CN102823501B - 一种山药珠芽的组培方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种山药珠芽的组培方法。包括外植物体取材和消毒，培养基的配置和接种，丛生珠芽的增殖以及驯化移栽。通过这种方法能让珠芽在短时间内快速大量地增殖，从而大大降低了需要贮存的珠芽数量，同时也大大提高了珠芽繁殖的使用范围。

Description

一种山药珠芽的组培方法
技术领域
本发明属于一种植物的组培技术，特别地涉及山药珠芽的组培技术。
背景技术
山药（Dioscorea opposita Thunb.），别名薯蓣、怀山药，为薯蓣科多年生缠绕草本植物。其根茎经去外皮干燥后可入药，具补脾胃，补肺益阴，固肾涩精等作用，主治体倦，虚劳咳嗽，肺虚咳喘，肾虚遗精等症，除药用外还可食用。
山药的传统繁殖方法主要有两种，一种是芦头繁殖法，一种是珠芽繁殖法。芦头繁殖法主要是指选取芦头（脖颈短）、粗壮、无病虫害、芽头饱满的山药，将上部7-10厘米长折下，置于室内通风处晾5-7天，贮藏于室内或窖内越冬。翌年4月取出用于种植。珠芽繁殖法是指选取无病虫害、无损伤、个头较大的珠芽。用湿沙埋在室内或窖内过冬，防止受冻或受热，翌年4月取出用于种植。
相对于芦头繁殖来说，珠芽繁殖的成活率更高，而且长期使用芦头繁殖存在严重的退化现象，另外珠芽的体积小，便于保存和运输，因此从上述角度来说珠芽繁殖要优于芦头繁殖，但是珠芽繁殖也有其自身的缺陷，那就是珠芽比芦头更加娇嫩，需要更严格的贮存条件。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种山药珠芽的组培方法，通过这种方法能让珠芽在短时间内快速大量地增殖，从而大大降低需要贮存的珠芽数量，同时也大大提高了珠芽繁殖的范围。
本发明所述的山药珠芽的组培方法如下：
1、外植物体取材和消毒。将从山药上取下的珠芽切成长宽分别为0.5-1厘米的方块状，用自来水冲洗干净后用洗衣粉溶液浸泡15分钟，再用自来水冲洗干净。将珠芽块置于超净工作台上，先用75%酒精消毒30秒，然后用0.1%的升汞溶液浸泡5分钟，随后用无菌水冲洗3-4次，置于无菌的干净培养皿中备用。
2、培养基的配置和接种。配置两种培养基，一种为诱导培养基，一种为增殖培养基，诱导培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤3.0mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。增殖培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤5.0mg/L，萘乙酸0.3mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。在超净台中将珠芽芽体朝上接种于诱导培养基上。培养温度为25±1℃，光照强度1200lx，光照时间10h/d。
3、丛生珠芽的增殖。在山药珠芽在诱导培养基上已经长出丛生珠芽之后，将丛生珠芽从主体上切下，将其转移到增值培养基上进行继代扩繁。
4、驯化移栽。将生长出的珠芽移植至通风、明亮的炼苗室中，揭开培养皿盖子，将珠芽取出，洗净粘在其上的培养基，用0.1%的高锰酸钾溶液浸泡10-15分钟，再转移到已消毒的苔藓基质上。移栽后适当浇水，保持光照在1500-2000lx之间，温度为25-30℃，光照时间12h/d，空气湿度大于90%。
其中步骤2中提到的MS培养基的配方是本领域技术人员所共知的，其配方为：
工作液浓度单位mg/L
大量元素：NH4NO31650；KNO31900；CaCl2·2H2O440；MgSO4·7H2O370；KH2PO4170；
微量元素：KI0.83；H3BO36.2；MnSO4·4H2O22.3；ZnSO4·7H2O8.6；Na2MnO4·2H2O0.25；CuSO4·5H2O0.025；CoCl2·6H2O0.025；
铁盐：FeSO4·7H2O27.8；Na2-EDTA·2H2O37.3
有机物质：肌醇100；烟酸0.5；盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5；盐酸硫胺素（维生素B1）0.1；甘氨酸2.0。
其中山药珠芽在诱导培养基上长出丛生珠芽大约需要13-15天，在增殖培养基上，大约10天左右又可生产新的丛生珠芽，驯化移栽的时间以5-7天为宜。
本发明提供的组培方法中的培养基是经过多次试验得出的较好配方，与一般的培养基相比，本发明提供的诱导培养基能使产生的丛生珠芽更多，产生的速度更快，而增殖培养基则能最快速地使丛生珠芽成熟。
通过本发明提供的组培方法，可以使山药的珠芽在不到一个月的时间内大量增殖，而且增殖获得的珠芽的质量都很高，基本上能够保证无病虫害，而且生命力旺盛。这样一方面大大减轻了山药种植中对珠芽的挑选和采收，另一方面也大大降低了珠芽贮存的成本。
具体实施方式
实施例1
1、外植物体取材和消毒。选取健康且成熟的山药珠芽，将从山药上取下的珠芽切成长宽分别为0.5厘米左右的方块状，用自来水冲洗干净后用洗衣粉溶液浸泡15分钟，再用自来水冲洗干净。将珠芽块置于超净工作台上，先用75%酒精消毒30秒，然后用0.1%的升汞溶液浸泡5分钟，随后用无菌水冲洗3-4次，置于无菌的干净培养皿中备用。
2、培养基的配置和接种。配置两种培养基，一种为诱导培养基，一种为增殖培养基，诱导培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤3.0mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。增殖培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤5.0mg/L，萘乙酸0.3mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。在超净台中将珠芽芽体朝上接种于诱导培养基上。培养温度为25±1℃，光照强度1200lx，光照时间10h/d。
3、丛生珠芽的增殖。经过13天的时间，诱导培养基上的山药珠芽平均已经长出4-7个丛生珠芽。在山药珠芽在诱导培养基上已经长出丛生珠芽之后，将丛生珠芽从主体上切下，将其转移到增值培养基上进行继代扩繁。经过10天的时间，继代珠芽基本生成完全。
4、驯化移栽。将生长出的珠芽移植至通风、明亮的炼苗室中，揭开培养皿盖子，将珠芽取出，洗净粘在其上的培养基，用0.1%的高锰酸钾溶液浸泡12分钟，再转移到已消毒的苔藓基质上。移栽后适当浇水，保持光照为1800lx，温度为27℃，光照时间12h/d，空气湿度大于90%。在驯化移栽7天后，这些珠芽即可用于实地土壤种植。
这些珠芽在实地土壤种植时的存活率达到99.4%，长成率达到93%。
实施例2
1、外植物体取材和消毒。选取健康且成熟的山药珠芽，将从山药上取下的珠芽切成长宽分别为0.7厘米左右的方块状，用自来水冲洗干净后用洗衣粉溶液浸泡15分钟，再用自来水冲洗干净。将珠芽块置于超净工作台上，先用75%酒精消毒30秒，然后用0.1%的升汞溶液浸泡5分钟，随后用无菌水冲洗4次，置于无菌的干净培养皿中备用。
2、培养基的配置和接种。配置两种培养基，一种为诱导培养基，一种为增殖培养基，诱导培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤3.0mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。增殖培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤5.0mg/L，萘乙酸0.3mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。在超净台中将珠芽芽体朝上接种于诱导培养基上。培养温度为25±1℃，光照强度1200lx，光照时间10h/d。
3、丛生珠芽的增殖。经过14天的时间，诱导培养基上的山药珠芽平均已经长出4-6个丛生珠芽。在山药珠芽在诱导培养基上已经长出丛生珠芽之后，将丛生珠芽从主体上切下，将其转移到增值培养基上进行继代扩繁。经过11天的时间，继代珠芽基本生成完全。
4、驯化移栽。将生长出的珠芽移植至通风、明亮的炼苗室中，揭开培养皿盖子，将珠芽取出，洗净粘在其上的培养基，用0.1%的高锰酸钾溶液浸泡12分钟，再转移到已消毒的苔藓基质上。移栽后适当浇水，保持光照为1800lx，温度为27℃，光照时间12h/d，空气湿度大于90%。在驯化移栽6天后，这些珠芽即可用于实地土壤种植。
这些珠芽在实地土壤种植时的存活率达到99.2%，长成率达到92%。
实施例3
1、外植物体取材和消毒。选取健康且成熟的山药珠芽，将从山药上取下的珠芽切成长宽分别为1厘米左右的方块状，用自来水冲洗干净后用洗衣粉溶液浸泡15分钟，再用自来水冲洗干净。将珠芽块置于超净工作台上，先用75%酒精消毒30秒，然后用0.1%的升汞溶液浸泡5分钟，随后用无菌水冲洗4次，置于无菌的干净培养皿中备用。
2、培养基的配置和接种。配置两种培养基，一种为诱导培养基，一种为增殖培养基，诱导培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤3.0mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。增殖培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤5.0mg/L，萘乙酸0.3mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。在超净台中将珠芽芽体朝上接种于诱导培养基上。培养温度为25±1℃，光照强度1200lx，光照时间10h/d。
3、丛生珠芽的增殖。经过15天的时间，诱导培养基上的山药珠芽平均已经长出3-6个丛生珠芽。在山药珠芽在诱导培养基上已经长出丛生珠芽之后，将丛生珠芽从主体上切下，将其转移到增值培养基上进行继代扩繁。经过11天的时间，继代珠芽基本生成完全。
4、驯化移栽。将生长出的珠芽移植至通风、明亮的炼苗室中，揭开培养皿盖子，将珠芽取出，洗净粘在其上的培养基，用0.1%的高锰酸钾溶液浸泡12分钟，再转移到已消毒的苔藓基质上。移栽后适当浇水，保持光照为1800lx，温度为27℃，光照时间12h/d，空气湿度大于90%。在驯化移栽7天后，这些珠芽即可用于实地土壤种植。
这些珠芽在实地土壤种植时的存活率达到99.0%，长成率达到91%。
本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。

Claims (1)

1.一种山药珠芽的组培方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
1)外植体取材和消毒，将从山药上取下的珠芽切成长宽分别为0.5-1厘米的方块状，用自来水冲洗干净后用洗衣粉溶液浸泡15分钟，再用自来水冲洗干净，将珠芽块置于超净工作台上，先用75%酒精消毒30秒，然后用0.1%的升汞溶液浸泡5分钟，随后用无菌水冲洗3-4次，置于无菌的干净培养皿中备用；
2)培养基的配制和接种，配制两种培养基，一种为诱导培养基，一种为增殖培养基，在超净台中将珠芽芽体朝上接种于诱导培养基上，培养温度为25±1℃，光照强度1200lx，光照时间10h/d；
3)丛生珠芽的增殖，在山药珠芽在诱导培养基上已经长出丛生珠芽之后，将丛生珠芽从主体上切下，将其转移到增殖培养基上进行继代扩繁；
4)驯化移栽，将生长出的珠芽移植至通风、明亮的炼苗室中，揭开培养皿盖子，将珠芽取出，洗净粘在其上的培养基，用0.1%的高锰酸钾溶液浸泡10-15分钟，再转移到已消毒的苔藓基质上，移栽后适当浇水，保持光照在1500-2000lx之间，温度为25-30℃，光照时间12h/d，空气湿度大于90%；
步骤2）中所述的诱导培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤3.0mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0；
步骤2）中所述的增殖培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤5.0mg/L，萘乙酸0.3mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。
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