CN101570560B - 两种甾醇衍生物及其分离提取方法和在防治前列腺增生疾病中的应用 - Google Patents

两种甾醇衍生物及其分离提取方法和在防治前列腺增生疾病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了两种甾醇衍生物及其分离提取方法和在防治前列腺增生疾病中的应用。所述两种甾醇衍生物，即如式1和式2所示的化合物24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯和环桉烯醇亚麻酸酯。本发明的化合物未见报道，且其具有抑制芳香化酶活性的作用。本发明还公开了这两种甾醇衍生物在制备抑制芳香化酶活性的制剂、预防或治疗前列腺增生疾病的药物组合物中的应用。

Description

两种甾醇衍生物及其分离提取方法和在防治前列腺增生疾病中的应用
技术领域
本发明涉及两种新化合物及其制备方法和应用，以及含其的药物组合物，具体的涉及两种甾醇衍生物及其制备方法和应用，以及含其的其药物组合物。 
背景技术
良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)是老年男性常见的生理病变，当病变引起排尿梗阻等一系列症状时称为前列腺增生症。国外1075例尸检报告表明：在25～30岁时，10％的男性可在显微镜下见到早期的前列腺增生病变；随着年龄的增长，经组织学诊断的前列腺增生的发生率也相应增加；至51～60岁，其发病率增加为75％；至85岁时，约有90％的男性有组织学上的前列腺增生病变。由上可见，随着我国人口老龄化的加速，由老龄引起的前列腺增生的发病率不断上升，良性前列腺增生症也越来越成为我国亟待解决的重要问题。良性前列腺增生的发病率很高，但其发病机理迄今尚未完全阐明。前列腺增生可能是一组多病因的疾病，其发病机制也是错综复杂的。BPH药物治疗的方向就是针对其各种可能的发病机制和存在因素，目前的理论和文献报道了多个成熟的和新的抗BPH药物的作用靶点，包括α1-肾上腺素受体、5α-还原酶、芳香化酶、磷酸二酯酶-5、糖酵解酶和环氧合酶-2等。 
目前，临床上用于治疗前列腺增生的药物主要有：α1-肾上腺受体拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、天然产物制剂等。由于前列腺增生发病原因错综复杂而且需要长期服药，只针对某一特定靶点的α1-受体阻断剂、5α-还原酶抑  制剂等合成药物在长期服用中出现了一定的副作用，如低血压，阳痿、性功能障碍、头痛等，且治疗效果不够理想，从而限制这些药物在前列腺增生治疗中的应用。天然产物制剂具有整体性、多靶点和多成分协同作用的特点，特别是花粉制剂不影响体内激素分泌平衡，毒副作用小，适用于长期服用的特点，越来越受到患者的欢迎。 
动物实验和临床研究均表明，雌激素在前列腺增生的发生、发展过程中均扮演着非常重要的角色。随着年龄的增加，男性体内的雌激素较稳定或稍有增加，与青年男性相比，老年男性血浆及前列腺组织内的雌/雄激素比例升高。而这种性激素平衡的改变可能诱导前列腺基质活性从而引BPH。有研究显示，前列腺基质增生中结合状态的雌性激素能够激活细胞合成和分泌细胞外基质蛋白，在细胞周围形成一层致密的纤维结缔组织，进而参与前列腺增生的发生发展。在最初的间质增生中，雌性激素的作用是主要的；在前列腺增生的过程中，雌雄性激素具有协同作用，因而有人称雌性激素是前列腺基质生长的刺激剂。鉴于雌激素在BPH中的重要作用，可使用抑制雌激素合成的方法，如使用芳香化酶抑制剂治疗前列腺增生。男性体内的雌激素主要是由雄激素前体转化而来，芳香化酶P450是这一转变过程的关键酶和限速酶。它是以NADPH为辅酶、细胞色素P450为介质的混合功能氧化酶。理论上，芳香化酶抑制剂具有治疗良性前列腺增生等一切激素依赖性疾病的潜在效果。并且目前已有一些使用芳香化酶抑制剂治疗BPH的实验报道：一种较弱的芳香化酶抑制剂睾内酯的治疗结果显示，50％的BPH患者症状改善，可自行排尿、前列腺体积减小30％，残余尿量明显减少。Michaud报道用一种独特的新型芳香化酶抑制剂TZA-2237进行动物(犬)实验，发现TZA-2237能够有效抑制雄激素和雌激素，可导致犬前列腺的基质细胞萎缩。但关于用芳香化酶治疗BPH的临床报道还不多，其疗效也需进一步验证。随着临床对雌激素在BPH中作用的逐渐认识，开发新的芳香酶抑制剂治疗BPH可能是下阶段药物治疗的方向之一。 
近年来，人们通过药效筛选，在天然产物中已发现黄酮、香豆素、萜类、脂肪酸和多酚等多类化合物具有芳香化酶抑制活性，并通过结构改造获得了一系列衍生物。 
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供了两种新的甾醇衍生物及其制备方法和药物组合物。本发明的甾醇衍生物未见报道，其具有芳香化酶抑制活性，能为前列腺增生疾病的预防或治疗提供一种新途径。 
本发明涉及如式1所示的24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯和式2所示的环桉烯醇亚麻酸酯： 
Figure S2008100369364D00031
本发明中所述甾醇化合物的理化性质和波谱数据如下： 
24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯(1).无色油状物，HRESIMS：m/z 658.5681[M+Na]+(calcd for C46H76O2，658.5689)；ESI-MS(positive)：m/z 681[M+Na]+，1339[2M+Na]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δH 5.30～5.40(6H，m，H-9′，10′，  12′，13′，15′，16′)，5.14(1H，s，H-6)，4.66～4.72(2H，d，H-30)，2.80(4H，t，J＝7.6Hz，H-11′，14′)，2.29(2H，t，J＝7.2Hz，H-2′)，2.07(4H，t，J＝7.5Hz，H-8′，17′)，1.60(2H，m，H-3′)，1.27-1.31(H-4′，5′，6′，7′)，1.01(3H，d，J＝2.1Hz，H-26)，0.99(3H，d，J＝2.1Hz，H-27)，0.96(3H，d，J＝6.5Hz，H-21)，0.90(3H，t，J＝7.5Hz，H-18′)，0.90(3H，s，H-19)，0.50(3H，s，H-18)；13C-NMR(100MHz，CDCl3)：δC 36.9(t，C-1)，31.1(t，C-2)，73.2(d，C-3)，39.5(d，C-4)，139.5(d，C-5)，117.4(t，C-6)，32.3(t，C-7)，33.8(d，C-8)，49.2(d，C-9)，21.5(t，C-11)，39.5(t，C-12)，56.0(d，C-14)，25.5(t，C-15)，27.9(t，C-16)，55.0(d，C-17)，12.0(q，C-18)，13.3(t，C-19)，36.2(d，C-20)，18.4(q，C-21)，34.7(t，C-22)，31.3(t，C-23)，156.9(s，C-24)，33.8(d，C-25)，21.9(q，C-26)，22.0(q，C-27)，106.0(d，C-28)，173.6(s，C-1′)，34.8(t，C-2′)，25.6(t，C-3′)，29.2～29.7(t，C-4′，5′，6′，7′)，27.2(t，C-8′)，132.0(d，C-9′)，128.2(d，C-10′，15′)，25.6(t，C-11′)，127.8(d，C-12′)，127.2(d，C-13′)，25.5(t，C-14′)，128.3(d，C-16′)，20.4(t，C-17′)，14.3(q，C-18′)。 
环桉烯醇亚麻酸酯(2).无色油状物，HRESIMS：m/z 710.1219[M+Na]+ (calcd for C48H78O2Na，710.1215)；ESI-MS(positive)：m/z 709.6[M+Na]+； 1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δH 5.30～5.40(6H，m，H-9′，10′，12′，13′，15′，16′)，4.66～4.72(2H，d，H-30)，2.80(4H，t，J＝7.6Hz，H-11′，14′)，2.29(2H，t，J＝7.2Hz，H-2′)，2.07(4H，t，J＝7.5Hz，H-8′，17′)，1.60(2H，m，H-3′)，1.27-1.31(H-4′，5′，6′，7′)，1.04(3H，d，J＝2.1Hz，H-26)，1.02(3H，d，J＝2.1Hz，H-27)，0.97(3H，t，J＝7.5Hz，H-18′)，0.90(3H，s，H-18)，0.90(3H，d，J＝6.2Hz，H-21)，0.89(3H，s，H-28)，0.84(3H，d，J＝6.1Hz，H-29)，0.54(1H，d，J＝3.8Hz，H-19a)，0.40(1H，d，J＝3.8Hz，H-19b)；13C-NMR(100MHz，CDCl3)：δC 31.0(t，C-1)，35.4(t，C-2)，78.5(d，C-3)，43.4(d，C-4)，41.6(d，C-5)，24.7(t，C-6)，28.1(t，C-7)，46.9(d，C-8)，25.1(t，C-11)，35.4(t，C-12)，32.9(t，C-15)，27.1(t，C-16)，52.2(d，C-17)，17.8(q，C-18)，27.0(t，C-19)，36.2(d，C-20)，18.4(q，C-21)，35.0(t，C-22)，31.3(t，C-23)，156.9(s，C-24)，33.9(d，C-25)，21.9(q，C-26)，22.0(q，C-27)，19.2(q，C-28)，14.4(q，C-29)，105.9(t，  C-30)，173.6(s，C-1′)，34.8(t，C-2′)，25.6(t，C-3′)，29.2～29.7(t，C-4′，5′，6′，7′)，27.2(t，C-8′)，132.0(d，C-9′)，128.2(d，C-10′，15′)，25.6(t，C-11′)，127.8(d，C-12′)，127.2(d，C-13′)，25.5(t，C-14′)，128.3(d，C-16′)，20.4(t，C-17′)，14.3(q，C-18′)。 
本发明还提供了如式1所示的24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯或如式2所示的环桉烯醇亚麻酸酯的制备方法： 
(1)用下述两种方法中的一种提取有效部位： 
①二氧化碳超临界提取。该方法可参照发明专利申请《一种破壁花粉的提取物及其提取方法和应用》(申请号：200710043270.0)中的超临界萃取，其说明书全文为本说明书所引用。 
其中，超临界二氧化碳萃取的温度优选在35～55℃范围，压力25～40MPa。 
为了提高提取物的收率，所述的超临界二氧化碳萃取中还采用萃取夹带剂。所述的萃取夹带剂可为现有技术中常用的极性有机溶剂，例如甲醇、各种浓度乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等C1～4的低级醇，丙酮，乙酸乙酯，氯仿等。本发明优选C1～4的低级醇，更优选甲醇和乙醇。所述夹带剂的用量优选为破壁花粉重量5～10％。 
同常规，本发明所述的收集超临界萃取部分可以采用减压离析的一级或多级分离收集。为尽可能收集完全并综合工艺时间、成本等因素考虑，本发明萃取物分离条件优选25～45℃范围递减的温度、4～12Mpa的递减压力；更优选二级分离，其中分离釜I的温度为35～45℃、压力8～12MPa，分离釜II的温度为25～35℃、压力4～6Mpa。 
在收率相同情况下，随着超临界二氧化碳萃取中CO2每小时循环用量增大，萃取时间可缩短，反之，超临界二氧化碳萃取中CO2每小时循环用量越小，萃取时间越长。本发明综合收率、工艺时间、成本等因素，优选采用25～45L/小时循环用量的CO2萃取1～3小时左右。 
本发明所说的油菜破壁花粉是指现有固体的破壁花粉，其可以市售得到，也可以采用现有花粉破壁技术(如可以参考：张星海等.油菜花粉的微生物破壁技术研究，食品科学，2003，24(3)：92～95；以及公开号为CN1452888A的专利申请文件公开的酶发酵破壁方法)自制得到。按常规，将油菜破壁花粉进行超临界二氧化碳萃取之前，尽量将破壁花粉，特别是市售产品去除水分，干燥完全。 
②提取：取破壁后玉米花粉，加弱极性溶剂加热回流或冷浸渗漉，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，得流浸膏，将流浸膏悬于水中，分别依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取部分，减压回收溶剂，得有效部位； 
其中，弱极性溶剂较佳的为乙醇、丙酮、石油醚和乙酸乙酯中的一种或几种；弱极性溶剂的用量较佳的为3-20ml/g玉米花粉；流浸膏的相对密度较佳的为1.10-1.60；水的用量较佳的为1-5ml/g流浸膏；冷浸渗漉的次数较佳的为2-3次；萃取过程中，每种溶剂每次萃取的用量较佳的为1-5倍水溶液体积，每种溶剂较佳地萃取2-3次。 
(2)柱层析：将上述有效部位在硅胶层析柱上用洗脱剂进行梯度洗脱，经正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯仿时，Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压回收溶剂制得粗产物； 
其中，硅胶较佳的为100-400目；硅胶的用量较佳的为步骤(1)所得的有效部位质量的3-20倍；硅胶柱的规格较佳的为直径0.5cm-200cm，长度为10-1000cm；洗脱剂较佳的为下述混合溶剂中的一种：石油醚-乙酸乙酯、正己烷-乙酸乙酯、环己烷-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、环己烷-丙酮和正己烷-丙酮；每个梯度下，洗脱剂的用量为3-5倍柱体积；洗脱剂的梯度较佳的为体积比100∶0-100∶20，更佳的为体积比：100∶0，100∶1，100∶5，100∶20。 
(3)纯化：将步骤(2)所得的粗产物在正相硅胶层析柱上用洗脱剂进行洗脱，经正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯  仿时，Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压蒸干，得到洗脱物；将上述洗脱物进行HPLC反相硅胶柱层析，HPLC反相硅胶柱的规格为Agilent ODS9.4mm×300mm，以无水乙醇洗脱为流动相，设定紫外波长为215nm，进行检测，分别收集化合物1和化合物2对应的峰，挥干溶剂即得化合物1和化合物2，其中化合物1为24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯，对应的保留时间为19分钟；化合物2为环桉烯醇亚麻酸酯，对应的保留时间为17分钟。 
其中，所述的硅胶较佳的为300-400目；硅胶用量较佳的为步骤(2)所得粗产物质量的3-20倍；硅胶柱的规格为直径0.5cm-200cm，长度为10-1000cm；所述的硅胶层析柱上用的洗脱剂为石油醚-氯仿；每个梯度洗脱剂的用量为3-5倍柱体积；洗脱剂的梯度为体积比1∶0-0∶1，更较佳的为体积比：1∶0，1∶1，1∶3，1∶5，0∶1。 
本发明的如式1所示化合物或如式2所示化合物可与药学上各种常用添加剂(如稀释剂和赋形剂等)制成药物组合物。其在各单一活性成分或两个以上活性成分的混合物加入相关的赋形剂，制成片剂、胶囊、软胶囊、液体制剂、颗粒剂、煎膏剂、丸剂、悬浮剂、分散剂、糖浆剂、栓剂、注射剂。其中的赋形剂包括粘合剂，如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素等；崩解剂，如羧甲基纤维素钠、低取代羟丙纤维素等；稀释剂，如淀粉、糖粉、糊精、微晶纤维素、甘露醇、乳糖、大豆油等，润滑剂，如硬脂酸镁、滑石粉；甜味剂，如蔗糖、果糖、天冬甜素等；稳定剂，如羧甲基纤维素钠、环糊精等；防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯、苯甲酸钠等。 
本发明中，可以根据服药方法、病人年龄、性别和其它条件以及症状适当地选择用药剂量。通常的活性成分给药剂量可为：约0.02～4.00mg/Kg体重/天。 
本发明还涉及如式1所示的化合物或如2所示的化合物在制备抑制芳香化酶活性制剂中的应用，以及在制备预防或治疗前列腺增生疾病的药物组合物中的应用。 
本发明涉及的试剂和原料均市售可得。 
本发明的积极进步效果在于：本发明提供了一种未见报道的甾醇衍生物，其具有很好的抑制芳香化酶活性的作用。本发明还提供了这种甾醇衍生物在制备抑制芳香化酶活性的制剂中、预防或治疗前列腺增生疾病的药物组合物中的应用。 
具体实施方式
下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。 
实施例1 
1)超临界提取：取破壁后的玉米花粉，采用超临界二氧化碳萃取，收集超临界萃取部分。根据本发明，所述的超临界二氧化碳萃取的温度优选在50℃，压力40MP，提取2次，每次30min，CO2流量30L/min夹带剂为乙醇，其用量为破壁花粉重量的8％； 
2)柱层析：将上述提取物，进行硅胶柱层析，硅胶为100目，用量为用粗产物质量的20倍，规格为100mm×1000mm；用洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯，每个梯度洗脱剂用量为5倍柱体积，洗脱剂体积比为：100∶0，100∶1，100∶5，100∶20；用正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯仿时，Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压回收溶剂制得粗产物； 
3)纯化：将步骤(2)所得的粗产物在正相硅胶层析柱上用洗脱剂进行梯度洗脱，硅胶为400目，用量为用粗产物质量的20倍，规格为40mm×800cm，每个梯度洗脱剂的用量为3倍柱体积，洗脱剂的体积比为：1∶0，1∶1，1∶3，1∶5，0∶1；用正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯仿时，Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压蒸干，得到洗脱物；将上述洗脱物进行HPLC反相硅胶柱层析，以无水乙醇洗脱，设定紫外波长为215nm，进行检测，分别收集化合物1和化合物2对应的峰，挥干溶剂即得化合物1和  化合物2，其中化合物1为24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯，对应的保留时间为19分钟；化合物2为环桉烯醇亚麻酸酯，对应的保留时间为17分钟，其中HPLC反相硅胶柱的规格为Agilent ODS 9.4mm×300mm。 
实施例2 
1)提取：取破壁后玉米花粉，粉碎，以10ml/g玉米花粉的比例用95％(体积百分比)乙醇加热回流或冷浸渗漉3次，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，得流浸膏；混悬于水中，水的用量为5ml/g流浸膏；分别用石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取，每种溶剂萃取3次，每次萃取溶剂用量为水溶液等体积，取乙酸乙酯萃取部分，减压回收溶剂，得有效部位； 
2)柱层析：将上述有效部位，进行硅胶柱层析，硅胶为200目，用量为用粗产物质量的5倍，规格为100mm×1000mm；用洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯，每个梯度洗脱剂用量为5倍柱体积，洗脱剂体积比为：100∶0，100∶1，100∶5，100∶20；用正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯仿时，Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压回收溶剂制得粗产物； 
3)纯化：将步骤(2)所得的粗产物在正相硅胶层析柱上用洗脱剂进行梯度洗脱，硅胶为300目，用量为用粗产物质量的5倍，规格为40mm×800mm，每个梯度洗脱剂的用量为5倍柱体积，洗脱剂的体积比为：1∶0，1∶1，1∶3，1∶5，0∶1；用正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯仿时，Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压蒸干，得到洗脱物；将上述洗脱物进行HPLC反相硅胶柱层析，以无水乙醇为流动相，设定紫外波长为215nm，进行检测，分别收集化合物1和化合物2对应的峰，挥干溶剂即得化合物1和化合物2，其中化合物1为24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯，对应的保留时间为19分钟；化合物2为环桉烯醇亚麻酸酯，对应的保留时间为17分钟，其中HPLC反相硅胶柱的规格为Agilent ODS 9.4mm×300mm。 
效果实施例 
表1说明了环桉烯醇亚麻酸酯、24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯和亚麻酸对芳香化酶的抑制作用。其中，亚麻酸为对比例，购自Sigma公司。 
该测试方法是根据文献《芳香化酶抑制剂筛选模型的建立》(全海天，楼丽广，中国药理学通报，2004，20(10)：1189-1192)，用胎盘的微粒体作为芳香化酶的酶源，以[1β-3H]雄烯二酮作为反应底物，通过测得产物3H2O的放射能来检测芳香化酶的活性，以液体闪烁计数仪计数3H2O的放射率，计算化合物芳香化酶的抑制作用。 
材料和仪器：人的胎盘取自上海市静安区妇产科医院。[1β-3H]雄烯二酮(958.3TBq·mol-1)为Perkin Elmer Life Sciences Inc产品；雄烯二酮，对照品Aminoglutethimide，NADPH为Sigma公司产品；供试样品自制。葡聚糖T70为Amersham Bioscience公司产品；其他试剂均为国产分析纯。 
超速离心机购自HITACHI Co，低温离心机购自International EquipmentCo，-86℃超低温冰箱购自Thermo Electron Co，放射性同位素检测仪购自Beckman Co。 
方法： 
1.微粒体的制备 
所有步骤均在0～4℃进行。胎盘得到后立刻放在冰上，除去绒毛膜和大血管，用0.01mol·L-1 PBS(内含1％KCl)清洗后用剪刀剪碎，用0.101mol·L-1PBS(内含0.124mol·L-1蔗糖和0.5μmol·L-1雄烯二酮)进行匀浆。离心900×g 60min。弃沉淀，上清液离心10000×g 60min以沉淀线粒体成分。上清液再离心125000×g 60min即可得到微粒体部分。沉淀再用0.01mol·L-1 PBS(内含0.1mmol·L-1 EDTA，0.5μmol·L-1雄烯二酮)重悬浮，悬浮的蛋白用以0.01mol·L-1PBS为溶剂的0.1％NP-40溶解至蛋白终浓度为2～3g·L-1。 
2.酶反应体系的建立 
反应底物[1β-3H]雄烯二酮事先保存在无水乙醇内，反应时用0.067mol·L-1PBS稀释，乙醇的最终浓度小于1％。反应以0.067mol·L-1PBS为缓冲  液，0.4ml的反应体系中还包含0.01ml微粒体制备液，50pmol[1β-3H]雄烯二酮和0.20mg NADPH。反应在37℃进行，以加入NADPH开始，分别进行2、5、10和15min，然后加0.4ml20％的三氯乙酸终止反应1min。终止后加入1.0ml预冷的氯仿抽提，继续振荡10min后离心3200×g 10min，吸上清液0.8ml，然后加入0.8ml 5％dextran coated charcoal，于37℃继续振荡温浴30min。混合液离心3200×g 10min。取上清液测定3H的放射能，空白对照用无微粒体的反应液。样品浓度为100μg/ml，在NADPH加入前加入。 
3.Km和Vmax的测定 
在0.4ml反应体系中，对照品Aminoglutethimide的浓度分别取1、2、4、12.5和25μg/ml，供试样品的浓度分别取10、25、50、100和200μg/ml，反应5min，反应体系中其他成分与步骤同2。 
4.测定底物的Km和Vmax 
在NADPH和O2过量很多的情况下，芳香化酶的催化反应是单底物反应。变化[1β-3H]雄烯二酮的浓度，并始终控制产物量小于底物量的5％，运用米-孟氏方程式，采用1/v-1/[S]双倒数作图法，可计算出Km和Vmax。 
5.测定对照品和供试品的抑制率 
在0.4ml反应体系中，对照品浓度为1μg/ml，供试品浓度为100μg/ml，反应5min，体系其他成分与步骤同2，测定抑制率。 
表1化合物抑制芳香化酶活性的测试结果 
  化合物  抑制率(100μg/mL)
  环桉烯醇亚麻酸酯  66％
  24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯  63％
  亚麻酸  55％
由上表可见环桉烯醇亚麻酸酯和24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯对芳香化酶均具有很好的抑制作用。 

Claims (7)

1.如式1所示的24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯或如式2所示的环桉烯醇亚
Figure FSB00000411761400011
2.如权利要求1所述的24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯或环桉烯醇亚麻酸酯的分离提取方法：
(1)用下述两种方法中的任一种提取有效部位：
①二氧化碳超临界提取；
②提取：取破壁后玉米花粉，加弱极性溶剂，加热回流或冷浸渗漉，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，得流浸膏，将流浸膏混悬于水中，分别依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取部分，减压回收溶剂至干，得有效部位；
(2)柱层析：将上述有效部位在硅胶层析柱上用洗脱剂进行梯度洗脱，经正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯仿时，Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压回收溶剂制得粗产物；
(3)纯化：将步骤(2)所得的粗产物在正相硅胶层析柱上用洗脱剂进行洗脱，经正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯仿时，Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压蒸干，得到洗脱物；将上述洗脱物进行HPLC反相硅胶柱层析，HPLC反相硅胶柱的规格为Agilent ODS9.4mm×300mm，以无水乙醇为流动相，设定紫外检测波长为215nm，进行检测，分别收集化合物1和化合物2对应的峰，挥干溶剂即得化合物1和化合物2，其中化合物1为24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯，对应的保留时间为19分钟；化合物2为环桉烯醇亚麻酸酯，对应的保留时间为17分钟。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(1)②中：所述的弱极性溶剂为乙醇、丙酮、石油醚和乙酸乙酯中的一种或几种；所述的弱极性溶剂的用量为3-20ml/g玉米花粉；所述的流浸膏的相对密度为1.10-1.60；所述的水的用量是1-5ml/g流浸膏；所述的冷浸渗漉的次数为2-3次；所述的萃取过程中，每种溶剂每次萃取的用量为1-5倍水溶液体积，每种溶剂萃取2-3次。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的硅胶为100-400目；硅胶的用量为步骤(1)所得的有效部位质量的3-20倍；硅胶柱的规格为直径0.5cm-200cm，长度为10-1000cm；所述的洗脱剂为下述混合溶剂中的一种：石油醚-乙酸乙酯、正己烷-乙酸乙酯、环己烷-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、环己烷-丙酮和正己烷-丙酮。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的洗脱剂的梯度为体积比100∶0-100∶20；每个梯度下，洗脱剂的用量为3-5倍柱体积。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的洗脱剂的梯度为体积比：100∶0，100∶1，100∶5，100∶20。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(3)中的硅胶为300-400目；硅胶用量为3-20倍的样品质量；硅胶柱的规格为直径0.5cm-200cm，长度为10-1000cm；所述的硅胶层析柱上用的洗脱剂为石油醚-氯仿，洗脱剂的梯度为体积比1∶0-0∶1，每个梯度洗脱剂的用量为3-5倍柱体积。
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