CN101637125B - 一种山药离体繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种山药离体繁殖方法，本发明的目的是提供一种遗传稳定性好、繁殖占用空间小、保存和运输方便的怀山药离体繁殖方法。本发明的技术解决方案要点有以下步骤：(1)怀山药类原球茎的诱导形成；(2)怀山药类原球茎的增殖；(3)怀山药类原球茎的分化；(4)怀山药类原球茎再生植株的生根；(5)怀山药类原球茎再生植株的炼苗移栽。本发明用于山药繁殖。

Description

一种山药离体繁殖方法
技术领域：
本发明涉及一种繁殖的方法，特别是一种山药离体繁殖方法。
背景技术：
山药既有食用价值，还有药用价值。怀山药因其独特的产地和品种所具有的独特口感和营养价值及药效而著称于世。然而传统的块茎繁殖方法不能适应生产需要。对其离体繁殖进行了广泛的研究，目前，在怀山药的研究中认为怀山药可以通过腋生枝途径、多芽体诱导途径和微型块茎诱导途径等方式进行离体繁殖。其中腋生枝是将带腋芽的茎段扦插在培养基中，其腋芽分化成苗，基部分化出根而成一完整植株；多芽体诱导型是通过调整培养基中的激素浓度，去除顶端优势的抑制使腋芽发育出多个小芽；微型块茎既是山药的一种变态器官，同时也是山药的储藏器官和繁殖器官，而微型块茎诱导途径则是诱导试管苗腋芽形成地上变态块茎，形成的块茎可萌发成苗亦可进行保存。前两种繁殖方式遗传稳定性较高，但占用空间大，第三种目前仅有微型块茎的初步诱导，在块茎萌发成苗及应用方面未见更深入的研究。本实验室以带腋芽的茎段为外植体，首次离体诱导出了怀山药的类原球茎，这些类原球茎占用空间小，且在适宜条件下能够大量分化为新的植株，可作为怀山药离体繁殖的新途径。
发明内容：
本发明的目的是提供一种遗传稳定性好、繁殖占用空间小、保存和运输方便的怀山药离体繁殖方法。本发明的技术解决方案是，其特征在于有以下步骤：(1)怀山药类原球茎的诱导形成，将怀山药试管苗切成带腋芽茎段接种于MS+TDZ 0.1～6mg/L+KT 1～4mg/L的培养基上，在培养室进行培养30～40d，诱导形成类原球茎；(2)怀山药类原球茎的增殖，将上述类原球茎的小块在无菌条件下接种于MS+TDZ 1～4mg/L+KT 1～4mg/L的培养基上，在培养室进行培养，得到大量增殖的类原球茎；(3)怀山药类原球茎的分化，将诱导形成或增殖的类原球茎转接于MS+2，4-D0.05～0.1mg/L+6-BA 1～2mg/L+KT 2～4mg/L+TDZ 0～2mg/L+活性炭0.1～0.2g/L的培养基上，在培养室进行培养，类原球茎分化出大量的芽；(4)怀山药类原球茎再生植株的生根，挑选顶芽长度为2～3cm的类原球茎再生植株，从其基部分开，转入液体的MS+PP333 0.5～1.0mg/L+NAA0.05～1.0mg/L培养基上，在培养室进行培养7d开始有根的形成，15-20d即可形成大量的根。以上各步骤中的工作台为超净工作台，各步骤培养室的培养条件为：温度20～25℃，光照每天12～16h，光强为2000lx；(5)怀山药类原球茎再生植株的炼苗移栽，将上述生根的怀山药类原球茎的培养瓶盖打开，将培养瓶移自然光下炼苗3～5d，使其逐渐适应外界自然环境，移栽时将根部的培养基洗净，去除褐化的老根，移栽入装有蛭石的营养钵中，15d后即成活。本发明与现有技术比较具有遗传稳定性好、繁殖占用空间小且保存及运输方便的显著优点。
具体实施方式：
本发明有以下实施例：
1、怀山药类原球茎的诱导形成
在超净工作台上将怀山药试管苗切成长度为1cm左右的带腋芽茎段接种于MS+TDZ 0.1～6mg/L+KT 1～4mg/L的培养基上，在培养室条件下进行培养，30～40d即可诱导形成类原球茎。
2、怀山药类原球茎的增殖
在超净工作台上，将诱导出的怀山药类原球茎切成直径0.5cm左右的小块在无菌条件下接种于MS+TDZ 1～4mg/L+KT 1～4mg/L培养基上，在培养室条件下进行培养，类原球茎可以大量增殖。
3、怀山药类原球茎的分化
在超净工作台上，将诱导形成或继代增殖的类原球茎转接于MS+2，4-D 0.05～0.1mg/L+6-BA 1～2mg/L+KT 2～4mg/L+TDZ 0～2mg/L+活性炭0.1～0.2g/L的培养基上，在培养室条件下进行培养，类原球茎可以分化出大量的芽。
4、怀山药类原球茎再生植株的生根
挑选顶芽长度为2～3cm的类原球茎再生植株，从基部分开，转入液体的MS+PP333 0.5～1.0mg/L+NAA 0.05～1.0mg/L培养基上，在培养室条件下进行培养，7d开始有根的形成，15～20d即可形成大量的根。
以上各步培养条件均为：温度20～25℃，每天光照12～16h，光强为20001x。
5、怀山药类原球茎再生植株的炼苗移栽
当类原球茎生根后，打开培养瓶盖，将培养瓶移至自然光下炼苗3～5d。让类原球茎植株逐渐适应外界自然条件，移栽时将根部的培养基洗净，去除褐化的老根，移栽入装有蛭石的营养钵中，15d后即可成活。

Claims (1)

1.一种山药离体繁殖方法，其特征在于：有以下步骤：(1)怀山药类原球茎的诱导形成，将怀山药试管苗切成带腋芽茎段接种于MS+TDZ0.1～6mg/L+KT 1～4mg/L的培养基上，在培养室进行培养30～40d，诱导形成类原球茎；(2)怀山药类原球茎的增殖，将上述类原球茎的小块在无菌条件下接种于MS+TDZ 1～4mg/L+KT 1～4mg/L的培养基上，在培养室进行培养，得到大量增殖的类原球茎；(3)怀山药类原球茎的分化，将诱导形成或增殖的类原球茎转接于MS+2，4-D 0.05～0.1mg/L+6-BA 1～2mg/L+KT 2～4mg/L+TDZ 0～2mg/L+活性炭0.1～0.2g/L的培养基上，在培养室进行培养，类原球茎可分化出大量的芽；(4)怀山药类原球茎再生植株的生根，挑选顶芽长度为2～3cm的类原球茎再生植株，从其基部分开，转入液体的MS+PP3330.5～1.0mg/L+NAA 0.05～1.0mg/L培养基上，在培养室进行培养，7d开始有根的形成，15～20d即可形成大量的根；以上各步骤中的工作台为超净工作台，各步骤培养室的培养条件为：温度20～25℃，光照每天12～16h，光强为2000lx；(5)怀山药类原球茎再生植株的炼苗移栽，将上述生根的怀山药类原球茎的培养瓶盖打开，将培养瓶移自然光下炼苗3～5d，使其逐渐适应外界自然环境，移栽时将根部的培养基洗净，去除褐化的老根，移栽入装有蛭石的营养钵中，15d后即成活。
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