CN104585027A - 一种生姜组培苗的炼苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种生姜组培苗的炼苗方法，包括以下步骤：（1）选择健壮、无病虫害的生姜为组织培养材料，将姜块消毒后埋于沙床催芽，灭菌，剥取0.3～0.5mm的茎尖进行接种；（2）将茎尖依次通过无菌苗培养基、诱导培养基、增殖培养基、生根培养基的培养，形成可以出培养室的组培瓶苗；（3）待培养瓶里的组培苗长有4～5条白根时，揭盖炼苗；5天后将培养瓶移出培养室，在自然光照和温度24～26℃的条件下炼苗7天，待组培苗出现5～6片叶，叶长5～7cm时，从培养瓶内取出组培苗并洗净培养基，移栽入草炭:珍珠岩:蛭石＝2:1:1的基质中，按常规肥水管理至长成成品苗，出圃。该方法简单易行，成本低且移栽成活率高。
Description
技术领域
本发明涉及一种生姜的培育方法，尤其涉及了一种生姜组培苗的炼苗方法。
背景技术
生姜( Zi ngi ber offici nale Rose) 属姜科姜属多年生草本植物, 也是一年生蔬菜作物。生姜营养丰富，并具有独特的风 味, 可作为一种重要的调味品。生姜还具有药用价值[1]，在市面上深受欢迎，因而需求量很大。近年来随着生姜出口贸易额的增加，种植面积也逐年扩大。但是，在生产上生姜长期以地下块茎进行无性繁殖，繁殖系数低[2-3]。多年的营养体种植造成病毒和病菌侵染，而且病毒[4-6]和青枯假单胞杆 菌极易通过种姜在体内积累，导致生姜品种种性退化，生活力下降，抗逆性降低，易诱发姜瘟病和姜癞皮病等多种病害，田间发病率可高达70%～80%，导致品质变劣，药用成分含量不稳定，对生姜生产构成严重威胁。近几年来，利用组织培养技术进行生姜脱菌毒繁殖已取得了很大成功。在常规栽培中，取已萌芽的种姜切块种植，需种姜4500～6000kg/hm2，种姜的消耗量很大；因此利用生姜姜芽组织进行组织培养的方式在将来必然是一种趋势。但是，目前关于生姜组培苗的培养、驯化炼苗方法的报道还是相对很少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简单易行、成本较低且生姜组培苗成活率高的炼苗方法。
为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
一种生姜组培苗的炼苗方法，依次包括以下步骤：
（1）种苗组织的处理：
选择健壮、无病虫害的生姜为组织培养材料，将姜块用50%多菌灵500倍液浸泡半个小时消毒后，埋于洗净的沙床中，在室温条件下进行催芽，当芽长1～2cm时，使用蒸馏水冲洗去掉沙土，在无菌室内用解剖针剥去幼叶，取3～5mm姜芽，用70%酒精灭菌一分钟，再用1%～10NaClO灭菌20分钟，蒸馏水冲洗3次，在超净工作台上用解剖镜进行茎尖剥离，剥去0.3～0.5mm的茎尖进行接种；
（2）组培苗的培养：
将步骤（1）中的0.3～0.5mm的茎尖接种到无菌苗培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养，直至茎尖长到1～2cm时成外植体无菌苗；所述的无菌苗培养基为：MS+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将外植体无菌苗接种到诱导培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养22～25天至形成初代不定芽并长到1.0～3.0cm；所述的诱导培养基为：MS+玉米素2mg/L+6_BA 1.5mg/L+NAA 0.15mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0
将上述的初代不定芽苗接种到增殖培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养10～15天至形成继代不定芽苗并长到3.0～6.0cm；所述的增殖培养基为：MS+玉米素1mg/L+6_BA 2mg/L+NAA 0.25mg/L+IAA 0.3mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将上述的继代不定芽苗接种到生根培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养12～15天，小苗长至4～8cm且至少具有3条长≥2cm的根时，即成可以出培养室的组培瓶苗；所述的生根培养基为：MS+赤霉素1mg/L+KT 2mg/L+NAA 0.1mg/L+IAA 0.05mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
（3）组培苗的驯化：
待培养瓶里的组培苗长有4～5条白根时，揭盖炼苗，并在培养瓶中加入少量蒸馏水；5天后将培养瓶移出培养室，在自然光照和温度24～26℃的条件下炼苗7天，待组培苗出现5～6片叶，叶长5～7cm时，从培养瓶内取出组培苗并洗净培养基，移栽入草炭:珍珠岩:蛭石＝2:1:1的基质中，按常规肥水管理至长成成品苗，出圃。
本发明在组织培养阶段采用了不同于传统培养基的新配方培养基；多种生长激素相互发生协同作用，让生姜组织多发芽、多长根，且在移栽之后，其成活率较以往的高。
MS培养基：
6_BA：即6-苄氨基腺嘌呤，是一种细胞分裂素，主要是引起细胞分裂，诱导芽的形成和促进芽的生长。
NAA：萘乙酸 (1-Naphthaleneacetic acid)，简称NAA，是一种有机化合物（化学式：C10H7CH2CO2H），是一种易溶于有机溶剂的无色固体。它的结构为萘的1号位置以羧甲基取代。它是一种植物激素生长素，常用于商用的发根粉或发根剂中，在植物使用扦插法繁殖时使用。它也可用于植物组织培养。
IAA：吲哚-3-乙酸，是一种植物体内普遍存在的内源生长素，属吲哚类化合物。在细胞水平上，生长素可刺激形成层细胞分裂；刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长；促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。
KT：化学名称为6-糖基氨基嘌呤（或N6-呋喃甲基腺嘌呤），分子式C10H9N5O；它是一种非天然的细胞分裂素，能够促进细胞分化、分裂、生长；诱导愈伤组织长芽；解除顶端优势；促进种子发芽、打破侧芽的休眠。
玉米素：一种天然的细胞分裂素，它是从甜玉米灌浆期的籽粒中提取并结晶出的第1个天然细胞分裂素；促进愈伤组织发芽；能人工合成。
赤霉素，是广泛存在的一类植物激素。其化学结构属于二萜类酸，由四环骨架衍生而得。它是结合国际技术成功研制出的新一代新型高科技调节剂产品，赤霉素是九二零的改良型药剂，英文名：gibberellin，简称GA4+7，其功效对作物的有效率是百分之百，效果持久，更高效，更稳定，更安全，幼苗期开始喷施为最佳，可使根系发达，又预防病害，它能显著地促进植物茎、叶生长，如生长期喷施，也可使营养均衡，有助于作物长势，花期喷施，可保花保果、也能使果实膨大、更有美果作用，棉花盛花期喷洒能有效减少蕾铃脱落，提高结铃率，并可以有效解除作物病害
本发明的优点：
1.本发明的炼苗方法简单易行，成本较低且移栽成活率高。
2.选用生姜茎尖作为组织培养材料，生姜组培苗具有生长快、长势旺、抗病，抗逆性强、姜块色泽鲜黄、均匀整齐、辣味浓、品质好、产量高等特性。
3.在组织培养阶段，采用了多种激素协同作用的新配方培养基，且是根据不同的阶段选用不同激素，相比传统配方培养基，有更好的效果。如在诱导培养基加入玉米素，可以促进生姜组织多发芽；在生根培养基加入赤霉素，可以促进组培苗最多长根，有助于提高组培苗移栽的成活率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明。
实施例1：
一种生姜组培苗的炼苗方法，依次包括以下步骤：
（1）种苗组织的处理：
选择健壮、无病虫害的生姜为组织培养材料，将姜块用50%多菌灵500倍液浸泡半个小时消毒后，埋于洗净的沙床中，在室温条件下进行催芽，当芽长约1cm时，使用蒸馏水冲洗去掉沙土，在无菌室内用解剖针剥去幼叶，取约3mm姜芽，用70%酒精灭菌一分钟，再用1%NaClO灭菌20分钟，蒸馏水冲洗3次，在超净工作台上用解剖镜进行茎尖剥离，剥取约0.3mm的茎尖进行接种；
（2）组培苗的培养：
将步骤（1）中的约0.3mm的茎尖接种到无菌苗培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养，直至茎尖长到约1cm时成外植体无菌苗；所述的无菌苗培养基为：MS+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将外植体无菌苗接种到诱导培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养22天至形成初代不定芽并长到约1cm；所述的诱导培养基为：MS+玉米素2mg/L+6_BA 1.5mg/L+NAA 0.15mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0
将上述的初代不定芽苗接种到增殖培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养10天左右至形成继代不定芽苗并长到约3cm；所述的增殖培养基为：MS+玉米素1mg/L+6_BA 2mg/L+NAA 0.25mg/L+IAA 0.3mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将上述的继代不定芽苗接种到生根培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养12天，小苗长至约4cm且至少具有3条长≥2cm的根时，即成可以出培养室的组培瓶苗；所述的生根培养基为：MS+赤霉素1mg/L+KT 2mg/L+NAA 0.1mg/L+IAA 0.05mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
（3）组培苗的驯化：
待培养瓶里的组培苗长有4条白根时，揭盖炼苗，并在培养瓶中加入少量蒸馏水；5天后将培养瓶移出培养室，在自然光照和温度24℃的条件下炼苗7天，待组培苗出现5片叶，叶长约5cm时，从培养瓶内取出组培苗并洗净培养基，移栽入草炭:珍珠岩:蛭石＝2:1:1的基质中，按常规肥水管理至长成成品苗，出圃。
实施例2：
一种生姜组培苗的炼苗方法，依次包括以下步骤：
（1）种苗组织的处理：
选择健壮、无病虫害的生姜为组织培养材料，将姜块用50%多菌灵500倍液浸泡半个小时消毒后，埋于洗净的沙床中，在室温条件下进行催芽，当芽长约2cm时，使用蒸馏水冲洗去掉沙土，在无菌室内用解剖针剥去幼叶，取3～5mm姜芽，用70%酒精灭菌一分钟，再用10%NaClO灭菌20分钟，蒸馏水冲洗3次，在超净工作台上用解剖镜进行茎尖剥离，剥取约0.5mm的茎尖进行接种；
（2）组培苗的培养：
将步骤（1）中的约0.5mm的茎尖接种到无菌苗培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养，直至茎尖长到约2cm时成外植体无菌苗；所述的无菌苗培养基为：MS+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将外植体无菌苗接种到诱导培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养25天至形成初代不定芽并长到约3.0cm；所述的诱导培养基为：MS+玉米素2mg/L+6_BA 1.5mg/L+NAA 0.15mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0
将上述的初代不定芽苗接种到增殖培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养15天至形成继代不定芽苗并长到约6.0cm；所述的增殖培养基为：MS+玉米素1mg/L+6_BA 2mg/L+NAA 0.25mg/L+IAA 0.3mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将上述的继代不定芽苗接种到生根培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养15天，小苗长至约8cm且至少具有3条长≥2cm的根时，即成可以出培养室的组培瓶苗；所述的生根培养基为：MS+赤霉素1mg/L+KT 2mg/L+NAA 0.1mg/L+IAA 0.05mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
（3）组培苗的驯化：
待培养瓶里的组培苗长有5条白根时，揭盖炼苗，并在培养瓶中加入少量蒸馏水；5天后将培养瓶移出培养室，在自然光照和温度26℃的条件下炼苗7天，待组培苗出现6片叶，叶长约7cm时，从培养瓶内取出组培苗并洗净培养基，移栽入草炭:珍珠岩:蛭石＝2:1:1的基质中，按常规肥水管理至长成成品苗，出圃。
实施例3：
一种生姜组培苗的炼苗方法，依次包括以下步骤：
（1）种苗组织的处理：
选择健壮、无病虫害的生姜为组织培养材料，将姜块用50%多菌灵500倍液浸泡半个小时消毒后，埋于洗净的沙床中，在室温条件下进行催芽，当芽长1.5cm时，使用蒸馏水冲洗去掉沙土，在无菌室内用解剖针剥去幼叶，取4mm姜芽，用70%酒精灭菌一分钟，再用5%NaClO灭菌20分钟，蒸馏水冲洗3次，在超净工作台上用解剖镜进行茎尖剥离，剥取0.4mm的茎尖进行接种；
（2）组培苗的培养：
将步骤（1）中的0.4mm的茎尖接种到无菌苗培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养，直至茎尖长到1.5cm时成外植体无菌苗；所述的无菌苗培养基为：MS+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将外植体无菌苗接种到诱导培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养24天至形成初代不定芽并长到2cm；所述的诱导培养基为：MS+玉米素2mg/L+6_BA 1.5mg/L+NAA 0.15mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0
将上述的初代不定芽苗接种到增殖培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养13天至形成继代不定芽苗并长到5cm；所述的增殖培养基为：MS+玉米素1mg/L+6_BA 2mg/L+NAA 0.25mg/L+IAA 0.3mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将上述的继代不定芽苗接种到生根培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养13天，小苗长至6cm且至少具有3条长≥2cm的根时，即成可以出培养室的组培瓶苗；所述的生根培养基为：MS+赤霉素1mg/L+KT 2mg/L+NAA 0.1mg/L+IAA 0.05mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
（3）组培苗的驯化：
待培养瓶里的组培苗长有5条白根时，揭盖炼苗，并在培养瓶中加入少量蒸馏水；5天后将培养瓶移出培养室，在自然光照和温度25℃的条件下炼苗7天，待组培苗出现6片叶，叶长6cm时，从培养瓶内取出组培苗并洗净培养基，移栽入草炭:珍珠岩:蛭石＝2:1:1的基质中，按常规肥水管理至长成成品苗，出圃。
Claims (1)
1. 一种生姜组培苗的炼苗方法，其特征在于，依次包括以下步骤：
（1）种苗组织的处理：
选择健壮、无病虫害的生姜为组织培养材料，将姜块用50%多菌灵500倍液浸泡半个小时消毒后，埋于洗净的沙床中，在室温条件下进行催芽，当芽长1～2cm时，使用蒸馏水冲洗去掉沙土，在无菌室内用解剖针剥去幼叶，取3～5mm姜芽，用70%酒精灭菌一分钟，再用1%～10NaClO灭菌20分钟，蒸馏水冲洗3次，在超净工作台上用解剖镜进行茎尖剥离，剥取0.3～0.5mm的茎尖进行接种；
（2）组培苗的培养：
将步骤（1）中的0.3～0.5mm的茎尖接种到无菌苗培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养，直至茎尖长到1～2cm时成外植体无菌苗；所述的无菌苗培养基为：MS+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将外植体无菌苗接种到诱导培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养22～25天至形成初代不定芽并长到1.0～3.0cm；所述的诱导培养基为：MS+玉米素2mg/L+6_BA 1.5mg/L+NAA 0.15mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0
将上述的初代不定芽苗接种到增殖培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养10～15天至形成继代不定芽苗并长到3.0～6.0cm；所述的增殖培养基为：MS+玉米素1mg/L+6_BA 2mg/L+NAA 0.25mg/L+IAA 0.3mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
将上述的继代不定芽苗接种到生根培养基中，在25℃、光强1500Lx、光照12h/d的组培条件下培养12～15天，小苗长至4～8cm且至少具有3条长≥2cm的根时，即成可以出培养室的组培瓶苗；所述的生根培养基为：MS+赤霉素1mg/L+KT 2mg/L+NAA 0.1mg/L+IAA 0.05mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L，pH值为6.0；
（3）组培苗的驯化：
待培养瓶里的组培苗长有4～5条白根时，揭盖炼苗，并在培养瓶中加入少量蒸馏水；5天后将培养瓶移出培养室，在自然光照和温度24～26℃的条件下炼苗7天，待组培苗出现5～6片叶，叶长5～7cm时，从培养瓶内取出组培苗并洗净培养基，移栽入草炭:珍珠岩:蛭石＝2:1:1的基质中，按常规肥水管理至长成成品苗，出圃。
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