基)芳基，所述-(C₀-C₁₀烷基)芳基任选被1-3个独立地选自羟基和R^b的基团取代；和

ix)-(C₀-C₁₀烷基)杂芳基，所述-(C₀-C₁₀烷基)杂芳基任选被1-3个独立地选自R^b的基团取代；

R⁵和R⁶独立地选自：

i)氢；

ii)C₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基任选被羟基、-SH、-NH_2或-CO₂H取代；

iii)三氟甲基；和

iv)2，2，2-三氟乙基；

R⁷选自：

i)氢；

ii)-C₁-C₁₀烷基；

iii)-(CH₂)_1-6-C₃-C₈环烷基；和

iv)-(CH₂)_1-6苯基；

R⁸、R⁹和R¹⁰独立地选自：

i)氢；

ii)-C₁-C_6烷基；

iii)-C₃-C₆环烷基，其中烷基和环烷基分别任选被1-5个独立地选自下列的基团取代：氟、羟基、氧代基、氰基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、-C₁-C₆烷氧基、取代的-C₁-C₆烷氧基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、-S(O)_p烷基和-S(O)_p芳基；

iv)芳基，所述芳基任选被1-3个独立地选自下列的基团取代：C₁-C₆烷基、卤素、羟基、氰基、-CO₂(C_1-3烷基)、-CONR¹¹R¹²、-OCO₂(C_1-3烷基)、-OCONR¹¹R¹²、和-S(O)_p(C_1-3烷基)；和

v)杂芳基，所述杂芳基任选被1-3个独立地选自下列的基团取代：C₁-C₆烷基、卤素、羟基、氧代基、氰基、-CO₂(C_1-3烷基)、CONR¹¹R¹²、-OCO₂(C_1-3烷基)、-OCONR¹¹R¹²、和-S(O)_p(C_1-3烷基)；或R⁸和R⁹与它们所连接的N原子一起形成饱和或部分饱和的5到8元环，所述环具有0、1或2个选自-O-、-NR⁷-和-S(O)_p-的另外的杂原子，其中所述环任选被甲基或羟基取代；

R¹¹和R¹²独立地选自：

i)氢原子；

ii)C₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基任选被羟基取代；或R¹¹和R¹²与它们所连接的N原子一起形成饱和或部分饱和的5到8元环，所述环含有0、1或2个选自-O-、-NR⁷-和-S(O)_p-的另外的杂原子；

R^a选自氟、羟基、氧代基、氰基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、-C₁-C₆烷氧基、取代的-C₁-C₆烷氧基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、-CO₂R⁷、-NR⁸R⁹、-CONR⁸R⁹、-OCO₂R⁷、-OCONR⁸R⁹、-NR¹⁰CO₂R⁷、-NR¹⁰CONR⁸R⁹和-S(O)_pR¹⁰；R^b选自卤素、氰基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基、取代的-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆烷氧基、取代的-C₁-C₆烷氧基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、-CO₂R⁷、-NR⁸R⁹、-CONR⁸R⁹、-OCO₂R⁷、-OCONR⁸R⁹、-NR¹⁰CO₂R⁷、-NR¹⁰CONR⁸R⁹和-S(O)_pR¹⁰。

在本发明的一个实施方案中，R¹、R²和R³分别独立地选自氢和卤素。

一组具有式I的化合物，其中R¹、R²和R³中的一个为氢，并且其余两个独立地选自i)氢，ii)C₁-C₆烷基，所述C₁-C₆烷基任选被1-3个独立地选自R^a的基团取代，iii)C₃-C₈环烷基，所述C₃-C₈环烷基任选被1-3个独立地选自C₁-C₄烷基、CF₃和R^a的基团取代，iv)芳基，所述芳基任选被1或2个独立地选自羟基和R^b的基团取代，v)卤素，vi)氰基，vii)杂芳基，所述杂芳基任选被1或2个独立地选自R^b的基团取代，viii)-O-C₁-C₆烷基，所述-O-C₁-C₆烷基任选被1-3个独立地选自下列的基团取代：氟、羟基、氧代基、氰基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、-C₁-C₆烷氧基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、-CO₂R⁷、-NR⁸R⁹、-CONR⁸R⁹、-OCO₂R⁷、-OCONR⁸R⁹、-NR¹⁰CO₂R⁷、-NR¹⁰CONR^8R9和-S(O)_pR¹⁰；ix)-O-芳基，所述-O-芳基任选被1或2个独立地选自羟基和R^b的基团取代，x)-O-杂芳基，所述-O-杂芳基任选被1-2个独立地选自R^b的基团取代；xi)-SO_p-C₁-C₆烷基，所述-SO_p-C₁-C₆烷基任选被1-3个独立地选自R^a的基团取代；和xii)-SO_p-芳基，所述-SO_p-芳基任选被1-3个独立地选自羟基和R^b的基团取代。所有其他变量均如式I下面所定义。

这组化合物中，存在一组化合物，其中R¹为氢，R²和R³中的一个为氢，另一个选自i)氢，ii)卤素，iii)氰基，iv)任选被1-3个氟取代的-C₁-C₄烷基，和iv)任选被1-3个氟取代的-O-C₁-C₄烷基。其中一组化合物，其中R¹和R²均为氢，并且R³选自氢、-O-C₁-C₄烷基、氰基和卤素。另一组化合物，其中R¹和R³均为氢，并且R²选自氢、-O-C₁-C₄烷基、氰基和卤素。

另一组具有式I的化合物，其中R⁴为-C₁-C₄烷基，所述-C₁-C₄烷基任选被选自下列的基团取代：C(O)OH、C(O)O-C₁-C₄烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基。所有其他变量均如式I下面所定义。

这组化合物中，存在一组化合物，其中R⁴为被苯基取代的-C₁-C₄烷基，其中苯基是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的基团取代：i)任选被1-3个氟取代的-C₁-C₃烷基，ii)卤素，iii)氰基，iv)C(O)NH₂，和v)任选被1-3个氟取代的-O-C₁-C₃烷基。其中一组化合物，其中R⁴为苄基，其中苯基部分任选被1或2个独立地选自卤素、氰基和三氟甲基的基团取代。

这组化合物中的另一组化合物，其中R⁴为被杂芳基取代的-C₁-C₄烷基，其中杂芳基是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的基因取代：i)任选被1-3个氟取代的-C₁-C₄烷基，ii)卤素，iii)氰基，iv)苯基，和v)任选被1-3个氟取代的-O-C₁-C_4烷基。其中一组化合物中，其中杂芳基是未取代的、单取代的或二取代的，并且选自苯并噻唑、苯并噁唑、噁唑、异噁唑、噁二唑(例如1，2，4-噁二唑和1，3，4-噁二唑)、噻唑、异噻唑和噻二唑(例如1，2，4-噻二唑和1，3，4-噻二唑)。另一组化合物中，其中杂芳基和取代的杂芳基选自苯并噻唑、被卤素取代的苯并噻唑、异噁唑、被苯基取代的异噁唑、1，2，4-噁二唑、被苯基取代的1，2，4-噁二唑、噻唑、被苯基取代的噻唑、被C₁-C₄烷基取代的噻唑、被二(C₁-C₄)烷基取代的噻唑、1，3，4-噁二唑和被苯基取代的1，3，4-噁二唑。

另一组具有式I的化合物是具有式Ia的那些：

Ia

其中，m、R²、R³、R⁵、R⁶和R⁷如式I下面所定义，并且R⁴′选自C(O)OH、C(O)O-C₁-C₄烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基。

在式Ia的这组化合物中存在一组化合物，其中R²和R³独立地选自氢、卤素、氰基和任选被1-3个氟取代的C₁-C₃烷基。其中一组化合物中，其中R²为氢，并且R³选自氢、卤素、氰基、三氟甲基和三氟甲氧基。另一组化合物中，其中R³为氢，并且R²选自氢、卤素、氰基、三氟甲基和三氟甲氧基。

在式Ia的这组化合物中存在另一组化合物，其中R4′选自i)苯基，所述苯基任选被1或2个独立地选自卤素原子、氰基和三氟甲基的基团取代，ii)选自下列的杂芳基和取代的杂芳基：苯并噻唑、被卤素取代的苯并噻唑、异噁唑、被苯基取代的异噁唑、1，2，4-噁二唑、被苯基取代的1，2，4-噁二唑、噻唑、被苯基取代的噻唑、被C₁-C₄烷基取代的噻唑、被二(C₁-C₄)烷基取代的噻唑、1，3，4-噁二唑和被苯基取代的1，3，4-噁二唑。

本发明的代表化合物包括：

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(4-氯苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(4-溴苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(4-氰基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(4-甲基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸；

N-{[1-(2-氟-4-三氟甲基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-7-甲氧基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({4-羟基-6-碘-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({6-氰基-4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢喹啉-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)-L-丙氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)-D-丙氨酸；

N-({1-[4-(氨基羰基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-[4-(三氟甲基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)-L-丝氨酸；

N-({1-[4-(三氟甲基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)-L-天冬氨酸；

(2S)-2-[({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]丁酸；

N-[(4-羟基-2-氧代-1-丙-2-炔-1-基-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(3-苯基异噁唑-5-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(5-苯基-1，2，4-噁二唑-3-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(3-苯基-1，2，4-噁二唑-5-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-{[1-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸；

N-({1-[(5-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({1-[(4-叔丁基-1，3-噻唑-2-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({1-[4，5-二甲基-1，3-噻唑-2-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(5-苯基-1.3，4-噁二唑-2-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

{[(4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基}氨基}乙酸；

{[(6-氯-4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]氨基}乙酸；

(2S)-2-({[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}氨基)丙酸；

(2S)-2-[({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]琥珀酸；

({[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-6-碘-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}氨基)乙酸；

2-[({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丙酸；

(2S)-2-[9{4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基]氨基]丁酸；

(2S)-2-[({1-[(5-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]丙酸；

(2R)-2-[({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]琥珀酸；

(2S)-2-({[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}氨基)琥珀酸；

(2S)-2-{[(4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]氨基}丙酸；

(2S)-2-[({1-[2-氟-4-(三氟甲基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]丙酸；和

({[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-6-氯-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}氨基)乙酸；或其可作药用的盐或溶剂化物。

除非另有规定，否则本文中使用的“烷基”包括支链和直链饱和脂族烃基团，包括具有指定碳原子数的所有异构体；例如，“C_1-6烷基”(或“C₁-C₆烷基”)包括所有己基烷基和戊基烷基异构体以及正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正丙基、异丙基、乙基和甲基。“亚烷基”是指支链和直链饱和脂族烃基团，包括具有指定碳原子数的所有异构体，并且具有两个末端链连接点；例如，“A-C₄亚烷基-B”代表，例如，A-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-B、A-CH₂-CH₂-CH(CH₃)-CH₂-B、A-CH₂-CH(CH₂CH₃)-B、A-CH₂-C(CH₃)(CH₃)-B等。“烷氧基”代表具有指定碳原子数并通过氧桥连接的直链或直链烷基；例如“C₁-C₆烷氧基”包括-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、-O(CH₂)₅CH₃等。

除非另外特别说明为仅是未被取代的或仅是被取代的，否则烷基和烷氧基是未被取代的或在一个或多个碳原子上被1至3个取代基取代(也称为“任选取代的”)。除非具体规定了取代基，否则被取代的或者任选被取代的烷基和烷氧基的取代基独立地选自卤素、NH₂、N(C₁-C₆烷基)₂、NO₂、氧代基、CN、N₃、-OH、-O(C₁-C₆烷基)、C₃-C₁₀环烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、(C₀-C₆烷基)S(O)_0-2(C₀-C₆亚烷基)-、(C₀-C₆烷基)C(O)NH-、H₂N-C(NH)-、-O(C₁-C₆烷基)CF₃、(C₀-C₆烷基)C(O)-、(C₀-C₆烷基)OC(O)-、(C₀-C₆烷基)O(C₁-C₆亚烷基)-、(C₀-C₆烷基)C(O)_1-2(C₀-C₆亚烷基)-、(C₀-C₆烷基)OC(O)NH-、-NH(C₁-C₆亚烷基)NHC(O)NH(C₁-C₆烷基)、-NHC(O)OC₁-C₆烷基、-NH(C₁-C₆亚烷基)NHSO₂(C₁-C₆烷基)、-(C₀-C₆亚烷基)NHSO₂(C₁-C₆烷基)、芳基、芳烷基、杂环基和杂环基烷基，其中芳基、芳烷基、杂环基和杂环基烷基任选被1-3个独立地选自卤素和氰基的基团取代。

术语“C_3-10环烷基”(或“C₃-C₁₀环烷基”)是指具有总共三至十个环碳原子的环烷烃(即环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基)。

术语“C_2-10烯基”(或“C₂-C₁₀烯基”)是指至少含有一个碳-碳双键的直链或支链二至十碳链。烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2，4-己二烯基等。术语“C_5-10环烯基”(或“C₅-C₁₀环烯基”)是指环中具有5至10个碳原子且含有至少一个碳-碳双键的非芳香族单环。

术语“C_2-10炔基”(或“C₂-C₁₀炔基”)是指至少含有一个碳-碳三键的直链或支链二至十碳链。炔基包括但不限于乙炔基、炔丙基、1-丙炔基、2-丁炔基等。

术语“芳基”是指芳香族单碳环和多碳环环系，其中多环系中的各个碳环是稠合的或通过单键彼此连接在一起。合适的芳基包括苯基、萘基和联苯基。

术语“杂芳基”(或杂芳族基团)是指5或6元芳香族单环或7至12元芳香族双环，所述环由碳原子和一个或多个选自N、O和S的杂原子组成。对于含有至少一个氮原子(例如吡啶)或至少一个硫原子(例如噻吩)的取代的杂芳环，这类取代基可以为导致N-氧化物或S-氧化物(包括S-二氧化物)形成的那些。单环杂芳环的代表例子包括吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噻吩基(或噻吩基)、呋喃基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基和噻二唑基。双环杂芳环的代表例子包括苯并三唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、色满基、异色满、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、咪唑并(2，1-b)(1，3)噻唑(例如)、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基和苯并噁唑基。

除非另外特别说明为仅是未被取代的或仅是被取代的，否则环烷基、环烯基、环烷基、芳基(包括苯基)和杂芳基是未被取代的或取代的(也称为“任选被取代的”)。除非具体规定了取代基，否则被取代的或者任选被取代的环烷基、环烯基、芳基(包括苯基，并作为独立取代基或作为取代基的一部分例如在芳氧基和芳烷基中)、杂芳基(作为独立取代基或作为取代基的一部分例如在杂芳氧基和杂芳烷基中)的取代基是1-3个独立地选自下列的基团：卤素、任选被1-5个氟取代的C₁-C₆烷基、NH₂、N(C₁-C₆烷基)₂、NO₂、氧代基、CN、N₃、-OH、任选被1-5个氟取代的-O(C₁-C₆烷基)、C₃-C₁₀环烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、(C₀-C₆烷基)S(O)_0-2-、芳基-S(O)_0-2-、(C₀-C₆烷基)S(O)_0-2(C₀-C₆烯基)-、(C₀-C₆烷基)C(O)NH-、H₂N-C(NH)-、(C₀-C₆烷基)C(O)-、(C₀-C₆烷基)OC(O)-、(C₀-C₆烷基)O(C₁-C₆烯基)-、(C₀-C₆烷基)C(O)_1-2(C₀-C₆烯基)-、(C₀-C₆烷基)₂NC(O)-、(C₀-C₆烷基)OC(O)NH-、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、卤代芳基、卤代芳烷基、卤代杂芳基、卤代杂芳烷基、氰基芳基、氰基芳烷基、氰基杂芳基和氰基杂芳烷基。

术语“卤素”(或“卤代”)是指氟、氯、溴和碘(或指氟代(F)、氯代(Cl)、溴代(Br)和碘代(I))。

在用语例如“C_0-6亚烷基”中的术语“C₀”是指直接共价键；或者当在用语例如“C_0-6烃基”中使用时是指氢。同样，当某基团中定义存在的原子数目的某个整数为零时，则表示其相邻原子直接由化学键连接，例如，在

结构中，其中s为零、1或2，当s为零时，结构为

或表示所指示的原子不存在；例如-S(O)₀-即为-S-。

除非明确说明了相反情况，否则“不饱和”环为部分或全部不饱和环。例如，“不饱和单环C₆碳环”是指环己烯、环己二烯和苯。

除非明确说明了相反情况，文中引用的所有范围为包含界限在内。例如，说一个杂环含有“1到4个杂原子”，则表示杂环中可含有1、2、3或4个杂原子。

当任何变量在描绘和描述本发明化合物的任何成分或任何式中出现一次以上时，其在每次出现时的定义独立于其在每一其他出现时的定义。另外，只有当取代基和/或变量的组合可以产生稳定的化合物时才允许这种组合。对于含有具有重复术语的术语的变量定义，例如，(CRⁱR^j)_r，其中r为整数2，Rⁱ是定义的变量，并且R^j是定义的变量，在其出现的每次情况中，Rⁱ的值可能不同，并且R^j的值在其出现的每次情况中可能也不同。例如，如果Rⁱ和R^j独立地选自甲基、乙基、丙基和丁基，则(CRⁱR^j)₂可为

光学异构体-非对映异构体-几何异构体-互变异构体

本文所述的化合物可能含有非对称中心，并且因此可能存在对映异构体。当本发明的化合物拥有两个或多个非对称中心时，它们还可能以非对映异构体存在。本发明包括所有可能的立体异构体，例如经过拆分得到的基本上纯的对映异构体、其外消旋混合物，以及非对映异构体混合物。上述式I未显示某些位置确切的立体化学特性。本发明包括式I的所有立体异构体及其可作药用的盐。可通过例如在合适的溶剂中分级结晶来分离对映异构体的非对映异构体对，由此得到的对映异构体对可通过传统方法分离成各个立体异构体，例如以具有光学活性的酸或碱作为拆分剂或采用手性HPLC柱。并且，利用已知构型的光学纯起始物料或试剂，通过立体选择性合成，可以获得通式I的化合物的任何对映异构体或非对映异构体。

当本文所述的化合物含有烯双键时，除非另有规定，否则此双键包括E和Z两种几何异构体。

本发明所述的-些化合物可能具有不同的氢原子连接点，因此形成互变异构体。例如，含有羰基-CH₂C(O)-基团(酮形式)的化合物可能会经过互变异构形成羟基-CH＝C(OH)-基团(烯醇形式)。单独的酮和烯醇形式及其混合物都在本发明的范围内。

盐

“可作药用的盐”指由可作药用的无毒的碱或酸制备的盐。本发明中的化合物呈酸性时，可方便地由可作药用的无毒碱制备相应的盐，包括无机碱和有机碱。来自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐(二价铜和亚铜)、三价铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐(三价锰和亚锰)、钾盐、钠盐、锌盐等。首选的为铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。由可作药用的有机无毒碱制成的盐包括自然产生的和合成的伯胺、仲胺和叔胺盐。可形成盐的可作药用的有机无毒碱包括，例如精氨酸、内铵盐、咖啡因、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺乙醇、2-二甲胺乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、海巴明、异丙胺、二环己胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。

当本发明中的化合物呈碱性时，可由可作药用的无毒无机和有机酸制备相应的盐。这类酸包括，例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、延胡索酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。首选柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。

溶剂化物

本发明范围内包括结构式I代表的化合物的溶剂化物。本文中使用的“溶剂化物”一词指溶质(例如结构式I代表的化合物)或其可作药用的盐和不影响溶质生物活性的溶剂形成的化学计量可变的复合体。溶剂的例子包括但不限于水、乙醇和乙酸。溶剂为水时，溶剂化物即为水合物；水合物包括但不限于半水合物、单水合物、倍半水合物、二水合物和三水合物。

前药

本发明范围内包括本发明化合物的前药的使用。通常，这些前药是本发明化合物的功能衍生物，可以在体内转化为所需的化合物。因此，在本发明所述的治疗方法中，“给药”一词应包括使用结构式I代表的化合物对各种病症的治疗，或所使用的化合物不符合结构式I，但是给病人用药后，会在体内转化成结构式I代表的化合物。合适的前药衍生物的常规选择和制备流程已在一些专著中有所论述，例如，《前药设计》，H.Bundgaard主编，Elsevier，1985。

用途

本发明的化合物是缺氧诱导因子(HIF)脯氨酰羟化酶的抑制剂，因此可用于治疗和预防需要调控HIF的疾病和病症，例如贫血和局部贫血。本发明的化合物可以以选择性和受控的方式诱导缺氧诱导因子的稳定化，以迅速双向促进促红细胞生成素的生成和分泌。因此，本发明的另一方面提供了一种治疗或预防哺乳动物病症的方法，即通过抑制HIF脯氨酰羟化酶实现或促进治疗或预防，包括使用一定剂量的式I代表的化合物，此化合物对抑制HIF脯氨酰羟化酶有效。本发明的此方面还包括在用于治疗或预防HIF脯氨酰羟化酶调控的疾病或病症的药物的制造中使用结构式I代表的化合物。

在一个实施方案中描述了一种增强哺乳动物促红细胞生成素的内源生成的方法，包括对上述哺乳动物使用一定剂量的式I代表的化合物，此化合物对增强促红细胞生成素的内源生成有效。

另一实施方案描述了一种治疗哺乳动物贫血的方法，此方法包括对上述哺乳动物使用有疗效剂量的式I代表的化合物。“贫血”包括但不限于慢性肾性贫血、化疗引起的贫血(例如，用于治疗传染病的抗病毒药物疗法，例如HIV和丙肝病毒)、慢性病引起的贫血、与癌症有关的贫血、癌症放疗引起的贫血、慢性免疫疾病引起的贫血，例如风湿性关节炎、炎症性肠病和狼疮，以及月经引起的贫血、老年期贫血或其他与铁利用缺陷有关贫血，例如有些人体内并不缺铁，但是却不能正常利用铁。

另一实施方案描述了一种治疗哺乳动物局部贫血疾病的方法，包括对上述哺乳动物使用有疗效剂量的式I代表的化合物。

联合治疗

对于一些式I代表的化合物有疗效的疾病或病症，此化合物可与用于治疗/预防/抑制或改善这些疾病或病症的其他药物一起使用。这些其他药物可采用常用的给药途径和剂量与式I代表的化合物同时或相继给药。当式I代表的化合物与一种或多种其他药物同时给药时，则首选除了含有式I代表的化合物，还含有其他药物的药物组合物。因此，本发明的药物组合物除了含有式I代表的化合物，还含有一种或多种其他活性成分。

给药途径/剂量

根据本发明，通过任何能使有效成分有效接触温血动物体内的作用部位的给药方式，可使用本发明的化合物治疗或预防多种疾病，例如，给药方式可为口服、局部给药，包括经皮给药、眼部给药、含服、鼻腔给药、吸入给药、阴道给药、直肠给药、脑池给药和非消化道给药。本文中使用的“非消化道给药”包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射、关节内注射或输液、胸骨内给药和腹膜腔内给药。本发明中，温血动物指一类拥有体内平衡机制的动物，包括哺乳动物和鸟类。

本发明的化合物可采用任何可用的常规方式与其他药物一起给药，既可作为单独的治疗药物，也可作为药物组合物中的一种成分。它们可以单独给药，但是通常是与药物载体一同给药，药物载体要根据所选的给药途径和标准制药实践而定。

给药剂量取决于受药者的年龄、健康状况和体重，疾病程度，同步进行的其他治疗的种类(如有)，治疗频率和所需疗效的性质。一般情况下，活性成分化合物的每日剂量为1.0-2000毫克。通常，一次或多次应用时采用10至500毫克的每日剂量即可获得所需的疗效。这些剂量为治疗和预防上述疾病例(如贫血)的有效剂量。

药物组合物

本发明的另一方面提供了含有式I代表的化合物和药用载体的药物组合物。药物组合物中所述的“组合物”包含一种含有活性成分，和构成载体的惰性成分(药用辅料)的产品，以及任何直接或间接通过组合、络合或聚集任何两种或多种成分，或通过分离一种或多种成分，或通过一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用得到的产品。因此，本发明中的药物组合物包含通过混合式I代表的化合物，其他活性成分，和可作药用的辅料获得的任何组合物。

本发明的药物组合物包含一种作为活性成分的式I代表的化合物(或其可作药用的盐)、一种可作药用的载体和其他可选药物成分或辅料。此组合物包括适合口服、直肠给药、局部给药和非消化道给药(包括皮下注射、肌肉注射和静脉注射)的组合物，然而在任何情况下，最适合的给药途径应取决于具体患者、以及活性成分要作用的疾病的性质和程度。药物组合物可以单位剂型提供并采用制药领域中已知的任何方法制备。

活性成分可以固体剂型，例如胶囊、片剂、口含片、糖衣片、颗粒剂和粉剂，或液体剂型，例如酏剂、糖浆、乳剂、分散剂和悬浮剂，口服给药。活性成分还可以无菌液剂型，例如分散剂、悬浮剂或溶液，以非消化道给药方式给药。活性成分的其他剂型包括用于局部给药的软膏剂、乳膏剂、滴剂、透皮贴片剂或粉剂，用于眼部给药的眼用溶液或悬浮剂型，例如滴眼剂，用于吸入或鼻腔给药的气溶胶喷雾剂或粉状组合剂，或用于直肠或阴道给药的乳膏剂、软膏剂、喷雾剂或栓剂。

胶囊含有活性成分和粉末状载体，例如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。可采用类似的稀释剂制成压制片剂。片剂和胶囊都可以制成缓释产品，以在一段时间内持续释放药物。压制片剂可包糖衣或覆膜，以遮盖任何令人不舒服的味道并保护片剂不受空气的影响，或包肠溶衣，以实现药物在胃肠道内的选择性崩解。

口服液体剂型还可包含色素和增味剂，以利于患者接受药物。

一般而言，水、合适的油、盐水、葡萄糖溶液，以及相关糖溶液和二羟基醇(例如丙二醇或聚乙二醇)都是注射液的合适载体。用于非肠道给药的溶液通常包含活性成分的水溶性盐、合适的稳定剂，如有必要还包含缓冲物质。亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸等抗氧化剂可单独或联合用作合适的稳定剂。其他常用的试剂包括柠檬酸及其盐和EDTA钠。此外，注射液可包含防腐剂，例如苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或丙酯、氯代丁醇。

A.Osol所著的《Remington′s Pharmaceutical Sciences》一书对合适的药物载体进行了论述，此书是该领域的标准参考文本。

对于吸入给药，本发明的化合物可通过加压包装或喷雾器以气溶胶喷雾形式给药。此化合物还可以粉剂给药，借助吹入式粉末吸入器吸入配制的粉末组合物。吸入剂的首选送药体系是定量吸入(MDI)气雾剂，它可制成式I代表的化合物在合适的推进剂中(例如碳氟化物或烃类)的混悬剂或溶液剂。

对于眼部用药，要采用合适的眼药载体制成具有合适质量分数的式I代表的化合物的溶液剂或混悬剂，这样可以使此化合物与眼睛表面接触足够长的时间，以便药物渗入角膜和眼睛内部。

本发明的化合物在给药时采用的药物剂型包括但不限于硬胶囊和软胶囊、片剂、非肠道注射剂和口服混悬剂。

向两个标准硬胶囊中各填入100毫克粉装活性成分、150毫克乳糖、50毫克纤维素和6毫克硬脂酸镁，即可制成大量单位胶囊。

用容积泵将活性成分与易消化的油(例如大豆油、棉籽油或橄榄油)的混合物注射到明胶里形成含有100毫克活性成分的软胶囊。然后将胶囊清洗、干燥。

大量片剂可采用常规流程制造，制得的单位剂量中含有100毫克活性成分、0.2毫克胶体二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶纤维素、11毫克淀粉和98.8毫克乳糖。可采用合适的包衣增加药物的适口性或延长吸收。

搅拌1.5％重量的活性成分和10％体积的丙二醇，可制得适用于注射给药的非肠道吸收组合物。用水将溶液稀释到适用于注射的体积，并灭菌。

制成水混悬剂用于口服给药，每5毫升此混悬剂中含有100毫克磨碎的活性成分、100毫克羧甲基纤维素钠、5毫克苯甲酸钠、1.0克山梨醇溶液，U.S.P和0.025毫升香草醛。

本发明的化合物采用逐步给药方式时或与其他治疗剂一起给药时通常可使用相同的剂型。当药物以物理组合物形式给药时，应根据组合药物的相容性选择剂型和给药途径。因此，应理解，联合给药包括两种药物同时或相继给药，或以两种活性成分的固定剂量组合给药。

合成

本发明的化合物的制备方法如下列方案所述。其他合成方法为本领域的技术人员熟知的方法。描述式I代表的化合物及类似化合物的制备的实例不被视为对后附权利说明中提出的发明的限制。除非另外说明，否则所有变体均按照前文的定义。

用于制备本发明的化合物的中间体为本领域中已知的物质，或可使用本领域中的技术人员已知的化学方法制备。所报道的中间体及其制备方法的例子包括1-苄基-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯(IIa)和相关取代类似物(IIb)(参见WO 2005/021546)；1-烷基-4-羟基-7-甲基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯类似物(IIc)(参见Kuroda等人，《药物化学杂志》(Journal of MedicinalChemistry)，1992，35，1130-1136)；1-取代的-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯类似物(IId)(参见Kuroda等人，《生物有机化学和药物化学通讯》(Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters)，2005，15，1577-1582)；和4-羟基-2-氧代-6-吡啶-4-基-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯(IIe)及其8-氧化物(IIf)(参见Haber等人，《应用化学杂志》(Journal fur Praktische Chemie)，1991，333，637-642)其他制备中间体II的一般方法参见Sherlock等人，《药物化学杂志》(Journal of Medicinal Chemistry)，1988，31，2108-2121。

可使用下列方案中描述的方法制备本发明的化合物。在方案1中，4-羟基-2-氧代-1，8-二氮杂萘-3-甲酸的烷基酯(II)与α-或β-氨基酸酯(III)可在适合的溶剂(例如，甲苯、二甲苯、溴苯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲氧基甲烷、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、乙醇、2-丙醇、丁醇)中化合，加热所得的混合物即可获得中间产物IV。合成中间产物IV的一个例子是，在130℃下，将II和1-2摩尔当量的III在乙醇/二甲氧基甲烷中一起加热1至3小时，其中n＝1，R⁷＝-C(CH₃)₃。可采用断裂酯键的一般方法将酯IV转化为羧酸I(R⁷＝-H)此方法可参阅文献(例如，Greene和Wuts，《有机合成中的保护基》(Protective Groups inOrganic Synthesis)，第三版，Wiley-Interscience，1999)。提高IV的转换效率的例子为，其中(R⁷＝-C(CH₃)₃)转换为I(R⁷＝-H)，将IV和酸在溶剂中一起加热(例如，和6M HCl在水中加热，和三氟乙酸在CH₂Cl₂中加热)，并在室温下将所得混合物搅拌12-24小时。

方案1

制备II的一些方法见方案2。在一种合成方法中，在室温或高于室温的温度下，将符合结构通式VI或VII的2H-吡啶并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4(1H)-二酮与一种二烷基丙二酸酯和一种纯强碱(例如NaH、KH)在适合的溶剂(例如，N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮)中加热2-18小时。反之，二酮VI也有多种制备方法。在一种方法中，在室温或高于室温的温度下，一种取代2-氨基烟酸(V)与光气或一种等同化学试剂(例如，双光气、三光气、N，N’-羰基二咪唑、氯甲酸乙酯)在适合的溶剂(例如，CH₂Cl₂、THF、1，4-二氧杂环己烷、甲苯、二甲苯)中反应生成中间体VI。合成中间体VI的另一种方法是，在55℃下，将等摩尔的取代2-甲酰氨基烟酸(Va)在四乙酸铅的存在下在DMF中加热一小时(参见美国专利第3,947,442号)。

二酮VII可由VI制得，后者与烷基卤化物或烷基三氟甲基磺酸酯在碱(例如，三乙胺、二异丙基乙胺、Na₂CO₃、NaH)的存在下在适合的溶剂(例如，甲苯、二甲苯、溴苯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜)中反应，可生成VII(R₄＝烷基)。其他由VI合成VII的方法包括但不限于Mitsunobu反应(VI和必要的醇与三烷基膦和偶氮二羧酸二烷基酯在适合的溶剂中反应，参见Coppola，G.M.等人的专著，《合成通讯》(Synth.Comm.，2002，32，1009-1013)，或在上述反应中用2-N-(R4-氨基)-或2-(N-R4-氨基)烟酸代替V。

制备II(其R₄≠-H)的另一种方法是以符合结构通式VIII的2-氯烟酸酯作为起始反应物。通过将VIII与适合的胺在添加或不添加碱(例如，三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、DBU)的条件下反应使2-Cl被取代，生成符合结构通式IX的烟酸酯。IX与烷基丙二酰氯的酰化反应生成了氨基化合物X。使X与碱(例如，甲醇钠、双(三甲基甲硅烷基)氨基钠、叔丁醇钾、氢化钠)在合适的溶剂(1，2-二甲氧基乙烷、THF、甲苯)中发生闭环反应可生成II。使IX与丙二酸二乙酯和碱(例如，甲醇钠、双(三甲基甲硅烷基)氨基钠、叔丁醇钾、氢化钠)在合适的溶剂(1，2-二甲氧基乙烷、THF、甲苯)中发生闭环反应也可生成II。

方案2

I的R¹-R⁶可能含有一个或多个非对称中心。存在这种情况时，可通过本领域内的技术人员已知的方法获得I的单独立体异构体，包括(但不限于)：立体选择性合成，用对映体纯的酸或碱拆分I的盐或用于其制备的任何中间体，通过采用对映体纯固定相的HPLC拆分I的盐或用于其制备的任何中间体。

生物测定

本发明化合物的生物活性可使用下述测定方法评定：

在96-孔培养板的每个孔里加入1μL溶有待测化合物的DMSO和20μl测试缓冲液(50mM Tris pH 7.4/0.01％吐温-20/0.1mg/ml牛血清白蛋白/10μM硫酸亚铁/1mM抗坏血酸钠/20μg/ml过氧化氢酶)，缓冲液中含有0.15μg/ml FLAG标记的在杆状病毒感染的Sf9细胞中表达和纯化的全长PHD2。在室温下经过30分钟预培养后，通过添加4μL底物(最终浓度为0.2μM 2-氧化戊二酸和0.5μM HIF-1α肽生物素-DLDLEMLAPYIPMDDDFQL)来启动酶催化反应。在室温下反应2小时后，添加25μL中止/检测混合剂来终止反应和发展信号，最终浓度为1mM邻菲咯啉，0.1mM EDTA，0.5nM抗(His)₆LANCE试剂(珀金埃尔默生命科学有限公司(Perkin-Elmer Life Sciences))，100nM AF647-标记的链霉亲和素(英杰生命技术有限公司(Invitrogen))，和2μg/ml(His)₆-VHL复合物(S.Tan(2001)《蛋白质的表达与纯化》(Protein Expr.Purif.)21，224-234)。然后确定665和620nm处时间分辨荧光信号的比率，并基于平行运转的未抑制的对照样本计算抑制百分比。

实施例	IC₅₀(nM)	实施例	IC₅₀(nM)
实施例	IC₅₀(nM)	实施例	IC₅₀(nM)	1	2.1	20	0.9
2	1.6	21	0.8	1	2.1	20	0.9
2	1.6	21	0.8	3	1.9	22	0.8
4	1.6	23	8.5	3	1.9	22	0.8
4	1.6	23	8.5	5	1.8	24	1.1
6	1.6	25	2.0	5	1.8	24	1.1
6	1.6	25	2.0	7	1.5	26	1.3
8	0.7	27	2.6	7	1.5	26	1.3
8	0.7	27	2.6	9	1.3	28	0.85
10	1.2	29	0.65	9	1.3	28	0.85
10	1.2	29	0.65	11	6.0	30	2.7
12	1100	31	25	11	6.0	30	2.7
12	1100	31	25	13	1.2	34	160
14	160	35	5.9	13	1.2	34	160
14	160	35	5.9	15	25	38	2.7
17	160	39	8.2	15	25	38	2.7
17	160	39	8.2	18	21	40	1.5
19	0.4			18	21	40	1.5

采用类似方法可确定HIF-PHD 1和HIF-PHD3的催化活性抑制状况。

以下实施例仅为对本发明的描述，并且不以任何方式被解释为本发明范围的限制。

实施例1

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

步骤A：2H-吡啶并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4(1H)-二酮

将2-(氨基甲酰基)烟酸(3.2g，19.26mmol)溶于DMF(30mL)，在0℃下向溶液中以少量多次的方式加入四乙酸铅(8.5，19.26mmol)。搅拌所得溶液，使其恢复至室温。在55℃下将反应混合物加热一小时，然后加水(30mL)中止反应。将形成的沉淀物过滤出来，用水洗，干燥，得到2.72g固态的标题化合物。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ12.27(s)，8.65(d，1H，J＝4.3Hz)，8.29(d，1H，J＝7.5Hz)，7.31(d，1H，J＝7.3Hz)。

步骤B：1-[4-(三氟甲基)苄基]-2H-吡啶并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4(1H)-二酮

将5.0g(30.5mmol)步骤A所得的化合物溶于50mL二甲基乙酰胺，在室温下向溶液中加入1.46g(36.6mmol，60％wt.，分散于矿物油中)氢化钠。在60℃下将混合物搅拌20分钟，然后冷却至0℃。向混合物中加入溶有4-(三氟甲基)苄基溴(8.74g，36.6mmol)的DMF(10mL)，然后加热至室温。4小时后，真空除去反应混合物中的DMF，用冰水混合物稀释残留物。将固体沉淀过滤、水洗、干燥，得到8.7g目标产物，无需进一步提纯。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ8.71(dd，1H，J＝4.8和1.9Hz)，8.43(dd，1H，J＝4.9和1.6Hz)，7.66(d，2H，J＝8.4Hz)，7.63(d，1H，J＝8.7Hz)，7.40(dd，2H，J＝4.8和4.9Hz)，5.43(s，2H)。

步骤C：4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯

在0℃下，向NaH(60％矿物油悬浮液，1.62g，40.5mmol)与二甲基甲酰胺(75mL)的混合物中加入丙二酸二乙酯(6.18mL，40.5mmol)。在0℃下将所得混合物搅拌30分钟，然后在室温下搅拌20分钟。然后加入溶有8.7g(27mmol)步骤B反应所得化合物的DMF(10mL)。在60℃下将反应混合物搅拌3小时。然后冷却混合物，真空除去DMF，用水稀释残留物。用1N HCl将水混合物的pH调至4-5，然后用乙酸乙酯萃取。用饱和NaCl溶液洗有机层，用硫酸镁干燥，用活性炭处理，然后过滤，浓缩，得到油状物。加入己烷/乙醚研制，过滤并干燥所得固体，得到5.2g标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.71(dd，1H，J＝4.6和1.9Hz)，8.49(dd，1H，J＝6.2和1.6Hz)7.57(d，2H，J＝8.3Hz)，7.57(d，2H，J＝8.2Hz)，7.40(dd，2H，J＝4.6和3.2Hz)，5.76(s，2H)，4.55(q，2H，J＝7.1Hz)和1.51(t，3H，7.0Hz)。MS：m/z 347(M-EtOH)。

步骤D：N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸叔丁酯

将800mg(2.04mmol)步骤C所得化合物和320mg(2.45mmol)叔丁基甘氨酸溶于5ml乙醇中，在130℃和在微波条件下将混合物搅拌3小时。冷却至室温，然后过滤白色沉淀物。用己烷/乙醚洗沉淀物，然后干燥，得到930mg白色固态标题化合物：¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ10.31(br s，1H)，8.77(dd，1H，J＝4.6和1.6Hz)，8.50(dd，1H，J＝6.4和1.6Hz)，7.63-7.44(m，3H)，5.70(s，2H)，4.08(d，2H，J＝5.7Hz)，1.42(s，9H)；MS：m/z478(M+H)。

步骤E：N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

将4.7g(9.8mmol)步骤D得到的化合物溶于40mL二氯甲烷中，在室温下向溶液中加入10mL三氟乙酸(10mL)。在室温下将混合物搅拌12小时。然后浓缩反应混合物，加入甲苯冻干，加入己烷研制，然后过滤，干燥，得到3.9g白色固态标题化合物：¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ12.98(br s，1H)，10.31(t，1H，J＝5.2Hz)，8.76(dd，1H，J＝4.6和1.4Hz)，8.49(dd，1H，J＝6.4和1.3Hz)，7.64-7.43(m，3H)，5.7(s，2H)，4.12(d，2H，J＝5.5Hz)；MS：m/z 423(M+H)。

实施例2

N-{[1-(4-氯苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸

采用与实施例1相似的方法制备标题化合物，用4-(氯)苄基溴代替步骤B中的4-(三氟甲基)苄基溴：MS：m/z388(M+H)。

实施例3

N-{[1-(4-溴苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸

采用与实施例1相似的方法制备标题化合物，用4-(溴)苄基溴代替步骤B中的4-(三氟甲基)苄基溴：MS：m/z 433(M+H)。

实施例4

N-{[1-(4-氰基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸

采用与实施例1相似的方法制备标题化合物，用4-(氰基)苄基溴代替步骤B中的4-(三氟甲基)苄基溴：MS：m/z 379(M+H)。

实施例5

N-{[1-(4-甲基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸

采用与实施例1相似的方法制备标题化合物，用4-(甲基)苄基溴代替步骤B中的4-(三氟甲基)苄基溴：MS：m/z 368(M+H)。

实施例6

N-{[1-(2-氟-4-三氟甲基苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸

采用与实施例1相似的方法制备标题化合物，用2-氟-4-三氟甲基苄基溴代替步骤B中的4-(三氟甲基)苄基溴：MS：m/z 440(M+H)。

实施例7

N-({4-羟基-7-甲氧基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

步骤A：2-氯-6-甲氧基烟酸

标题化合物的制备方法参见Hirokawa等人的论文，(Chem.Phar.Bull.，48，2000，1847)：¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ13.29(br s，1H)，8.16(d，1H，J＝8.4Hz)，6.90(d，1H，J＝8.4Hz)，3.90(s，3H)；MS：m/z 188(M+H)。

步骤B：2-氯-6-甲氧基烟酸甲酯

将4.8g(25.6mmol)步骤A所得化合物和亚硫酰氯(25mL，343mmol)回流5小时。真空除去过量的亚硫酰氯，将混合物蒸两次，从甲苯中蒸出中间产物酰氯。加入甲醇(30mL)，将酰氯回流1小时，然后在室温下搅拌12小时。真空除去甲醇，用氯仿萃取残留物。用水、NaCl饱和溶液洗溶剂层，干燥，蒸干。加入己烷研制并过滤，得到2.51g白色固态标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.14(d，1H，J＝8.5Hz)，6.72(d，1H，J＝8.7Hz)，4.02(s，3H)，3.94(s，3H)。

步骤C：6-甲氧基-2-{[4-(三氟甲基)苄基]氨基}烟酸甲酯

将1.0g(5.0mmol)步骤B所得化合物和4-(三氟甲基)苄胺(1.82g，10.4mmol)在DME(25mL)中回流48小时。过滤所得混合物，并用DME洗。将合并的滤液蒸干，然后用硅胶柱(combiflash，ISCO)纯化，用己烷+乙酸乙酯(0至10％梯度)洗脱，得到1.49g米色固态标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.63(br s，1H)，8.04(d，1H，J＝8.5Hz)，7.59(d，2H，J＝7.3Hz)，7.48(d，2H，J＝7.2Hz)，6.02(d，1H，J＝8.5Hz)，4.81(d，2H，J＝5.5Hz)，3.86(s，3H)，3.81(s，3H)；MS：m/z341(M+H)。

步骤D：6-甲氧基-2-{[4-(三氟甲基)苄基]氨基}烟酸

将1.0g(2.9mmol)步骤C所得化合物和氢氧化钠(0.14g，3.53mmol)在甲醇/水(1∶1，10mL)中回流24小时。将所得化合物蒸干，并用2N HCl将水混合物的pH调节至pH＝3。将形成的沉淀物过滤、水洗、干燥，得到0.97g白色固态标题化合物。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ8.78(t，1H，J＝6Hz)，7.94(d，1H，J＝8.5Hz)，7.65(d，2H，J＝7.8Hz)，7.53(d，2H，J＝7.7Hz)，5.98(d，1H，J＝8.5Hz)，4.74(d，2H，J＝5.7Hz)，3.68(s，3H)；MS：m/z 327(M+H)。步骤E：7-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苄基]-2H-吡啶并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4(1H)-二酮

将0.51g(1.56mmol)步骤D得到的化合物与0.66g(6.3mmol)碳酸钠(0.665g，6.28mmol)溶于水(12mL)中，向溶液中加入光气(5mL，20％)的甲苯溶液。将所得的非均质混合物回流24小时。过滤形成的固体，水洗、干燥，得到0.21g标题化合物：¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ8.78(t，1H，J＝6Hz)，8.22(d，1H，J＝8.7Hz)，7.67(s，4H)，6.74(d，1H，J＝8.5Hz)，5.37(s，2H)，3.84(s，3H)。步骤F：N-({4-羟基-7-甲氧基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

标题化合物由步骤E得到的化合物制得，制备方法与实施例1中第三至五步相似：MS：m/z 452(M+H)。

实施例8

N-{[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸

步骤A：1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-2H-吡啶并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4(1H)-二酮

在N₂保护下，用注射器向含有1.0g(6.1mmol)2H-吡啶并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4(1H)-二酮(来自实施例1步骤A)和1.45g(7.9mmol)of 2-(氯甲基)-1，3-苯并噻唑(1.45g，7.92mmol)的乙腈(40.0mL)悬浮液中加入BEMP(2.65mL，9.14mmol)，在室温下将所得混合物搅拌40小时。真空浓缩所得溶液，上CombiFlash Companion柱(40g柱)提纯，用0至100％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到0.29g标题化合物。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ8.77(dd，1H，J＝1.8，3.2Hz)，8.47(dd，1H，J＝1.8，5.9Hz)，8.05(d，1H，J＝7.8Hz)，7.94(d，1H，J＝8Hz)，7.49～7.39(m，3H)，5.76(s，2H)。

步骤B：1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯

采用与实施例1步骤C相似的方法和步骤A得到的化合物制备标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.73(d，1H，J＝4.3Hz)，8.51(d，1H，J＝7.8Hz)，8.01(d，1H，J＝8.0Hz)，7.79(d，1H，J＝8.0Hz)，7.45(t，1H，J＝7.5Hz)，7.35(t，1H，J＝7.7Hz)，7.29～7.26(m，1H)，6.14(s，2H)，4.55(q，2H，J＝7.1Hz)1.51(t，3H，J＝7.1Hz)；MS：m/z 382.41(M+H)。

步骤C：N-{[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸叔丁酯

采用与实施例1步骤D相似的方法和步骤B得到的化合物制备标题化合物。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ10.30(br s，1H)，8.78～8.77(dd，1H，J＝1.8，2.8Hz)，8.54～8.52(dd，1H，J＝1.6，6.1Hz)，8.00(d，1H，J＝7.8Hz)，7.90(d，1H，J＝8Hz)，7.48～7.44(m，2H)，7.38(t，1H，J＝8Hz)，6.02(s，2H)，4.08(d，2H，J＝5.7Hz)1.42(s，9H)；MS：m/z 467.51(M+H)。

步骤D：N-{[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸

采用与实施例1步骤E相似的方法和步骤C得到的化合物制备标题化合物。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ12.96～12.92(br s，1H)，10.28(br d，1H，J＝2.2)，8.79(d，1H，J＝3.5Hz)，8.53(d，1H，J＝7.8Hz)，8.00(d，1H，J＝7.8Hz)，7.90(d，1H，J＝8Hz)，7.49～7.44(m，2H)，7.38(t，1H，J＝7.6Hz)，6.03(s，2H)，4.12(d，2H，J＝5.5Hz)；MS：m/z 411.40(M+H)。

实施例9

N-({4-羟基-6-碘-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

步骤A：5-碘-2-{[4-(三氟甲基)苄基]氨基}烟酸甲酯

将1.0g(3.4mmol)5-碘-2-氯烟酸甲酯和1.05mL(7.4mmol)4-(三氟甲基)苄胺溶于7.0mL乙醇中，在140℃下，将溶液在微波中辐照3小时。蒸干溶剂，加入乙酸乙酯研制残留物，滤掉形成的固体。真空浓缩滤液，得到粘稠的油状物。用最少量的乙酸乙酯将油状物溶解，然后用硅胶塞过滤，用10％乙酸乙酯/己烷冲洗。真空浓缩滤液，得到1.3g标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.43(d，1H，J＝1.8Hz)，8.39(d，1H，J＝1.9Hz)，7.59(d，2H，J＝7.8Hz)，7.46(d，2H，J＝7.7Hz)，4.80(d，2H，J＝5.7Hz)，3.91(s，3H)；MS：m/z 437.17(M+H)。

步骤B：2-{(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)[4-(三氟甲基)苄基]氨基}5-碘烟酸甲酯

将1.0g(2.3mmol)步骤A得到的标题化合物和吡啶(0.28mL，3.44mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，在室温下用注射器向溶液中加入乙基丙二酰氯(0.382mL，2.98mmol)，在45℃下将混合物搅拌15小时。真空浓缩混合物，然后上CombiFlash Companion柱(40g柱)提纯，用己烷/乙酸乙酯洗脱(梯度洗脱，0％至45％)，得到1.05g油状标题化合物：MS：m/z 551.27(M+H)。

步骤C：4-羟基-6-碘-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯

将乙醇钠(2.73mmol)溶于无水乙醇(5.0mL)中，向溶液中加入含有1.0g(1.8mmol)步骤B所得化合物的乙醇(5mL)溶液，在60℃下，将所得混合物搅拌30分钟。将混合物冷却至室温，加水中止反应，然后真空浓缩。将所得固体溶于水，用二氯甲烷稀释，并加1NHCl酸化。分离各层液体，用硫酸镁干燥有机层，然后真空浓缩。研制除去乙醚/己烷，得到620mg白色固态标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.50(d，1H，J＝2.3Hz)，8.72(d，1H，J＝2.3Hz)，7.56-7.52(m，4H)，5.68(s，2H)，4.55(q，2H，J＝7.1Hz)，1.50(t，3H，J＝7.0Hz)；MS：m/z 519.23(M+H)。

步骤D：N-({4-羟基-6-碘-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸叔丁酯

采用与实施例1步骤D相似的方法和步骤C得到的化合物制备标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ10.50(t，1H，J＝5.3Hz)，8.86(d，1H，J＝2.0Hz)，8.76(d，1H，J＝1.9Hz)，7.56-7.52(m，4H)，5.73(s，2H)，4.15(d，2H，J＝5.3Hz)，1.53(s，9H)；MS：m/z 604.33(M+H)。

步骤E：N-({4-羟基-6-碘-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

采用与实施例1步骤E相似的方法和步骤D得到的化合物制备标题化合物。¹H NMR(500MHz，DMSO)δ12.98-12.92(br，1H)，10.26(s，1H)，8.95(d，1H，J＝2.1Hz)，8.69(d，1H，J＝1.8Hz)，7.62(d，2H，J＝8.0Hz)，7.62(d，2H，J＝8.0)，5.64(s，2H)，4.12(d，2H，J＝5.7Hz)；MS：m/z 548.22(M+H)。

实施例10

N-({6-氰基-4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

步骤A：N-({6-氰基-4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸叔丁酯

将100mg(0.17mmol)N-({6-碘-4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸叔丁酯(来自实施例9步骤D)、24mg(0.2mmol)氰化锌、30mg(0.033mmol)三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)和18.4mg(0.033mmol)1，1′-二(二苯基膦基)溶解于3mL DMF和0.05mL水中，排除溶液中的氧气，在氮气保护下，在110℃下将溶液搅拌2小时。冷却混合物，用乙酸乙酯稀释，然后用硅藻土过滤。将滤液浓缩，上CombiFlash Companion(4g柱)提纯，用己烷+乙酸乙酯洗脱(梯度洗脱，5％至60％乙酸乙酯)，得到64mg标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ10.36(br s，1H)，8.92(d，1H，J＝2.0Hz)，8.76(d，1H，J＝2.2Hz)，7.58～7.54(m，4H)，5.76(s，2H)，4.16(d，2H，J＝5.2Hz)，1.54(s，9H)；MS：m/z 503.44(M+H)。

步骤B：N-({6-氰基-4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

将60mg(0.12mmol)步骤A得到的化合物溶于5mL 4∶1二氯甲烷/三氟乙酸，在室温下将溶液搅拌20分钟。浓缩溶液，加入乙醚/己烷研制残留物，得到47mg标题化合物：¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)

13.02～12.94(br s，1H)，10.18(br s，1H)，9.16(s，1H)，8.97(s，1H)，7.64(d，2H，J＝8.2Hz)，7.48(d，2H，J＝8.0Hz)，5.91(s，2H)，4.13(d，2H，J＝5.3Hz)；MS：m/z 447.34(M+H)。

下列化合物的制备方法与上述实施例中的描述的过程相似。

实施例11

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)-L-丙氨酸

实施例12

N-({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)-D-丙氨酸

实施例13

N-({1-[4-(氨基羰基)苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

实施例14

N-({[1-[4-(三氟甲基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)-L-丝氨酸

实施例15

N-({1-[4-(三氟甲基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)-L-天冬氨酸

实施例16

N-({[1-[4-(三氟甲基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)-2-甲基丙氨酸

实施例17

(2S)-2-[({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]丁酸

实施例18

N-[(4-羟基-2-氧代-1-丙-2-炔-1-基-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]甘氨酸

实施例19

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(3-苯基异噁唑-5-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

实施例20

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(5-苯基-1，2，4-噁二唑-3-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

实施例21

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(3-苯基-1，2，4-噁二唑-5-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

实施例22

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(4-苯基-1，3-噻唑-2-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

实施例23

N-{[1-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}甘氨酸

实施例24

N-({1-(5-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

实施例25

N-({1-[(4-叔丁基-1，3-噻唑-2-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

实施例26

N-({1-[4，5-二甲基-1，3-噻唑-2-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

实施例27

N-({4-羟基-2-氧代-1-[(5-苯基-1.3，4-噁二唑-2-基)甲基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸

实施例28

{[(4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基}氨基}乙酸

步骤A：1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基]-2H-吡啶并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4(1H)-二酮

在25℃下，向含有2H-吡啶并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4(1H)-二酮(10.0g，60.9mmol，实施例1步骤A)的DMF(150mL)悬浮液中加入2.92g氢化钠(73.1mmol，60％wt.，分散于矿物油中)并在50℃下，将所得淡绿色混合物搅拌30分钟。将所得绿色悬浮液冷却到0℃，用注射器加入13.11g(67.0mmol)5-(氯甲基)-2-(三氟甲基)吡啶。在0℃下搅拌5小时，然后在室温下搅拌30分钟，将混合物倒入750mL冰水中。滤出沉淀的固体，干燥，得到粉色固体(14.8g)。将此固体加入DCM(300mL)，在室温下搅拌10分钟，然后过滤。浓缩滤液，加入乙醚/己烷研制残留物，过滤，干燥，得到12.8g标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.98(s，1H)，8.76(dd，1H，J＝4.8，和1.8Hz)，8.46(dd，1H，J＝7.8和1.9Hz)，8.09(dd，1H，J＝16.1和8.1Hz)，7.67(d，1H，J＝8.1Hz)，7.35(dd，1H，J＝7.8和4.8Hz)，5.57(s，2H)。

步骤B：4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯

向含有2.22g(55.4mmol，60％wt.，分散于矿物油中)氢化钠的DMF(50mL)悬浮液中加入9.51g(59.4mmol)丙二酸二乙酯，在60℃下将所得的混合物搅拌15分钟。将混合物冷却至0℃，用导管加入含有12.8g(39.6mmol)1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基]-2H-吡啶并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4(1H)-二酮(来自步骤A)的DMF(50mL)溶液。在60℃将混合物搅拌2小时，然后倒入500mL冰水中。用1N HCl将混合物的pH调至6，滤出沉淀的固体。将固体溶于600mLDCM，用水、NaCl饱和溶液洗所得溶液。用活性炭对有机层脱色，用硅藻土干燥和过滤。浓缩滤液，加入乙醚/己烷研制残留物，得到12.8g标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.93(s，1H)，8.70(dd，1H，J＝4.4，和1.4Hz)，8.47(dd，1H，J＝7.8和1.2Hz)，8.02(d，1H，J＝7.8Hz)，7.57(d，1H，J＝8.0Hz)，7.27(m，1H，)，5.76(s，2H)，4.54(q，2H，J＝14.2and 7.1Hz)，1.49(t，3H，J＝14.2and 7.1)；MS：m/z 394(M+1)。

步骤C：{[(4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]氨基}乙酸叔丁酯

将12.8g(32.7mmol)4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯(来自步骤B)和5.31g(39.2mmol)叔丁基甘氨酸溶于130mL DME中，在82℃下搅拌8小时。加入乙醚/己烷研制所得残留物，过滤，干燥，得14.9g标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ10.50(b，1H)，8.95(s，1H)，8.71(dd，1H，J＝4.6，和1.9Hz)，8.49(dd，1H，J＝8.0和1.8Hz)，8.00(d，1H，J＝8.0Hz)，7.59(d，1H，J＝8.0Hz)，7.30(dd，1H，J＝7.8和4.6Hz)，5.80(s，2H)，4.15(d，2H，J＝5.2Hz)，1.53(s，9H)。MS：m/z 479(M+1)。

步骤D：{[(4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基}氨基}乙酸

将14.9g(31mmol){[(4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]氨基}乙酸叔丁酯(来自步骤C)溶于250mL 4∶1v/v DCM/TFA中，在室温下将溶液搅拌20小时。蒸干溶剂。加入乙醚/己烷(1/4，v/v)研制残留物，过滤，用水洗，干燥，得12.5g(95％)标题化合物：¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ12.98，(b，1H)10.28(t，1H，J＝5.5Hz)，8.78(bd，2H)，8.49(dd，1H，J＝7.8，和1.4Hz)，7.91(d，1H，J＝8.3Hz)，7.79(d，1H，J＝8.0Hz)，7.45(dd，1H，J＝8.0和4.8Hz)，5.73(s，2H)，4.12(d，2H，J＝5.5Hz)；MS：m/z 423(M+1)。

实施例29

{[(6-氯-4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]氨基}乙酸

步骤A：5-氯-2-({[6-三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}氨基)烟酸甲酯

将0.30g(1.46mmol)2，5-二氯烟酸甲酯、0.31g(1.75mmol)1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲胺和0.44g(4.4mmol)TEA溶于4mL1，4-二氧杂环己烷(4.0mL)，在100℃下将混合物搅拌30小时。冷却混合物，直接上CombiFlash Companion层析系统纯化，用0-20％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到0.29g标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.74，(d，1H，J＝1.2Hz)，8.44(t，1H，J＝5.5Hz)，8.21(d，1H，J＝2.8Hz)，8.13(d，1H，J＝2.5Hz)，7.85(dd，1H，J＝8.0Hz和1.4Hz)，7.64(d，1H，J＝8.0Hz)，4.83(d，2H，J＝5.9Hz)，3.92(s，3H)；MS：m/z 346(M+1)。

步骤B：6-氯-4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯

将0.28g(0.81mmol)5-氯-2-({[6-三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}氨基)烟酸甲酯(来自步骤A)和0.13mL(1.6mmol)吡啶溶于3mL DCM，向溶液中加入0.37(2.9mmol)3-氯-3-氧代丙酸乙酯(0.372mL，2.916mmol)，在室温下将所得混合物搅拌3小时。蒸干溶剂，将残留物溶于3mL无水乙醇。用注射器向此溶液中加入1.2mmol新制备的乙醇钠，在60℃下将所得混合物搅拌30分钟。加水(1.0mL)中止反应，浓缩。将所得固体溶于水/DCM，用1N HCl将水层的pH调至5。分离各层液体，干燥并浓缩有机层。加入乙醚/己烷(1/2，v/v)研制残留物，过滤，干燥，得236mg(95％)标题化合物：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.92，(s，1H)，8.64(d，1H，J＝2.5Hz)，8.43(d，1H，J＝2.5Hz)，8.00(d，1H，J＝8.0Hz)，7.60(d，1H，J＝8.0Hz)，5.72(s，2H)，4.56(q，2H，J＝14.4和7.1Hz)，1.51(t，3H，J＝14.1和7.1Hz)；MS：m/z 428(M+1)。

步骤C：{[(6-氯-4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]氨基}乙酸叔丁酯

用0.23g(0.54mmol)6-氯-4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-甲酸乙酯(来自步骤B)制备标题化合物，制备方法与实施例1步骤D相似：MS：m/z 513(M+1)。

步骤D：{[(6-氯-4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]氨基}乙酸

用0.155g(0.30mmol){[(6-氯-4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]氨基}乙酸叔丁酯(来自步骤C)制备标题化合物，制备方法与实施例1步骤E相似：MS：m/z 457(M+1)。

实施例30

(2S)-2-({[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}氨基)丙酸

实施例31

(2S)-2-[({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]琥珀酸

实施例32

({[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-6-碘-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}氨基)乙酸

实施例33

2-[({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丙酸

实施例34

(2S)-2-[9-{4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基]氨基]丁酸

实施例35

(2S)-2-[({1-[(5-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]丙酸

实施例36

(2R)-2-[({4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]琥珀酸

实施例37

(2S)-2-({[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-4-羟基-2-氧代-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}氨基)琥珀酸

实施例38

(2S)-2-{[(4-羟基-2-氧代-1-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基)羰基]氨基}丙酸

实施例39

(2S)-2-[({1-[2-氟-4-(三氟甲基)苄基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)氨基]丙酸

实施例40

({[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-6-氯-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基]羰基}氨基)乙酸

Claims

1.具有式I的化合物：

或其可作药用的盐或溶剂化物，其中

m为0或1；

n为1或2；

p为0、1或2；

R¹、R²和R³独立地选自：

i)氢，

viii)卤素，

ix)氰基，

R⁴选自：

i)氢；

ii)-C1-C₁₀烷基，所述-C₁-C₁₀烷基任选被1-5个独立地选自R^a的基团取代；

vii)-(C₀-C₁₀烷基)芳基，所述-(C₀-C₁₀烷基)芳基任选被1-3个独立地选自羟基和R^b的基团取代，

R⁵和R⁶独立地选自：

i)氢；

ii)C₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基任选被羟基、-SH、-NH₂或-CO₂H取代；

iii)三氟甲基；和

iv)2，2，2-三氟乙基；

R⁷选自：

i)氢；

ii)-C₁-C₁₀烷基；

iii)-(CH₂)_1-6-C₃-C₈环烷基；和

iv)-(CH₂)_1-6苯基；

R⁸、R⁹和R¹⁰独立地选自：

i)氢原子；

ii)-C₁-C₆烷基；

v)杂芳基，所述杂芳基任选被1-3个独立地选自下列的基团取代：C₁-C₆烷基、卤素、羟基、氧代基、氰基、-CO₂(C_1-3烷基)、-CONR¹¹R¹²、-OCO₂(C_1-3烷基)、-OCONR¹¹R¹²、和-S(O)_p(C_1-3烷基)；或

R⁸和R⁹与它们所连接的N原子一起形成饱和或部分饱和的5到8元环，所述环具有0、1或2个选自-O-、-NR⁷-和-S(O)_p-的另外的杂原子，其中所述环任选被甲基或羟基取代；

R¹¹和R¹²独立地选自：

i)氢；

ii)C₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基任选被羟基取代；或R¹¹和R¹²与它们所连接的N原子一起形成饱和或部分饱和的5到8元环，所述环具有0、1或2个选自-O-、-NR7-和-S(O)_p-的另外的杂原子；

2.权利要求1所述的化合物或其可作药用的盐或溶剂化物，其中R¹、R²和R³中的一个为氢，并且其余两个独立地选自i)氢，ii)C₁-C₆烷基，所述C₁-C₆烷基任选被1-3个独立地选自R^a的基团取代，iii)C₃-C₈环烷基，所述C₃-C₈环烷基任选被1-3个独立地选自C₁-C₄烷基、CF₃和R^a的基团取代，iv)芳基，所述芳基任选被1或2个独立地选自羟基和R^b的基团取代，v)卤素，vi)氰基，vii)杂芳基，所述杂芳基任选被1或2个独立地选自R^b的基团取代，viii)-O-C₁-C₆烷基，所述-O-C₁-C₆烷基任选被1-3个独立地选自下列的基团取代：氟、羟基、氧代基、氰基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、-C₁-C₆烷氧基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、-CO₂R⁷、-NR⁸R⁹、-CONR⁸R⁹、-OCO₂R⁷、-OCONR⁸R⁹、-NR¹⁰CO₂R⁷、-NR¹⁰CONR⁸R⁹和-S(O)_pR¹⁰；ix)-O-芳基，所述-O-芳基任选被1或2个独立地选自羟基和R^b的基团取代，x)-O-杂芳基，所述-O-杂芳基任选被1-2个独立地选自R^b的基团取代；xi)-SO_p-C₁-C₆烷基，所述-SO_p-C₁-C₆烷基任选被1-3个独立地选自R^a的基团取代；和xii)-SO_p-芳基，所述-SO_p-芳基任选被1-3个独立地选自羟基和R^b的基团取代。

3.权利要求1所述的化合物或其可作药用的盐或溶剂化物，其中R¹为氢，R²和R³中的一个为氢，并且另一个选自i)氢，ii)卤素，iii)氰基，iv)任选被1-3个氟取代的-C₁-C₃烷基，和iv)任选被1-3个氟取代的-O-C₁-C₃烷基。

4.权利要求1所述的化合物或其可作药用的盐或溶剂化物，其中R⁴为-C₁-C₄烷基，所述-C₁-C₄烷基任选被选自下列的基团取代：C(O)OH、C(O)O-C₁-C₄烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基。

5.权利要求1所述的化合物或其可作药用的盐或溶剂化物，其中R⁴为被苯基取代的-C₁-C₄烷基，其中苯基是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的基团取代：i)任选被1-3个氟取代的-C₁-C₃烷基，ii)卤素，iii)氰基，iv)C(O)NH₂，和v)任选被1-3个氟取代的-O-C₁-C₃烷基。

6.权利要求1所述的化合物或其可作药用的盐或溶剂化物，其中R⁴为被杂芳基取代的-C₁-C₄烷基，其中杂芳基是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的基团取代：i)任选被1-3个氟取代的-C₁-C_4烷基，ii)卤素，iii)氰基，iv)苯基，和v)任选被1-3个氟取代的-O-C₁-C₄烷基。

7.具有式Ia的权利要求1所述的化合物：

或其可作药用的盐或溶剂化物，其中，m、R²、R³、R⁵、R⁶和R⁷如权利要求1中所定义，并且R⁴′选自C(O)OH、C(O)O-C₁-C₄烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基。

8.权利要求7所述的化合物，或其可作药用的盐或溶剂化物，其中R4′选自i)苯基，所述苯基任选被1或2个独立地选自卤素、氰基和三氟甲基的基团取代，ii)选自下列的杂芳基和取代的杂芳基：苯并噻唑、被卤素取代的苯并噻唑、异噁唑、被苯基取代的异噁唑、1，2，4-噁二唑、被苯基取代的1，2，4-噁二唑、噻唑、被苯基取代的噻唑、被C₁-C₄烷基取代的噻唑、被二(C₁-C₄)烷基取代的噻唑、1，3，4-噁二唑和被苯基取代的1，3，4-噁二唑。

9.权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：

N-({1-[4-(氨基羰基)苄基)-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

N-({1-(5-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)甲基]-4-羟基-2-氧代-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基)甘氨酸；

(2S)-2-[9-{4-羟基-2-氧代-1-[4-(三氟甲基)苄基]-1，2-二氢-1，8-二氮杂萘-3-基}羰基]氨基]丁酸；

10.治疗哺乳动物病症的方法，所述病症的治疗是通过抑制HIF脯氨酰羟化酶实现或促进的，所述方法包括施用能有效抑制HIF脯氨酰羟化酶的量的权利要求1所述的化合物或其可作药用的盐或溶剂化物。

11.权利要求10所述的方法，其中所述的疾病为贫血。

12.通过对哺乳动物施用能有效增强促红细胞生成素的内源生成的量的权利要求1所述的化合物或其可作药用的盐或溶剂化物来增强哺乳动物体内促红细胞生成素的内源生成的方法。

13.药物组合物，所述药物组合物包含可作药用的载体和权利要求1所述化合物，或其可作药用的盐或溶剂化物。

14.药物组合物，所述药物组合物是通过组合权利要求1所述化合物，或其可作药用的盐或溶剂化物，以及可作药用的载体而制成的。

15.权利要求1所述的化合物，或其可作药用的盐或溶剂化物在制备用于治疗HIF脯氨酰羟化酶介导的病症的药物中的应用。