ES2574262T3 - Formulaciones de sal de meglumina de ácido 1-(5,6-dicloro-1h-benzo[d]imidazol-2-il)-1h-pirazol-4-carboxílico - Google Patents

Abstract

Una formulación que comprende la sal de meglumina del ácido 1-(5,6-dicloro-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1H-pirazol- 4-carboxílico; en la que dicha sal de meglumina está en la forma de un dihidrato.

Description

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Formulaciones de sal de meglumina de acido 1-(5,6-dicloro-1h-benzo[d]imidazol-2-il)-1h-pirazol-4-carboxflico Descripcion

CAMPO DE LA INVENCION

La presente invencion esta dirigida a la sal de meglumina de acido 1-(5,6-dicloro-1H-benzo[d]imidazol-2-il)- 1 H-pirazol-4-carboxllico.

ANTECEDENTES

Una familia de enzimas prolil hidroxilasa (PHD) dependientes de oxlgeno, hierro y 2-oxoglutarato altamente conservadas median la respuesta de las celulas a la hipoxia a traves de la modification post-traslacional de factores inducibles de hipoxia (HIF) (Ivan et al., 2001, Science, 292:464-68; Jaakkola et al., 2001, Science, 292:468-72). Bajo condiciones de normoxia, la PHD cataliza la hidroxilacion de dos residuos de prolina conservados dentro de HIF. Como la afinidad de la PHD para el oxlgeno esta dentro del intervalo fisiologico del oxlgeno y el oxlgeno es un cofactor necesario para modificar HIF hidroxilados, la PHD se inactiva cuando se reduce la tension de oxlgeno. De esta manera, el HIF es degradado rapidamente bajo condiciones de normoxia pero se acumula en celulas bajo condiciones de hipoxia o cuando se inhibe la PHD.

Se han descrito cuatro isotipos de PHD: PHD1, PHD2, PHD3 y PHD4 (Epstein et al., 2001, Cell, 107:43-54; Kaelin, 2005, Annu Rev Biochem., 74:115-28; Schmid et al., 2004, J Cell Mol Med., 8:423-31). Los diferentes isotipos se expresan ubicuamente pero se regulan diferencialmente y tienen distintos papeles fisiologicos en la respuesta celular a la hipoxia. Hay evidencia de que los varios isotipos tienen diferente selectividad para los tres subtipos diferentes de HIF-a (Epstein et al., anteriormente). En terminos de localization celular, la pHD1 es principalmente nuclear, la PHD2 es principalmente citoplasmica y la PHD3 parece ser tanto citoplasmica como nuclear (Metzen E, et al. 2003, J Cell Sci., 116(7): 1319-26). La pHD2 parece ser la HIF-a prolil hidroxilasa predominante bajo condiciones de normoxia (Ivan et al., 2002. Proc Natl Acad Sci. USA, 99(21):13459-64; Berra et al., 2003, EMBO J., 22:4082-90). Los tres isotipos tienen un alto grado de homologla de aminoacidos y el sitio activo del enzima esta altamente conservado.

La disruption dirigida de la activad de la enzima PHD por moleculas pequenas tiene utilidad potencial en el tratamiento de trastornos de detection y distribution de oxlgeno. Los ejemplos incluyen, pero no estan limitados a: anemia; anemia falciforme; enfermedad vascular periferica; enfermedad de la arteria coronaria; insuficiencia cardlaca; protection del tejido de isquemia en condiciones como la isquemia miocardica, infarto de miocardio y derrame cerebral; preservation de organos para trasplante; tratamiento de la isquemia de los tejidos mediante la regulation y/o restauracion del flujo sangulneo, suministro de oxlgeno y/o utilization de energla; aceleracion de la curacion de heridas en particular en pacientes diabeticos y ancianos; tratamiento de quemaduras; tratamiento de infecciones; curacion del hueso y crecimiento del hueso. Ademas, la disrupcion dirigida de la PHD se espera que tenga utilidad en el tratamiento de trastornos metabolicos como la diabetes, obesidad, colitis ulcerativa, enfermedad inflamatoria del intestino y trastornos relacionados como enfermedad de Crohn. (Recent Patents on Inflammation & Allergy Drug Discovery, 2009, 3:1-16).

El HIF ha demostrado ser el factor transcripcional principal que lleva a la production de eritropoyetina aumentada bajo condiciones de hipoxia (Wang et al., 1993, anteriormente). Aunque el tratamiento con eritropoyetina humana recombinante ha demostrado ser un metodo eficaz para tratar la anemia, la inhibition de PHD mediada por celulas pequenas puede esperarse que ofrezca ventajas sobre el tratamiento con eritropoyetina. Especlficamente, la funcion de otros productos de genes de HIF es necesaria para la hematopoyesis y la regulacion de estos factores aumenta la eficacia de la hematopoyesis. Ejemplos de productos de genes diana de HIF que son crlticos para la hematopoyesis incluyen: transferrina (Rolfs et al., 1997, J Biol Chem., 272(32):20055-62), receptor de transferrina (Lok et al., 1999, J Biol Chem., 274(34):24147-52; Tacchini et al., 1999, J Biol Chem., 274(34):24142-46)y ceruloplasmina (Mukhopadhyay et al., 2000, J Biol Chem., 275(28):21048-54). La expresion de hepcidina tambien es suprimida por HIF (Peyssonnaux et al., 2007, J Clin Invest., 117(7):1926-32) y los inhibidores de moleculas pequenas de PHD han demostrado reducir la produccion de hepcidina (Braliou et al., 2008, J Hepatol., 48:801-10). La hepcidina es un regulador negativo de la disponibilidad de hierro que es necesario para la hematopoyesis, por lo que una reduction en la produccion de hepcidina se espera que sea beneficiosa para el tratamiento de la anemia. La inhibicion de PHD puede ser tambien util cuando se usa en conjuncion con otros tratamientos para la anemia incluyendo suplementos de hierro y/o eritropoyetina exogena. Los estudios de mutaciones en el gen PHD2 que tienen lugar de forma natural en la poblacion humana proporcionan evidencia adicional para el uso de inhibidores de PHD para tratar la anemia. Dos informes recientes han demostrado que los pacientes con mutaciones disfuncionales en el gen PHD2 muestran eritrocitosis aumentada y hemoglobina en sangre elevada (Percy et al., 2007, PNAS, 103(3):654-59; Al-Sheikh et al., 2008, Blood Cells Mol Dis., 40:160-65). Ademas, se ha evaluado un inhibidor de PHD de moleculas pequenas en voluntarios sanos y pacientes con enfermedad renal cronica (Solicitud de Patente U.S. N° US2006/0276477, 7 de diciembre del 2006). La eritropoyetina en plasma aumento de una manera dependiente de la dosis y las concentraciones de hemoglobina en sangre aumentaron en los pacientes con

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enfermedad renal cronica.

La acumulacion total de HIF bajo condiciones de hipoxia gobierna una sobre-regulacion adaptativa de glicolisis, una reduction en la fosforilacion oxidante resultando en una reduction en la production de peroxido y superoxido de hidrogeno, la optimization de la fosforilacion oxidativa protegiendo las celulas contra dano isquemico. Por lo tanto, se espera que los inhibidores de PHD sean utiles en la conservation del trasplante de tejidos y organos (Bernhardt et al., 2007, Methods Enzymol., 435:221-45). Aunque se puede conseguir beneficio administrando inhibidores de PHD antes de recolectar los organos para el trasplante, la administration de un inhibidor a un organo/tejido despues de la recoleccion, ya sea en almacenamiento (por ejemplo solution de cardioplejla) o despues del trasplante, puede ser tambien de beneficio terapeutico.

Se espera que los inhibidores de PHD sean eficaces conservando el tejido de isquemia y/o hipoxia regional. Esto incluye isquemia/hipoxia asociada con entre otros: angina, isquemia de miocardio, derrame cerebral, isquemia del musculo esqueletico. Recientemente, el pre-condicionamiento isquemico ha demostrado ser un fenomeno dependiente de HlF (Cai et al., 2008, Cardiovasc Res., 77(3):463-70). Aunque el concepto de pre-condicionamiento es mas conocido por sus efectos protectores en el corazon, tambien se aplica a otros tejidos incluyendo, pero no limitado a: hlgado, musculo esqueletico, hlgado, pulmon, rinon, intestino y cerebro (Pasupathy et al., 2005, Eur J Vasc Endovasc Surg., 29:106-15; Mallick et al., 2004, Dig Dis Sci., 49(9):1359-77). Se ha obtenido evidencia experimental para los efectos protectores del tejido de la inhibicion de PHD y la elevacion de HIF en una variedad de modelos animales incluyendo: bloqueo de la expresion de la llnea germinal de PHD1 que confirio protection del musculo esqueletico del ataque isquemica (Aragones et al., 2008, Nat Genet., 40(2):170-80), silenciamiento de PHD2 a traves del uso de ARNsi que protegio el corazon de ataque isquemico (Natarajan et al., 2006, Circ Res., 98(1):133-40), inhibition de PHD por la administracion de monoxido de carbono que protegio el miocardio de lesion isquemica (Chin et al., 2007, Proc Natl Acad Sci. U.S.A., 104(12):5109-14), hipoxia en el cerebro que aumento la tolerancia a la isquemia (Bernaudin et al., 2002, J Cereb Blood Flow Metab., 22(4):393-403). Ademas, los inhibidores de moleculas pequenas de PHD protegen el cerebro en modelos de derrame cerebral (Siddiq et al., 2005, J Biol Chem., 280(50):41732-43). Ademas, la sobre-regulacion de HIF tambien ha demostrado que protege el corazon de ratones diabeticos, donde los resultados son generalmente peores (Natarajan et al., 2008, J Cardiovasc Pharmacol., 51(2):178-187).. Los efectos protectores del tejido tambien pueden observarse en la enfermedad de Buerger, la enfermedad de Raynaud y en la acrocianosis.

La dependencia reducida en el metabolismo aerobico a traves del ciclo de Kreb en la mitocondria y la dependencia aumentada en la glicolisis anaerobica producida por la inhibicion de PHD puede tener efectos beneficiosos en tejidos de normoxia. Es importante senalar que la inhibicion de PHD tambien ha demostrado que eleva el HIF bajo condiciones de normoxia. Asl, la inhibicion de PHD produce una pseudohipoxia asociada con la respuesta de hipoxia que se inicia a traves del HIF pero con la oxigenacion del tejido permaneciendo normal. Puede esperarse tambien que la alteration del metabolismo producida por la inhibicion de PHD proporcione un paradigma de tratamiento para la diabetes, obesidad y trastornos relacionados, incluyendo comorbilidades.

Globalmente, la acumulacion de cambios en la expresion de los genes producida por la inhibicion de PHD reduce la cantidad de energla generada por unidad de glucosa y estimulara el cuerpo para que queme mas grasas para mantener el equilibrio energetico. Los mecanismos para el aumento en la glicolisis se tratan con anterioridad. Otras observaciones ligan la respuesta de hipoxia con los efectos que se espera sean beneficiosos para el tratamiento de la diabetes y la obesidad. La hipoxia y los mimeticos de hipoxia como la deferoxamina han demostrado que evitan la diferenciacion de adipocitos (Lin et al., 2006, J Biol Chem., 281(41):30678-83; Carriere et al., 2004, J Biol Chem., 279(39):40462-69). La inhibicion de la actividad de PHD durante las etapas iniciales de la adipogenesis inhibe la formation de nuevos adipocitos (Floyd et al., 2007, J Cell Biochem., 101:1545-57). La hipoxia, el cloruro de cobalto y la deferoxamina elevaron el HIF e inhibieron la transcription del receptor de la hormona nuclear PPAR gamma 2 (Yun et al., 2002, Dev Cell., 2:331-41). Como la PPAR gamma 2 es una senal importante para la diferenciacion de adipocitos, puede esperarse que la inhibicion de PHD que inhiba la diferenciacion de adipocitos. Se demostro que estos efectos estaban mediados por el gen regulado por HIF DEC1/Stra13 (Yun et al., anteriormente).

Los inhibidores moleculares pequenos de PHD han demostrado que tienen efectos beneficiosos en los modelos animales de diabetes y obesidad (Publication de Solicitud de Patente Internacional N° WO2004/052284, 24de Junio del 2004; WO2004/052285, 24 de Junio del 2004). Entre los efectos demostrado por los inhibidores de PHD en obesidad inducida por dieta en ratones, modelos de raton db/db y de rata fa/fa de Zucker estaban la disminucion de: concentration de glucosa en sangre, masa de grasa en tanto las bolsas de grasa abdominales como viscerales, hemoglobina A1c, trigliceridos en plasma, peso corporal asl como cambios en los biomarcadores de la enfermedad establecida como aumentos en los niveles de adrenomedulina y leptina. La leptina es un producto del gen diana HIF conocido (Grosfeld et al., 2002, J Biol Chem., 277(45):42953-57). Se demostro que los productos de los genes implicados en el metabolismo en celulas grasas estaban regulados por la inhibicion de PHD de una manera dependiente de HID (Intl. Pat. App. Pub. No. WO2004/052285, anteriormente). Estos incluyen la apolipoprotelna A-IV, acilo CoA tioesterasa, carnitina acetil transferasa, y la protelna de enlace del factor de crecimiento tipo insulina (IGFBP)-1.

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Se espera que los inhibidores de PHD sean terapeuticamente utiles como estimulantes de la vasculogenesis, la angiogenesis y la arteriogenesis. Estos procesos establecen o restauran el flujo sanguineo y la oxigenacion a los tejidos con isquemia y/o condiciones de hipoxia (Semenza et al., 2007, J Cell Biochem., 102:84047; Semenza, 2007, Exp Physiol., 92(6):988-91). Se ha demostrado que el ejercicio fisico aumenta el HIF-1 y el factor de crecimiento endotelial vascular en modelos animales experimentales y en humanos (Gustafsson et al. 2001, Front Biosci., 6:D75-89) y consecuentemente el numero de vasos sanguineos en el musculo esqueletico. El VEGF es un producto genico diana de HIF bien conocido que es un factor clave de la angiogenesis (Liu et al., anteriormente). La inhibicion de PHD ofrece una ventaja potencial sobre las terapias angiogenicas ya que estimula una expresion controlada de multiples factores de crecimiento angiogenicos de una manera dependiente de HIF incluyendo, pero no limitado a: factor de crecimiento placentario (PLGF), angiopoyetina-1 (ANGPT1), angiopoyetina- 2 (aNgPT2), factor de crecimiento beta derivado de plaquetas (PDGFB) (Carmeliet, 2004, J Intern Med., 255:53861; Kelly et al., 2003, Circ Res., 93:1074-81) y factor 1 derivado de celulas del estroma (SDF-1) (Ceradini et al., 2004, Nat Med., 10(8):858-64). La expresion de la angiopoyetina-1 durante la angiogenesis produce vasos sanguineos resistentes a fugas, al contrario que los vasos producidos por la administracion de VEGF solamente (Thurston et al., 1999, Science, 286:2511-14; Thurston et al., 2000, Nat Med., 6(4):460-3; Elson et al., 2001, Genes Dev., 15(19):2520-32). El factor 1 derivado de celulas del estroma (SDF-1) ha demostrado ser critico para el proceso de reclutamiento de celulas progenitoras endoteliales en los sitios de lesion del tejido. La expresion de SDF-1 aumento la adhesion, migration y fijacion de las celulas progenitoras CXCR4-positivas circulantes con el tejido isquemico. Ademas la inhibicion de SDSF-1 en tejido isquemico o bloqueo de CXCR4 en celulas circulantes evita el reclutamiento de celulas progenitoras a sitios de lesion (Ceradini et al., 2004, supra; Ceradini et al., 2005, Trends Cardiovasc Med., 15(2):57-63). De manera importante, el reclutamiento de celulas progenitoras endoteliales en sitios de lesion se reduce en ratones viejos y esto se corrige por intervenciones que aumentan el HIF en el sitio de la lesion (Chang et al., 2007, Circulation, 116(24):2818-29). La inhibicion de PHD ofrece la ventaja de no solo aumentar la expresion de una variedad de facciones angiogenicas si no tambien una coordination en su expresion a lo largo del proceso de angiogenesis y reclutamiento de celulas progenitoras endoteliales en tejido isquemico.

Los inhibidores de PHD son utiles en terapias pro-angiogenicas tambien. Se ha demostrado que la sobreexpresion mediada por adenovirus de HIF induce la angiogenesis en tejido no isquemico de un animal adulto (Kelly et al., 2003, Circ Res., 93(11):1074-81) proporcionando evidencia de que las terapias que elevan el HIF, como la inhibicion de PHD, induciran la angiogenesis. El factor de crecimiento placentario (PLGF), tambien tiene un gen diana HIF, que ha demostrado que juega un papel critico en la angiogenesis en tejido isquemico (Carmeliet, 2004, J Intern Med., 255(5):538-61; Luttun et al., 2002, Ann N Y Acad Sci., 979:80-93). Se han demostrado los potentes efectos pro-angiogenicos de terapias que elevan el HIF, a traves de la sobreexpresion de HIF, en musculo esqueletico (Pajusola et al., 2005, FASEB J., 19(10):1365-7; Vincent et al., 2000, Circulation, 102:2255-61) y en el miocardio (Shyu et al., 2002, Cardiovasc Res., 54:576-83). Tambien se ha demostrado el reclutamiento de celulas progenitoras endoteliales al miocardio isquemico por el gen diana HIF SDF-1 (Abbott et al., 2004, Circulation, 110(21):3300-05). Por lo tanto, los inhibidores de pHd seran probablemente eficaces para estimular la angiogenesis en el establecimiento de isquemia del tejido, particularmente isquemia del musculo. La angiogenesis terapeutica producida por inhibidores de PHD llevara probablemente a restaurar el flujo sanguineo a tejidos y por lo tanto mejorara dichas enfermedades como, pero no limitado a, angina de pecho, isquemia e infarto de miocardio, enfermedad isquemica periferica, claudication, ulceras gastricas y duodenales, colitis ulcerosa, y enfermedad inflamatoria intestinal.

La PHD y el HIF juegan un papel central en la reparation y regeneration del tejido incluyendo la curacion de heridas y ulceras. Estudios recientes han demostrado que una expresion aumentada de los tres PHDs en los sitios de heridas en ratones viejos con una reduction resultante en la acumulacion de HIF (Chang et al., anteriormente). Por lo tanto, la elevation de HIF en ratones viejos administrando deferoxamina aumento el grado de curacion de heridas de vuelta a los niveles observado en ratones jovenes. De manera similar, en un modelo de ratones diabeticos, la elevacion de HIF se suprimio en comparacion con companeros de camada no diabeticos (Mace et al., 2007, Wound Repair Regen., 15(5):636-45). La administracion topica de cloruro de cobalto, una mimetico de la hipoxia, o sobreexpresion de un HIF murino que carece del dominio de degradation dependiente del oxigeno y por lo tanto proporciona una forma constituyentemente activa de HIF, resulto en HIF aumentado en el sitio de la herida, expresion aumentada de Genes diana HIF como VEGF, Nos2 y Hmox1 y curacion de la herida acelerada. El efecto beneficioso de la inhibicion de PHD no esta restringido a la piel y los inhibidores de moleculas pequenas de PHD han demostrado recientemente que proporcionan beneficios en un modelo de raton de colitis (Robinson et al., 2008, Gastroenterology, 134(1 ):145-55).

En resumen, la inhibicion de PHD resultante en la acumulacion de HIF actua probablemente por al menos cuatro mecanismos para contribuir a la curacion de heridas acelerada y mas completa: 1) protection del tejido comprometido por la hipoxia y/o isquemia, 2) estimulacion de angiogenesis para establecer o restaurar el flujo sanguineo apropiado al sitio, 3) reclutamiento de celulas progenitoras endoteliales a los sitios de herida, 4) estimulacion de la liberation de factores de crecimiento que estimulan especificamente la curacion y la regeneracion.

Como el PDGF es una diana genica HIF (Schultz et al., 2006, Am J Physiol Heart Circ Physiol.,

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290(6):H2528-34; Yoshida et al., 2006, J Neurooncol., 76(1): 13-21), la inhibicion de PHD aumenta probablemente la expresion de PDGF endogeno y produce un efecto similar o mas beneficiosos que los producidos solo con PDGF. Los estudios en animales han demostrado que la aplicacion topica de PDGF resulta en cantidades de ADN, protelna e hidroxiprolina en la herida aumentadas; formacion de granulacion y tejido epidermico mas gruesos; y repoblacion celular aumentada de los sitios de heridas. El PDGF ejerce un efecto local en la potenciacion de la formacion de nuevo tejido conector. La eficacia de la inhibicion de PHD es probablemente mayor que la producida por el PDGF debido a los efectos pro-angiogenicos y protectores del tejido adicional mediados por HIF.

Los efectos beneficiosos de la inhibicion de PHD se extiende no solo a la curacion de heridas acelerada en la piel y el colon sino tambien a la curacion de otro dano tisular incluyendo pero no limitado a ulceras gastrointestinales, reemplazos de injertos de piel, quemaduras, heridas cronicas y quemaduras por congelacion.

Se han encontrado celulas madre y celulas progenitoras en nichos de hipoxia dentro del cuerpo y la hipoxia regula su diferenciacion y destino celular (Simon et al., 2008, Nat Rev Mol Cell Biol., 9:285-96). Por lo tanto, los inhibidores de PHD pueden ser utiles para mantener las celulas madre y las celulas progenitoras en un estado pluripotente y para conducir la diferenciacion a los tipos de celulas deseados. Las celulas madre pueden ser utiles en el cultivo y expansion de poblaciones de celulas madre y pueden mantener las celulas en un estado pluripotente mientras se administran hormonas y otros factores a las celulas para influir en la diferenciacion y el destino celular.

Un uso adicional de los inhibidores de PHD en el area de agentes terapeuticos de celulas madre y celulas progenitoras se refiere al uso de inhibidores de PHD para condicionar a estas celulas para que resistan el proceso de implantacion en el cuerpo y para generar una respuesta apropiada del cuerpo para hacer la implantacion de celulas madre y celulas progenitoras viable (Hu et al., 2008, J Thorac Cardiovasc Surg., 135(4):799-808). Mas especlficamente los inhibidores de PHD pueden facilitar la integracion de celulas madre y extraerlas en un suministro de sangre apropiado para mantener a las celulas madre una vez que se han integrado. Esta formacion de vasos sangulneos tambien funcionara para llevar hormonas y otros factores liberados de estas celulas al resto del cuerpo.

Los inhibidores de PHD tambien pueden ser utiles en el tratamiento de infecciones (Peyssonnaux et al., 2005, J Invest Dermatol., 115(7): 1806-15; Peyssonnaux et al., 2008 J Invest Dermatol., 2008 Aug;128(8):1964-8). Se ha demostrado que la elevacion de HIF aumenta la respuesta inmune innata a la infeccion en fagocitos y queratinocitos. Los fagocitos en los que el HIF es elevado muestran actividad bactericida aumentada, produccion de oxido nltrico aumentada y expresion aumentada de catelicidina peptida antibacteriana. Estos efectos pueden ser utiles para tratar infecciones de quemaduras.

El HIF tambien ha demostrado estar implicado en el crecimiento y curacion oseos (Pfander D et al., 2003 J Cell Sci., 116(Pt 9):1819-26., Wang et al., 2007 J Clin Invest., 17(6):1616-26.) y puede usarse por lo tanto para curar o evitar fracturas. El HIF estimula la glicolisis para proporcionar energla para permitir la slntesis de la matriz extracelular de condrocitos epiteliales bajo un ambiente de hipoxia. El HIF tambien juega un papel en conducir la liberacion de VEGF y angiogenesis en el proceso de curacion osea. El crecimiento de vasos sangulneos en el crecimiento o curacion del hueso puede ser la etapa de limitacion de la velocidad en el proceso.

Los inhibidores de moleculas pequenas de PHD se han descrito en la bibliografla, que incluyen, pero no estan limitados a, derivados de imidazo[1,2-a]piridina (Warshakoon et al., 2006, Bioorg Med Chem Lett., 16(21):5598-601), derivados de piridina sustituidos (Warshakoon et al., 2006, Bioorg Med Chem Lett., 16(21 ):5616- 20), pirazolopiridinas (Warshakoon et al., 2006, Bioorg Med Chem Lett., 16(21):5687-90), derivados de clicina N- sustituidos heteroaromaticos biclclicos (Publicacion de Solicitud de Patente Internacional N° WO2007/103905, 13 de Septiembre del 2007), compuestos basados en quinolina (Publicacion de Solicitud de Patente Internacional N° WO2007/070359, 21 de Junio del 2007), derivados de glicina N-sustituidos de pirimidinetriona (Publicacion de Solicitud de Patente Internacional WO2007/150011, 27 de Diciembre del 2007), compuestos de amida de arilo o heteroarilo sustituidos (Publicacion de Solicitud de Patente U.S. N° US2007/0299086, 27 de Diciembre del 2007) y 4- hidroxipirimidina-5-carboxamidas sustituidas (Publicacion de Solicitud de Patente Internacional, 24 de Septiembre del 2009).

RESUMEN DE LA INVENCION

La presente invencion es como se define en las reivindicaciones anadidas.

La invencion esta dirigida a las realizaciones generales y preferidas definidas, como se exponen en la presente. Las caracterlsticas preferidas y ejemplares de la invencion seran aparente a partir de la descripcion detallada siguiente y con referencia a las figuras de los dibujos.

En sus muchas realizaciones, la presente invencion se refiere a una nueva sal de un inhibidor de enzimas prolil hidroxilasa (PHD).

Mas particularmente, la presente divulgacion se refiere a la sal de meglumina de un compuesto de la formula siguiente:

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Especlficamente, la presente invencion se refiere a la forma de dihidrato de la sal de meglumina del compuesto (1).

Realizaciones y ventajas adicionales de la invencion seran aparentes del analisis detallado, esquemas, ejemplos y reivindicaciones siguientes.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

La Figura 1 muestra la dependencia del pH de la saturacion del compuesto (1) en la solucion.

La Figura 2 muestra los datos de PXRD de la sal de meglumina del compuesto (1).

La Figura 3 muestra los datos de DSC, TGA y rayos x de la sal de meglumina del compuesto (1).

La Figura 4 muestra: (A) la estructura de cristal unica de la sal de meglumina del compuesto (1); y (B) el patron de polvo experimental y estimulado de un cristal unico para la sal de meglumina del compuesto (1).

La Figura 5 muestra la estimulacion del porcentaje de HIF1-a tras la exposicion a formulaciones de sal de meglumina del compuesto (1).

La Figura 6 muestra los niveles de plasma (carga sistemica) en ratones heridos despues de la aplicacion topica de formulaciones de la sal de meglumina del compuesto (1).

La Figura 7 muestra la correlacion del flujo del compuesto (1) a traves de la piel (dermis humana) y una membrana artificial usando una celula de difusion de Franz tras la aplicacion de una formulacion de sal de meglumina del compuesto (1 ).

La Figura 8 muestra irritacion no muy baja provocada por la aplicacion de una formulacion de la sal de meglumina del compuesto (1) como se probo en un ensayo HET-CAM.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

La divulgacion se refiere a una nueva sal de un compuesto de la formula siguiente:

imagen2

que es un inhibidor de enzimas prolil hidroxilasa (PHD), y composiciones de las mismas para el tratamiento, mejora o inhibicion de trastornos y enfermedades relacionadas con la modulacion de un enzima prolil hidroxilasa. La presente divulgacion tambien se refiere a metodos de hacer dicho compuesto y las composiciones farmaceuticas del mismo.

A) Terminos

La presente invencion se entiende mejor con referencia a las definiciones siguientes, los dibujos y la divulgacion ejemplar proporcionada en la presente.

Los terminos "comprende", "contiene" e "incluye", se usan en la presente en su sentido abierto, no

limitativo.

"Administrar " o "administracion" significa proporcionar un farmaco a un paciente de una manera que es farmaceuticamente util.

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"Composicion" significa un producto que contiene un compuesto de la presente invencion (como un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, asi como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de dichas combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas).

"Compuesto" o "farmaco" significa un compuesto de Formula (1) o formas farmaceuticamente aceptables del mismo.

"Formas" significa varios isomeros y mezclas de uno o mas compuestos de Formula (1) y sales o hidratos de los mismos. El termino "isomero" se refiere a compuestos que tienen la misma composicion y peso molecular pero difieren en las propiedades fisicas y/o quimicas. Dichas sustancias tienen el mismo numero y tipo de atomos pero difieren en la estructura. La diferencia estructural puede ser en la constitution (isomeros geometricos) o en la capacidad de rotar el plano de luz polarizada (estereoisomeros). El termino " estereoisomero" se refiere a isomeros de constitucion identica que difieren en la disposition de sus atomos en el espacio. Los enantiomeros y diastereomeros son estereoisomeros en los que un atomo de carbono asimetricamente sustituido actua como un centro quiral. El termino "quiral" se refiere a una molecula que no es superponible en su imagen espejo, implicando la ausencia de un eje y un plano o centro de simetria.

El termino "hipoxia" o "trastorno hipoxico" se refiere a una afeccion en la que no hay suficiente nivel de oxigeno proporcionado en la sangre o a los tejidos y organos. Los trastornos hipoxicos pueden tener lugar a traves de una variedad de mecanismos incluyendo cuando no hay suficiente capacidad de la sangre para transportar oxigenos (es decir anemia), cuando hay un flujo inadecuado de sangre al tejido y/o organo provocado por o fallo cardiaco o por bloqueo de los vasos y/o arterias sanguineas (es decir isquemia), cuando hay presion barometrica reducida (es decir, enfermedad de altura a altitudes altas) o cuando las celulas disfuncionales son incapaces de hacer uso del oxigeno apropiadamente (es decir, condiciones histotoxicas). Por consiguiente, alguien experto en la tecnica apreciara facilmente que la presente invencion es util en el tratamiento de una variedad de condiciones de hipoxia incluyendo anemia, fallo cardiaco, enfermedad arterial coronaria, tromboembolia, derrame cerebral, angina de pecho y similares.

"Paciente" o "sujeto" significa un animal, preferiblemente un mamifero, mas preferiblemente un humano con necesidad de intervention terapeutica.

"Farmaceuticamente aceptable" significa entidades y composiciones moleculares que son de pureza y calidad suficientes para su uso en la formulation de una composicion o medicamente de la presente invencion. Como tanto el uso humano (clmico como sin receta) como el veterinario estan igualmente incluidos dentro del alcance de la presente invencion, una formulacion incluira una composicion o medicamente para uso o humano o veterinario.

"Excipiente farmaceuticamente aceptable" se refiere a una sustancia que es no toxica, biologicamente tolerable y por lo demas biologicamente adecuada para su administration a un sujeto, como una sustancia inerte, anadida a una composicion farmaceutica o usada de otra manera como un vehiculo, portador o diluyente para facilitar la administracion de un agente y que es compatible con el mismo. Ejemplos de excipientes incluyen carbonato calcico, fosfato calcico, diversos azucares y tipos de almidon, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales, y polietilenglicoles.

"Sal farmaceuticamente aceptable" significa una sal de acido o base de los compuestos de la divulgation que es de pureza y calidad suficientes para su uso en la formulacion de una composicion o medicamento de la presente divulgacion y son toleradas y suficientemente no toxicas para ser usadas en una preparation farmaceutica.

El termino "solvatos" significa aquellos compuestos formados de la interaction o formation de complejos de dichos compuestos con una o mas moleculas del solvente, ya sea en solution o en forma solida o cristalina. El termino "hidratos" significa solvatos, en los que el solvente es agua.

"Cantidad terapeuticamente efectiva" significa la cantidad de compuesto que provoca la respuesta biologica o medicinal en un sistema de tejidos, animal o humano, que se esta buscando por un investigador, veterinario, doctor medico u otro clinico, que incluye el alivio terapeutico de los sintomas de la enfermedad o trastorno que se esta tratando.

El termino "tratar" como se usa en la presente, a menos que se indique lo contrario, significa revertir, aliviar, inhibir el progreso de, disminuir la severidad de, o prevenir el trastorno o afeccion a la que dicho termino se aplica, o uno o mas sintomas de dicho trastorno o afeccion. El termino "tratamiento", como se usa en la presente, a menos que se indique lo contrario, se refiere al acto de tratar.

B) Compuestos

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La presente invention se refiere a una sal del compuesto de Formula (1). En particular, la invention se refiere a la forma de dihidrato de la sal de meglumina del compuesto de Formula (1). En general, la divulgation se refiere a todos los compuestos que tras su administration a pacientes con necesidad de de tratamiento de trastornos o enfermedades relacionados con la modulation de una enzima prolil hidroxilasa.

Las realizaciones de la invencion incluyen polimorfos de dichos compuestos, y mezclas de los mismos, incluso si dichas formas no se exponen expllcitamente en la presente especificacion.

En otra realization de la invencion la forma de dihidrato de la sal de meglumina de los compuestos de Formula (1) puede obtenerse como co-cristales.

En ciertas realizaciones de la invencion la forma de dihidrato de la sal de meglumina de los compuestos de Formula (1) se obtuvo en forma cristalina.

Los compuestos de farmacos de la presente invencion tambien incluyen una mezcla de estereoisomeros, o de cada isomero puro o sustancialmente puro. Por ejemplo, el presente compuesto puede tener opcionalmente uno o mas centros asimetricos en un atomo de carbono que contiene cualquier sustituyente. Por lo tanto, el compuesto puede existir en la forma de enantiomero o diastereomero, o una mezcla de los mismos. Cuando el presente compuesto contiene un enlace doble, el presente compuesto puede existir en la forma de un isomerismo geometrico (compuesto cis, compuesto trans), y cuando el presente compuesto contiene un enlace no saturado como carbonilo, entonces el presente compuesto puede existir en la forma de un tautomero, y el presente compuesto tambien incluye estos isomeros o una mezcla de los mismos. El compuesto de partida en la forma de una mezcla racemica, enantiomero o diastereomero puede usarse en los procesos para preparar el presente compuesto. Cuando el presente compuesto se obtiene en la forma de un diastereomero o enantiomero, pueden separarse por un metodo convencional como cromatografla o cristalizacion fraccional. Los compuestos de farmacos adecuados son aquellos que ejercen un efecto fisiologico local, o un efecto sistemico, ya sea despues de penetrar la mucosa, dermis o -en el caso de administracion oral- despues del transporte al tracto gastrointestinal con la saliva.

La divulgacion se refiere a sales farmaceuticamente aceptables de compuestos de Formula (1) y metodos de usar dichas sales. Una sal farmaceuticamente aceptable se refiere a una sal de una base o acido libre del compuesto que es no toxica, biologicamente tolerable, o biologicamente adecuada de otra manera para la administracion al sujeto. Ver, de forma general, S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 1977, 66:1-19, y Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection, and Use, 2002, Stahl and Wermuth, Eds., Wiley- VCH and VHCA, Zurich. Las sales farmaceuticamente aceptables preferidas son aquellas que son farmacologicamente eficaces y adecuadas para el contacto con los tejidos de pacientes sin toxicidad, irritation o respuesta alergica indebidas. En presencia de un grupo acido, como un acido carboxllico, la sal farmaceuticamente aceptable deseada puede prepararse por cualquier metodo adecuado, por ejemplo, tratamiento del acido libre con meglumina.

C) Composiciones Farmaceuticas

En realizaciones particulares de la invencion, la forma de dihidrato de la sal de meglumina de los compuestos de Formula (1), se usan solos o en combination con uno o mas ingredientes adicionales, para formular las composiciones farmaceuticas. Una composition farmaceutica comprende una cantidad efectiva de al menos un compuesto de acuerdo con la invencion.

La divulgacion tambien proporciona composiciones (incluyendo composiciones farmaceuticas) que comprenden un compuesto o derivados descritos en la presente, y uno o mas portadores, excipientes y diluyentes farmaceuticamente aceptables. En ciertas realizaciones de la invencion, una composicion puede tambien contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes de tamponamiento del pH. En una realizacion especlfica, la composicion farmaceutica es farmaceuticamente aceptable para la administracion a un humano. En ciertas realizaciones, la composicion farmaceutica comprende una cantidad terapeutica o profilacticamente efectiva de un compuesto o derivado descrito en la presente. La cantidad de un compuesto o derivado de la invencion que sera terapeutica o profilacticamente efectivo puede administrarse por tecnicas cllnicas estandar. Las cantidades efectivas ejemplares se describen con mas detalle en las secciones siguientes. En ciertas realizaciones de la invencion, una composicion puede contener tambien un estabilizador. Un estabilizador es un compuesto que reduce la tasa de degradation qulmica de la composicion del compuesto (1). Los estabilizadores adecuados incluyen, pero no estan limitados a, antioxidantes, como acido ascorbico, tampones de pH, o tampones de sales.

Las composiciones farmaceuticas pueden estar en cualquier forma adecuada para la administracion a un sujeto, preferiblemente un sujeto humano. En ciertas realizaciones, las composiciones estan en forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, comprimidos, plldoras, capsulas, polvos y formulaciones de liberation sostenida. Las composiciones tambien pueden estar en formas de dosificacion unitaria particulares. Ejemplos de formas de dosificacion unitaria incluyen, pero no estan limitadas a: comprimidos; caplets; capsulas, como capsulas de gelatina

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elasticas blandas; obleas; trociscos; grageas; dispersiones; supositorios; unguentos; cataplasmas (emplastos); pastas; polvos; apositos; cremas; emplastos; soluciones; parches; aerosoles (por ejemplo, esprais nasales o inhaladores); geles; formas de dosificacion llquida adecuadas para la administracion oral o mucosal a un paciente, incluyendo suspensiones (por ejemplo, suspensiones llquidas acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite en agua o emulsiones llquidas de agua en aceite), soluciones y elixires; formas de dosificacion llquida adecuadas para la administracion parenteral a un sujeto; y solidos esteriles (por ejemplo solidos cristalinos o amorfos) que pueden reconstituirse para proporcionar formas de dosificacion llquida adecuadas para la administracion parenteral a un sujeto.

En una realizacion especlfica, el sujeto es un mamlfero como una vaca, caballo, oveja, cerdo, ave, gato, perro, raton, rata, conejo, o cobaya. En una realizacion preferida, el sujeto es un humano. Preferiblemente, la composicion farmaceutica es adecuada para administracion veterinaria y/o humana. De acuerdo con esta realizacion, el termino "farmaceuticamente aceptable. Significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno Federal o un estado o enumerado en la Farmacopea de los U.S. u otra farmacopea generalmente reconocida para su uso en animales, y mas particularmente para su uso en humanos.

Los portadores farmaceuticamente aceptables para su uso en composiciones son llquidos esteriles, como agua y aceites, incluyendo los del petroleo, de origen animal, vegetal o sintetico. En una realizacion especlfica, el aceite es aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral o aceite de sesamo. El agua es un portador preferido cuando la composicion farmaceutica se administra intravenosamente. Las soluciones salinas y la dextrosa acusa y las soluciones de glicerol pueden emplearse tambien como portadores llquidos, particularmente como soluciones inyectables. Ejemplos adicionales de portadores farmaceuticos aceptables son conocidos en la tecnica, por ejemplo como se describe en Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) 18th ed. (Mack Publishing, Easton Pa.).

Los excipientes adecuados para su uso en las composiciones incluyen almidon, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, gel de sllice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada en polvo, glicerol, propileno, glicol, agua y etanol. Si un excipiente particular es adecuado para su incorporacion en una composicion farmaceutica depende de una variedad de factores bien conocidos en la tecnica incluyendo, pero no limitado a, la via de administracion y los ingredientes activos especlficos en la composicion.

Las composiciones farmaceuticas que comprenden los compuestos o derivados descritos en la presente se formulan para ser compatibles con la via pretendida de administracion. Las formulaciones son preferiblemente para administracion topica, pero pueden ser para administracion por otros medios como por inhalacion o insuflacion ( ya sea a traves de la boca o la nariz), intradermica, oral, subcutanea, bucal, parenteral, vaginal o rectal. Preferiblemente, las composiciones tambien se formulan para proporcionar estabilidad qulmica aumentada de los compuestos durante el almacenamiento y el transporte. Las formulaciones pueden ser liofilizadas o formulaciones llquidas.

D) Administracion

Un compuesto o derivado descrito en la presente se administra preferiblemente como un componente de una composicion que comprende opcionalmente un vehlculo farmaceuticamente aceptable. El compuesto o derivado preferiblemente se administra oralmente. Otro metodo preferido de administracion es a traves de aplicacion topica del compuesto o derivado.

En ciertas realizaciones, el compuesto o derivado se administra por cualquier otra via conveniente, por ejemplo, por absorcion a traves de la piel, revestimientos epiteliales o mucocutaneos (por ejemplo (epi-)dermis, mucosa oral, rectal y mucosa intestinal). Los metodos de administracion incluyen pero no estan limitados a parenteral, intradermica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutanea, intranasal, epidural, oral, sublingual, intranasal, intracerebral, intravaginal, transdermica, rectal, por inhalacion, o por via topica, particularmente a los oldos, nariz, ojos, o piel. En la mayorla de casos, la administracion resultara en la liberacion del compuesto o derivado en el torrente sangulneo. En realizaciones preferidas, el compuesto o derivado se administra por via oral.

Ademas, la divulgacion se refiere a metodos de usar los compuestos descritos en la presente para tratar sujetos diagnosticados con o que sufren de una enfermedad, trastorno o afeccion mediada por prolil hidroxilasa, como: anemia, trastornos vasculares, trastornos metabolicos y curacion de heridas.

Los compuestos de la presente invention son utiles en tratamiento o prevention de anemia que comprende condiciones anemicas asociadas con enfermedad de rinon cronica, enfermedad poliqulstica renal, anemia aplasica, anemia hemolltica autoinmune, anemia por trasplante de medula osea, slndrome de Churg-Strauss, anemia de Diamond Blackfan, anemia de Fanconi, slndrome de Felty, enfermedad injerto contra huesped, trasplante de celulas madre hematopoyeticas, slndrome uremico hemolltico, slndrome mielodisplasico, hemoglobinuria paroxlstica nocturna, osteomielofibrosis, pancitopenia, aplasia pura de celulas rojas, purpura Schoenlein-Henoch, anemia

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refractaria con exceso de blastos, artritis reumatoide, slndrome de Shwachman, anemia de celulas falciformes, talasemia mayor, talasemia menor, trombocitopenica purpura, pacientes anemicos o no anemicos sometidos a cirugla, anemia asociada con o secundaria a un traumatismo, anemia sideroblastica, anemia secundaria a otros tratamientos que incluyen: inhibidores de la transcriptasa inversa para tratar el VIH, hormonas corticosteroides, quimioterapeuticos que contienen cisplatino o no clclicos, alcaloides de la vinca, inhibidores de la mitosis, inhibidores de la topoisomerasa II, antraciclinas, agentes alquilantes, en particular anemia secundaria a inflamatoria, el envejecimiento y/o enfermedades cronicas. La inhibicion PHD tambien se puede utilizar para tratar slntomas de anemia, incluyendo fatiga cronica, palidez y mareos.

Las moleculas de la presente invencion son utiles para el tratamiento o prevencion de enfermedades de trastornos metabolicos incluyendo, pero no limitado a, diabetes y obesidad. En otro aspecto de la divulgacion, las moleculas de la presente invencion son utiles para el tratamiento o prevencion de trastornos vasculares. Estos incluyen pero no estan limitados a enfermedades relacionadas con hipoxia o curacion de heridas que requieren mediadores pro-angiogenicos para la vasculogenesis, la angiogenesis y la arteriogenesis.

En los metodos de tratamiento divulgados, una cantidad efectiva de un agente farmaceutico de acuerdo con la invencion se administra a un sujeto que padece de o esta diagnosticado que tiene dicha enfermedad, trastorno o afeccion. Una "cantidad efectiva" significa una cantidad o dosis suficiente para producir de forma general el beneficio terapeutico o profilactico deseado en pacientes con necesidad de dicho tratamiento para la enfermedad, trastorno o afeccion designado. Las cantidades efectivas o dosis de los compuestos de la presente invencion pueden averiguarse por metodos rutinarios como modelado, estudios de escalado de dosis o pruebas cllnicas, y tomando en consideracion factores rutinarios, por ejemplo, el modo o via de administration o administration del farmaco, las farmacocineticas del compuesto, la severidad y trayectoria de la enfermedad, trastorno o afeccion, la terapia anterior o actual del sujeto, el estado de salud del sujeto y respuesta a farmacos, y el juicio del medico tratante. Un ejemplo de una dosis esta en el intervalo de desde alrededor de 0,001 a alrededor de 200 mg del compuesto por kg de peso corporal del sujeto por dla, preferiblemente alrededor de 0,05 a 100 mg/kg/dla, o alrededor de 1 a 35 mg/kg/dla, en unidades de dosificacion individuales o divididas (por ejemplo, BID, TID, QID). Para un humano de 70 kg, un intervalo ilustrativo para una cantidad de dosificacion adecuada es de alrededor de 0,05 a alrededor de 7 g/dla, o de alrededor de 0,2 a alrededor de 2,5 g/dla.

Los comprimidos orales pueden incluir un compuesto de acuerdo con la invencion mezclados con excipientes farmaceuticamente aceptables como diluyentes inertes, agentes disgregantes, agentes aglutinantes, agentes lubricantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes. Los rellenos inertes adecuados incluyen carbonato sodico y calcico, fosfato de sodio y calcio, lactosa, almidon, azucar, glucosa, metil celulosa, estearato de magnesio, manitol, sorbitol, y similares. Los excipientes orales llquidos ejemplares incluyen etanol, glicerol, agua y similares. El almidon, polivinil-pirrolidona (PVP), glicolato sodico de almidon, celulosa microcristalina, y acido alglnico son agentes disgregantes adecuados. Los agentes aglutinantes pueden incluir almidon y gelatina. El agente lubricante, si esta presente, puede ser estearato de magnesio, acido estearico o talco. Si se desea, los comprimidos pueden recubrirse con un material como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo para retrasar la absorcion en el tracto gastrointestinal, o pueden recubrirse con un recubrimiento enterico.

Las capsulas para la administracion oral incluyen capsulas de gelatina dura y blanda. Para preparar capsulas de gelatina dura, los compuestos de la invencion pueden mezclarse con un diluyente solido, semi-solido o llquido. Las capsulas de gelatina blanda pueden prepararse mezclando el compuesto de la invencion con agua, un aceite como aceite de cacahuete o aceite de oliva, parafina llquida, una mezcla de mono y di-gliceridos de acidos grasos de cadena corta, polietilenglicol 400, o propilenglicol.

Los llquidos para administracion oral pueden estar en la forma de suspensiones, soluciones, emulsiones o jarabes o pueden presentarse como un producto seco para su reconstitution con agua u otro vehlculo adecuado antes del uso. Dichas composiciones llquidas pueden contener opcionalmente: excipientes farmaceuticamente aceptables como agentes de suspension (por ejemplo, sorbitol, metilcelulosa, alginato sodico, gelatina, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio y similares); vehlculos no acuosos, por ejemplo aceite (por ejemplo, aceite de almendra o aceite de coco fraccionado), propilenglicol, alcohol etllico, o agua; conservantes (por ejemplo, metil o propil p-hidroxibenzoato o acido sorbico); agentes humectantes como lecitina; y, si se desea, agentes aromatizantes o colorantes.

Los agentes activos de la invencion pueden administrarse tambien por vlas no orales. Por ejemplo, las composiciones pueden formularse para administracion rectal como un supositorio. Para uso parenteral, incluyendo vlas intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, o subcutanea, los compuestos de la invencion pueden proporcionarse en soluciones o suspensiones acuosas esteriles, tamponadas a un pH apropiado e isotonicidad o en aceite parenteralmente aceptable. Los vehlculos acuosos adecuados incluyen solution de Ringer y cloruro sodico isotonico. Dichas formas se presentaran en formas de dosis unitarias como ampollas o dispositivos de inyeccion desechables, en formas multi-dosis como viales de los que puede extraerse la dosis apropiada, o en una forma solida o pre-concentrada que puede usarse para preparar una formulation inyectable. Las dosis de infusion

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ilustrativas pueden variare de alrededor de 1 a 1000 pg/kg/minuto de compuesto, mezclada con un portador farmaceutico durante un periodo que varla de varios minutos a varios dlas.

Para administracion topica, los compuestos pueden mezclarse con un portador farmaceutico a una concentracion de alrededor del 0,1% a alrededor del 10% de farmaco a vehlculo. Los ejemplos incluyen lociones, cremas, unguentos y similares y pueden formularse por metodos conocidos. Otro modo de administrar los compuestos de la invencion puede utilizar una formulacion de parche para afectar a la administracion transdermica.

Se llevo a cabo una evaluation de selection de sales para identificar una sal del compuesto (1) con propiedades mas adecuadas para el desarrollo. Los criterios considerados esenciales para el proceso de seleccion fueron la cristalinidad, la reproductibilidad de forma a partir de un proceso de recristalizacion, la estabilidad qulmica y flsica bajo condiciones aceleradas y la solubilidad adecuada para soportar tanto la sustancia del farmaco como el desarrollo del producto del farmaco.

En realizaciones, el compuesto se formula en formas de dosificacion adecuadas para la administracion a pacientes con necesidad del mismo. Los procesos y equipo para preparar partlculas de farmaco y portados se divulgan en Pharmaceutical Sciences, Remington, 1985, 17a Ed., 1585-1594; Chemical Engineers Handbook, Perry, 1984, 6th Ed., pp. 21-13 a 21-19 (1984); Parrot et al., 1974, J. Pharm.Sci., 61(6): 813-829; y Hixon et al., 1990, Chem. Engineering, pp. 94-103.

La cantidad de compuesto incorporado en las formas de dosificacion de la presente divulgacion pueden generalmente variar de alrededor del 10% a alrededor del 90% por peso de la composition dependiendo de la indication terapeutica y del periodo de administracion deseado, por ejemplo cada 12 horas, cada 24 horas y similares. Dependiendo de la dosis del compuesto deseado para ser administrado, se pueden administrar una o mas de las formas de dosificacion.

Ademas, esta divulgation tambien se refiere a una composicion farmaceutica o una forma de dosificacion farmaceutica como se describe anteriormente en este documento para su uso en un metodo de terapia o diagnostico del cuerpo animal humano o no humano.

La divulgacion tambien se refiere a una composicion farmaceutica para su uso en la fabrication de una forma de dosificacion farmaceutica para la administracion oral a un mamlfera con necesidad de tratamiento, caracterizada por que dicha forma de dosificacion puede administrarse en cualquier momento del dla independientemente de la comida ingerida por dicho mamlfero.

La divulgacion tambien se refiere a un metodo de terapia o diagnostico del cuerpo animal humano o no humano que comprende administrar a dicho cuerpo una dosis terapeutica o diagnosticamente efectiva de una composicion farmaceutica descrita en la presente.

Esta divulgacion tambien se refiere a un envase farmaceutico adecuado para la venta comercial que comprende un contenedor, una forma de dosificacion como se describe en la presente, y asociada con dicho envase materia escrita no limitada a si la forma de dosificacion puede administrarse con o sin comida.

Los siguientes ejemplos de formulation son solamente ilustrativos y no se pretende que limiten el alcance de las invenciones de ninguna manera.

EJEMPLOS

Se produjeron cinco versiones del compuesto (1), concretamente las sales de meglumina, trometamina, potasio, sodio y acido libre y sus propiedades flsicas y potencial de fabricacion guio la seleccion de una forma preferida del compuesto.

E) Sintesis de Ejemplo

Para obtener los compuestos descritos en los ejemplos siguientes y sus datos anallticos correspondientes, se siguieron los siguientes protocolos experimentales y anallticos a menos que se indique lo contrario. A menos que se indique lo contrario, las mezclas de la reaction se agitaron magneticamente a temperatura ambiente (rt), las soluciones se "secaron" generalmente sobre un agente secante como Na2SO4 o MgSO4, y las mezclas, soluciones y extractos se "concentraron" tlpicamente en un evaporador rotatorio bajo presion reducida.

Configuration de Analisis de Datos

Se realizo cromatografla en capa fina (TLC) usando gel de sllice de Merck 60 F254 2,5 cm x 7,5 cm 250 pm o 5,0 cm x 10,0 cm 250 pm pre-cubierto en placas de gel de sllice. La cromatografla en capa fina preparatoria se realizo usando gel de sllice de EM Science 60 F254 20 cm x 20 cm 0,5 mm en placas pre-cubiertas con una zona de

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concentracion de 20 cm x 4 cm.

Se realizo cromatografla en columna ultrarrapida de fase normal (FCC) en gel de sllice (SiO2) eluyendo con hexanos/acetato de etilo, a menos que se indique lo contrario, mientras que se realizo HPLC de fase inversa en una Hewlett Packard HPLC Series 1100, con una columna Phenomenex Luna Ci8 (5 pm, 4,6x150 mm), y la deteccion se hizo a A = 230, 254 y 280 nm con un gradiente del 10 al 99% de acetonitrilo/agua (0,05% de acido trifluoroacetico) durante 5,0 minutos con un caudal de 1 ml/min. Alterantivamente, se realizo purificacion HPLC preparatoria en una sistema de HPLC automatizado Gilson ejecutando el software Gilson Unipoint LC con deteccion de picos UV hecha a A = 220 nm y equipada con una columna YMC-Pack ODS-A de fase inversa (5 pm, 30 x 250 mm) ; gradiente movil de 10-99% de acetonitrilo/agua (0,05% de acido trifluoroacetico) durante 15-20 minutos y caudales de 10-20 ml/min.

Los espectros de masa (MS) se obtuvieron en un Agilent serie 1100 MSD equipado con una fuente multimodo positiva y negativa ESI/APCI a menos que se indique lo contrario, los espectros de la resonancia magnetica nuclear (NMR) se obtuvieron en espectrometros Bruker modelo DRX con los datos de 1H NMR mostrando desplazamientos qulmicos en ppm campo abajo de la referencia de tetrametilsilano (multiplicidad aparente, constante de acoplamiento J en Hz, integration)..

Ejemplo 1: Acido libre de acido 1-(5.6-Dicloro-1H-benzoimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-carboxilico (compuesto (1))

imagen3

Metodo A

El acido libre del compuesto (1) se preparo usando 2,5,6-tricloro-1 H-benzoimidazol y acido 1H-pirazol-4- carboxllico. MS (ESI/CI): masa calculada para C11H6O2N4O2, 297.1; m/z encontrado, 296.0 [M-H]-. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): 14.18-12.52 (br s, 2H), 8.89 (d, J = 0.5 Hz, 1 H), 8.31 (d, J = 0.5 Hz, 1H), 7.80 (s, 2H).

Metodo B

Paso A: 5,6-Dicloro-1,3-dihidro-benzoimidazol-2-ona: A la solution de 4,5-dicloro-benceno-1,2-diamina (25 g, 0.14 mol) en DMF seco (200 ml), se le anadio CDI (23 g, 0,14 mol) como el solido. La solucion de la reaction se agito a temperatura ambiente durante 1 hora, despues se anadio agua (500 ml). El solido precipitado se recogio por filtration, se lavo con agua, se seco exhaustivamente para proporcionar el compuesto del tltulo (26,0 g, 90%). El producto bruto se uso en la reaccion siguiente sin purificacion adicional.

Paso B: 2,5,6-Tricloro-1H-benzoimidazol: 5,6-dicloro-1,3-dihidro-benzoimidazol-2-ona secada

exhaustivamente (28,4 g, 0,14 ,mol) se suspendio en POCb (75 ml). La solucion de la reaccion se calento a temperatura de reflujo durante 3 horas y se enfrio a temperatura ambiente. La solucion se vertio en hielo picado/agua (1,5 l) lentamente con agitation suficiente. La solucion se neutralizo a pH = 7.0 con NaOH. El solido precipitado se recogio por filtracion, se lavo con agua, se seco para proporcionar el compuesto del tltulo (27,9 g, 90%). El producto bruto se uso en la reaccion siguiente sin purificacion adicional.

Paso C: Ester etllico de acido 1-(5,6-Dicloro-1-dimetilsulfamoil-1H-benzoimidazol-2-il)-1H-pirazol-4- carboxllico. Se disolvio 2,5,6-Tricloro-1H-benzoimidazol 2 (27,6 g, 0,125 mol) en DMF seco (200 ml) y despues se anadieron K2CO3 (20,7 g, 0,15 mol) y cloruro de dimetilsulfamoilo (17,9 g, 0,125 mol). La mezcla de la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 16 horas. El analisis HPLC mostro la formation completa de dimetilamida de acido 2,5,6-tricloro-benzoimidazol-1-sulfonico. En el mismo bote, sin aislamiento de dimetilamida de acido 2,5,6-tricloro-benzoimidazol-1-sulfonico, se anadio ester etllico de acido 1H-pirazol- 4-carboxllico (17,5 g, 0,125 mol) y K2CO3 (20,7 g, 0,15 mol). La mezcla de la reaccion se agito a 70° C durante 4 horas y se anadio agua (500 ml) mientras la solucion de la reaccion estaba todavla caliente. La solucion de la reaccion se enfrio a temperatura ambiente. El solido precipitado se recogio por filtracion, se lavo con agua y se seco. El producto bruto se uso en la reaccion siguiente sin purificacion adicional.

Paso D: acido 1-(5,6-Dicloro-1H-benzoimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-carboxllico. Se disolvio ester etllico de acido 1-(5,6-Dicloro-1-dimetilsulfamoil-1H-benzoimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-carboxllico en THF (125 ml) y se anadio LiOH.H2O (21 g, 0,5 mol) en agua (250 ml). La mezcla de la reaccion se agito a temperatura de reflujo durante 2 horas y se enfrio a temperatura ambiente. Se anadio HCl concentrado para ajustar el pH a 2.0. El solido precipitado se recogio por filtracion, se lavo con agua y se seco. El solido se trituro en EtOAc caliente (1 l). Despues de enfriarse a temperatura ambiente y la filtracion, se obtuvo el compuesto de formula (I) como un solido de color tostado (18.5 g, 50%). MS [M+H] + encontrado 297.0. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): 13.71 (s, 1H), 12.99 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.67 (s, 1H).

Las propiedades termicas, naturaleza cristalina, pureza aparente y absorcion de humedad de un lote de 6.0 g del acido libre del compuesto (1) se resumen en la Tabla 1. Los datos de saturation para el compuesto (1) se

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muestran en la Figura 1.

Tabla 1

Pureza Aparente

Cristalinidad Punto de Adsorcion (40-90% Desorcion (90-0%

(HPLC)

(PXRD) Fusion (DSC) RH) RH)

99.8%

Debilmente 343 °Ca +0.59 % -0.96%

Cristalino

a descomposicion

Ejemplo de Referencia 2: sal de potasio del compuesto (1)

La sal de potasio del acido 1-(5,6-Dicloro-1H-benzoimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-carboxllico se prepare suspendiendo el acido libre (55 g, 1,7 mol) en EtOH (1,5 l) a temperatura de reflujo con K2CO3 (12,79 g, 0,85 mol) en 20 ml de agua anadida gota a gota durante 5 minutos. Se requirio agitacion mecanica fuerte para asegurar la agitacion apropiada. La suspension se agito a temperatura de reflujo durante ocho horas y despues se enfrio a temperatura ambiente durante cinco horas. El solido precipitado se recogio por filtracion y se lavo rapidamente con 100 ml de agua seguido por EtOH. La sal de potasio se obtuvo como un solido blanco (38 g, 65%). Posteriormente, el licor madre se concentro y el proceso anterior se repitio una vez para dar el segundo cultivo de la sal de potasio (13 g, 22%). MS [M+H]+ = 297.0. 1H NMR (500 MHz, DMSOd6): 8.65 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.57 (s, 2H).

La sal de potasio como se preparo por la metodologla de re-lechada anterior es no-higroscopica y consistente con un hidrato pobremente cristalino como se ve en el PXRD y el analisis termico. Se vieron dos picos endotermicos amplios de la sal de potasio del compuesto (1) por DSC que pueden asociarse con un evento de deshidratacion y fundicion/descomposicion, respectivamente (Tabla 2).

Tabla 2

Pureza Aparente

Cristalinidad Punto de Fusion Adsorcion (40-90% Desorcion (90-0%

(HPLC)

(PXRD) (DSC) RH) RH)

100.0 %

monohidrato cristalino 277 °Cd +0.53% -0.89%

ddescomposicion

Ejemplo de Referencia 3: Sal de sodio del compuesto (1)

La sal de sodio del compuesto (1) es un solido hidratado pobremente cristalino como se muestra por PXRD y analisis termico. El DSC revela dos picos endotermicos amplios; el primer evento esta asociado con una perdida de agua (~9% por TGA), mientras que el segundo endotermico esta provocado por la fusion/descomposicion de la sal. La sal de sodio se preparo en un metodo similar al usado para preparar la sal de potasio (metodo de lechada).

Ejemplo de Referencia 4: Procedimiento de cristalizacion de la sal de trometamina del compuesto (1)

Hasta la fecha se han producido dos formas de sal de trometamina. La primera forma se obtuvo de la lechada del compuesto (1) y trometamina en etanol acuoso (14% de agua). Aunque no es una sal, esta mezcla flsica no se persiguio. La segunda forma se produjo a partir de un tratamiento acuoso que contenla cantidades en exceso de contraion. Esta forma era una sal hidratada que se observo tenia una solubilidad acuosa aparente mas baja que la sal de potasio. Esto compuesto tambien mostro propiedades a granel pobres.

Ejemplo 5: Procedimiento de cristalizacion de la sal de meglumina del compuesto (1)

Una solucion clara (30 mg/ml) del acido libre del compuesto (1) y 1.2 equivalente molar de meglumina se produjo en metanol acuoso (12% de agua) seguido por calentamiento ligero. Agitacion a temperatura ambiente con siembra o refrigeration con os in siembra llevo consistentemente a la cristalizacion de la sal de meglumina, que se recogio por filtracion. esta metodologla se uso para producir un lote de 2 g de la sal. La composition del solvente en el procedimiento anterior se modifico a etanol acuoso y se uso por equipo de desarrollo PDMS API SM para producir 8,7-kg de material de grado GMP en apoyo de los estudios FIS y que permitlan el FIH.

Las propiedades termicas, naturaleza cristalina y pureza aparente de la sal de meglumina del compuesto (1) se resumen en la Tabla 3. Las Figuras 2 y 3 muestran las propiedades a granel de la sal de meglumina del

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compuesto (1), incluyendo datos de PXRD y datos de DSC, TGA y rayos x, respectivamente. Los datos de cristales individuales confirmaron que la sal de meglumina del compuesto (1) es un dihidrato con el patron de polvo simulado en excelente concordancia con el patron de polvo experimental como se muestra en las Figuras 4A y 4b. Se observo que la sal de meglumina del compuesto (1) tenia propiedades a granel mejoradas, solubilidad y procesabilidad mejorada en comparacion con el acido libre de la sal de potasio del compuesto (1).

Tabla 3

ID de la muestra Pureza Aparente (HPLC) Cristalinidad (PXRD) Punto de Fusion (DSC)

Sal de meglumina del compuesto (1)

> 99.9 % dihidrato cristalino 80 °C

Ejemplo 6: Formulaciones topicas de la sal de meglumina del compuesto (1)

Los materiales y excipientes que se usaron en el desarrollo de formulaciones topicas de una sal de meglumina del compuesto (1) se enumeran en la Tabla 4

Tabla 4 Materiales

Sal de meglumina del compuesto (1)

Hidroxipropil Metilcelulosa (HPMC K15M)

Poloxamero 407*

Metilcelulosa (MC)

PEG4000

Meglumina (NMDG)

Vitamina E-TPGS

Carbomero 941

Carbomero 934P

Carboximetilcelulosa (Na-CMC)

HP-p-CD

Agua esteril para irrigacion

*solubilizacion a 5 °C debido a la propiedad termo-reversible del excipiente.

La Tabla 5 enumera los resultados de estabilidad flsica y qulmica realizados en las formulaciones seleccionadas de la sal de meglumina del compuesto (1) despues de 4 semanas de almacenamiento.

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Tabla 5

Sal de Meglumina del compuesto (1) restante (%)

Experimento

Composicion de la Formulacion 2 °C 20 °C 4*. o o O

1

0.5% HPMC K15M (pH 8.33) 99.89 101.14 101.44

2

1.0% HPMC K15M (pH 8.33) 99.59 99.21 99.08

3

2.0% Metilcelulosa (pH 8.32) 98.49 99.71 97.20

4

15% Poloxamero 407 (pH 8.10) 99.19 100.03 87.29*

5

20% Poloxamero 407 (pH 8.03) 97.60 99.57 96.43*

6

VitE-TPGS/PEG4000 /agua (20:20:60; pH 8.06) 100.27 100.32 98.87

* Precipitacion observada en el vial

El analisis HPLC mostro que las seis composiciones de la formulacion eran qulmicamente estables durante cuatro semanas bajo las condiciones de almacenaje estudiadas. La perdida aparente del equilibrio de masa para la formulacion basada en poloxamero (experimento 4) se atribuyo a la precipitacion del acido libre del compuesto (1) a 40° Celsius y no a la degradacion. A 40° Celsius, los pollmeros degradados resultaron en la formacion de acido acetico aldehldos y una perdida concurrente de la viscosidad y calda den el pH. El ambiente acido resultante provoco la precipitacion del acido libre insoluble del compuesto (1) y la descoloracion de la formulacion. La inestabilidad del poloxamero (o lutrol) es conocida y se ha divulgado en Erlandsson, B., 2002, Polym. Degrad. and Stab., 78:571-575. Dicha degradacion no se observo en muestras almacenadas a temperatura ambiente o refrigeradas.

Los resultados de la criba de solubilidad de las formulaciones de la sal de meglumina del compuesto (1) se muestran en la Tabla 6. Cuatro de los diez vehlculos investigados, concretamente 1 % Na-CMC (Experimento 1), 1 % Carbomero 941 (Experimento 2), 1 % Carbomero 934P (Experimento 3) and 20% HP-p-CD (Experimento 4), no cumplieron el criterio de solubilidad objetivo de 10 mg/ml (equivalente del acido libre) o fueron toxicos para celulas Hela. el vehlculo 1% MC no tuvo ventajas notables sobre el producto que contenla 2% MC. La sal meglumina del compuesto (1) fue suficientemente soluble dentro de un intervalo de pH aceptable (6-8.5) en los Experimentos 5 y 711.

Tabla 6

Experimento

Composicion de la Formulacion Solubilidad del Compuesto (1)

1

1% Na-CMC < 10 mg/ml

2

1% Carbomero 941 < 10 mg/ml

3

1 % Carbomero 934P < 10 mg/ml

4

0.5% HPMC K15M > 10 mg/ml

5

1.0% HPMC K15M > 10 mg/ml

6

1% Metilcelulosa > 10 mg/ml

7

2% Metilcelulosa > 10 mg/ml

8

15% Poloxamero 407 > 10 mg/ml

9

20% Poloxamero 407 > 10 mg/ml

10

VitE-TPGS/PEG4000/agua (20:20:60) > 10 mg/ml

11

20% HP-p -CD* > 10 mg/ml

* La Formulacion era toxica para las celulas Hela

F) Ejemplos Biologicos

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Ensayo Celular para HIF1-a

Se colocaron en placas celulas Hela (ATCC, Manassas, VA) en placas de 96 pocillos a 20.000 celulas por pocillo en 100pl de DMEM que contenla 10% de suero bovino fetal, 1% de aminoacidos no esenciales, 50 lU/ml de penicilina y 50 |jg/ml de estreptomicina (todos los reactivos del cultivo celular de Invitrogen, Carlsbad, CA). 24 horas despues de la colocacion en placas, el medio cambio a 100jl de DMEME sin el 10% de suero bovino fetal, se anadio 1,1 jl de la solucion madre para cada compuesto y se incubo durante seis horas. Todos los compuestos se probaron con una concentracion de compuesto final de 100 jM. Se retiro el sobrenadante y las celulas se lisaron en 55 jl de tampon de lisis MSD que contenla inhibidores de proteasa. Se transfirieron despues 50 jl del lisado celular a una placa de deteccion de HIF1-a humano MSD bloqueada (Meso-Scale Discovery, Gaithersburg, MD, segun el protocolo del fabricante), y se incubaron a temperatura ambiente en un agitador orbital durante dos horas. Despues de tres lavados en PBS, se anadieron 25 jl de anticuerpo de deteccion HIF-a 20nM y se incubo durante 1 hora a temperatura ambiente en un agitador orbital. Despues de tres lavados en PBS, se anadieron 150 jl de tampon de lectura 1X y la placa se leyo despues en un instrumento MSD SECTOR. Los datos se analizaron determinando el porcentaje de estimulacion HIF en presencia de 100 jM del compuesto en relacion a un compuesto de control del ensayo, 7-[(4-Cloro-fenil)-(5-metil-isoxazol-3-ilamino)-metil]-quinolin-8-ol. Estos datos biologicos para la sal de meglumina del compuesto (1) se presentan en la Figura 5.

Datos biologicos adicionales para las formulaciones de la sal de meglumina del compuesto (1) se presentan en las Figuras 6 a 8.

Aunque la especificacion anterior ensena los principios de la presente invencion, con ejemplos proporcionados con el proposito de ilustracion, se entendera que la practica de la invencion abarca todas las variaciones, adaptaciones y/o modificaciones habituales como quedan comprendidas dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones y sus equivalentes.

Claims (4)

1. 5

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   Reivindicaciones

   1. Una formulacion que comprende la sal de meglumina del acido 1-(5,6-dicloro-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1H-pirazol- 4-carboxllico;

   en la que dicha sal de meglumina esta en la forma de un dihidrato.
2. 2. Un compuesto de la formula

   imagen1

   O

   en la forma de una sal de meglumina;

   en el que dicho compuesto esta en la forma de un dihidrato.
3. 3. Una composition farmaceutica que comprende el compuesto de la reivindicacion 2 y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
4. 4. Un unguento topico que comprende la formulacion de la reivindicacion 1.