CN101564410B - 从小蓟中提取抗肿瘤活性物质的方法以及小蓟抗肿瘤药物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了从小蓟中提取纯化抗肿瘤活性物质的方法,是用60%~80%乙醇超声提取或依次使用不同浓度的乙醇组合提取得到粗提品,水溶后用石油醚萃取,剩余水相过HP-20型大孔吸附树脂洗脱,收集45%乙醇洗脱液得到小蓟中抗肿瘤活性物质。本发明首次验证小蓟的抗肿瘤功效组分主要存在于45%乙醇洗脱部分,并依此得到以该活性部位制成的药品和保健品。实验表明本发明提取的活性组分有明显的抗肿瘤功能,又由于小蓟本身就可食用,所以其具有无毒、安全等特点,以上述活性组分可以得到有效的抗肿瘤新药和/或抗肿瘤保健品,具有高效、无毒且原料廉价易得的特点。
Description
技术领域
本发明涉及医药和保健领域,具体涉及药食两用小蓟中抗肿瘤活性部位的提取和纯化工艺以及小蓟中抗肿瘤活性物质的医药和保健用途。
背景技术
在上个世纪末到本世纪初,恶性肿瘤发病率在各国高居不下。从上个世纪50年代以来,由于医疗技术的改进,使心脏病等其它慢性疾病的死亡率大大降低,而肿瘤仍然没有任何下降的趋势。由于恶性肿瘤发病比较隐匿,肿瘤病因复杂病理变化多样,发现时常为晚期,因此给社会和家庭造成了沉重的负担。同时,由于恶性肿瘤治疗复杂,患者家庭等很多相关人群为此付出了沉重的代价。目前肿瘤是人类死亡的第一杀手,研究如何消灭癌症、让癌症病人能生活的更好,是医药领域中的研究重点,因此寻找高效、低毒、选择性强的有临床应用价值的理想的新型抗肿瘤药物是一项长期的世界性科学研究的前沿和热点,尤其从药食两用的无毒且原料廉价易得的中药里寻找抗肿瘤药物已成为抗肿瘤药物开发的重要方向与希望所在。
本发明研究对象——小蓟(Cirsium Setosum(Willd.)MB.)为菊科植物刺儿菜的干燥地上部分,全国各地均产,主产于安徽、山东、江苏等省。《中国药典》2005版记载其性甘、苦,味凉,归心、肝经;具有凉血止血、祛瘀消肿之功效。可用于治疗衄血,吐血,尿血,便血,崩漏下血,外伤出血,痈肿疮毒等,为历代中医临床的常用药之一。小蓟同时也可以食用,作为药食两用的野生植物资源含有丰富的营养物质,为人们喜爱的民间野菜。
有关小蓟临床应用的报道颇多,如单独大剂量、长期服用用来降血压,未见不良反应的报告,也无明显毒副作用且安全(张京.小蓟的降压作用及其机制分析.中医药临床杂志,2005,7(4):344-344.;张京.小蓟治疗原发性高血压3例报告.安徽医学,2005,26(4):339-339.;李桂敏,田林忠.小蓟花生酒治疗原发性高血压100例疗效观察.国医论坛,1989,4(5):31-31.);和其它中药配伍使用可治疗慢性活动性肝炎和肝硬化;用小蓟作为药引子可以治疗泌尿生殖系统疾病,被广泛地用于治疗尿路感染、增生性肾炎、急性肾小球肾炎、肾功能衰竭、血尿、血精症等各种泌尿生殖系统疾病;采用以小蓟单方叶鲜汁治疗鼻妞、出血性胃炎和胃切除后近期出血效果显著,与其它药物组方可以治疗外伤出血、血尿、外阴肿瘤出血、和多种各种不明原因的出血症等;用小蓟还可治疗顽固性失眠,疗效确切,未发现不良反应,一般服用15min即可入睡,维持时间8小时以上,如果中断睡眠或醒后,无不适感,白天对思维和情绪无影响;将小蓟与蓖麻籽捣烂治疗关节炎,疗效确切,且经济方便;用小蓟膏治疗疖疮,疗效好,且对皮肤无刺激性,易于清洗。小蓟饮子加减可治疗杀虫脒中毒血尿;小蓟饮子加减治可疗过敏性紫癜,疗效确切;小蓟饮子加减治疗膀胱癌具有较好的效果。
小蓟的现代研究始于20世纪60年代。在化学成分方面,从中分离鉴定了包括黄酮类(14个)、甾体类(5个)、三萜类(2个)和有机酸衍生物类(5个)等物质,在药理学方面,主要是对小蓟提取物的研究报道,表明小蓟水或乙醇提取物具有抗氧化、降压、止血和对心血管系统的作用等(陈毓,丁安伟,杨星昊,张丽.小蓟化学成分药理作用及临床应用研究述要.中医药学刊,2005,23(4):614-615.),同时仅有一篇文献报道小蓟水提液可使人白血病细胞K562、肝癌细胞HepG2、宫颈癌细胞Hela和胃癌细胞BGC823的细胞形态发生皱缩、变圆、脱壁、裂碎等变化,生长受到明显抑制,抑制率最高可达86.03%,首次报道了小蓟的抑癌作用(李煜,王振飞,贾瑞贞.小蓟水提液对4种癌细胞生长抑制作用的研究.中华中医药学刊,2008,26(2):274-275.)。但是该文献没有提示小蓟具有抑癌作用的活性组分以及其它提取方法。
关于小蓟中化合物的提取,通常为水提,醇提方法中最具有代表性的方式是先经乙醇提取,然后依次使用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取,从不同的萃取部位进行化学成分的分离(潘珂,尹永芹,孔令义.小蓟化学成分的研究.中国现代中药,2006,8(4):7-9.),这些文献确证了从不同部位获得的化合物,但没有揭示其药物活性。也有文献介绍大孔吸附树脂对小蓟总黄酮成分的分离纯化作用(杨星昊,刘海,丁安伟.大孔吸附树脂分离纯化小蓟总黄酮的研究.浙江中医杂志,2006,41(1):50-52.),提示了富集的黄酮类化合物具有止血作用。这些文献均没有提示小蓟提取物具有抑癌作用以及活性部位,并且,从提取方法上,均为实验室研究工艺,例如多次萃取过程的繁杂、大孔树脂的预处理等,不适用产业化生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能提取小蓟中抗肿瘤活性部位并纯化获得抗肿瘤活性物质的方法,进而提供从小蓟中获取的抗肿瘤活性物质和小蓟抗肿瘤药物。
本发明首先提供一种小蓟中抗肿瘤活性物质的提取方法,采用以下步骤:
步骤一:从小蓟干粉中用乙醇超声提取,去除乙醇得浓缩液;
步骤二:对浓缩液先用石油醚多次萃取,水相再过大孔吸附树脂吸附,然后分别用水和45%乙醇洗脱,收集45%乙醇洗脱液;
步骤三:减压回收45%乙醇洗脱液得到小蓟中抗肿瘤活性物质。
其中,步骤二所述大孔吸附树脂优选为HP-20型大孔吸附树脂。
其中,所述步骤一浓缩液以下述过程获取:向小蓟干粉中加入乙醇溶液分多次超声提取,合并滤液,过滤去渣,滤液减压浓缩至乙醇全部蒸出即可。这里,使用质量浓度为60%~80%单一浓度的乙醇多次提取,优选用80%的乙醇单一重复提取三次。或者,在65%~95%范围内依次由高浓度至低浓度使用两种或两种以上质量浓度的乙醇溶液组合提取;优选依次使用95%、80%和65%乙醇组合提取三次。
上述方法获取的小蓟抗肿瘤活性物质也是本发明内容之一。该抗肿瘤活性物质为小分子物质,主要为醇提物经石油醚萃取后的剩余水相经大孔吸附树脂吸附后45%乙醇洗脱液的浓缩液或干浸膏。
本发明通过体外活性实验的跟踪检测,最终确定了一条最佳的提取和纯化的工艺路线,该提取和纯化方法具有提取量大、部位准确的特点,获得的活性物质效果明显,可作为一种高效、低毒且原料廉价易得的抗肿瘤药物或保健品。
本发明采用MTT方法,在包括人肺癌细胞、人肝癌细胞、人结肠癌细胞、人胃癌细胞和人卵巢癌细胞等多种体外细胞毒活性模型上,检测小蓟中抗肿瘤活性物质的抗肿瘤效果,寻找到了小蓟中的抗肿瘤活性部位。
本发明还提供了一种抗肿瘤新药,其中以上述活性部位作为药用活性成分。所述药物为小蓟抗肿瘤片剂、胶囊剂、口服液或滴丸剂;其中:
小蓟抗肿瘤片是按1∶1的重量比例将小蓟抗肿瘤活性物质的干浸膏和淀粉混合,按制片工艺制成小蓟抗肿瘤片成品;
小蓟抗肿瘤胶囊是按1∶0.05的重量比例将小蓟抗肿瘤活性物质的干浸膏和硬脂酸镁混合,按制胶囊工艺制成小蓟抗肿瘤胶囊成品。
本发明还提供了一种抗肿瘤功能的保健品,其中以上述活性部位作为活性成分。
本发明提出了从小蓟中提取抗肿瘤活性物质的方法,首次提出小蓟的主要抗肿瘤功效组分存在于乙醇提取液蒸去醇后用石油醚萃取后的剩余水相,再经大孔吸附树脂吸附的45%乙醇洗脱部位,并依此得到以该活性部位制成的药品和保健品。实验表明本发明提取的活性部位有明显的抗肿瘤功能,又由于小蓟本身就可食用,所以其具有无毒、安全等特点,以此活性部位作为活性成分可以得到有效的抗肿瘤新药和/或抗肿瘤保健品,具有高效、无毒且原料廉价易得的特点;本发明活性部位的提取纯化工艺适应工业生产要求,粗提物采用混合醇提取以提高产量,富集过程先经石油醚萃取再通过大孔吸附树脂吸附,提高纯化效率,并且,纯化中采用优选的HP-20型大孔吸附树脂,可以直接上柱操作,且树脂不需繁琐的预处理,均为活性部位提取的产业化生产提供了好的措施。本发明为抗肿瘤的防治开辟了一条新途径。
附图说明
图1为小蓟中活性抗肿瘤部位的提取和纯化工艺路线图。
具体实施方式
本发明从抗细胞毒活性出发,对小蓟的药效部位进行了研究,经采用MTT方法,在包括人肺癌细胞、人肝癌细胞、人结肠癌细胞、人胃癌细胞和人卵巢癌细胞等多种体外细胞毒活性模型上,对小蓟的醇提物进行了细胞毒活性测试。实验表明,用不同浓度的醇提取的浸膏对人卵巢癌细胞均有选择性细胞毒活性。将乙醇粗提物的浸膏分散在水中,用石油醚萃取后,水相经过大孔吸附树脂HP-20吸附和不同浓度的乙醇梯度洗脱后,再对以上分离得到的各个部位进行细胞毒活性的测试,发现各部位的抗细胞毒活性存在明显差异,表明小蓟中存在具有不同抗细胞毒的多种活性成分。要研究清楚具有不同抗细胞毒的活性成分分别是什么,首先需研究清楚小蓟的主要抗细胞毒活性部位,进而找到真正量较大的主要抗细胞毒活性物质,为开发利用廉价易得的资源提供科学依据,对开发新型抗肿瘤药物具有潜在的显著应用价值。
本发明提取小蓟中抗肿瘤活性部位的方法,为从小蓟粗粉中尽可能多的将原料中的抗肿瘤活性物质提出,再通过后续适于产业化的分离纯化工序来富积抗肿瘤活性物质。具体的,首先用乙醇(如60~80%的乙醇或组合浓度乙醇)超声提取得到粗提物浸膏,浸膏水溶后用小极性溶剂(如石油醚)萃取,剩余水相过大孔吸附树脂,再依次用水、45%乙醇洗脱;将45%乙醇洗脱液减压浓缩成膏后就可以得到小蓟中大部分的抗肿瘤活性组分。本发明从小蓟中获得抗肿瘤活性物质的工艺路线参见图1所示。
本发明中,浓度“%”均指质量百分比浓度。
体外抗肿瘤活性的测定
a.实验材料
①被测样品:本发明实施例获得的系列小蓟提取物,用DMSO溶解。
②MTT(四甲基偶氮唑盐):用新鲜的RRM1640培养液(Serva公司生产)配制。
③体外培养HCT-8,Bel-7402,BGC-823,A549和Ketr3细胞株(医科院药物研究所提供)。
④5-氟脲嘧啶为对照品。
b.实验方法
①细胞培养
采用含有10%牛胎血清、100U/ml青霉素和100mg/L的RRMI1640培养基,将细胞在37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中传代培养,实验选用对数生长期细胞。
②MTT法
取对数生长期细胞,消化后充分吹打成单细胞悬液,计数后稀释成1×104cell/ml,接种于96孔培养板中,100μl/孔。每一被测样品设4-5个浓度级别,然后在实验孔中加入100μl培养基和不同浓度级别的被测样品,每一浓度级别平行3孔。对照组加入等体积溶剂(DMSO)。将96孔培养板置于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养96小时后,弃去培养液,每孔加入新鲜配制的含0.20mg/mlMTT的无血清培养基,37℃下继续培养4小时后,离心,除去上清液。每孔加入150μl DMSO溶解甲瓒(formazan,是一种蓝紫色结晶)沉淀,置微量震荡器上震荡5分钟使其充分溶解。在BIORAD 550型酶标仪上测定570λm处的光密度值。按下列公式计算肿瘤细胞生成抑制率,再以药物浓度对肿瘤细胞生成抑制率作图得到计量曲线,从曲线上读取药物的半数抑制浓度(IC50)值。
肿瘤细胞生长抑制率(%)=(1-实验孔测定值/对照孔测定值)×100%
实施例一:小蓟中抗肿瘤活性部位的粗提
本发明实施例中使用的小蓟来自安徽九华山。
称六份小蓟干粉,每份200g,分为六组,每组加小蓟重量12倍的不同质量浓度的乙醇溶液超声提取,每次1小时,共提取三次,合并滤液,过滤去渣,滤液减压浓缩得粗提品浸膏,具体分组操作如下:
第一组:200g小蓟干粉,每次加2400ml 95%乙醇超声提取1小时,共提取三次,过滤,合并三次滤液,减压浓缩得干浸膏10.2g。
第二组:200g小蓟干粉,每次加2400ml 80%乙醇超声提取1小时,共提取三次,过滤,合并三次滤液,减压浓缩得干浸膏11.4g。
第三组:200g小蓟干粉,每次加2400ml 70%乙醇超声提取1小时,共提取三次,过滤,合并三次滤液,减压浓缩得干浸膏9.3g。
第四组:200g小蓟干粉,每次加2400ml 60%乙醇超声提取1小时,共提取三次,过滤,合并三次滤液,减压浓缩得干浸膏8.1g。
第五组:200g小蓟干粉,每次加2400ml 50%乙醇超声提取1小时,共提取三次,过滤,合并三次滤液,减压浓缩得干浸膏6.7g。
第六组:200g小蓟干粉,第一次加2400ml 95%乙醇超声提取1小时,第二次加2400ml 80%乙醇超声提取1小时,第三次加2400ml 65%乙醇超声提取1小时,共提取三次,过滤,合并三次滤液,减压浓缩得干浸膏12.5g。
用MTT法测定六组小蓟粗提物分别对人结肠癌细胞、人肝癌细胞、人胃癌细胞、人肺癌细胞和人卵巢癌细胞的细胞毒活性。分组精确称取一定量小蓟粗提物样品,按前述方法将被测样品配备好后进行测试,测试结果见表1:
表1:小蓟粗提物的体外肿瘤细胞毒活性筛选结果(IC50μl/ml)
注:1、HCT-8为人结肠癌细胞,Bel-7402为人肝癌细胞,BGC-823为人胃癌细胞,A549为人肺癌细胞,A2780为人卵巢癌细胞。
2、>50表明不具有抗细胞毒活性。
该组实验表明,超声提取过程中,使用质量浓度为95%、80%和65%的乙醇组合(第六组)提取,粗提物在体外MTT实验中对人胃癌细胞、人肺癌细胞和人卵巢癌细胞的抗细胞毒活性作用明显;从抗细胞毒活性作用效果看,使用质量浓度为60~80%乙醇的单一浓度提取,也可以达到较好的实验效果。
另一方面,从六组粗提品浸膏提取量看,混合醇提(第六组)提取量最高,可达12.5克。当然,不同浓度的乙醇组合提取的方式不限于第六组列举的一种,可以是其它从高浓度至低浓度的乙醇的组合,可以在操作中灵活掌握,其原则是组合提取时活性物质的提取量有所增加,表明能较充分地提取出了小蓟中的活性物质,同时提取物对人胃癌细胞、人肺癌细胞和人卵巢癌细胞的抗细胞毒活性作用也很明显。因此,比较提取量和抗细胞毒活性的双重效果,本发明粗提过程优化的醇提方案为不同浓度乙醇组合提取,优选依次用95%、80%和65%的不同浓度的乙醇超声提取,每次提取的溶剂用量优化为药材量的12倍,每次提取一小时,合并三次滤液即得粗提物。
实施例二、小蓟中抗细胞毒活性物质的分离和纯化
本实施例进一步确定粗提物中抗细胞毒活性物质的集中部位,并从工业应用角度简化分离和纯化抗细胞毒活性物质的操作。
取95%、80%和65%乙醇组合提取的小蓟粗提浸膏(实施例一的最后一组粗提物)24g超声水溶至240ml,先用石油醚萃取,每次720ml连续萃取4~6次,合并萃取液,得到石油醚萃取部分(分离部位1)和水相部分;
将水相部分平均分成相同体积的两份,其中的1/2水相部分过HP-20型大孔吸附树脂,分别用水、30%乙醇、60%乙醇和95%乙醇依次洗脱,收集各段洗脱液(其中:分离部位2为纯水洗脱部分,分离部位3为30%乙醇洗脱部分,分离部位4为60%乙醇洗脱部分,分离部位5为95%乙醇洗脱部分);另1/2水相部分同样过HP-20型大孔吸附树脂,分别用水、45%乙醇、60%乙醇和95%乙醇依次洗脱,收集各段洗脱液(其中:分离部位6为纯水洗脱部分,分离部位7为45%乙醇洗脱部分,分离部位8为60%乙醇洗脱部分,分离部位9为95%乙醇洗脱部分)。将上述石油醚萃取部分和各部分洗脱液减压浓缩成膏后,精确称取,用MTT法测定。
测定时,精确称取各部分样品,用MTT法测定不同样品对人结肠癌细胞、人肝癌细胞、人胃癌细胞、人肺癌细胞和人卵巢癌细胞的细胞毒活性。测试结果见表2:
表2:小蓟萃取和分离物的体外肿瘤细胞毒活性筛选结果(IC50μl/ml)
注:1、HCT-8为人结肠癌细胞,Bel-7402为人肝癌细胞,BGC-823为人胃癌细胞,A549为人肺癌细胞,A2780为人卵巢癌细胞。
2、>50表明不具有抗细胞毒活性。
实验中,从分离部位2到分离部位5可以看出,过HP-20型大孔吸附树脂,分别用水、30%乙醇、60%和95%乙醇依次洗脱后,抗细胞毒活性物质在30%乙醇洗脱部分和60%乙醇部分都有;而从分离部位6到分离部位9可以看出,过HP-20型大孔吸附树脂,分别用水、45%、60%和95%乙醇依次洗脱后,抗细胞毒活性物质却高度集中在45%乙醇洗脱部分,且45%乙醇洗脱部分(分离部位7)对人胃癌细胞、人肺癌细胞和人卵巢癌细胞的细胞毒活性均有较好的作用。因此,依据本实施例,将分离部位7洗脱的部分优选作为本发明的抗细胞毒活性物质。
通过本实施例,说明本发明已经非常精准的确证了小蓟抗细胞毒活性部位,较以往文献介绍内容有重大突破。本发明虽暂没有鉴定通过实施例二富集得到的抗细胞毒活性物质具体为哪些化合物,但通过分析已有文献(杨星昊,刘海,丁安伟.大孔吸附树脂分离纯化小蓟总黄酮的研究.浙江中医杂志,2006,41(1):50-52.)可以了解,该部分富集的主要不是黄酮类化合物(按文献结论,黄酮类化合物主要集中在浓度在70%以上的乙醇洗脱液中),而实施例二中60%和95%乙醇洗脱液不具有抗细胞毒活性。因此判断本发明获得的富集物中可能存在的黄酮类化合物不是抗细胞毒活性的主导物质。本发明提取部位中存在哪些化合物,哪些化合物可作为抗细胞毒活性的主导物质,有待发明人的进一步深入研究论证和更加细化的分离,本发明不包括这部分内容。
实施例三:抗肿瘤新药的制备
以上通过实验验证了本发明提供的方法可以获得小蓟的抗肿瘤活性物质。依据该结论,本领域技术人员均了解,将其作为药用活性成分,可以加入适应不同使用剂型的可药用辅料或载体制成药品,使用剂型包括片剂、胶囊剂、口服液或滴丸剂;也可以加入其他可食用的辅剂制成保健品,包括保健目的的吞咽片、咀嚼片、泡腾片、胶囊、口服液、或保健食品或饮料等等。
在制药或保健品的过程中,选用的小蓟抗细胞毒活性物质是用实施例二方法制备得到的浓缩液或干浸膏,优选分离部位7的浓缩液或干浸膏;当然,在忽视提取成本的情况下,分离部位3和4,或者直接使用60%乙醇进行洗脱获得的浓缩液或干浸膏,也属于可用的小蓟抗细胞毒活性物质。以下例举一二,其余按常规制法制备,本发明在此不一一赘述。
小蓟抗肿瘤片:取分离部位7的干浸膏,按1∶1的重量比例称取干浸膏25g和淀粉25g,混匀,制成湿颗粒,在60℃左右干燥,得干颗粒,压成素片100片,包糖衣或薄膜衣,检验合格,分装,即得小蓟抗肿瘤片成品。
小蓟抗肿瘤胶囊:取分离部位7的干浸膏,按1∶0.05的重量比例称取干浸膏25g和硬脂酸镁1.25g,混匀,制成湿颗粒,在40℃左右干燥,制成100粒胶囊,检验合格,分装,即得小蓟降胶囊成品。
本发明首次用实验确证了小蓟中的主要抗肿瘤功效组分存在于大孔吸附树脂吸附,45%乙醇洗脱部位,判断小蓟中的主要抗肿瘤活性物质是小分子物质。
抗肿瘤活性物质应用性:由于本发明是从药食两用小蓟中提取纯化得到的抗肿瘤活性部位,提取过程中所用试剂和设备也均符合制药行业标准,所以具有无毒、安全等特点;又因为小蓟来源广泛,价格低,资源廉价、易得,抗肿瘤功效已得到确证,活性部位可以开发成为一个新的抗肿瘤药物和/或抗肿瘤保健保健品。
Claims (6)
1.一种小蓟中抗肿瘤活性物质的提取方法,其特征在于,采用以下步骤:
步骤一:从小蓟干粉中用乙醇超声提取,去除乙醇得浓缩液;
步骤二:对浓缩液先用石油醚多次萃取,水相再过HP-20型大孔吸附树脂吸附,然后分别用水和45%乙醇洗脱,收集45%乙醇洗脱液;
步骤三:减压回收45%乙醇洗脱液得到小蓟中抗肿瘤活性物质;
其中,步骤一浓缩液是通过向小蓟干粉中用65%-95%范围内依次由高浓度至低浓度使用的两种或两种以上质量浓度的乙醇溶液组合分多次超声提取,合并滤液,过滤去渣,滤液减压浓缩至乙醇全部蒸出而得。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,步骤一依次使用95%、80%和65%乙醇组合提取三次。
3.上述任一权利要求所述方法获取的小蓟抗肿瘤活性物质。
4.权利要求3所述小蓟抗肿瘤活性物质在制备抗肿瘤药物中的应用,所述肿瘤为胃癌、肺癌和卵巢癌。
5.根据权利要求4所述应用,所述药物为小蓟抗肿瘤片剂、胶囊剂、口服液或滴丸剂;其中:
小蓟抗肿瘤片是按1∶1的重量比例将小蓟抗肿瘤活性物质的干浸膏和淀粉混合,按制片工艺制成小蓟抗肿瘤片成品;
小蓟抗肿瘤胶囊是按1∶0.05的重量比例将小蓟抗肿瘤活性物质的干浸膏和硬脂酸镁混合,按制胶囊工艺制成小蓟抗肿瘤胶囊成品。
6.权利要求3所述小蓟抗肿瘤活性物质在制备抗肿瘤保健品中的应用,所述肿瘤为胃癌、肺癌和卵巢癌。
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