CN101569627B - 叶酸受体介导的分子靶向光敏剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种分子靶向光敏剂及其制备方法，该分子靶向光敏剂由叶酸卟啉组成，该叶酸卟啉的分子结构式中的R₁、R₂、R₃各自独立地为羟基、直链或支链烃氧基，分子结构式中的n为1-20。其制备方法是由单羟基卟啉与二卤代烃发生烷基化反生成卤代卟啉，在与邻苯二甲酰亚胺钾发生Gabriel反应生成酰胺卟啉，用肼水解该酰胺卟啉得到伯胺卟啉；然后用伯胺卟啉再与叶酸发生酰胺化反应即得到所述的叶酸卟啉。本发明的制备方法使用的原料稳定易得，反应条件温和，产率高，生成的反应物对肿瘤细胞具有很好的靶向作用，部分光敏剂体外光动力抑瘤活性结果显示强效，用于肿瘤靶向性光动力治疗，具有很好的临床应用价值。

Description

叶酸受体介导的分子靶向光敏剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种分子靶向光敏剂及其制备方法，特别是一种由叶酸受体介导的用于肿瘤靶向性光动力治疗的一种分子靶向光敏剂及其制备方法。

背景技术

在我国肿瘤每年的发病率为230万，平均每分钟有3人死于肿瘤，已严重威胁人类健康。肿瘤光动力治疗(Photodynamic Therapy，PDT)是现代肿瘤微创或无创治疗领域的最新进展，其以有效、安全、副作用小、可协同性、可重复性和相对成本较低等优点而倍受重视，并显示强大的生命力。1996年被美国FDA批准用于临床，2003年5月中国SFDA批准这一治疗系统进入临床应用。该疗法主要用于体表肿瘤、消化道肿瘤、肝癌、肺癌及膀胱癌等的治疗，而决定其疗效的一个重要因素是光敏剂的光动力活性。

理想的光敏剂应具有如下特点：1)为单一化合物；2)靶组织选择性高；3)最长的激发可达红区、近红外区，以利于光对组织的渗透，激发后活性氧的产量高；4)在体内的清除时间短，黑暗情况下无毒副作用。现临床上使用的第一代光敏剂一血卟啉衍生物(Photofrin)，在波长大于600nm的红光区吸收较弱，成分复杂，难以实现稳定规范的质量控制，且在体内排泄缓慢，并与胶原纤维有较强的亲和力，使用后皮肤的光敏反应持续1-3个月。现一些已进入临床试验阶段的第二代光敏剂虽都具有结构单一、单态氧产率高、在红光区(波长650-800nm)有较强吸收等优点，但是由于它们的肿瘤靶向性不强，导致除肿瘤组织以外的正常组织，如皮肤等对光敏剂的吸收，使病人在接受了光动力治疗后仍需长时避光以减轻皮肤红肿、色素沉着等光毒反应。为提高卟啉光敏剂的肿瘤靶向性，人们在卟啉光敏剂分子中引入一些具有生物识别功能的效应分子，如短肽(Jain RK，Sarracino DA，RichertC.A.Chem Commun，1998，(3)：423-424)、糖基(Driaf K，Granet R，KrauszP，et al.Can J Chem，1996，74(8)：1550-1563.)、糖肽(Sol V，Blais JC，CarreV，et al.J Org Chem，1999，64(12)：443l-4444)和核苷(Comia M，MenozziM，Ragg E，et al..Tetrahedron，2000，56(24)：3977-3983)等得到一些偶联光敏剂，这些效应分子虽在一定程度上提高了光敏剂的靶向性，但其特异性并不是很强。

叶酸受体(folate receptor，FR)是一种糖基化磷脂酰肌醇连接的膜糖蛋白，研究发现，叶酸受体FR在正常组织中为低表达，而在大部分恶性肿瘤中为高表达，另FR对叶酸及叶酸类似物具有很高的亲和力(KD≈10-10mol·L)，可介导其内吞进入细胞，是生物细胞最具特点的转运过程之一。鉴于叶酸受体在正常组织和恶性肿瘤组织中表达的差异性，利用叶酸受体对叶酸的高亲和性而实现叶酸受体介导的靶向性治疗已引起人们的关注。将反义寡核苷酸(ASON)、抗肿瘤药物、转基因药物等与叶酸或叶酸类似物偶联，通过叶酸受体介导进入细胞内以实现靶向性治疗的报道已不断见诸报端，然而，将光敏剂与叶酸偶联以实现叶酸受体介导的肿瘤靶向性光动力治疗却鲜于报道。

最近，Schneider等以单羧基卟啉化合物为原料，以一个双伯氨基的直链烷烃为中间链，通过两个酰胺键实现了与叶酸分子的键连。生物活性实验表面，卟啉光敏剂的肿瘤靶向性得到了明显提高。[1.Schneider R，Bioorg.Med.Chem.2005，13，2799-2808.2.Gravier J，J.Med.Chem.2008，51，3867-3877]。但由于氨基为活泼基团，易被空气氧化，因而双氨基化合物不稳定，难以保存，且在合成时，需先将一端氨基保护，待另一端氨基进行完化学反应后再脱去保护以进行后续的反应。另外，由于分子中的酯键和酰胺键易被体内的水解酶水解，使其在体内的稳定性降低，体内的循环时间缩短，从而使其生物利用度降低。为此，选用稳定、易得的原料，采用简便、高效的方法研制稳定的肿瘤靶向性卟啉类光敏剂，对提高肿瘤光动力疗法的靶向性具有十分重要的理论和临床意义。

发明内容

本发明的目的之一就是提供一类具有潜在肿瘤靶向光动力治疗活性的分子靶向光敏剂，它对肿瘤细胞具有显著的靶向作用，可通过提高其光动力抑瘤活性，达到减少用药量、降低病人皮肤光毒反应的目的，被体内水解酶水解的几率小，在体内循环的时间长，其生物利用率高。

本发明的目的之二就是提供上述叶酸卟啉的制备方法，它采用稳定、易得的原料，以简便的方法、温和的条件高效地实现了该类光敏剂的制备。

本发明的第一个目的是通过这样的技术方案实现的，该分子靶向光敏剂由叶酸卟啉组成，该叶酸卟啉的分子结构式如下：

其中，

R1、R2和R3各自独立地为甲氧基；

n为1-20。

本发明所述的分子靶向光敏剂的苯环对位上的取代基R₁、R₂和R₃各自独立地为羟基、C_1-5直链烃氧基或C_1-5支链烃氧基，所述的C_1-5直链烃氧基为：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基或戊氧基，所述的C_1-5支链烃氧基为：异丙基、异丁基、叔丁基或异戊基等支链烃氧基。

本发明的分子靶向光敏剂的烃链为C_1-20直链烷烃，推荐为C_1-10直链烷烃。

本发明的分子靶向光敏剂，由于叶酸卟啉化合物分子中只含有一个酰胺键，降低了在体内被水解酶水解的几率，提高了叶酸卟啉在体内的稳定性；更重要的是，通过分子中的叶酸结构单元与肿瘤细胞表面叶酸受体的特异性结合及叶酸受体介导的内吞作用可实现卟啉类光敏剂的肿瘤靶向性，达到减小病人皮肤光敏作用的目的。

本发明的第二个目的是这样实现的，它包括以下三个步骤：

(1)、单羟基卟啉在碱催化下与二卤代烷发生亲核反应生成卤代卟啉；其中，该单羟基卟啉为具有三个取代基R₁、R₂和R₃的单羟基卟啉，所述R1、R2和R3各自独立地为甲氧基；所述的二卤代烷为C_1-20的1，n-二卤代烷，其中n＝1-20；

(2)、由步骤(1)获得的卤代卟啉与邻苯二甲酰亚胺钾发生Gabriel反应，生成酰胺卟啉，随后在非质子溶剂中用肼水解该酰胺卟啉，生成伯胺卟啉；

(3)、由步骤(2)得到的伯胺卟啉与叶酸活化了的γ-羧基发生酰胺化反应，即生成目标化合物叶酸卟啉。

本发明所述的单羟基卟啉合成方法，请参阅《四川大学学报》(自然科学版1999，36(5)：913-917)中发表的题目为“杯[6]芳烃-双卟啉仿酶模型化合物的合成”的文章进行合成；二卤代烷、二环己基碳二亚胺DCC、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺HONb和叶酸均属市售产品，其中：二卤代烷、二环己基碳二亚胺DCC，从中国医药集团上海化学试剂公司购得，N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺(HONb)从Acros Organics公司购买，货号是210050500；叶酸从Sigm-Aldrich公司购买，货号是F7876-1G。邻苯二甲酰亚胺钾的合成方法，请参阅南京大学有机化学教研组译《有机合成》第一集(北京：科学出版社，1965年，94，p369)中报道的方法进行合成；其它试剂如无水碳酸钾、硅胶、氧化铝等和所有溶剂均可以从重庆医药化学试剂公司购买。

本发明制备方法中，步骤(1)中所述的卤代卟啉的制备过程是这样的，按照常规方法，使单羟基卟啉与二卤代烷在碱催化下发生反应生成卤代卟啉；其中单羟基卟啉是与过量的1，n-二卤代烷在N，N-二甲基甲酰胺DMF中，在无水碳酸钾催化下发生反应，反应温度约为0℃至150℃，反应时间为半小时至10小时，反应生成卤代卟啉。卤代卟啉的制备方法选用了稳定、易得的二卤代烷与单羟基卟啉的羟基发生烃氧基化反应得到一个不对称的卤代卟啉，该方法操作简便，产率高；二卤代烷为C_1-20的1，n-二卤代烷(n＝1-20)，推荐为C_1-10的1，n-二卤代烷(n＝1-10)；单羟基卟啉与二卤代烷的摩尔数值比为1：(2-50)，推荐为1：(5-30)；反应的温度为0℃至150℃，推荐为30℃至100℃；反应时间为半小时至10小时，推荐为半小时至5小时。所述的卤代卟啉的制备方法进一步包括对反应生成的卤代卟啉的粗产品进行柱层析分离纯化的步骤，其中：柱层析分离纯化时所用的固定相为硅胶或氧化铝，所用的流动相为氯仿或二氯甲烷。

本发明的制备方法中，步骤(2)中的伯胺卟啉的制备过程是这样的：邻苯二甲酰亚胺钾是一种已知的化合物或者是按照已知方法制备的化合物，按照常规方法，使邻苯二甲酰亚胺钾与卤代卟啉发生Gabriel反应，反应生成的酰胺卟啉在肼的作用下发生水解反应生成伯氨基取代的伯胺卟啉；在对酰胺卟啉进行水解时，我们发现采用常规方法(请参阅李家明，汪志勇，ZengL，Zhou M M，化学学报，2006，64(11)，1151-1156；黄红霞，林原斌，精细化工中间体，2007，37(3)，70-72)在质子溶剂中进行水解，发现由于酰胺卟啉在质子性溶剂如乙醇中几乎不溶解，使得反应难以发生。为了使酰胺卟啉在质子溶剂中水解，本领域的技术人员惯用的手段是在质子性溶剂中添加相转移催化剂，如：十六烷基三甲基溴化铵，本发明采用上述惯用手段后，虽然酰胺卟啉发生了反应，但是反应生成物不是合乎需要的目标产物。为了解决这个技术问题，我们进行了大量的试验，发现酰胺卟啉能够在非质子性溶剂如：四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、乙睛、二氧六环、苯、二甲苯等中发生水解反应，生成伯胺卟啉，且反应时间短，产率高。上述的卤代卟啉与邻苯二甲酰亚胺钾反应时，二者的摩尔数值比为1∶(1-40)，推荐为1∶(2-20)；反应温度为0℃至160℃，推荐反应温度为30℃至120℃；反应时间为0.5小时至24小时，推荐为2小时至12小时；用肼水解的温度为0℃至120℃，推荐为25℃至100℃；反应时间为0.5小时至24小时，推荐为2小时至12小时。

上述伯胺卟啉的制备过程中，还包括对酰胺卟啉水解反应后生成的伯胺卟啉粗产物进行柱层析分离纯化的步骤，柱层析分离纯化所用的固定相为硅胶或氧化铝，所用的流动相为非质子性溶剂与质子溶剂的混合物，其中：所述的非质子性溶剂是：氯仿或二氯甲烷，质子性溶剂是：甲醇或乙醇，非质子性溶剂与质子性溶剂的混合体积比为：(1-500)∶1。

本发明所述的叶酸卟啉的制备方法中，活化叶酸γ-羧基的方法有多种，本发明采用如下方法：即在室温黑暗条件下，叶酸的γ-羧基与N，N-二环己基碳二亚胺DCC和N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺HONb反应生成一个活性酯，即生成叶酸活化了的γ-羧基，该活性酯再与伯胺卟啉在室温发生酰胺化反应生成目标化合物叶酸卟啉。其中：叶酸γ-羧基活化反应的温度为-20℃-60℃，推荐为0℃-50℃；反应时间为2小时-48小时，推荐为5小时-36小时；活性酯与伯胺卟啉反应的温度为-20℃-60℃，推荐为0℃-50℃；反应时间为2小时-48小时，推荐为5小时-36小时；叶酸与伯胺卟啉的摩尔数值比为(1-10)∶1，推荐为(1-5)∶1。

通过上述方法，我们得到了用醚氧键和一个酰胺键将一个苯基对位上带有不同取代基的卟啉环与一分子叶酸键连在一起的叶酸卟啉，该叶酸卟啉只含有一个酰胺键，稳定性高，在体内被水解酶降解的几率减少，使其在体内的循环时间延长，生物利用度显著增强。

为了更好地制备出本发明的分子靶向光敏剂，上述制备方法中：

(1)、单羟基卟啉的苯环上取代基R₁、R₂、和R₃分别为羟基、甲氧基、乙氧基；二卤代烷为1，3-二卤代烷(n＝3)；单羟基卟啉与二卤代烷的摩尔数值比为1∶10，二者发生反应的温度为80℃，反应时间为2.5小时，反应得到的卤代卟啉粗产物用柱层析分离纯化时所用的固定相为硅胶，流动相为氯仿。

(2)、卤代卟啉与邻苯二甲酰亚胺钾反应的摩尔数值比为1∶10，反应的温度为100℃，反应时间为10小时；伯胺卟啉用肼水解时的温度为70℃，反应时间为6小时。伯胺卟啉粗产物用柱层析分离纯化时所用的固定相为硅胶，流动相为氯仿和甲醇的混合物，混合溶剂中氯仿与甲醇的体积比(1-100)∶1。

(3)、本发明的制备方法中所述的水解时所用的非质子溶剂是四氢呋喃。

(4)、本发明的制备方法中，叶酸γ-羧基活化时的温度为25℃，反应时间为12小时；活性酯与伯胺卟啉反应的温度为25℃，反应时间为24小时。

由于采用了上述技术方案，本发明具有如下的优点：

1.分子中酰胺键的减少增加了其在体内的稳定性；

2.分子中叶酸结构单元的引入使其可在叶酸受体的介导下实现卟啉类光敏剂对肿瘤细胞的主动靶向性；

3.选用的原料稳定易得，制备方法简便，条件温和，产率高。

本发明的附图说明如下：

图1为本发明分子靶向光敏剂的分子结构图；

图2为本发明分子靶向光敏剂的合成流程图；

图3为实验例4中的激光共聚焦照片；

图中，a为正常对照组，b为2×10^-5M溴卟啉对照组，c为2×10^-5M叶酸卟啉实验组，d为2×10^-5M溴卟啉+2×10³M叶酸实验组，e为2×10^-5M叶酸卟啉+2×10³M叶酸实验组

具体实施方式

下面结合附图和实验例对本发明上述的方法作相应的说明：

如图1所示，本发明所述的该分子靶向光敏剂由叶酸卟啉组成，该叶酸卟啉的分子结构式如下：

其中，

R1、R2和R3各自独立地为甲氧基；

n为1-20。

如图2所示，本发明所述的分子靶向光敏剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)、单羟基卟啉在碱催化下与二卤代烷发生亲核反应生成卤代卟啉；其中，该单羟基卟啉为具有三个取代基R₁、R₂和R₃的单羟基卟啉，所述R1、R2和R3各自独立地为甲氧基；所述的二卤代烷为C_1-20的1，n-二卤代烷，其中n＝1-20；

(2)、由步骤(1)获得的卤代卟啉与邻苯二甲酰亚胺钾发生Gabriel反应，生成酰胺卟啉，随后在非质子溶剂中用肼水解该酰胺卟啉，生成伯胺卟啉；

(3)、由步骤(2)得到的伯胺卟啉与叶酸活化了的γ-羧基发生酰胺化反应，即生成目标化合物叶酸卟啉。

实验例1：溴代卟啉的合成

在110mL的N，N-二甲基甲酰胺溶液中，加入新焙制的碳酸钾16.1mmol，、单羟基卟啉2.1mmol和1，3二溴丙烷30mmol，N₂保护于80℃搅拌反应2h，待反应液稍冷，倾入100mL的氯化钠水溶液中，静置2h，抽滤，大量水洗涤，少量95％(体积比)乙醇洗涤，真空干燥，得到粗产品。粗产品用柱色谱分离(硅胶H，氯仿洗脱)，收集第一紫色带，减压浓缩后用氯仿-石油醚重结晶，得到1.77g溴代卟啉，收率：88％，为紫红色固体。¹HNMR(CDCl₃)δ：8.85(s，8H，β-H)，8.77-8.21(d，8H，Ar-H)，7.30-7.25(d，8H，Ar-H)，4.34-4.13(t，2H，BrCH₂)，4.10(s，9H，3×OCH₃)，3.83-3.69(t，2H，OCH₂)，2.54-2.14(m，2H，CH₂)，-2.71(s，2H，porphyrin-NH)；S(ESI)m/z：841[M⁺]。

实验例2：伯胺卟啉的合成

在100mL N，N-二甲基甲酰胺溶液中，加入溴代卟啉924mg、邻苯二甲酰亚胺钾375mg，在氩气保护下于100℃搅拌反应9h后将反应液倒入NaCl溶液中静置数小时，抽滤，水洗三次后用少量乙醇洗两次，真空干燥得到紫红色固体，即酰胺卟啉粗产物。该粗产物经柱色谱分离(SiO₂，CHCl₃)，收集第二紫色带浓缩后得中间体880mg。将该中间体加入50ml四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二氧六环或二氯甲烷后，在氩气保护下加入水合肼于75℃油浴中搅拌反应6小时，抽干反应液，再用CHCl₃溶解固体，水洗三次后用无水硫酸钠干躁，浓缩溶液，柱色谱分离(SiO₂，CHCl₃∶MeOH＝50∶1，25∶1，10∶1)，收集第三浓紫色带，浓缩溶剂得到产品伯胺卟啉653mg，收率：86.17％。¹H NMR(CDCl₃)δ∶8.86(s，8H，β-H)，8.13-8.08(d，8H，Ar-H)，7.89-7.87(d，2H，Ar-H)，7.73-7.71(d，2H，Ar-H)，7.29-7.23(d，8H，Ar-H)，4.29-4.26(t，2H，NCH₂)，4.08(s，9H，3×OCH₃)，3.91-3.88(t，2H，OCH₂)，2.14-2.05(m，4H，2×CH₂)，-2.71(s，2H，porphyrin-NH)；MS(EPS)m/z：792[M⁺]。

实验例3：叶酸卟啉的合成

将83.5mg叶酸、39.6mg DCC和34.4mg HONb加入8ml DMSO中，在氩气保护下于室温避光搅拌过夜，过滤；滤液中加入150mg伯胺卟啉，再于室温下避光搅拌反应24h，停止反应，将反应液倒入5％的NaHCO₃溶液中静置数小时，抽滤，固体水洗三次后真空干燥得土红色固体。将该土红色固体倾入CHCl₃中，搅拌，过滤，CHCl₃洗至滤液为无色，真空干燥得到125mg、收率为54％的叶酸卟啉，为土红色固体。1H NMR(DMSO-d6)：d8.89-8.77(m，7H)，8.64(s，1H)，8.32-8.17(m，7H)，7.90-7.78(m，13H)，7.66(d，J＝8.8Hz，2H)，6.95(br s，2H，NH)，6.64(d，J＝8.8Hz，2H)，4.48(d，J＝6.0Hz，2H)，4.93-4.75(m，1H)，3.04(br td，2H)，2.76(d，J＝6.2Hz，2H)，2.08-1.60(m，4H)，1.56-1.18(m，8H)，-2.96(s，2H，NH)；MS(EPS)m/z：1215.48[M⁺]。

实验例4：本发明对宫颈癌Hela细胞株的靶向作用

将Hela细胞株(5×10⁵个/孔)接种于置于24孔培养板的盖玻片上(1×1cm)，用含10％胎牛血清的无叶酸RPMI1640培养基培养48小时。实验分为5个组：正常对照组，2×10^-5M溴卟啉对照组，2×10^-5M叶酸卟啉实验组，2×10^-5M溴卟啉+2×10³M叶酸实验组，2×10^-5M叶酸卟啉+2×10³M叶酸实验组；各组加药后于CO2孵箱培养24h，去除培养基，PBS洗涤3次，3.7％多聚甲醛室温固定15min，PBS洗涤两次，激光共聚焦观察结果。对照图3，a为正常对照组，b为2×10^-5M溴卟啉对照组，c为2×10^-5M叶酸卟啉实验组，d为2×10^-5M溴卟啉+2×10³M叶酸实验组，e为2×10^-5M叶酸卟啉+2×10³M叶酸实验组。如图3所示，溴卟啉只是少量地聚集在细胞表面，过量叶酸的加入不明显改变其聚集量；而叶酸卟啉被大量内吞进入肿瘤细胞中，且这种内吞作用被大量加入的自由叶酸所抑制，说明这种内吞作用是被肿瘤细胞表面的叶酸受体介导的。

Claims (9)

1.一种分子靶向光敏剂，其特征在于：该分子靶向光敏剂由叶酸卟啉组成，该叶酸卟啉的分子结构式如下：

其中，R1、R2和R3各自独立地为甲氧基；n为1-20。

2.如权利要求1所述的分子靶向光敏剂的制备方法，其特征在于：该方法包括以下三个步骤：

(1)、单羟基卟啉在碱催化下与二卤代烷发生亲核反应生成卤代卟啉；其中，该单羟基卟啉为具有三个取代基R₁、R₂和R₃的单羟基卟啉，所述R1、R2和R3各自独立地为甲氧基；所述的二卤代烷为C_1-20的1，n-二卤代烷，其中n＝1-20；

(2)、由步骤(1)获得的卤代卟啉与邻苯二甲酰亚胺钾发生Gabriel反应，生成酰胺卟啉，随后在非质子溶剂中用肼水解该酰胺卟啉，生成伯胺卟啉；

(3)、由步骤(2)得到的伯胺卟啉与叶酸活化了的γ-羧基发生酰胺化反应，生成所述的叶酸卟啉。

3.如权利要求2所述的分子靶向光敏剂的制备方法，其特征在于：所述的非质子溶剂为极性溶剂或非极性溶剂，其中：

极性溶剂是：四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、乙睛或者二氯甲烷；

非极性溶剂为：二氧六环、苯、二甲苯、三氯甲烷或四氯化碳。

4.如权利要求2或3所述的分子靶向光敏剂的制备方法，其特征在于：卤代卟啉的制备方法为：所述的单羟基卟啉与过量的1，n-二卤代烷在N，N-二甲基甲酰胺中，且在无水碳酸钾催化下反应得到卤代卟啉，反应温度为0℃-150℃，反应时间为0.5小时-10小时。

5.如权利要求4所述的分子靶向光敏剂的制备方法，其特征在于：所述的单羟基卟啉与二卤代烷的摩尔数值比为1：(2-40)。

6.如权利要求4所述的分子靶向光敏剂制备方法，其特征在于：所述的卤代卟啉的制备方法进一步包括对反应生成的卤代卟啉的粗产品进行柱层析分离纯化的步骤，其中：柱层析分离纯化时所用的固定相为硅胶或氧化铝，所用的流动相为氯仿或二氯甲烷。

7.如权利要求2或3的分子靶向光敏剂的制备方法，其特征在于：所述伯胺卟啉的制备方法包括以下步骤：

(1)、卤代卟啉与邻苯二甲酰亚胺钾在二甲基甲酰胺(DMF)溶剂中发生反应，其中：卤代卟啉与邻苯二甲酰亚胺钾的摩尔数值比为1∶(1-40)，反应时间为0.5小时-24小时，反应温度为0℃-160℃；

(2)、将步骤(1)得到的酰胺卟啉粗产物进行柱层析分离纯化后得到酰胺卟啉中间体；

(3)、将步骤(2)中得到酰胺卟啉中间体在非质子溶剂中用肼进行水解反应，即得到伯胺卟啉，其中：水解反应的反应温度为0℃-120℃，反应时间为0.5小时-24小时。

8.如权利要求7所述的分子靶向光敏剂的制备方法，其特征在于：所述的柱层析分离纯化中所用的固定相为硅胶或氧化铝，所用的流动相为非质子溶剂与质子溶剂的混合物，其中：

所述的非质子性溶剂是：氯仿或二氯甲烷；

质子性溶剂是：甲醇或乙醇；

所述的非质子性溶剂与质子性溶剂的混合体积比为：(1-500)∶1。

9.如权利要求2或3所述的分子靶向光敏剂的制备方法，其特征在于：所述叶酸卟啉的制备方法包括以下两个步骤：

(1)、在二甲基亚砜溶剂中，用叶酸的γ-羧基与N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺(HONb)发生反应生成活性酯，即叶酸活化了的γ-羧基，其中：反应温度控制在-20℃-60℃，反应时间控制在2小时-48小时；

(2)、由步骤(1)得到的活性脂与伯胺卟啉在二甲基亚砜溶剂中反应生成所述的叶酸卟啉，其中：反应温度控制在-20℃-60℃，反应时间控制在2小时-48小时，叶酸与伯胺卟啉的摩尔数值比为(1-10)∶1。

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