CN101569630B - 甾体类化合物或含其的植物提取物在防治前列腺增生疾病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了甾体类化合物或含其的植物提取物在防治前列腺增生疾病中的应用。特别是下述甾体类化合物：24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇或花粉烷甾醇，或含有上述甾体类化合物的植物提取物在制备抑制芳香化酶活性制剂、预防或治疗前列腺增生疾病的药物组合物中的应用。本发明的应用开拓了该化合物新的应用领域，同时也为上述领域的病症的预防和治疗提供了新的途径。

Description

甾体类化合物或含其的植物提取物在防治前列腺增生疾病中的应用

技术领域

本发明涉及一类化合物及含其的植物提取物的新应用，具体的涉及24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇或花粉烷甾醇，或含其的植物提取物在制备抑制芳香化酶活性的制剂、预防或治疗前列腺增生疾病的药物组合物中的应用。

背景技术

良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)是老年男性常见的生理病变，当病变引起排尿梗阻等一系列症状时称为前列腺增生症。国外1075例尸检报告表明：在25～30岁时，10％的男性可在显微镜下见到早期的前列腺增生病变；随着年龄的增长，经组织学诊断的前列腺增生的发生率也相应增加；至51～60岁，其发病率增加为75％；至85岁时，约有90％的男性有组织学上的前列腺增生病变。由上可见，随着我国人口老龄化的加速，由老龄引起的前列腺增生的发病率不断上升，良性前列腺增生症也越来越成为我国亟待解决的重要问题。良性前列腺增生的发病率很高，但其发病机理迄今尚未完全阐明。前列腺增生可能是一组多病因的疾病，其发病机制也是错综复杂的。BPH药物治疗的方向就是针对其各种可能的发病机制和存在因素，目前的理论和文献报道了多个成熟的和新的抗BPH药物的作用靶点，包括α1-肾上腺素受体、5α-还原酶、芳香化酶、磷酸二酯酶-5、糖酵解酶和环氧合酶-2等。

目前，临床上用于治疗前列腺增生的药物主要有：α1-肾上腺受体拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、天然产物制剂等。由于前列腺增生发病原因错综复杂而且需要长期服药，只针对某一特定靶点的α1-受体阻断剂、5α-还原酶抑 制剂等合成药物在长期服用中出现了一定的副作用，如低血压，阳痿、性功能障碍、头痛等，且治疗效果不够理想，从而限制这些药物在前列腺增生治疗中的应用。天然产物制剂具有整体性、多靶点和多成分协同作用的特点，特别是花粉制剂不影响体内激素分泌平衡，毒副作用小，适用于长期服用的特点，越来越受到患者的欢迎。

动物实验和临床研究均表明，雌激素在前列腺增生的发生、发展过程中均扮演着非常重要的角色。随着年龄的增加，男性体内的雌激素较稳定或稍有增加，与青年男性相比，老年男性血浆及前列腺组织内的雌/雄激素比例升高。而这种性激素平衡的改变可能诱导前列腺基质活性从而引BPH。有研究显示，前列腺基质增生中结合状态的雌性激素能够激活细胞合成和分泌细胞外基质蛋白，在细胞周围形成一层致密的纤维结缔组织，进而参与前列腺增生的发生发展。在最初的间质增生中，雌性激素的作用是主要的；在前列腺增生的过程中，雌雄性激素具有协同作用，因而有人称雌性激素是前列腺基质生长的刺激剂。鉴于雌激素在BPH中的重要作用，可使用抑制雌激素合成的方法，如使用芳香化酶抑制剂治疗前列腺增生。男性体内的雌激素主要是由雄激素前体转化而来，芳香化酶P450是这一转变过程的关键酶和限速酶。它是以NADPH为辅酶、细胞色素P450为介质的混合功能氧化酶。理论上，芳香化酶抑制剂具有治疗良性前列腺增生等一切激素依赖性疾病的潜在效果。并且目前已有一些使用芳香化酶抑制剂治疗BPH的实验报道：一种较弱的芳香化酶抑制剂睾内酯的治疗结果显示，50％的BPH患者症状改善，可自行排尿、前列腺体积减小30％，残余尿量明显减少。Michaud报道用一种独特的新型芳香化酶抑制剂TZA-2237进行动物(犬)实验，发现TZA-2237能够有效抑制雄激素和雌激素，可导致犬前列腺的基质细胞萎缩。但关于用芳香化酶治疗BPH的临床报道还不多，其疗效也需进一步验证。随着临床对雌激素在BPH中作用的逐渐认识，开发新的芳香酶抑制剂治疗BPH可能是下阶段药物治疗的方向之一。

近年来，人们通过药效筛选，在天然产物中已发现黄酮、香豆素、萜类、脂肪酸和多酚等多类化合物具有芳香化酶抑制活性，并通过结构改造获得了一系列衍生物。文献未见报道过有关甾体类化合物的抑制芳香化酶活性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是通过抑制芳香化酶活性，为前列腺增生疾病的预防或治疗提供一种新途径，而公开了几种甾体类化合物及含有该化合物的植物提取物的新应用。

本发明公开了几种甾体类化合物：24-亚甲基胆甾醇(1)、环桉烯醇(2)或花粉烷甾醇(3)，或含有该甾体类化合物的植物提取物在制备抑制芳香化酶活性制剂中的应用，以及进一步在制备预防或治疗前列腺增生疾病用的药物组合物中的应用。所述的甾体类化合物在抑制芳香化酶活性方面有良好的效果。

本发明的化合物：24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇和花粉烷甾醇，其可以是粗提的含有24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇和花粉烷甾醇的提取物，也可以是24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇和花粉烷甾醇纯品。

24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇和花粉烷甾醇的结构鉴定可参见文献：Giorgio Bianchi，Carla Murelli，Ercole Ottawano.Maize pollen lipids.phytochemistry 1990；29(3)：739-744。

24-亚甲基胆甾醇的制备方法可参见文献：《圆形短指软珊瑚化学成分的研究》(匡云艳，蓝文健，苏镜娱，曾陇梅，热带海洋学报，2002， 21(3)：95-98)；环桉烯醇的制备方法可参见文献：《岩黄连化学成分》(王奇志，梁敬钰，原悦，中国天然药物，2007，5(1)：31-34)。

花粉烷甾醇的制备方法可参见文献：Devys M，Barbier M.Isolation ofpollinastanol and of a series of delta-7 sterols of pollens of two compositae，Bull.Soc.Chim.Biol.(Paris)1967；49(7)：865-71。

本发明中，所述的植物提取物较佳的为油菜花粉或玉米花粉等花粉提取物。

本发明所述的甾体类化合物或含其的植物提取物，可按常规的药物制备方法，添加常规的赋形剂或药学上可接受的载体，可制得各种剂型的药物组合物。其在各单一活性成分或两个以上活性成分的混合物加入相关的赋形剂，制成片剂、胶囊、软胶囊、液体制剂、颗粒剂、煎膏剂、丸剂、悬浮剂、分散剂、糖浆剂、栓剂、注射剂。其中的赋形剂包括粘合剂，如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素等；崩解剂，如羧甲基纤维素钠、低取代羟丙纤维素等；稀释剂，如淀粉、糖粉、糊精、微晶纤维素、甘露醇、乳糖、大豆油等，润滑剂，如硬脂酸镁、滑石粉；甜味剂，如蔗糖、果糖、天冬甜素等；稳定剂，如羧甲基纤维素钠、环糊精等；防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯、苯甲酸钠等。所述的药物组合物的活性成分的用药剂量较佳的为0.02～4.0mg/Kg体重/天。

本发明的积极进步效果在于：24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇或花粉烷甾醇或含有上述化合物的植物提取物具有明显的抑制芳香化酶活性的作用，可有效防治前列腺增生疾病，同时不影响体内激素分泌平衡，毒副作用小，适于长期服用，对提高人民生活质量有积极和重大意义。

具体实施方式

实施例1

1)超临界提取：取破壁后的油菜花粉1000g，采用超临界二氧化碳萃取， 收集超临界萃取部分，得有效部位，超临界二氧化碳萃取的温度为40℃，压力35MP，夹带剂分别为甲醇、乙醇，其用量为破壁花粉重量的8％。

2)柱层析：将上述有效部位，进行硅胶柱层析，硅胶为300目，用量为有效部位质量的3倍；用洗脱剂石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，梯度为体积比：100∶0，100∶1，100∶5，100∶10，每个梯度洗脱剂用量为3倍柱体积；用正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为氯仿时，Rf＝0.3～0.6的洗脱液，蒸干溶剂，得粗产物。

3)纯化：将上述步骤所得的粗产物进行硅胶柱层析，硅胶为300目，其用量为用粗产物质量的3倍；用石油醚-氯仿进行梯度洗脱，梯度为体积比：1∶2，1∶1，1∶0，每个梯度洗脱剂的用量为3倍柱体积；用正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为氯仿时，Rf分别为0.3、0.4和0.6的洗脱液，蒸干溶剂得化合物；其中Rf＝0.3对应24-亚甲基胆甾醇，Rf＝0.4对应花粉烷甾醇，Rf＝0.6对应环桉烯醇。

实施例2

1)提取：取破壁后玉米花粉1000g，粉碎，以10ml/g玉米花粉的比例用95％(体积百分比)乙醇加热回流3次，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，得流浸膏80g，流浸膏相对密度为1.5，混悬于1000mL水中，分别用石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取，每种溶剂萃取3次，每次萃取溶剂用量为水溶液等体积，收集乙酸乙酯萃取部分，减压回收溶剂，得有效部位。

2)柱层析：将上述有效部位，进行硅胶柱层析，硅胶为400目，用量为用粗产物质量的20倍；用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，梯度为体积比：100∶0，100∶5，100∶10，每个梯度洗脱剂用量为5倍柱体积；用正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为氯仿时，Rf＝0.3～0.6的洗脱液，蒸干溶剂，得粗产物。

3)纯化：将上述步骤所得的粗产物进行硅胶柱层析，硅胶为400目，其用量为用粗产物质量的20倍；用石油醚-氯仿进行梯度洗脱，梯度为体积比： 1∶2，1∶1，1∶0，每个梯度洗脱剂用量为5倍柱体积；用正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为氯仿时，Rf分别为0.3、0.4和0.6的洗脱液，蒸干溶剂得化合物；其中Rf＝0.3对应24-亚甲基胆甾醇，Rf＝0.4对应花粉烷甾醇，Rf＝0.6对应环桉烯醇。

效果实施例

表1说明了24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇、花粉烷甾醇和亚麻酸对芳香化酶的抑制作用。其中，亚麻酸为对比例，购自Sigma公司。

该测试方法是根据文献《芳香化酶抑制剂筛选模型的建立》(全海天，楼丽广，中国药理学通报，2004，20(10)：1189-1192)，用胎盘的微粒体作为芳香化酶的酶源，以[1β-³H]雄烯二酮作为反应底物，通过测得产物³H₂O的放射能来检测芳香化酶的活性，以液体闪烁计数仪计数³H₂O的放射率，计算化合物芳香化酶的抑制作用。

材料和仪器：人的胎盘取自上海市静安区妇产科医院。[1β-3H]雄烯二酮(958.3TBq·mol-1)为Perkin Elmer Life Sciences Inc产品；雄烯二酮，对照品Aminoglutethimide，NADPH为Sigma公司产品；供试样品自制。葡聚糖T70为Amersham Bioscience公司产品；其他试剂均为国产分析纯。

超速离心机购自HITACHI Co，低温离心机购自International EquipmentCo，-86℃超低温冰箱购自Thermo Electron Co，放射性同位素检测仪购自Beckman Co。

表1化合物抑制芳香化酶活性的测试结果

由上表可见，24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇、花粉烷甾醇对芳香化酶均具有相当的抑制作用。

Claims (2)

1.下述甾体类化合物：24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇或花粉烷甾醇，或含有上述化合物的油菜花粉提取物在制备抑制芳香化酶活性制剂中的应用。

2.下述甾体类化合物：24-亚甲基胆甾醇、环桉烯醇或花粉烷甾醇，或含有上述化合物的油菜花粉提取物在制备预防或治疗前列腺增生疾病的药物组合物中的应用。