CN101596274A - 益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，属于药品的技术领域。益心舒中药制剂是以人参、黄芪、丹参、麦冬、五味子等七味药组成，具有益气复脉，活血化瘀，养阴生津的功效，目前临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。本发明提供了一种益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，该方法的提供直接向有关的生产益心舒制剂中五味子的品质提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好的控制该中药制剂的质量，保证用药的安全性和疗效，能够更好的指导生产，为消费者提供一种品质优良的产品。

Description

益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法

技术领域：

本发明涉及益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，属于药品的技术领域。

背景技术：

中药制剂作为最具发展潜力的药物资源已经被全世界所认知的情况下，我国政府已经建立了一系列广泛的政策来应对传统中药制剂标准化，现代化的要求。其中最重要的就是如何控制中药制剂的质量。目前我们最常用的方法就是选择中药材的主要活性成分或其指标性成份，对这些成分的鉴别和含量测定以达到控制这些中药制剂质量的目的。但是，这种只针对中药及中药制剂指标性成分进行控制的方法并不能科学而全面的确保中药的药效。五味子一直都有南五味子(主产于四川、湖南、云南等地)、北五味子(辽宁、吉林、黑龙江等地)的说法，本发明通过对南、北五味子的益心舒中药制剂分别进行了药理学研究，结果发现，北五味子对心血管系统及中枢神经系统均有影响，其作用于人参相似，虽然作用较弱，但其毒性亦较轻。益心舒中药制剂是以人参、麦冬、五味子等七味药经加工制成的制剂，临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。所以在益心舒制剂中五味子的质量直接关系到该制剂的疗效，所以对于五味子的药材品质控制方法的提高从而确保益心舒中药制剂的疗效显得十分必要。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，这种方法向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好的控制益心舒中药制剂的质量，为临床提供一种疗效确切的益心舒中药制剂，保证用药的安全和疗效，同时能够更好的指导生产，使消费者能全面认识益心舒中药制剂的品质。

本发明涉及益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，它包括五味子的产地、采集、鉴别、含测项目作为该制剂中五味子质量控制的指标。

上述的益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，是采用以下方法中的部分或全部：

(1)五味子的产地为辽宁、吉林、黑龙江、河北、湖南、江西、四川等地。

(2)五味子的采集时间为每年的10月份后采摘。

(3)五味子的加工方法为以下的部分或全部：

方法1：霜降后果实完全成熟采摘的鲜果，拣去果枝及杂质，晒干即可.

方法2：霜降后果实完全成熟采摘的鲜果，拣去果枝及杂质，晒干，再次置蒸笼内蒸透，取出晒干即可。

(4)五味子的鉴别方法为：

方法1：采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF₂₅₄或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10％磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；

方法2：采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯醋或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规合适的比例条件下为流动相，以五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品种作为对照品，检测波长在200～600nm范围内；

(5)五味子的含量测定方法为：

方法1：采用高效液相色谱法测定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200～600nm范围内；

方法2：采用薄层色谱扫描法，一般使用硅胶G或硅胶GF₂₅₄或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，置紫外光灯下或采用包括喷以变色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸气或10％磷钼酸乙醇溶液的方法，斑点在薄层扫描仪上采用单波长或双波长进行扫描，扫描波长为200～400nm；

上述的益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，采用以下方法：

(1)五味子的产地为：辽宁、吉林、黑龙江、河北。

(2)五味子的采集时间为：每年的10月份霜降后采摘。

(3)五味子的加工方法为：霜降后果实完全成熟采摘的鲜果，拣去果枝及杂质，晒干即可.

(4)五味子的鉴别方法为：采用薄层色谱法，使用硅胶GF₂₅₄薄层板，点样量为0.5～20μl之间某一体积，以五味子对照药材、五味子甲素作为对照品，样品前处理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一种或者是它们任意混合溶剂提取后再浓缩方法，展开剂为石油醚、甲酸乙酯、甲酸的上层液，检视条件为紫外光灯下254nm检视。

(5)五味子的含量测定方法为：采用高效液相色谱法测定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200～600nm范围内；

上述的益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，采用以下方法：

(1)五味子的产地为：辽宁、吉林、黑龙江。

(2)五味子的采集时间为：每年的10月份霜降后果实完全成熟后采摘。

(3)五味子的加工方法为：霜降后果实完全成熟采摘的鲜果，拣去果枝及杂质，晒干即可.

(4)五味子的鉴别方法为：取本品内容物10g，加氯仿20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml氯仿使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材10g，同法制得对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加甲醇制得每1ml含1mg的对照品溶液。吸取上述对照药材、对照品溶液各4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的荧光斑点。

(5)五味子的含量测定方法为：HPLC法测定五味子醇甲和五味子醇乙的总含量：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(62∶38)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲和五味子醇乙峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取五味子醇甲和五味子醇乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，混匀，取0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10分钟，再加热回流20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

与现有技术相比，本发明提供的质量控制方法能更好的、更进一步的控制一种益心舒中药制剂的产品质量，保证用药的安全性，使用本发明后，使生产该产品的单位或检测机构从源头原料麦冬来控制，确保该益心舒的疗效，能够保证药物制成品的质量；我们在进行试验时发现：为了达到益心舒中药制剂的确切疗效，就必须从源头开始控制，包括麦冬的产地、采集、鉴别、含测项目。这样更有利于指导生产，让消费者全面认识产品品质、放心使用这类药品。

为证明利用本发明提供的五味子质量控制方法能更好的控制益心舒中药制剂的产品质量，得到的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验；

试验例1益心舒中药制剂中五味子产地的考察

本实验通过对相同采集时期的南五味子和北五味子中木质素类成分的含量测定来考察不同产地的五味子的品质。

1.1仪器与药材

Waters高效液相色谱仪，2693输液泵柱温箱自动进样装置；2487紫外检测器；Millennium32色谱工作站。HP1100色谱仪，Chem Station色谱工作站，二级管陈列检测器；恒温柱箱；TCQ-250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。

药材：南五味子、北五味子

1.2试验方法

1.2.1色谱条件

色谱柱：迪玛，C₁₈(4.6×200mm)；流动相：0.1％磷酸溶液-乙腈(80∶20)；检测波长：203nm；流速：1ml/min；进样量：10μl。

1.2.2对照品溶液制备

精密称取五味子醇甲标准品10.00mg，用甲醇溶解，定容于10ml容量瓶中，摇匀，配制成1.000mg/ml的对照品溶液。

精密称取五味子醇乙标准品10.00mg，以甲醇溶解，定容于10ml容量瓶中，摇匀，配制成1.000mg/ml的对照品溶液。

1.2.3供试品溶液制备

南、北五味子药材，粉碎过40目筛，分别精密称取1.0g样品，以20ml的30％乙醇浸24h，加液20ml渗渡，渗滚液浓缩，定容至50ml，取2ml，稀释并定容于10ml容量瓶中，0.45pm微孔滤膜过滤，滤液为供试品溶液，待测。

1.2.4测定法

分别吸取对照品及各供试品溶液10pl注入液相色谱仪，将峰面积及浓度均取常用对数后用外标法计算。

1.3结果和讨论

1.3.1样品测定结果

南、北五味子药材样品，单位(mg/g)，结果见表1-1

1.3.2讨论

研究结果表明，南、北五味子中的木脂素类成分含量差异较大，说明不同产地药材的种内变异造成药材品质的差异。其中以东北五味子为佳，其总木脂素含量最高，故认为综合评价其品质优良。

试验例2益心舒中药制剂中五味子鉴别的稳定性考察

本实验通过对5批五味子进行鉴别方法学考察，以确定该方法的稳定性。

2.1标准溶液的制备

2.1.1取五味子药材10g，加三氯甲烷50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷10ml使溶解，作为供试品溶液。

2.1.2另取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2鉴别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置日光及紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。

2.3结果供试品和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；同时5批样品均比较稳定，说明此方法可以作为五味子药材的鉴别方法来进行麦冬药材的鉴别。

试验例3益心舒中药制剂中五味子含测的方法学考察

3.1仪器条件：Waters高效液相色谱仪，2693输液泵柱温箱自动进样装置；2487紫外检测器；Millennium32色谱工作站。HP1100色谱仪，ChemStation色谱工作站，二级管陈列检测器；恒温柱箱TCQ-250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。

3.2色谱条件：色谱柱：迪玛，C₁₈(4.6×200mm)；流动相：0.1％磷酸溶液-乙腈(80∶20)；检测波长：203nm；流速：1ml/min；进样量：10μl。

3.3测定法

3.3.1对照品溶液的制备

精密称取五味子醇甲标准品10.00mg，用甲醇溶解，定容于10ml容量瓶中，摇匀，配制成1.000mg/ml的对照品溶液。

精密称取五味子醇乙标准品10.00mg，以甲醇溶解，定容于10ml容量瓶中，摇匀，配制成1.000mg/ml的对照品溶液。

3.3.2供试品溶液制备

南、北五味子药材，粉碎过40目筛，分别精密称取1.0g样品，以20ml的30％乙醇浸24h，加液20ml渗渡，渗滚液浓缩，定容至50ml，取2ml，稀释并定容于10ml容量瓶中，0.45pm微孔滤膜过滤，滤液为供试品溶液，待测。

3.3.3分别精密吸取上述对照液与供试品溶液20ul，注入高效液相色谱仪，用蒸发光散射检测器进行检测，即得。

3.4精密度试验

取北五味子药材(0801030)粗粉按1.2.3方法制备供试品溶液，吸取10ul，重复进样6次，测定样品中五味子醇甲、五味子醇乙的含量见表六，RSD为1.8％，测定方法精密度良好。

五味子醇甲、乙的含量测定的精密度试验3-1，单位(mg/g)

3.5稳定性试验

取北五味子药材(0801030)粗粉，按1.2.3项下供试液的制备方法制备供试液，分别于0h、1h、2h、4h、8h小时进样10ul，测定峰面积的RSD为2.2说明供试品溶液在8h内稳定性良好。

3.6重复性试验

取北五味子药材(0801030)粗粉，按供试品溶液方法平行制备5份，分别进样10μl，进样，测定含量。计算五味子醇甲、乙的含量，RSD为1.5％，测定方法重复性良好，结果见表。

五味子醇甲、乙含量测定的重复性试验5-2，单位(mg/g)

3.7样品测定

按前述方法制备供试液和对照溶液，分别进样10μl，记录色谱图，测定峰面积，按外标法计算含量，5个批样品中五味子醇甲、乙的含量测定结果见表四。

5批样品中五味子醇甲、乙含量测定结果5-3，单位(mg/g)

Claims (4)

1、益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，其特征在于：它是将五味子的产地、采集、加工、鉴别、含测项目作为该制剂中五味子质量控制的指标。

2、按照权利要求1所述的益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，其特征是采用以下方法中的部分或全部：

(1)五味子的产地为辽宁、吉林、黑龙江、河北、湖南、江西、四川等地。

(2)五味子的采集时间为每年的10月份后采摘。

(3)五味子的加工方法为以下的部分或全部：

方法1：霜降后果实完全成熟采摘的鲜果，拣去果枝及杂质，晒干即可.

方法2：霜降后果实完全成熟采摘的鲜果，拣去果枝及杂质，晒干，再次置蒸笼内蒸透，取出晒干即可。

(4)五味子的鉴别方法为：

方法1：采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF₂₅₄或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10％磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；

方法2：采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯醋或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规合适的比例条件下为流动相，以五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品种作为对照品，检测波长在200～600nm范围内；

(5)五味子的含量测定方法为：

方法1：采用高效液相色谱法测定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200～600nm范围内；

方法2：采用薄层色谱扫描法，一般使用硅胶G或硅胶GF₂₅₄或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，置紫外光灯下或采用包括喷以变色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸气或10％磷钼酸乙醇溶液的方法，斑点在薄层扫描仪上采用单波长或双波长进行扫描，扫描波长为200～400nm。

3、根据权利要求1或2所述的益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，采用以下方法：

(1)五味子的产地为：辽宁、吉林、黑龙江、河北。

(2)五味子的采集时间为：每年的10月份霜降后采摘。

(3)五味子的加工方法为：霜降后果实完全成熟采摘的鲜果，拣去果枝及杂质，晒干即可。

(4)五味子的鉴别方法为：采用薄层色谱法，使用硅胶GF₂₅₄薄层板，点样量为0.5～20μl之间某一体积，以五味子对照药材、五味子甲素作为对照品，样品前处理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一种或者是它们任意混合溶剂提取后再浓缩方法，展开剂为石油醚、甲酸乙酯、甲酸的上层液，检视条件为紫外光灯下254nm检视。

(5)五味子的含量测定方法为：采用高效液相色谱法测定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200～600nm范围内。

4、根据权利要求1-3所述的益心舒中药制剂中五味子的质量控制方法，采用以下方法：

(1)五味子的产地为：辽宁、吉林、黑龙江。

(2)五味子的采集时间为：每年的10月份霜降后果实完全成熟后采摘。

(3)五味子的加工方法为：霜降后果实完全成熟采摘的鲜果，拣去果枝及杂质，晒干即可.

(4)五味子的鉴别方法为：取本品内容物10g，加氯仿20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml氯仿使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材10g，同法制得对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加甲醇制得每1ml含1mg的对照品溶液。吸取上述对照药材、对照品溶液各4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的荧光斑点。

(5)五味子的含量测定方法为：HPLC法测定五味子醇甲和五味子醇乙的总含量：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(62∶38)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲和五味子醇乙峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取五味子醇甲和五味子醇乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，混匀，取0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10分钟，再加热回流20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。