CN101579520A - 用于多发性骨髓瘤的治疗的aplidine - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于多发性骨髓瘤的治疗的Aplidine。本发明涉及Aplidine和aplidine类似物在制备治疗多发性骨髓瘤的药物中的用途。

Description

用于多发性骨髓瘤的治疗的APLIDINE
本申请是专利申请号为200480006724.1、国际申请日为2004年3月12日(国际申请号为PCT/GB2004/001062)、发明名称为“用于多发性骨髓瘤的治疗的APLIDINE”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及aplidine和类似物的在癌症治疗中、特别是在多发性骨髓瘤的治疗中的用途。
背景技术
多发性骨髓瘤表现为从单一无性系得到的浆细胞的恶性增殖。术语多发性骨髓瘤和骨髓瘤可以互换使用。
浆细胞产生抗体，即通过血液移动以帮助身体去除有害物质的蛋白质。每种类型的浆细胞通过制造大量的一个类型的抗体而仅对一种特定物质作出反应。这些抗体发现并且抵抗那一种物质。因为身体有许多类型的浆细胞，可以与许多种物质反应。当癌症牵涉到浆细胞的时候，身体继续产生越来越多的这些细胞。所有异常和所有完全相同的不需要的浆细胞被称作骨髓瘤细胞。骨髓瘤细胞倾向于在骨髓中和骨的坚硬的外侧部分中集中。有时它们仅聚集在一块骨中而且形成单个块(mass)或肿瘤，被称作浆细胞瘤。然而，在大多数情况下，骨髓瘤细胞聚集在许多骨中，常常形成许多肿瘤而且引起其它问题。当这发生的时候，疾病被称作多发性骨髓瘤(MM)。
因为患有MM的人有大量异常的相同浆细胞，同样，他们有太多的一个类型的抗体。它的产物肿瘤和宿主对它作出反应造成多种器官功能障碍和骨痛或骨折的症状、肾衰竭、易感性感染、贫血、高血钙，而且有时有凝固异常情况、神经系统症状和高粘度的血管表现。
MM是在西方世界中诊断出的列第二位的最普遍的血液学恶性肿瘤，仅在美国每年就有约15,000个新病例的发病率。不幸地，尽管在过去的约30年中非常努力地致力于对基于细胞毒性的化学治疗的治疗活性进行改进，MM目前仍被认为是不治之症，而且MM病人的总存活数基本上在3-4年中依然没有变化。重要地，MM诊断的中值年龄＜65岁，而且在诊断上超过1/3的MM病人＜55岁：对于相对年轻的MM病人的这个实际的比例，MM的诊断表明，在恰好没有其它的并存病的情况下，高度的可能性是，他们的总幸存者的寿命将比与其年龄匹配的非MM病人的平均预期寿命更显著地短。
最近，在MM的治疗处理中已经有一连串重要的进步，就是2类新抗癌剂的抗-MM活性载入文献，所述的2类新抗癌剂是沙利度胺(和它的免疫调节的衍生物)和蛋白酶体抑制剂。虽然这两类试剂已经显示，在对常规的或以高剂量细胞毒素化学疗法为基础的用药法的复发/顽固性的MM病人的处理中是有效的，但是显著比例的MM病人新形成对那些新试剂的耐药性，同时起始的反应者(甚至那些实现了可耐受的完全缓解)可以最终复发。因此，为了进一步改善MM病人的结局和有希望去取得对这个目前不能治愈的瘤形成的高治愈率，迫切需要研制新类型的抗MM药剂。
发明内容
我们已经首次确定了aplidine具有非常有效的抗多发性骨髓瘤活性。
Aplidine(Dehydrodidemnin B)是从地中海海鞘Aplidiumalbicans中分离的环状缩肽。
Figure A20091000399900041
作为在此处使用的术语aplidine也涵盖任何药学可接受的盐、酯、溶剂合物、水合物或前体药物化合物，在施用它们后能给接受者提供(直接或间接地)化合物aplidine。盐和其它衍生物以及前体药物的制备，可以采用本领域已知的方法实施。
Aplidine类似物包括在WO 02/2596中公开的化合物。
关于aplidine、Aplidine类似物、它们的用途、组成和合成的更多信息可以在专利申请：WO 91/9485、WO 98/1352、WO 99/42125、WO0176616、WO 01/35974、WO02/30441和WO 02/2596中找到。我们通过特别参考这些PCT文本各自的内容来引入它们。
已显示Aplidine在体外和I期和II期临床试验中有与抗癌剂一样有用的可能性。Aplidine具有几种作用方式，包括阻断VEGF分泌、抑制蛋白质的合成和信号转导以及诱导G1细胞周期停滞。在I/II期试验中的剂量限制性毒性是肌肉毒性，伴随值得注意的缺乏严重的骨髓抑制。
Aplidine显示有效的抗人肿瘤固体细胞系，特别是抗IC50值分别在0.18nM和0.45nM上的非小细胞肺肿瘤和结肠肿瘤细胞的体外活性(Faircloth等，1995，Proceedings 8th ECCO Congress，Paris，Abstractno。122，529；Lobo等，1997，Anticancer Res，17，333-336)。国立癌症研究所(NCI)的人体外小组已证实对非小细胞肺癌(NSCLC)、黑色素瘤、卵巢癌和结肠直肠癌细胞系的选择性(Faircloth等，1996，Ann Oncol.，7，34)。
对这种海洋生物缩肽的初期研究提出抗鼠肿瘤(例如B16黑色素瘤)的体内活性(Faircloth等，1995，Proceedings 8th ECCO Congress，Paris，Abstract no。122，529)。而且，在生产人异种移植肿瘤的老鼠中进行的附加的活体内研究，证实了抗乳房MX-1和结肠CX-1的活性(Faircloth等，1996，Ann Oncol.，7，34)。儿科的白血球过多症的I期试验已经完成了(Jimeno J。et al.，2002，Ann Oncol.，13(suppl。5)，Abst.65P)。最后显示还证明了aplidine抵抗皮下植入的胃、前列腺和中空纤维的伯基特淋巴瘤人异种移植和膀胱癌的体内抗肿瘤活性(Faircloth等，1999，Proc.Am.Assoc。CancerFees.，40，Abstract2612；Faircloth等，1998，Proc.Am.Assoc。Cancer Res.，39，Abstract 227)。
本发明涉及aplidine和类似物在治疗多发性骨髓瘤中的应用。
本发明还涉及在治疗多发性骨髓瘤中使用的包含aplidine或类似物和药学上可接受的载体、运载体或稀释剂的药物组合物。
本发明进一步提供治疗任何受多发性骨髓瘤侵袭的哺乳动物，特别是人类的方法，该方法包含施用治疗上有效量的aplidine或类似物到患病个体。
另一方面本发明涉及aplidine或类似物在制备治疗多发性骨髓瘤的药物中的应用。
本发明还提供包含分离的容器的试剂盒，该分离的容器包含含有aplidine或类似物的药物组合物和重建试剂。还提供了重建的方法。
附图说明
图1.经aplidine治疗的MM细胞系小组的MTT比色法存活率试验的结果
图2.Aplidine(20nM，48hrs)抵抗从多重耐药的MM病人得到的原发MM肿瘤细胞样品的体外活性
图3.原发MM肿瘤细胞(从多重耐药的MM病人分离)与骨髓基质细胞(BMSCs)的共培养不显著减弱MM细胞对Aplidin的反应性
图4.A)来自多重耐药MM病人的原发MM肿瘤细胞的Aplidine治疗(20nM，0-12hrs)阻止VEGF的分泌
图4.B)Aplidine(20nM，12hrs)通过原发MM肿瘤细胞、BMSCs，还通过共培养的MM细胞和BMSCs阻止VEGF分泌
图5.Aplidine使原发MM肿瘤细胞对阿霉素敏感
图6.Aplidine抑制培养中的抗多发性骨髓瘤的地塞米松(MM1.R)细胞的生长，与肠胃外路线一样有效(MM1.S)
图7.Aplidine抑制Bcl-2过分表达的MM细胞的生长
发明详述
尽管多发性骨髓瘤(MM)的治疗处理近来有进展，但是当前不存在对于这种疾病的治愈性治疗，该疾病是在西方世界中诊断出的列第二位的最普遍的血液学恶性肿瘤。鉴定具有抗MM活性的新治疗剂，特别在复发或对常规方法新疗法和/或没有最佳反应的病人中仍然是迫切需要优先考虑的。
我们发现了Aplidine(APL)，一种新的来源于海洋生物的缩肽，其在体外非常有效地对抗MM细胞。特别地，我们观察到与临床有关的APL浓度有对抗一大组人MM细胞系的活性，包括抗传统的抗MM试剂(例如地塞米松、烷化剂、蒽环类抗生素)或新型抗MM试剂(例如沙利度胺、调节免疫的沙利度胺衍生物、蛋白酶抑制剂PS-341[bortezomib]、Apo2L/TRAIL)，或针对MM细胞的细胞过度表达的主要抗细胞凋亡调节剂的MM细胞系。MTT比色法存活率试验显示aplidine是普遍有效地对抗我们小组的细胞系，其IC50用量范围为10nM或更少(对于压倒性多数的这些MM细胞系)。重要地，通过APL的浓度触发这有效的体外抗MM活性，所述APL的浓度是在这种试剂的I期临床试验在实体瘤中临床上达到的。而且这些IC50值比得上这种试剂在大多数APL敏感的实体瘤模型中的体外活性。
进一步证实APL的在体外抗MM活性不是仅局限于一种细胞系模型，我们也试验过APL对抗从对沙利度胺或它的类似物和/或蛋白酶体抑制耐药的病人新分离的原发MM肿瘤细胞的影响。在来自MM病人(对于CD138+CD38+MM肿瘤细胞的纯度＞90％)的10个原发肿瘤样品的预试验中，我们观察到的aplidine的体外抗MM活性与从我们的细胞系小组的试验获得的结果一致。总的来说，aplidine对抗原发MM肿瘤样品和MM细胞系的体外研究结果显示，这种试剂可以有效地对抗宽广范围的MM细胞，包括那些直接生成或后天性的抵抗常规治疗或其它有效抗MM活性的新试剂的MM细胞。
虽然细胞因子或细胞粘附介导的局部骨髓(BM)微环境(例如BM基质细胞)的相互作用保护来自常规治疗(例如地塞米松或细胞毒素化学疗法)(refs)的MM细胞，但是APL能够克服在MM细胞与BM基质细胞的共培养模型中的这种保护效应。
除此之外，通过在离体的共培养模型中的MM细胞或BM基质细胞，APL使MM细胞对细胞毒素化学疗法诱导的细胞死亡和促血管生成细胞活素(例如VEGF)的取消分泌敏感。这提示aplidine可以与常规的以细胞毒素化学疗法为基础的方案结合以达到增强的抗MM活性。对MM细胞与其它抗癌药对APL的灵敏度模式的比较分析，显示用APL处理的MM的剂量-反应关系不同于那些与药物给药相关的剂量-反应关系。这进一步支持通过与来自那些当前可以得到的抗MM药物不同的分子机制介导APL的抗MM性质的理念，而且还提示APL甚至可以有效地抗MM的亚型，所述亚型能对其它现在临床研制中的新疗法有抵抗力。这些发现与实体瘤的临床试验中APL的有利的安全图谱相匹配。
对于本发明，aplidine的类似物可以用来代替APL，aplidine本身。典型的所述化合物是如WO0202596详细说明的。本发明的化合物的例子包括在WO0202596中给出的优选的化合物，而且我们特别引入该专利说明书优选化合物的详述和在WO0202596中给出的有关方面。更优选地，类似物在结构上接近aplidine，而且通常与aplidine在在一个氨基酸或末端侧链方面不同。不同的氨基酸可以在分子的循环部分中或在侧链中。所述化合物的许多例子在WO0202596中给出，而且它们是本发明使用的候选方案。
aplidine或类似物的药物制剂可以通过任何适当的途径例如通过口腔(包括含服或舌下)、直肠、鼻、局部(包括含服、舌下或经皮肤)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉注射或皮内)途径以适合于施用。所述成分可以通过任何药学领域已知的方法制备，例如通过采用将有效成分与载体或运载体(辅药)缔和而带入。
包含aplidine或类似物的药物组合物的例子，包括适合于静脉内施用组分的液体(溶液，混悬液或乳剂)，而且它们可能含有纯粹的化合物或与其组合的任何载体或其它药理学活性物质。溶解的aplidine在热应激试验和光应激试验条件下显现实质性降解，并且发展了冻干剂型，见WO99/42125引入此处作为参考。
可以通过静脉输注施用aplidine和类似物或本发明的组合物。可以使用最高达72小时的输液时间，更优选1-24小时，最优选约1小时，约3小时或约24小时中的任意一个。允许实现治疗而不用在医院过夜的短的输液时间是特别需要的。然而，如果需要，输液可能是大约24小时或甚至更长。输液可以用变化的模式在适合的间隔实现，比如一周一次，每周两次，或每周更多次数，任选地以典型一周的间隙重复每周。
在优选的应用方法中，在多个周期中完成给药。在每个周期的第一周，给病人静脉输注本发明化合物，允许病人在剩余的周期痊愈。每个周期的优选持续时间是1、3或4周中的任意一个；作为需要可以给出多个周期。在备选的给药实验设计中，比方说本发明的化合物每3周连续5天施用约1小时。其它方案可以被设计为可变的。
根据被治疗病人个体的耐受性，实施剂量延迟和/或剂量减少对治疗方案的调整。
虽然在上文中给出了对剂量的指导，但是化合物的适当剂量可以根据特定的组成、用法、和特定的部位、被治疗的宿主和肿瘤而变化。其它因素像年龄、体重、性别、日常饮食、给药的时间、排泄率、宿主的状态、联合用药、反应灵敏度和疾病的严重性将被考虑。给药可以在最大耐受剂量之内连续地或周期性地实现。进一步的关于施用aplidine的指导在WO 01/35974中给出，其全文引入此处作为参考。
在多发性骨髓瘤的治疗中，Aplidine和类似物可以与其它药物一起使用，以提供联合治疗。其它药物可能构成相同组合物的一部分，或作为分离的组合物提供，在同一时间或不同时间施用。
具体实施方式
实施例
统计分析
通过双向方差分析的检验，然后通过Duncan post hoc检验，来检测统计学上的显著性。在全部分析中，考虑P＜0.05被认为是统计学上显著的。
实施例1：
MTT比色法存活率测定
使用3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT；Sigma Chemical，St Louis，MO)比色测定，如前所述检测细胞存活率(Mitsiades C.S.等Blood。2001，98，795-804；Mitsiades N.等ProcNatl Acad Sci USA 2002，99，14374-14379；Mitsiades N.等Blood.2003，101，2377-2380)。简要地，在2.5％胎牛血清(FBS)和在终浓度为0-100nM的Aplidine或DMSO运载体对照的存在下，将70％-80％融合度的细胞铺于48孔培养板上。在各处理结束时，将细胞用1mg/mLMTT在37℃培养4小时；然后在有力的移液管冲洗下加入异丙醇和1N HCl的混合物(23∶2，vol/vol)以溶解甲
Figure A20091000399900101
结晶。用630nm作为对照波长，在570nm测量有活力的细胞的染色吸光度(A)。将细胞的成活力估算成占未处理对照的值的百分数。全部的实验至少被重复3次，而且在各个实验中，各试验条件至少在三份孔中被重复。记录的数据是代表性实验的平均值±标准偏差。
耐受药物的MM细胞系和原发性MM肿瘤细胞的小组
我们评估了药物敏感的人MM细胞系和药物耐受的人MM细胞系的小组中aplidine的活性，包括下列细胞系：地塞米松(Dex)-敏感的MM-IS和Dex-抵抗的MM-1R细胞系(作为学术礼物由Dr StevenRosen惠赠，Northwestern University，Chicago，IL)；化学敏感的RPMI-8226/S细胞系和它们的阿霉素-(Dox6，Dox40)、美法仑(LR5)-和盐酸米托蒽醌(MR20)-抵抗的亚系(作为学术礼物由Dr WilliamDalton惠赠，Lee Moffitt Cancer Center，Tampa，FL)；Dr H.A.Messner的OCI-My-5细胞(Ontario Cancer Institute，ON，Canada)；DrT.Kishimoto的S6B45细胞(Osaka University，Osaka，Japan)；ARD，ARK和ARP-1细胞(Dr Nikhil Munshi惠赠，Dana-Farber CancerInstitute，Boston，MA)；OPM-1，OPM-6，K620和LP-1细胞(作为学术礼物由Dr Leif Bergsagel惠赠，Cornell University，New York，NY)；与从美国典型菌种收藏所(Rockville，MD)获得的U266和NCI-H929细胞一样。
从10名病人的骨髓(BM)抽吸物中分离原发性MM肿瘤细胞，上述病人对常规治疗(以类固醇-和细胞毒素化学疗法-为基础的)和更多最近发展的抗MM试剂(例如沙利度胺或蛋白酶体抑制剂)有抵抗力。通过Ficoll密度离心开始处理BM抽吸物，通过CD138+选择纯化(通过流式细胞仪活化细胞分选(FACS)，或通过CD138+正向选择使用免疫磁性分离)，采用如前所述的实验设计(Mitsiades C.S.等Blood。2001，98，795-804)。在CD38+CD138+或CD38+CD45RA-细胞中，所有分选的肿瘤细胞样品具有＞90％的纯度。就在Aplidine治疗之前，通过锥虫蓝排除法测定，所有原发肿瘤样品被证实具有超过95％的成活力。将所有MM细胞系和病人MM细胞在RPMI 1640培养基中培养(Gibco Laboratories，GrandIsland，NY)，培养基中添加了10％活性炭葡聚糖处理过的胎牛血清(FBS；Hyclone，Logan，UT)以及L-谷氨酰胺、青霉素和链霉素(Gibco Laboratories)。
结果：Aplidine抵抗药物耐受性MM细胞系和原发肿瘤样品的活 性
我们试验了一大组人MM细胞系的体外活性，该MM细胞系包括对常规(例如地塞米松、烷化剂、蒽环类抗生素)或新型(例如沙利度胺、调节免疫的沙利度胺衍生物、Apo2L/TRAIL)抗MM试剂敏感或耐受的MM细胞。MTT比色法存活率测定(图1)显示，Aplidine普遍地有效对抗我们小组的细胞系，IC50用量(对于绝大多数这些MM细胞系)在10nM或更少的范围(它对应于临床上可达到的aplidine的浓度，基于这种药剂的I期试验经验)。重要地，aplidine的这种体外活性比得上它在大多数aplidine敏感的实体瘤模型中的体外活性。使用分级簇分析和关联性网状结构算法(relevance networkalgorithms)，我们比较了MM细胞对aplidine的敏感度与其它抗癌药的比较的图像，发现aplidine的剂量-反应关系的图像是清楚地与那些其它药物不同的。
这个发现不但进一步支持通过与那些其它药物不同的分子机制介导aplidine抗MM性质的理念，而且提示APL甚至可以有效抵抗这种疾病的不同分子的亚型。
结果：Aplidine的抵抗药物耐受的原发MM肿瘤细胞的活性
为了进一步证实APL的体外抗MM活性不只限于细胞系模型，我们也测试了APL对从耐沙利度胺或它的类似物和/或蛋白酶体抑制剂的病人新分离的原发MM肿瘤细胞的影响。在对来自MM病人的10个原发肿瘤样品的初步试验中(对于CD138+CD38+MM肿瘤细胞，纯度＞90％)，我们获得的Aplidine的体外抗MM活性与从我们的细胞系小组的试验获得的结果一致(图2)。
总的来说，对aplidine抵抗原发MM肿瘤样品和MM细胞系体外研究的结果表明，这种试剂可以有效地抗广谱的MM细胞，包括那些新形成的或对常规治疗或其它具有有效抗MM活性的研究药物获得抗性的MM细胞。
实施例2：
对Bcl-2和组成型活化的Akt的稳定转染
用编码十四烷酰化的(组成型活化的)Akt或Bcl-2(UpstateBiotechnologies，Lake Placid，NY)的质粒载体或用空(neo)载体稳定地转染MM-1S细胞，然后使用Lipofectamine 2000(LifeTechnologies)操作，接着如前所述(Mitsiades C.S.等Oncogene。2002，21，5673-5683；Mitsiades N.等ProcNatlAcad Sci USA.2002，99，14374-14379)在包含G418的选择培养基中培养。
结果：Aplidine克服Bcl-2或组成型活化的Akt抗细胞凋亡的影响
因为Bcl-2和PI-3K/Akt级连反应在MM和其它的瘤形成中药物造成的细胞凋亡的调节中的作用，我们还表征了aplidine在用Bcl-2或十四烷酰化的Akt构建体稳定转染MM-IS人MM细胞中的活性，与空载体转染对照MM-1S细胞进行比较。我们观察到Bcl-2-或myrAkt-转染的细胞对aplidine的灵敏度低于空载体转染的细胞(图1)，提示Bcl-2的过度表达或Akt和它的下游效应基因的组成型活化不足以克服aplidine的抗MM作用。
实施例3：
MM细胞与骨髓基质细胞(BMSCs)的共培养测定
在粘附到BMSCs的时候，MM细胞具有减少的对传统的抗MM治疗，例如地塞米松或细胞毒素化学疗法(Chauhan D.等Blood.1996，87，1104-1112)的敏感性。这种形式的耐药性被认为是在MM病人接受基于施用糖皮质激素类和/或细胞毒素化学疗法治疗的时候，最后复发的主要原因。相比之下，在最近发展的MM的疗法中，在化学抵抗型或激素抵抗型MM的病例中的抗肿瘤活性已经藉由几类药品达到，例如蛋白酶体抑制剂(HideshimaT.等Cancer Res.2001，61，3071-3076)，其可以克服BMSCs对MM细胞的保护作用。所以我们研究了是否aplidine也可以克服BMSCs与MM细胞相互作用的分子的后遗症，并且达到本文上下文中的抗MM活性。因此我们用如前所述的BMSCs进行了MM细胞的体外共培养测定：将BMSCs在24孔培养板上生长融合。随后用无血清培养基洗涤，将从3名MM病人分离的原发肿瘤细胞(在CD138+细胞中＞95％纯度)加入到涂铺了BMSCs的孔或如前所述的对照孔(Uchiyama H.等Blood.1993，82，3712-3720；Mitsiades N.等Blood。2003，101，4055-4062)，然后在存在或不存在aplidine的环境下培养48小时。进行流式细胞检测分析以检测有活力的MM细胞的CD138+群体并且将aplidine对MM细胞成活力的影响表示成存活的细胞数相对于各自的经运载体处理的培养物的百分比表示。
结果：Aplidine克服骨髓基质细胞(BMSCs)对MM细胞的保护 效应
来自我们的小组和其它研究者的先前的研究已经显示，细胞因子-或细胞粘附介导的局部骨髓(BM)微环境(例如BM基质细胞)的相互作用可以保护MM细胞免受常规治疗(例如地塞米松或细胞毒素化学疗法)的影响(Chauhan D.等Blood。1996，87，1104-1112)。我们因此评价了Aplidine在MM细胞与BMSCs共培养的环境中的抗MM作用，而且使用流式细胞仪测定在MM细胞区域中的细胞死亡(图3)，观察到MM-BMSCs相互作用不显著减弱aplidine的体外抗MM活性(aplidine剂量不显著地影响BMSCs的存活率)。
实施例4：
VEGF分泌的定量
BMSCs粘附到MM细胞诱导增强血管原细胞活素，例如血管内皮生长因子(VEGF)的分泌，该事件被认为对于在BM环境中在MM细胞的位置上的新血管的补充具有重大意义。因此我们使用如前所述的MM细胞与BMSCs的体外共培养测定：将BMSCs在24孔培养板上生长到铺满评价了是否aplidine可以通过MM和/或BMSCs来阻止VEGF的分泌。在用无血清培养基洗涤后，将从3名MM病人分离的原发肿瘤细胞(在CD138+细胞中＞95％纯度)加入到涂铺了BMSCs的孔或如前所述的对照孔(Uchiyama H.等Blood.1993，82，3712-3720；Mitsiades N.等Blood.2003，101，4055-4062)，然后在存在或不存在Aplidine的环境下培养12小时。收集上清液，然后使用商业上可得到的试剂盒(VEGF ELISA kit；R&D Systems)，依照制造厂商的技术说明书，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定VEGF的浓度。
结果：Aplidine减少MM/BMSCs分泌VEGF
已经提出将VEGF作为在BM微环境中MM细胞增殖反应推定的介质。VEGF也是在肿瘤细胞生长的区域中肿瘤诱导的新血管补充的关键介质。因为在先的报告提出对急性白血病细胞的aplidine治疗导致VEGF分泌受到抑制，我们研究了是否Aplidine也可以通过MM细胞和/或通过BMSCs阻止VEGF的分泌。确实，使用aplidine(20nM)治疗12小时能够通过MM细胞阻止VEGF的分泌，以及抵消在MM细胞与BMSCs共培养时发生的VEGF分泌的增加(图4A和4B)。
实施例5：
结果：Aplidine使MM细胞对细胞毒素化学疗法敏感
使用MTT比色法存活率测定，我们发现当这个治疗与Aplidine联合的时候，MM细胞增强了对阿霉素的反应性。图5显示通过用aplidine(2nM)进行治疗，原发MM肿瘤样品对阿霉素(10ng/mL)敏感的例子。
实施例6：
测试了Aplidine对抗在培养中建立的不同的细胞。
所使用的细胞是：
-多发性骨髓瘤细胞(MM1.S)
-抗地塞米松的多发性骨髓瘤系(MM1.R)
-过度表达Bcl-2的多发性骨髓瘤系
对于已建立的细胞系，将细胞铺于96孔培养板中而且允许在生长前24小时加入药品。将细胞与药物一起培养指定的时间，然后通过XTT或MTS试验，使用自动平板读数器测定细胞成活力。
这些研究的结果表示在图6-7中。

Claims (8)

1.aplidine和aplidine类似物在制备治疗多发性骨髓瘤的药物中的用途。
2.根据权利要求1的aplidine或aplidine类似物的用途，其中所述的aplidine或aplidine类似物是aplidine。
3.根据前面任何权利要求的aplidine或aplidine类似物的用途，其中将aplidine或aplidine类似物与其它的药或药品或治疗组合使用以提供联合治疗。
4.根据权利要求1或2的用途，其中所述的aplidine或aplidine类似物用于治疗具有新形成的抗性或获得的抗性的多发性骨髓瘤。
5.被用于治疗多发性骨髓瘤的药物组合物，它包含aplidine或aplidine类似物和药学上可接受的载体、运载体或稀释剂。
6.根据权利要求5的药物组合物，其中所述的aplidine或aplidine类似物是aplidine。
7.用于施用aplidine或aplidine类似物以治疗多发性骨髓瘤的医疗试剂盒，其包括在分离的容器中包含aplidine或aplidine类似物的药物组合物和重建剂。
8.根据权利要求7的医疗试剂盒，其中所述的aplidine或aplidine类似物是aplidine。
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