MXPA05009741A - Tratamientos antitumorales mejorados. - Google Patents

Abstract

El aplidine y analogos de aplidine son de uso para el tratamiento de cancer, en particular en el tratamiento de leucemias y linfomas, especialmente en terapias de combinacion.

Description

TRATAMIENTOS ANTITUMORALES MEJORADOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a combinaciones de aplidine o análogos de aplidine con otros agentes antitumorales, y el uso de estas combinaciones en el tratamiento de cáncer, en particular, en el tratamiento de leucemias y linfomas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El aplidine (Dehidrodidemnin B) es un depsipéptido cíclico que se aisló de un tunicate marino Mediterráneo, Aplidium albicans, y es el objeto de WO 9109485. Se refiere a compuestos conocidos como didemninas, y tiene la siguiente estructura: Mayor información sobre aplidine, análogos de aplidine, sus usos, formulaciones y síntesis puede encontrarse en las solicitudes de patente WO 98 1352, WO 99 42125, WO 01 76616, WO 01 35974, WO 02 30441 y WO 02 02596. Nosotros incorporamos para referencia específica el contenido de cada uno de estos textos PCT.

Tanto en los estudios preclínicos de humano y animal como en los estudios de Fase I clínicos este agente se ha mostrado que tiene potencial citotóxico contra un amplio espectro de tipos de tumor incluyendo leucemia y linfoma. Véase por ejemplo: Faircloth , G. et a/.: "Dehydrodidemnin B (DDB) a new marine deríved anticancer agent with activity against experimental tumour models", 9th NCI-EORTC Symp New Drugs Cáncer Ther (Marzo 12-15, Ámsterdam) 1996, Abst. 1 1 1 ; Faircloth, G. et al.: "Preclinical characterization of aplidine, a new marine anticancer depsipeptide", Proc Amer Assoc Cáncer Res 1 997, 38: Abst 692; Depenbrock H, Peter R, Faircloth GT, Manzanares 1 , Jimeno J, Hanauske AR. : "In vitro activity of Aplidine, a new marine-derived anti- cáncer compound, on freshly explanted clonogenic human tumour cells and haematopoietic precursor cells" Br. J. Cáncer, 1998; 78: 739-744; Faircloth G, Grant W, Nam S, Jimeno J, Manzanares I, Rinehart K. : "Schedule-dependency of Aplidine, a marine depsipeptide with antitumor activity"', Proc. Am. Assoc. Cáncer Res. 1999; 40: 394; Broggini M, Marchini S, Dincalci M, Taraboletti G, Giavazzi R, Faircloth G, Jimeno J.: "Aplidine blocks VEGF secretion and VEGF/VEGF-R1 autocrine loop in a human leukemic cell line", Clin Cáncer Res 2000; 6 (suppl): 4509; Erba E, Bassano L, Di Liberti G , Muradore I, Chiorino G , Ubezio P, Vignati S, Codegoni A, Desiderio MA, Faircloth G, Jimeno J and Dlncalci M.: "Cell cycle phase perturbations and apoptosis in tumour cel!s ¡nduced by aplidine", Br J Cáncer 2002 ; 86: 1510-1517; Paz-Ares L, Anthony A, Pronk L, Twelves C, Alonso S, Cortes-Funes H, Celli N , Gómez C, Lopez-Lazaro L, Guzman C, Jimeno J, Kaye S.: "Phase I clinical and pharmacokinetic study of aplidine, a new marine didemnin, administered as 24-hour infusión weekly" Clin. Cáncer Res. 2000; 6 (suppl): 4509; Raymond E, Ady-Vago N, Baudin E, Ribrag V, Faivre S, Lecot F, Wright T, López Lázaro L, Guzman C, Jimeno J, Ducreux M, Le Chevalier T, Armand JP.: "A phase I and pharmacokinetic study of aplidine given as a 24-hour continuous infusión every other week in patients with solid tumor and lymphoma", Clin. Cáncer Res. 2000; 6 (suppl): 4510; Maroun Ja Belanger K, Seymour L, Soulieres D, Charpentier D, Goel R, Stewart D, Tomiak E, Jimeno J , Matthews S. : "Phase I study of aplidine in a 5 day bolus q 3 weeks in patients with solid tumors and lymphomas", Clin. Cáncer Res. 2000; 6 (suppl): 4509; Izquierdo MA, Bowman A, Martínez M, Cicchella B, Jimeno J, Guzman C, Germa J, Smyth J . :"Phase I trial of Aplidine given as a 1 hour intravenous weekly infusión in patients with advanced solid tumors and lymphoma", Clin. Cáncer Res. 2000 ; 6 (suppl): 4509. Los estudios mecánicos indican que aplidine puede bloquear la secreción de VEGF en las células ALL-MOLT4 y en la actividad citotoxica in vitro a bajas concentraciones (5 nM) se ha observado en las muestras AML y ALL de los pacientes pediátricos con ALL y AML reincidido o de novo. El aplidine parece que induce tanto a una detención de G 1 como G2 en las células de Leucemia tratadas por fármaco in Vitro. Aparte de la sub-regulación del receptor VEGF, poco se sabe acerca de los modos de acción de aplidine. En los estudios clínicos Fase I con aplidine, se dio la L-carnitina como un pretratamiento de 24 horas o se co-administró para prevenir la mielotoxicidad, véase por ejemplo WO 02 30441 . La co-administración de L-carnitina se probó que era capaz de mejorar la recuperación de la toxicidad muscular inducida por fármaco y se ha permitido para la revisión de dosis de aplidine. De esta manera, en los estudios clínicos de Fase I, el aplidine no fue mielotóxico en las dosis toleradas máximas, excepto para la linfopenia media. Estas características hacen al aplidine un agente potencialmente útil para el tratamiento de leucemia. Al agregar el aplidine a la quimioterapia actual para la leucemia podría mejorare la eficacia sin la necesidad de reducciones de dosis de fármacos con actividad antileucémica probada, debido a la mielotoxicidad aumentada. Esto parece especialmente relevante para el tratamiento de ALL reincidido y AML recientemente diagnosticado y reincidido, ya que estas son enfermedades con una prognosis relativamente escasa, las cuales se están tratando actualmente con combinaciones de fármaco mielotóxico.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Nosotros por primera vez hemos establecido que el aplidine y los análogos de aplidine potencian otros agentes anticáncer y por lo tanto pueden utilizarse exitosamente en terapia de combinación para el tratamiento de cáncer. Esta invención se dirige a composiciones farmacéuticas, formas de dosificación farmacéutica, equipos y métodos para el tratamiento de cáncer utilizando estas terapias de combinación. De acuerdo con un aspecto de esta invención, proporcionamos las terapias de combinación eficaces en base al aplidine y análogos de aplidine, utilizando otros fármacos que son eficaces en el tratamiento de cáncer. Preferentemente, el otro fármaco es eficaz en el tratamiento de leucemia y/o linfoma. Más preferentemente, el otro fármaco se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprenisolona, y doxorubicina. En otra modalidad, la invención comprende un método para tratar el cáncer primario y/o metastático que comprende administrar a un paciente en necesidad de tal tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de aplidine o un análogo de aplidine, o un profármaco farmacéuticamente aceptable, sal, solvato o hidrato del mismo, y una cantidad terapéuticamente eficaz de otro fármaco el cual es eficaz en el tratamiento de cáncer o profármaco farmacéuticamente aceptable, sal, solvato o hidrato del mismo, administrado antes, durante, o después de administrar aplidine o análogo de aplidine. Preferentemente, el otro fármaco es eficaz en el tratamiento de leucemia y/o linfoma. Más preferentemente, el otro fármaco se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprenisolona y doxorubicina. Los otros fármacos pueden formar parte de la misma composición, o proporcionarse como una composición separada para la administración al mismo tiempo o a un tiempo diferente. El cáncer a tratar es preferentemente una leucemia o un linfoma, más preferentemente ALL, AML, CML, MML o CLL. En otro aspecto, la invención comprende un método para aumentar la eficacia terapéutica de un fármaco eficaz en el tratamiento de cáncer, preferentemente un fármaco eficaz en el tratamiento de leucemia y/o linfoma, más preferentemente un fármaco seleccionado del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprednisolona y doxorubicina, o un profármaco farmacéuticamente aceptable, sal, solvato o hidrato del mismo, el cual comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad de aplidine o un análogo de aplidine, o un profármaco farmacéuticamente aceptable, sal, solvato o hidrato del mismo. El aplidine o el análogo de aplidine se administra antes, durante, o después de administrar el otro fármaco. El aplidine o un análogo de aplidine es capaz de aumentar la eficacia terapéutica de algunos fármacos de cáncer. En un aspecto, el resultado es sinergia, en lugar de aditivo. Tales combinaciones sinergísticas representan un aspecto preferido de la presente invención. La sinergia puede indicarse por el uso del método Chou-Talalay, u otros métodos. En otros casos, puede encontrarse antagonismo. En un aspecto adicional, la invención comprende una composición farmacéutica que comprende aplidine o un análogo de aplidine, o un profármaco farmacéuticamente aceptable, sal, solvato o hidrato del mismo, y otro fármaco eficaz en el tratamiento de cáncer. Preferentemente, el otro fármaco es eficaz en el tratamiento de leucemia y/o linfoma. Más preferentemente, el otro fármaco se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprednisolona y doxorubicina. La invención también comprende un equipo para utilizarse en el tratamiento o prevención de cáncer el cual comprende una forma de dosis de aplidine o un análogo de aplidine, o un profármaco farmacéuticamente aceptable, sal, solvato o hidrato del mismo, una forma de dosificación de otro fármaco eficaz en el tratamiento de cáncer, o un profármaco farmacéuticamente aceptable, sal, solvato o hidrato del mismo, e instrucciones para el uso de cada actor en combinación para el tratamiento o prevención de cáncer. Preferentemente, el otro fármaco es eficaz en el tratamiento de leucemia y/o linfoma. Más preferentemente, el otro fármaco se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprednisolona y doxorubicina.

En un aspecto adicional, la invención se dirige al uso de aplidine para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS Fig. 1. Aplidine inhibe el crecimiento de células CLL en cultivo. Fig. 2. Aplidine es un inhibidor potente de células preB-ALL en cultivo. Fig. 3. La curva de respuesta de dosis citotóxica de células CCRF-CEM (Fig. 3A), SKI-DLCL (Fig. 3B) y K562 (3C) siguiendo el tratamiento de aplidine por 96 horas. Fig. 4. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y AraC en células CCRF-CEM. Fig. 5. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y AraC en células SKI-DLCL. Fig. 6. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y mitoxantrona en células CCRF-CEM. Fig. 7. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y mitoxantrona en células SKI-DLCL. Fig. 8. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y metotrexato en células CCRF-CEM. Fig. 9. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y doxorubicina en células CCRF-CEM. Fig. 10. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y vinblastina en células CCRF-CEM.

Fig. 11. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y doxorubicina en células SKI-DLCL. Fig. 12. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y vinblastina en células SKI-DLCL. Fig. 13. Análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y metilprednisolona en células SKI-DLCL. Fig. 14. Combinación de IC2o de aplidine disminuyó el IC50 de AraC en células CCRF-CEM (Fig. 12A) y SKI-DLCL (Fig. 12B) después de la incubación por 96 horas. Fig. 15. El efecto de aplidine en tamaño de tumor in vivo como un agente único y en combinación con AraC.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Por cáncer se entiende que incluye tumores, neoplasias, y cualquier otro tejido maligno o células. La presente invención se dirige al uso de aplidine o un análogo de aplidine en combinación para los tratamientos de cáncer en general, pero más preferentemente para el tratamiento de diferentes leucemias y linfomas. A fin de estudiar la posible potenciación de otros agentes anti-cáncer con aplidine hemos iniciado un estudio sistemático de combinaciones de fármaco para uso posible en leucemias y linfomas. Se encontró que el aplidine era un agente citotóxico in Vitro eficaz contra las células primarias de un paciente con preB-ALL (DM4) así como también contra las células frescas obtenidas de seis pacientes con leucemia linfocítica crónica (CLL). El valor IC50 fue 10 nM para el día 3 de exposición con la estirpe DM4 y después un día 1 1 de exposición con las muestras de CLL primaria. Los estudios de combinación de fármaco se llevaron a cabo en estirpes de célula establecidas en lugar de células primarias. Estudiamos tres estirpes de célula viz. K562, CC F-CEM y SKI-DLCL que representan la leucemia mieloide aguda, linfoma linfoblástico y linfoma de célula grande de célula B difusa, respectivamente. Los datos en los ejemplos muestran que Aplidine potencia el efecto de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinbiastina, metilprednisolona así como también doxorubicina en células K562, CCRF-CEM y SKI-DLCL al disminuir los IC5oS para los fármacos. De esta manera, encontramos que el aplidine es un agente citotóxico potente contra las células de varias malignidades hematológicas. De manera importante, hemos establecido por primera vez que el aplidine inhibe el crecimiento de las células CLL en cultivo. También encontramos que el aplidine mejora la citotoxicidad de agentes utilizados en el tratamiento de leucemias, tales como metotrexato (MTX), arabinoside citosina (AraC), mitoxantrona (Mitos), vinbiastina (Vinb), metilprednisolona (Metpred) y doxorubicina (DOX). La leucemia se clasifica por qué tan rápido progresa. La leucemia aguda es de crecimiento rápido y puede sobrepasar ei cuerpo dentro de pocas semanas o meses. En contraste, la leucemia crónica es de crecimiento lento y empeora progresivamente a través de los años.

Las células formadoras de sangre (hematopoyéticas) de leucemia aguda permanecen en un estado inmaduro, de tal forma que se producen y acumulan muy rápidamente. Por lo tanto, la leucemia aguda necesita tratarse inmediatamente, de otra forma la enfermedad podría ser fatal dentro de pocos meses. Afortunadamente, algunos subtipos de leucemia aguda responden a las terapias disponibles y son curables. Frecuentemente los niños desarrollan formas agudas de leucemia, las cuales se manejan de manera diferente de la leucemia en adultos. En la leucemia crónica, las células formadoras de sangre eventualmente maduran, o se diferencian, pero no son "normales". Estas permanecen en la corriente sanguínea mucho más tiempo que los leucocitos normales, y son incapaces de combatir bien la infección. La leucemia también se clasifica de acuerdo al tipo de leucocitos que se multiplica -es decir, linfocitos (células del sistema inmune), granulocitos (células destruidores de bacterias), o monocitos (células formadoras de macrófagos). Si los leucocitos anormales son principalmente monocitos o granulocitos, la leucemia se cataloga como leucemia mielógena o mieloide. Por el otro lado, si los leucocitos anormales se originan de los linfocitos de la médula ósea, el cáncer se llama leucemia linfocítica. Otros cánceres, conocidos como linfomas, se desarrollan de linfocitos dentro de los nodulos linfáticos, bazo, y otros órganos. Tales cánceres no se originan en la médula ósea y tienen un comportamiento biológico que es diferente de la leucemia linfocítica. Existe más de una docena de diferentes tipos de leucemia, pero cuatro tipos ocurren más frecuentemente. Estas clasificaciones se basan en si la leucemia es aguda contra crónica y mielógena contra linfocítica, es decir: Leucemia Mielóqena Aguda (AML): también conocida como leucemia no linfocítica aguda (ANLL) -es la forma más común de leucemia de adultos. La mayoría de los pacientes son de edad de jubilación (edad promedio en diagnóstico = 65 años), y más hombres son afectados que las mujeres. Afortunadamente, debido a los actuales avances en el tratamiento, AML puede mantenerse en remisión (disminución de la enfermedad) en aproximadamente 60% a 70% de adultos quienes superaron la terapia adecuado. Las tasas de respuesta inicial son aproximadamente 65-75% pero las tasas de cura total son más en orden de 40-50%. Leucemia Mielóqena Crónica (CML): se conoce como un desorden mieloproliferativo -es decir, es una enfermedad en la cual las células de médula ósea proliferan (se multiplican) fuera del tejido de la médula ósea. La CML es fácil de diagnosticar, ya que tiene una peculiaridad genética, o marca, que sea fácilmente identificable bajo un microscopio. Aproximadamente 95% de los pacientes con CML tienen una translocación genética entre los cromosomas 9 y 22 en sus células leucémicas. El cromosoma Filadelfia origina la reproducción y proliferación descontrolada de todos los tipos de leucocitos y plaquetas (factores de coagulación sanguínea). La CML todavía no es curable mediante métodos estándares de quimioterapia o inmunoterapia. Leucemia Linfocítica Aguda (ALL): también conocida como leucemia linfoblástica aguda -es una enfermedad maligna originada por el crecimiento anormal y desarrollo de leucocitos no granulares tempranos, o glóbulos blancos. La leucemia se origina en los blastocitos de la médula ósea (células B), timo (células T), y nodulos linfáticos. ALL ocurre predominantemente en niños, ajustándose a 4 años de edad. Leucemia Linfocítica Crónica (CLL) es la leucemia más común en Norteamérica y en Europa. Es una enfermedad de adultos más grandes y es muy rara entre personas que son más jóvenes que los 50 años de edad. Los hombres con CLL sobrepasan a las mujeres por un promedio de 2 a 1. CLL se cree que se da como resultado de I acumulación gradual de linfocitos de larga vida, maduros. Por lo tanto, este cáncer se origina no tanto por supercrecimiento como lo es por la longevidad extrema y aumentos de células malignas. A pesar de que la tasa de acumulación varía entre los individuos, la sobrecarga extensiva de tumor eventualmente origina complicaciones en todos los pacientes con CLL. Las composiciones de la presente invención pueden comprender ambos componentes (fármacos) en una formulación farmacéuticamente aceptable única. Alternativamente, los componentes pueden formularse por separado y administrarse en combinación con otro. Varias formulaciones farmacéuticamente aceptables bien conocidas por aquellos expertos en la materia pueden utilizarse en la presente invención. La selección de una formulación adecuada para utilizarse en la presente invención puede realizarse rutinariamente por aquellos expertos en la materia en base al modo de administración y las características de solubilidad de los componentes de la composición. Los ejemplos de las composiciones farmacéuticas que contienen Aplidine o un análogo de aplidine incluyen liquido (solucione, suspensiones o emulsiones) con composición adecuada para administración intravenosa, y pueden contener el compuesto puro o en combinación con cualquier vehículo u otros compuestos farmacológicamente activos. El aplidine solubilizado muestra la degradación sustancial bajo condiciones de prueba de tensión ligera y calor, y una forma de dosificación liofilizada se desarrolló, véase WO 99/42125 incorporada en la presente para referencia. La administración de aplidine o composiciones de la presente invención se basa en un Protocolo de Dosificación preferentemente por infusión intravenosa. Preferimos que los tiempos de infusión de hasta 72 horas se utilicen, más preferentemente 1 a 24 horas, con aproximadamente 1 , aproximadamente 3 o aproximadamente 24 horas se prefieren más. Los tiempos de infusión cortos que permiten que el tratamiento se lleve a cabo sin una permanencia durante la noche en hospital, son especialmente deseables. Sin embargo, la infusión puede ser de aproximadamente 24 horas o aún más si se requiere. La infusión puede llevarse a cabo a intervalos adecuados con modelos variantes, ilustrativamente una vez a la semana, dos veces a la semana, o más frecuentemente por semana, repetida cada vez opcionalmente con aberturas de típicamente una semana. La dosificación correcta de los compuestos de la combinación variará de acuerdo a la formulación en particular, el modo de aplicación, y el sitio en particular, huésped y tumor a tratar. Otros factores como edad, peso corporal, sexo, dieta, tiempo de administración, tasa de excreción, condición del huésped, combinaciones de fármaco, sensibilidades de reacción y severidad de la enfermedad, deberán tomarse en cuenta. La administración puede llevarse a cabo continúa o periódicamente dentro de la dosis máxima tolerada. Además, la guía para la administración de aplidine se da en WO 0135974 la cual se incorpora en la presente para referencia en su totalidad. Para la presente Invención, los análogos de aplidine pueden utilizarse en lugar de APL, aplidine por sí mismo. Típicamente, tales compuestos son según se definen en WO 0202596. Los ejemplos de los compuestos para la presente invención incluyen los compuestos preferidos dados en WO 0202596, y en particular, importamos en esta especificación de patente la discusión de los compuestos preferidos y los aspectos relacionados dados en WO 0202596. Más preferentemente, los análogos son estructuralmente cercanos a aplidine, y usualmente difieren de aplidine respecto a un aminoácido o la cadena lateral terminal. El aminoácido diferente puede encontrarse en la parte cíclica de la molécula o en la cadena lateral. Varios ejemplos de tales compuestos se dan en WO 0202596, y son candidatos para utilizarse en la presente invención.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 El aplidine se probó contra las células primarias de los pacientes con malignidades hematológicas . Las células utilizadas fueron: - células frescas obtenidas de seis pacientes con leucemia linfocítica crónica célula primaria de un paciente con preB-ALL (DM4) Las muestras de los pacientes se obtuvieron con consentimiento previo y las células CLL se aislaron por centrifugación de gradiente de densidad sobre histopaque. El medio utilizado fue RPMI complementado con 1 0% de suero antologo y L-glutamina. Los cultivos se incubaron con 1 0 nM de aplidine y la viabilidad celular se midió los días 3, 7, 1 1 y 18 y se comparó con la viabilidad de las células no tratadas y STI 571 (0.5 mM). Los resultados de estos estudios se muestran en las figuras 1 -2.

EJEMPLO 2 A fin de estudiar la potenciación posible de otros agentes anti-cáncer sometimos un estudio de combinaciones de fármaco para uso posible en leucemias y linfomas. Los estudios de combinación de fármaco se llevaron a cabo en estirpes de célula establecidas en lugar de células primarias. Estudiamos tres estirpes de célula, viz. K562 como un modelo para la leucemia mieioide aguda, CEM representando la leucemia linfocítica aguda y SKI-DLCL representando el linfoma de célula grande difusa. Los estudios de combinación con dosis de aplidine 1C20 e 1C50 con un rango de dosis de metotrexato, arabinoside citosina y doxorubicina se probaron para determinar si el aplidine podría potenciar el efecto de estos fármacos .

Los resultados se muestran en la Tabla 1 : Tabla 1 Fármaco Adicional IC50 Dox IC50 MTX IC50 Ara-C No Aplidine 1 8 nM 5 n M 30 nM Aplidine IC20 (0.5 nM) 1 nM 500 pM 6 nM p<0.01 , p<0.05, p<0.05 Claramente, estos datos muestran q ue el aplidine potencia el efecto doxorubicina, metotrexato y arabinoside citosina al disminuir de manera muy importante los IC50s para los fármacos.

EJEMPLO 3: Estudios in Vitro para determinar el efecto de aplidine como un agente único en estirpes de célula CCRF-CEM, SKI-DLCL y K562.

Las células CCRF-CEMS, SKI-DLCL y K562 se mantienen en RPMI 1640 complementado con 10% de FCS. Para determinar el efecto citotoxico de aplidine en todas las estirpes de célula y para obtener el IC50 de aplidine en estas estirpes de célula, las células se laminaron en placas de 96 cavidades y se incubaron por 96 horas en una incubadora húmeda y que contiene 5% de C02. La viabilidad de célula se mide por el ensayo XTT en un lector de placas automático. Encontramos que aplidine era citotoxico para todas las estirpes de célula con una dosis IC50 de 0.5-1 .0 nM (Figura 3). etotrexato, arabinoside citosina C (ara-C), mitoxantrona, metilprednisolona, vinblastina y doxorubicina se probaron en combinación con aplidine. El análisis Chou-Talalay se utilizó para analizar las combinaciones de fármaco. Cuando el índice de Combinación (Cl) obtenido por este análisis es menor a 1 , los fármacos son sinergísticos; cuando Cl es 1 , los fármacos son aditivos; y, si Cl es mayor a 1 , los fármacos son antagonísticos. Todos los estudios de citotoxicidad se realizaron al utilizar XTT o MTS. Primero determinamos la dosis de IC50 de estos fármacos en las estirpes de célula SKI-DLCL, CCRF-CEM y K562. Investigamos las combinaciones del fármaco utilizando la proporción fija IC5o(Aplidine):IC5o(FármacoX). En la Tabla 2 se muestra la combinación de aplidine y Ara-C con la dosis de (IC50:lC50) en células CCRF-CEM.

Tabla 2 Los resultados del análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y Ara-C en células CCRF-CEM pueden observarse en la figura 4. El Cl para esta combinación en células CCRF-CEM es 0.469. En la tabla 3 se muestra la combinación de aplidine y Ara-C con la dosis de (IC5o:IC50) en células SKI-DLCL.

Tabla 3 Proporción Dosis de APL Dosis de AraC Viabilidad (% de control) Control 0 0 100 IC50 (APL) 0.5 nM 0 50 IC50 (AraC) 0 30 nM 50 x16 8 nM 480 nM 12 x8 4 nM 240 nM 10.7 x4 2 n 120 nM 14.1 x2 1 nM 60 nM 17.4 IC50:IC50 0.5 nM 30 nM 23.1 X 1 /2 0.25 nM 15 nM 25.4 x 1/4 1.125 nM 7.5 nM 25.5 x 1/8 0.0625 nM 3.75 nM 50.8 Los resultados del análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y Ara-C en células SKI-DLCL pueden observarse en la figura 5. El Cl para esta combinación en células SKI-DLCL es 0.306. En la tabla 4 se muestra la combinación de aplidine y Ara-C con la dosis de (IC50:IC50) en células K562.

Tabla 4 Proporción Dosis de APL Dosis de Viabilidad AraC (% de control) Control 0 0 00 IC50 (APL) 1 nM 0 50 IC50 (AraC) 0 30 nM 50 x16 16 nM 480 nM 1 1.8 x8 8 nM 240 nM 15.2 x4 4 nM 120 nM 15.5 x2 2 nM 60 nM 17 IC50: IC50 1 nM 30 nM 22.1 x 1/2 0.5 nM 15 nM 25.6 x 1/4 0.25 nM 7.5 nM 31.1 x 1/8 0.125 nM 3.75 nM 44.2 El Cl para esta combinación en células K562 es 0.502. En la tabla 5 se muestra la combinación de aplidine y mitoxantrona con la dosis de ( IC50. IC50) en células CCRF-CEM.

Tabla 5 Los resultados del análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y mitoxantrona en células CCRF-CEM pueden observarse en la figura 6. El Cl para esta combinación en células CCRF-CEM es 0.91 1 .

En la tabla 6 se muestra la combinación de aplidine y mitoxantrona con la dosis de (I C50- I C50) en células SKI-DLCL.

Tabla 6 Los resultados del análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y mitoxantrona en células SKI-DLCL pueden observarse en la figura 7. El Cl para esta combinación en células SKI-DLCL es 0.646. En la tabla 7 se muestra la combinación de aplidine y mitoxantrona con la dosis de (IC5o: IC50) en células K562.

Tabla 7 Proporción Dosis de APL Dosis de Viabilidad Mitoxantrona (% de control) Control 0 0 100 IC50 (APL) 1 nM 0 50 IC50 (Mitox) 0 7.5 nM 50.7 x16 16 nM 120 nM 9.9 x8 8 nM 60 nM 1 1 .6 x4 4 nM 30 nM 1 1.9 x2 2 n 15 nM 13.8 IC50:IC50 1 nM 7.5 n 20.6 x 1/2 0.5 nM 3.75 nM 39.7 x 1/4 0.025 nM 1 .8 nM 60.7 x 1 /8 0.125 nM 0.9 n 76.5 El Cl para esta combinación en células k562 es 0.487. En la tabla 8 se muestra la combinación de aplidii metotrexato con la dosis de (?050:?05?) en células CCRF-CEM.

Tabla 8 Los resultados del análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y metotrexato en células CCRF-CEM pueden observarse en la figura 8. El Cl para esta combinación en células CCRF-CEM es 0.950. Los resultados del análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y doxorubicina en células CCRF-CEM pueden observarse en la figura 9. El Cl para esta combinación en células CCRF-CEM es 1.952. Los resultados del análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y vinblastina en células CCRF-CEM pueden observarse en la figura 10. El Cl para esta combinación en células CCRF-CEM es 2.046. En la tabla 9 se muestra la combinación de aplidine y doxorubicina con la dosis de (IC50: I C5Q) en células SKI-DLCL.

Tabla 9 Proporción Dosis de APL Dosis de Viabilidad Doxorubicina (% de control) Control 0 0 100 IC50 (APL) 0.5 nM 0 50 IC50 (Doxo) 0 5 nM 50 x16 8 nM 80 nM 9.4 x8 4 nM 40 nM 8.6 x4 2 nM 20 nM 8 x2 1 nM 10 nM 9.7 IC50 C50 0.5 nM 5 nM 21 x 1/2 0.25 nM 2.5 nM 40 x 1/4 1 .125 nM 1.25 nM 45 x 1/8 0.0625 nM 0.625 nM 49 Los resultados del análisis de combinación Chou-Talalay de aplidíne y doxorubicina en células SKI-DLCL pueden observarse en la figura 1 1 . El Cl para esta combinación en células SKI-DLCL es 0.478. En la tabla 10 se muestra la combinación de aplidine y vinblastina con la dosis de (IC50:IC5o) en células SKI-DLCL.

Tabla 10 Los resultados del . análisis de combinación Chou-Talalay de aplidine y vinblastina en células SKI-DLCL pueden observarse en la figura 12. El Cl para esta combinación en células SKI-DLCL es 0.760. En la tabla 1 1 se muestra la combinación de aplidine y metilprednisolona con la dosis de (IC5o:IC5o) en células SKI-DLCL.

Tabla 1 1 Los resultados del análisis de combinación Chou-Talalay de apüdine y metilprednisolona en células SKI-DLCL pueden observarse en la figura 13. El Cl para esta combinación en células SKI-DLCL es 0.646.

EJEMPLO 5 También investigamos el efecto citotóxico de combinación de IC20 (APL) con una dosis variable de AraC en estirpes de célula CCRF-CEM y SKI-DLCL. El aplidine en ambas estirpes de célula potenció el efecto de AraC, la dosis IC50 de AraC se redujo de 30 nM a 1.6 nM en la estirpe de célula SKI-DLCL, y de 10 nM a 0.8 nM en la estirpe de célula CCRF-CEM respectivamente (figura 14). Se obtuvo información después de la incubación celular por 96 horas y de utilizarse el ensayo XTT. Los resultados representan las medias aritméticas de tres diferentes experimentos.

EJEMPLO 6 Estudios in Vivo. Realizamos experimentos in vivo para estudiar el efecto de aplidine solo y en combinación con otros fármacos para malignidades linfoides.

Determinación de la dosis máxima tolerada (MTD) en C.B.-17 scid/scid (ratones SCID) Hemos utilizado un modelo in vivo de linfoma humano en ratones SC1D para este propósito. Específicamente, hemos utilizado células CCRF-CE S y ratones CB.17 scid/scid. Hemos experimentado con este modelo y hemos evaluado los tratamientos de fármaco utilizando este xenoinjerto (Lacerda J.F. eí al. Blood 85 (1 0): 2675-2679 (1995)). Encontramos que una dosis total de 1 mg/kg/semana dada en cinco dosis diarias es la dosis máxima de aplidine que puede tolerarse por los ratones.

Determinación de efecto antitumoral in vivo de aplidine como un agente único v en combinación con AraC en modelo de xenoinjerto de ratones SCID Los ratone se inocularon subcutáneamente en el flanco derecho con células leucémicas 107 CEM-T. Se observaron dos veces a la semana para la formación tumoral en el sitio de inoculación.

Después del establecimiento de tumor palpable, el alidine se inyectó como agente único y en combinación con varias dosis de AraC para determinar el efecto antitumoral. Los ratones se seleccionaron al azar para recibir alidine solo en dosis de 0.75 mg/kg y 1 mg/kg, AraC solo en 50 mg/kg, o combinación de Aplidine y AraC para todas las combinaciones de dosis. La dosis AraC seleccionada para esta combinación es la dosis a la cual se inhibió el crecimiento tumoral pero no ocurrió la reincidencia del tumor. Todos los fármacos se administraron intra-peritonealmente, y el tamaño del tumor se comparó a un grupo de control de ratones que no reciben ningún tratamiento y para grupos de combinación, en comparación a los tamaños de tumor con el tratamiento de agente único. La combinación más eficaz se encontró que era AraC-50 mg/kg + alidine-0.75 mg/kg (figura 15). Estos descubrimientos respecto al aplidine pueden extenderse a análogos de aplidine, derivados y compuestos relacionados. Por ejemplo, la presente invención proporciona una combinación de un compuesto tal como aquella de WO 02 02596 con un fármaco anti-cáncer, preferentemente un fármaco anti-leucemia o fármaco anti-linfoma, notablemente metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprednisolona o doxorubicina.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. El uso de aplidine o un análogo de aplidine en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer primario y/o metastático por terapia de combinación empleando aplidine o un análogo de aplidine con otro fármaco. 2. El uso de aplidine o un análogo de aplidine según la reivindicación 1 , caracterizado porque el cáncer a tratar es una leucemia o un linfoma. 3. El uso de aplidine o un análogo de aplidine según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el aplidine o el análogo de aplidine y el otro fármaco forman parte del mismo medicamento. 4. El uso de aplidine o un análogo de aplidine según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el aplidine o el análogo de aplidine y el otro fármaco se proporcionan como medicamentos separados para la administración al mismo tiempo o a diferentes tiempos. 5. El uso de aplidine o un análogo de aplidine según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el otro fármaco se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprednisolona y doxorubicina. 6. El uso de aplidine o un análogo de aplidine según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el aplidine o el análogo de aplidine es aplidine. 7. Un método para tratar el cáncer primario y/o metastático que comprende administrar a un paciente en necesidad de tal tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de aplidine o un análogo de aplidine y una cantidad terapéuticamente eficaz de otro fármaco, el cual es eficaz en el tratamiento de cáncer administrado antes, durante, o después de administrar el aplidine o el análogo de aplidine. 8. El método para tratar el cáncer primario y/o metastático según la reivindicación 6, caracterizado porque el cáncer a tratar es una leucemia o un linfoma. 9. El método para tratar el cáncer primario y/o metastático según la reivindicación 7 u 8, caracterizado porque el otro fármaco se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprednisolona y doxorubicina. 10. Un método para aumentar la eficacia terapéutica de un fármaco eficaz en el tratamiento de cáncer, el cual comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad de aplidine o un análogo de aplidine, el aplidine o el análogo de aplidine administrándose antes, durante, o después de administrar el otro fármaco. 1 1. El método para aumentar la eficacia terapéutica de un fármaco eficaz en el tratamiento de cáncer según la reivindicación 10, caracterizado porque el cáncer a tratar es una leucemia o un linfoma. 12. El método para aumentar la eficacia terapéutica de un fármaco eficaz en el tratamiento de cáncer según las reivindicaciones 10 u 1 1 , caracterizado porque fármaco se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprednisolona y doxorubicina. 13. Una composición farmacéutica que comprende aplidine o un análogo de aplidine y otro fármaco eficaz en el tratamiento de cáncer. 14. La composición farmacéutica según la reivindicación 13, caracterizada porque el otro fármaco es eficaz en el tratamiento de una leucemia y/o linfoma. 15. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 13 o 14, caracterizada porque el otro fármaco se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprednisolona y doxorubicina. 16. Un equipo para utilizarse en el tratamiento o prevención de cáncer el cual comprende una forma de dosificación de aplidine o un análogo de aplidine, una forma de dosificación de otro fármaco eficaz en el tratamiento de cáncer e instrucciones para el uso de cada actor en combinación para el tratamiento o prevención de cáncer. 17. El equipo según la reivindicación 16, caracterizado porque el equipo es para utilizarse en el tratamiento o prevención de una leucemia y/o un linfoma. 18. El equipo según cualquiera de las reivindicaciones 16 o 17, caracterizado porque el otro fármaco se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, arabinoside citosina, mitoxantrona, vinblastina, metilprednisolona y doxorubicina. 19. Un uso de aplidine o un análogo de aplidine en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica.