CN101636171B - 血清调制方法及血清调制装置 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种血清调制方法和血清调制装置，可以不受血液新鲜度的影响，一次获取大量的高培养率的血清。本发明提供的从至少含有血小板的血液中调制血清的血清调制方法，设置有破坏血液中血小板细胞膜的血小板处理工序。优选为，设置有从经血小板处理工序后的血液中析出不耐热蛋白质的析出工序以及去除从析出工序中析出的不耐热蛋白质的去除工序。

Description

血清调制方法及血清调制装置

技术领域

本发明涉及从采取的血液中调制血清的方法及调制血清的装置。

背景技术

目前，在再生医疗领域正开展一种将人体干细胞进行人体外增殖、分化后，重新移植回干细胞提供者体内，以促进人体组织的再生的研究。

已经知道，在干细胞的体外培养中，如果在培养基中添加血清，可以提高培养效率。

专利文献1公开了一种使用装有促进血液凝固的玻璃粉的采血管来进行血清调制的方法。专利文献2公开了通过使采集的血液与促进血液凝固的玻璃珠接触，从而激发血小板的活性，释放细胞增殖因子后进行血清分离的方法。。

【专利文献1】特开2000-000228号公报

【专利文献2】特许第3788479号

但是，专利文献1公开的方法，由于是以血液检查为目的，其前提是使用容量很小的采血管调制血清。采用专利文献1公开的方法调制血清时，为了确保培养干细胞使用的血清量，血清调制需要操作多次，因此该方法不适合实际应用。

另外，细胞的培养率与血清中的细胞增殖因子的含量相关。即便一次可获得大量的血清，但如果细胞增殖因子的含量很少，也很难提高细胞的培养率。

细胞增殖因子存在于血小板中，从血小板中释放出的细胞增殖因子的量与血小板的活性状态相关，而血小板的活性状态则与血小板的新鲜度相关。专利文献2公开的方法，是通过与玻璃珠接触来激发血小板自身活性，如果使用的血液不新鲜，很难获得从血小板的量而推算出的推测量的细胞增殖因子，因此不可能一次获取大量的可高效培养的血清。

而且，专利文献2的方法中，玻璃珠在接触血液激发血小板活性的同时也粘附血液凝固因子，从而去除血液中的凝固因子。但是，诸如采集的献血血液，由于进行了抗凝固处理，不可能通过使血液中的凝固因子附着到玻璃珠上而得以去除，因此专利文献2的方法不适用该种血液。

发明内容

本发明提供一种血清调制方法及血清调制装置，可以不受血液新鲜度的限制一次获取大量的高培养率的血清。

采用本发明，即使血液不新鲜，血小板的细胞膜遭到破坏，也可以获得依据血小板的含量而推测出的推测量的细胞增殖因子。也就是说，几乎可以获得血小板中的全部细胞增殖因子。另外，使用本发明，即使是进行了抗凝固处理的血液，经过一定的处理后也可以利用。本发明具体如下：

(1)一种血清调制方法，从至少含有血小板的血液中调制血清，包括破坏所述血液中血小板细胞膜的处理工序。

(2)如(1)所述方法，所述血小板处理工序为，对上述血液至少要进行下列处理中的任意一种处理：热处理、超声波处理、离心分离处理、加压/减压处理、利用玻璃珠进行的混合搅拌处理。

(3)如(1)或(2)所述方法，所述血液为经过抗凝固处理的血液。

(4)如(1)-(3)中任意一项所述方法，还包括从所述经过血小板处理工序后的血液中析出不耐热蛋白质的析出工序。

(5)如(4)所述方法，还包括去除通过所述析出工序析出的所述不耐热性蛋白质的去除工序。

(6)依据(1)-(5)中任意一项方法调制的血清。

(7)一种血清调制装置，从至少含有血小板的血液中调制血清，包括：

血液储存部，用于储存所述血液；

成分存放部，与血液储存部无菌密封连接，用于存放从所述血液储存部中储存的血液中分离出的血清。

(8)如(7)所述装置，所述血液储存部还包括：

全血储存部，用于储存全血；

血浆储存部，与全血储存部无菌密封连接，用于储存从所述全血储存部处储存的全血中分离出的富血小板血浆。

(9)如(7)所述装置，所述血液储存部是用于储存富血小板血浆的血浆储存部。

(10)如所述(7)-(9)中任意一项所述装置，还包括：

连接部，用于连接或分离所述血液储存部和所述成分存放部。

本发明中所述“血液”为，至少含有血小板的全血，或至少含有血小板的由全血中的一种成分组成的液体(例如从成分献血中采集的血液)。所述全血为由血细胞(白细胞、红细胞)和液体成分的血浆(血清)组成。

本发明中所述“血清”为，采集的血液经放置后流动性降低，会产生红色的凝固块(血凝块)和与之分离的淡黄色液体，本发明中所述“血清”是指该淡黄色液体或富含细胞增殖因子的淡黄色血液的液体成分。

本发明中所述“富血小板血浆”为，比通常全血中的血小板浓度高，含有更多血小板的血液的液体成分。

使用本发明中提供的血清调制方法和血清调制装置，可以不受血液新鲜度的限制一次获取大量的高培养率的血清。

而且，由于本发明中，即使使用经抗凝固处理的血液(例如从成分献血采集的血液)也可调制血清，因此对因健康问题采血比较困难的患者，也可以不给身体添加负担地制作血清。

附图说明

图1为本发明第3实施例中血清调制装置示意图；

图2为本发明第3实施例中使用血清调制装置进行的从血液采集到血清保存过程的操作顺序示意图；

图3为本发明第3实施例中，将在血清调制装置的全血储存部11中调制的富血小板血浆71导入到血浆储存部12的导入方法剖面图；

图4为本发明第4实施例中血清调制装置中的血浆储存部处于分离状态的示意图；

图5为本发明第4实施例中血清调制装置中的血浆储存部处于连接状态的示意图；

图6为本发明第4实施例中血清调制装置的变形例的示意图；

图7为本发明第5实施例中血清调制装置的示意图；

图8为对图7中的一部分进行扩大的示意图；

图9为本发明第2实施例和第3实施例中显示超声波处理时间和血小板残留率(％)关系的示意图；

附图中各符号含义如下：

1、1A  血清调制装置

10、10A血液储存部

11全血储存部

110本体部

110a外边缘部

12血浆储存部

21-26袋体

30采血针

41-47、51-57软管

61-66分流管

70连接部

71富血小板血浆

80加压器

90夹具

91圆板

92垫板

具体实施方式

下面就本发明的实施例进行详细说明。本发明并不局限于下述实施例，在本发明目的的范围内，可以进行适当变形。对重复说明的部分进行的适当省略也不限定本发明宗旨。

第1实施例

【血清调制方法】

本发明为使用至少含有血小板的血液进行血清调制的血清调制方法，包括破坏所述血液中血小板的细胞膜的血小板处理工序。

血小板可以自动释放的细胞增殖因子的量与血小板的新鲜的相关。血液中的“高活性、新鲜血小板”及“低活性、老化血小板”混合存在，“新鲜血小板”自动释放出的细胞增殖因子的量也多。采血后经过的时间越长，“老化血小板”的含量就越多，使用陈旧血液制造出的血清，细胞增殖因子的含量很少。但在本实施例中，由于设置有破坏血小板细胞膜的“血小板处理工序”，可以不受血液(血小板)新鲜度的影响，获得几乎全部的依据血小板的含量而推测出的推测量的细胞增殖因子，因此可以制造出高培育率的血清。

“血小板处理工序”，可以列举对血液进行热处理、超声波处理、离心分离处理、加压/减压处理等，还可列举实施物理负荷的处理方法。其中，优选热处理和超声波处理，可以有效破坏细胞膜。热处理可以具体列举冻结溶解处理。

冻结融解处理为至少要进行1次以上的冻结融解工序的处理方法。在冻结工序中，冻结温度为-196～1℃，优选为-80℃～-5℃，冻结状态的保持时间因容量而异，优选为1秒以上。在融解工序中，融解温度为0℃～56℃，优选为4℃～37℃，融解状态的保持时间因容量而异，优选为1秒以上。

在超声波处理中，使用音压计测定作用于处理对象上的超声波强度时，使用强度为5mV以上的超声波，进行5分钟～60分钟超声波处理，优选为10分钟～30分钟。本发明中，使用通常的超声波发生装置产生超声波。

在离心分离处理中，使用血液袋存放血液，在10000～100000G、5～600分钟的条件下，对装有血液的血液袋进行离心分离。在血小板处理工序中进行离心分离处理时，优选使用富血小板血浆的血液。

在加压/减压处理中，对血液施加3～275Mpa的较高压力，之后进行至少一次的减压操作。这样，可以有效地破坏细胞膜。

所述物理负荷处理，可列举向血液中混入玻璃珠，然后使用离心分离器等器械搅拌混有玻璃珠的血液进行的混合搅拌处理。

在上述的血液处理工序中，优选在储存有采集的血液的血液袋等容器中进行处理，以防止采集到的血液或经处理的血液因与外部环境接触而造成的污染，而且由于不必变换容器，使工序得以简化。

在本实施例中，“血液”中只要含有血小板，既可为全血，也可为类似富血小板血浆的含有部分血液成分的血液，没有特别的限定。可以使用例如采血管采集数ml的所述血液，但在一次制造大量血清时，优选使用所述的血液袋来采集数百ml～数千ml的血液。

血液还可为经抗凝固处理的血液，诸如在献血活动中采集的血液。所述“抗凝固处理”是指向采集到的血液中添加CPD液体(Citrate-Phosphate-Dextrosesolution)或ACD-A液体(Acid-Citrate-Dextrose-A solution)等抗凝剂。优选提前将抗凝剂添加到储存血液的血液袋中。可以向经过“血小板处理工序”的血液中添加氯化钙等钙离子中和所述经抗凝固处理的血液，进而去除抗凝剂。

在本实施例中，由于向采集的血液中添加了抗凝剂，如果不采取任何措施，会使血液成分中含有血纤蛋白原等不耐热蛋白质。血清中如含有不耐热蛋白质，会析出血纤蛋白原，导致细胞的培养变得困难。因此优选为，将上述经血小板处理工序处理的血液，通过“析出工序”析出不耐热蛋白质，之后，再经“去除工序”去除不耐热蛋白质。

由上述可知，即便使用添加抗凝剂的血液，也可不需添加任何药剂去除不耐热蛋白质。不耐热蛋白质可列举血纤蛋白原、补体成分等。

与前述血液处理工序同样的理由，该“析出工序”优选在储存有采集的血液的血液袋或采血管等容器中进行。

“析出工序”可列举加热处理。加热的温度因使用血液的新鲜度和容量而异，通常优选45℃～60℃，更优选50℃～60℃，而55℃～60℃为最适宜温度。加热时间优选10分钟至60分钟，更优选20分钟到50分钟，而30分钟到40分钟为最适宜加热时间。通过上述加热处理，不耐热蛋白质的析出变得简单容易，同时，由于加热处理使补体失去活性，因此不需要再对调制后的血清进行失活处理，从而简化了工序。从上述理由可知，加热处理可在与所谓的血清失活相同的条件(在56℃时加热30分钟)下进行。

“去除工序”可列举离心分离处理、过滤处理等。在离心分离处理时，因调制后的血清量及分离成分的不同而设置不同的工艺条件，例如可优选设定为4400(G)×6分钟、22℃。而过滤条件优选为使用孔径为200μm的过滤器进行过滤。

第2实施例

本实施例与第1实施例的区别之处在于，进行血清调制时血液中没有添加抗凝剂。

在本实施例中，经血小板处理工序后的血液，不仅是血小板，红细胞和白细胞的细胞膜也遭到破坏，处于所谓的溶血状态。为了去除红细胞中的血红蛋白和白细胞中的DNA和RNA，在血小板处理工序和析出工序之间需要对由红细胞和白细胞产生的成分进行去除处理。去除处理具体为使用吸附柱和过滤器等进行去除。在去除血红蛋白时优选利用吸附柱，而去除DNA及RNA时则优先利用过滤器。

第3实施例

【血清调制装置】

接下来，对上述本发明中的用于调制血清的血清调制装置进行说明。

本发明中的血清调制装置为利用至少含有血小板的血液来调制血清，包括所述储存血液的血液储存部和成分存放部，成分存放部与血液储存部无菌密闭连接，用于存放从所述血液储存部储存的血液中分离出的血清。以下，就本实施例中的血清调制装置进行详细说明。

图1为本实施例中的血清调制装置示意图。该血清调制装置1主要由血液储存部10和成分存放部20构成。血液储存部10由储存供血者全血的全血储存部11和储存从全血分离出的富血小板血浆的血浆储存部12组成。其中的全血储存部11包括外边缘部110a和本体部110。使用扰性树脂材料，例如2枚软质乙酰塑料薄片在外边缘部110a处熔接形成袋状的本体部110。血浆存储部12也与全血储存部相同，是由软质乙酰塑料形成的。

而且，全血储存部11内部充填有抗凝剂，所述的血液袋或分离袋也可以充当全血储存部。血液储存部10的内部预先进行了灭菌处理。在本实施例中，预先填充抗凝剂。

成分存放部20由6个袋体21～26组成，各袋体与全血储存部11相同，是软质乙酰塑料材质。与血液存储部10相同，在成分存放部20中也预先进行灭菌处理。

如图1所示，在全血储存部11的本体部110的上边缘的一端，有两根软管41、42通过接口与之密闭连接。其中软管41是输入管路，用于输入血液，在其另一端还连接有采血针30或能够连接采血针的连接部。另一根软管42，通过软管43～47、51～57以及分流管61～66分别与袋体21～26相连，通过该种连接，形成血液输出管路用以输出血液。这些软管41～47、51～57是由具有柔软性的树脂材料，例如软质乙酰塑料制成的。该处的成分存放部20的袋体21～26与软管51～57也是密闭连接的。

全血储存部11和血浆储存部12、血浆储存部12和各袋体21～26，通过软管42～47、51～57保持连通，形成与外部环境相隔绝的内部空间，即上述连通是密闭连接的。另外各软管42～47、51～57及各分流管61～66之间形成的血液成分流通管路也是与外部环境相隔绝，进行密闭连接。连接方法可列举熔剂黏结，热熔接或超声波熔接等。

下述内容图1没有显示。本发明中的第1实施例中的血清调制装置1中，各软管42～47、51～57的几个必要之处设置有夹具，通过使用夹具夹紧软管切换输出血液(或提取出的血清)时的输出路径。

关于血清调制操作

参考图1、图2和图3，对使用具有上述构成的血清调制装置1调制血清的操作过程进行说明。如无特别限定，下述内容中出现的符号为图1所示符号。

如图2所示，利用上述血清调制装置进行的血液分离操作大体可分为10个工序(S1～S10)。

首先在第1阶段中，采血针30扎入采血对象(患者)血管，抽取血液。采血针采取的血液经软管41输入到软管41下方的全血储存部11进行储存(以下，称为储存工序S1)。为了使全血储存部的血液不流向血浆储存部12，可在与全血储存部11临近的软管42处设置一个可断裂的的挡板(图中未标示)，或者在全血储存部11的根处用夹具夹紧，关闭通往血浆储存部的通路。在储存工序S1中，考虑到患者的健康状况，只采取需要量的血液。此处需要量是指，当患者的身体和健康状况没有特别问题时采集的血液量为200～600(ml)左右。

采血时可以使用诸如献血活动中广泛使用的采血器等器械。

接下来，从采血对象处将采血针拔出，将连接采血针30和全血储存部11的软管41的一部分熔断，并熔接熔断端口(以下，称为第1熔断工序S2)。可使用熔断器(所谓的sealer，焊机)熔断软管41。

之后，从全血储存部11处的全血中分离血浆(本实施例中为富血小板血浆)(以下，称为第1分离工序S3)。分离方法可列举离心分离、过滤以及二者的组合等方法。在本实施例中采用离心分离法。离心分离的实施条件因血液的储存量及分离成分的种类而异，例如可优选设定为1100(G)×6(min)、24℃。在离心分离时，优选将血清调制装置折叠整理后放置入分离器。

之后，将分离出的富血小板血浆移送至血浆储存部12(以下，称为第1移送工序S4)。参考图3进行说明。

如图3所示，将分离出的富血小板血浆71移送至血浆存储部12之前，用夹具90将软管43的管路关闭，然后使用设置在全血储存部11外侧的加压器80对全血储存部11加压(F1)。如同前述部分所作说明，与全血储存部11密闭相连的软管41在储存工序S1结束时，在工序过程中软管的一部分41a已被熔断，同时，该熔断端口和近旁的41b已被熔接。

经过加压F1，分离后提取出的上清液(即富血小板血浆71)的一部分，经软管42、分流管61及软管51输入到血浆储存部12。

对软管43的管路关闭是通过将具有柔软性的软管43放到夹具90的圆板91和垫板92之间进行夹紧而完成的。

输出富血小板血浆71后残留在全血储存部11处的红细胞等血液成分经生理盐水稀释后可返回供血者体内。还可以向残留血液成分中加入红细胞保存液，保存一段时间后返还给供血者，例如细胞移植时。

回到图2，血浆储存部12处装有富血小板血浆71后，熔断并熔接软管42(以下，称为第2熔断工序S5)。此处的熔断及熔接采用与第1熔断工序S2相同的方法。

之后，对输送到血浆储存部12处的富血小板血浆中的血小板细胞膜进行物理性破坏(以下，称为血小板处理工序S6)。血小板处理工序S6，可列举离心分离处理、超声波处理、热处理、加压/减压处理、玻璃珠混合/搅拌处理等方法进行血小板处理。本实施例中的血小板处理工序采用热处理方式之一的冻结融解处理方法进行血小板处理。在冻结融解处理时，将血清调制装置1整体在-80℃的温度下冻结60分钟后，再升温至37℃后持续20分钟，如此反复3次。

通过血小板处理工序S6，破坏了血小板细胞膜，释放出血小板中的细胞增殖因子。该处理方法，可以不受血小板和血液新鲜度的影响，获取血小板所含有的全部细胞增殖因子。

之后，析出经过血小板处理工序S6的血液中的不耐热蛋白质(以下，称为析出工序S7)。析出处理是对经上述血小板处理工序S6处理后的血浆储存部12进行加热处理而进行的。在本实施例中，在温度为56℃时，加热处理30分钟。通过析出工序S7，不仅是不耐热蛋白质，补体也可以失去活性。补体的失活，可以减轻对培养细胞的影响。

析出工序S7中的加热处理也可以对血清调制装置1全体进行加热。

之后，去除析出工序S7中析出的不耐热性蛋白质(以下，称为去除工序S8)。去除方法可列举过滤、离心分离及二者的组合方法等。在本实施例中采用离心分离方法，具体为4400(G)×6分钟。离心分离时优选将血清调制装置1整体放入离心分离器进行离心分离。如果采用过滤方法，将图1中的软管43的一部分与过滤器预先组合的话，可以在执行后续的第2移送工序中，去除析出的不耐热性蛋白质。

之后，将通过上述去除工序S8分离出的血清分别移送到成分存放部20的袋体21～26处(第2移送工序S9)。移送方法与第1移送工序S4相同，优选对血浆储存部12的外侧加压来挤压出调制的血清。血清分别被输出到袋体21～26处进行存放。当调制的血清量较少时，可以使用夹具关闭软管44～47中的任意管路，调整使用袋体21～26的个数。

将血清移送到成分存放部20处后，熔断并熔接软管52～57(以下，称为第3熔断工序S10).该处的熔断及熔接，采用与第1熔断工序S2相同的方法。

根据本实施例方法，可以使采集血液中的血清不与外部环境接触，实现无菌制造。这样，由于从采血到血清调制一系列的工序都不与外部环境接触，可以降低微生物污染的危险性。

在本实施例中，血小板处理工序S6处的热处理是例举了冻结融解处理。但本发明中的热处理不局限于冻结融解处理。例如，采用加热处理的热处理方式也能达到本发明效果。血小板处理工序S6处的加热处理，例如可以采用对血清调制装置1整体在56℃时加热处理60分钟的方式。这样，可以破坏血小板的细胞膜，获得血小板中的细胞增殖因子。另外，在血小板处理工序S6中，温度为56℃的条件下加热处理60分钟的过程可与上述析出工序S7同时进行，从而达到缩短血清调制工序的效果。

本发明中的血清调制装置不仅可以使用人类的血液，还可使用啮齿类动物、家畜、灵长类等哺乳动物的血液，因此也可用作为分离非人类血液成分的分离装置。

第4实施例

图4及图5为本发明第4实施例中的血清调制装置1A示意图。在本实施例中，血液储存部10A并不是由全血储存部和血浆储存部构成，而是由一个袋体构成。第4实施例与第3实施例的区别在于血液储存部10A仅由储存富血小板血浆的血浆储存部12A构成。

图4中的血浆储存部12A用于储存例如在献血活动中采集的富血小板血浆。

在该种情况下软管42A和血浆储存部12A在开始时并不相连。使用时，将软管42A插入到连接部70处，与血浆储存部12A一侧的软管42A′相连。优选将采血时使用的软管41A预先熔断。连接部70可列举由高密闭性的连接孔盖(日本国特许第3389983号)构成，该孔盖的条状阀门可随插入器具的插入拔出进行开合。

如图6所示，本实施例中的血浆储存部12A和软管42A可预先连接为一体，而不必通过连接部70相连。

由于具有上述构造，可以使用诸如从献血活动中采集的血液。由于可以使用从成分献血采集到的血液，对由于健康问题而不能采取全血的患者也可以较容易地调制血清。本实施例中血清调制装置的其他构造与第3实施例相同，在此不再赘述。

第5实施例

图7和图8为本发明第5实施例中血清调制装置1B的示意图。

本实施例中，血液储存部10B仅由血浆储存部12B构成，该血浆储存部12B处设置有可存放产生超声波的超声波发生振子13的超声波发生振子存放部14，这也是本实施例同第1实施例的区别之处。

设置一端关闭而另一端开放的筒状部件15从血浆储存部12B的上边缘突入到袋状的本体部120B的内侧，从而形成超声波发生振子存放部14。筒状部件15的关闭一端设置为突入到本体部120B的内部。

超声波发生振子13，呈棒状，从筒状部件15的开发一端插入到筒状部件15的中空部分。也就是说，筒状部件15的中空部分构成超声波发生振子存放部14。

筒状部件15的中空部分的形状与超声波发生振子13的外形略显相同。这样，当超声波发生振子13放置于超声波发生振子存放部14时，超声波发生振子13与筒状部15紧密相连。

超声波发生振子13通过连接线与超声波发生装置本体16相连，打开设置于该超声波发生装置本体16处的开关就可产生超声波。

通过上述的构造可使超声波发生振子13产生的超声波直接作用于存放在本体部120B内部的全血，从而提高血清调制的效率。这样，在降低血清调制过程中所消耗的能量的同时，还可缩短血清调制的时间。

超声波发生振子存放部14与血浆存储部12B的内部空间在和外部空间相隔绝的状态下相连接，保证了在血浆存储部12B内部空间的无菌性的同时，进行血小板处理工序。

将超声波发生振子存放部14设置于血清调制装置1B中的作为血液储存部10B来使用的血浆储存部12B中，可以使血小板处理工序方法之一的超声波处理中使用的超声波发生振子13在血清调制装置1B处的插入、拔出操作变得简单易行，血清调制操作也变得更加容易。另外，还可以使用小型的超声波发生装置，以节省血清调制装置1B的占用空间。

实施例

【实施例1～4，比较例、参考例1和2】

在血小板处理工序中，对血小板细胞膜的破坏方法进行了分析。

首先，从全血分离富血小板血浆。开始时向人类的血液10ml中加入CPD液体1.4ml，在20℃、3500rpm的条件下进行8分钟的离心分离处理(离心分离机：株式会社久保田制作所制)。之后，将分离出的血浆层和血块黄(buffy coat)层进行分离，在20℃、800rpm的条件下进行8分钟的离心分离处理后，分离上清液，即富血小板血浆。将该富血小板血浆作为实验分析物。

将上述富血小板血浆分装到各容器中，每个容器盛装1ml，分别进行下述处理。对比例1中记载的处理方法为专利文献2(特许第3788479号)中记载的方法。

(实施例1)-80℃时冻结10分钟，然后在37℃的温度下进行融解处理，如此反复3次。

(实施例2)进行15分钟超声波处理

(实施例3)进行30分钟超声波处理

(实施例4)向容器中添加多个直径为1mm的玻璃珠，剧烈搅拌10分钟

(对比例1)添加5个直径为4mm的玻璃珠和27.8w/v％的氯化钙10μl，在37℃的温度下加热30分钟

(参考例1)14000G条件下进行1次10分钟的离心分离

(参考例2)14000G条件下进行3次10分钟的离心分离

经上述处理后，在3500rpm的条件下进行10分钟离心分离处理后，测量获得的上清液(血清)的细胞增值因子，结果如表1所示。

细胞增殖因子的含量	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	对比例1	参考例1	参考例2
								TGF-β1(pg/ml)	37900	62193.3	62066.7	44173.3	44915.6	193.3	4966.7
PDGF-BB(pg/ml)	3792.9	5652.1	5672.1	1637.9	3325	0	0

使用实施例1的冻结溶解处理方法和实施例4的添加玻璃珠搅拌处理方法可以得到与现有技术(对比例1)几乎相同量的细胞增殖因子。实施例2和3中经超声波处理后可获得的细胞增殖因子的量接近人类血清中细胞增殖因子量的上限值。

接下来，对实施例2、3中的超声波处理时间与血小板残留率(％)的关系进行了分析。图9为超声波处理时间和血小板数目关系(n＝5)的示意图。从图9可知，经15分钟的超声波处理后，几乎全部的血小板细胞膜都被破坏了。

Claims (9)

1.一种从至少含有血小板的血液中调制血清的血清调制方法，其特征在于，包括破坏所述血液中血小板细胞膜的血小板处理工序，所述血小板处理工序为，对上述血液至少要进行下列处理中的任意一种处理：热处理、超声波处理、离心分离处理、加压减压处理、利用玻璃珠进行的混合搅拌处理。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述血液为经过抗凝固处理的血液。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，还包括从所述经过血小板处理工序后的血液中析出不耐热蛋白质的析出工序。

4.如权利要求3所述方法，其特征在于，还包括去除从所述析出工序中析出的所述不耐热性蛋白质的去除工序。

5.依据权利要求1～4中任意一项所述方法调制的血清。

6.一种从至少含有血小板的血液中调制血清的血清调制装置，其特征在于，包括：

血液储存部，用于储存所述血液；

成分存放部，与血液储存部无菌密封连接，用于存放从所述血液储存部中储存的血液中分离出的血清，

在所述血液储存部处设置有可存放产生超声波的超声波发生振子的超声波发生振子存放部。

7.如权利要求6所述装置，其特征在于，所述血液储存部还包括：

全血储存部，用于储存全血；

血浆储存部，与全血储存部无菌密封连接，用于储存从所述全血储存部处储存的全血中分离出的富血小板血浆。

8.如权利要求6所述装置，其特征在于，所述血液储存部是用于储存富血小板血浆的血浆储存部。

9.如权利要求6～8中任意一项所述装置，其特征在于，还包括：

连接部，用于连接或分离所述血液储存部和所述成分存放部。

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