CN101557724A - 由植物制备新型磷酸二酯酶 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从高粱提取5′－磷酸二酯酶的制备方法，及其用途，即用于制备富含5′－核苷酸的组合物，特别是酵母提取物。

Description

由植物制备新型磷酸二酯酶

本发明涉及一种通过对酵母进行酶处理以制备香料改良剂的方法、所制得的香料改良剂及其用途。

市售的酵母提取物为粉末状或糊状，酵母提取物作为调味剂，被广泛地应用于农产加工食品工业中。

酵母提取物为酵母的可溶解部分的浓缩物，一般通过自解或水解而得到。

自解为通过活化酵母的实际降解酶(蛋白酶)，来破坏酵母的细胞质膜，使得细胞内化合物溶解。

酵母提取物也可以用试剂或外加酶通过水解获得，，使得细胞内物质以高度降解的形式释放出来。

天然调味剂，是酵母提取物在农产加工食品工业中广泛使用的名称。

和其它具有同等香味强度的调味剂(非天然的)相比较，天然调味剂也具有一定的经济竞争能力。

酵母的这些酶处理方法在现有技术中是已知的。

酵母经受其自身内在酶的作用下降解制备的自解物，作为食品添加剂众所周知。

自解可如此引发：将酵母细胞置于高温中孵育、加入有机溶剂，使用浓度逐渐增大的NaCl溶液，以及上述各种方法的组合。

在自解过程中，主要的转变为蛋白质降解为肽和氨基酸。

所获得的自解产物也不可避免地具有一些苦味和典型的表示酵母特征。自解的另一不足是，自解产物中主要仅含有3`-核糖核苷酸，因为内在的核糖核酸酶将细胞内的RNA转化为3`-核糖核苷酸，使得自解产物就调味剂而言没有作用。

在Quest International B.V.的欧洲专利EP0354610B1中，教导了一种制备酵母提取物的方法。其中，首先，在厌氧条件下，细胞壁在外在蛋白水解酶的作用下破裂；随后，在有氧条件下，RNA在外加酶作用下降解。这种方法能够获得含有大量5`-核苷酸的自解产物。

在酵母自解产物中，已知味道的化合物包括氨基酸、肽、核酸如5`-核苷酸、糖类和有机酸。所述5`-核苷酸的含量对味道和调味非常重要。这种核酸被用作制备调味食品的原料，例如5`-肌苷酸(5`-IMP)、5`-鸟苷酸(5`-GMP)，但也发现其在药物产品中的应用。

鲜味(uanmi taste)是与甜、咸、苦和酸并排的第五种基础味道。具有显著增强味道的能力的5`-核苷酸能也产生鲜味，因此增强天然存在于酵母提取物中的谷氨酸钠(MSG)的作用。

生成5`-核苷酸，需要未加工的RNA在非常特殊的酶——5`-磷酸二酯酶(5`-PDE)作用下进行水解。Cohn和Volkin(1953)首次在蛇的毒液中发现了5`-磷酸二酯酶的存在。尽管这种5`-磷酸二酯酶有很高的效率，但是由于众所周知的原因，它不能在农产加工食品中使用。

5`-PDE的其它主要来源包括如桔青霉菌(Penicillium citrinum)的一些真菌类和如金黄链霉菌(Streptomyces aureus)的一些放线菌(Actinomyces)类。

实际上，从桔青霉菌(Penicillium citrinum)获得的5`-PDE由Amano Enzyme市售，其商品名为Nuclease RP-1G(或者EC3.1.30.1)。因为非常高的生产成本，使得这种5`-PDE主要以固定的形式用于工业中。将这种5`-PDE用于生产富含5`-核苷酸的酵母提取物，增加非常高的额外酶成本。

Schuster(1957)证实了5`-PDE活性存在于一些植物胚芽中。随后大量的研究成为专利申请的主题，其介绍了从麦芽幼根(麦芽指大麦芽)提取物中产生富含5`-核苷酸的酵母提取物的方法。麦芽是啤酒产业的副产品，因此可代表能够从酵母RNA中获得5`-核苷酸产品的酶的价廉来源。在这种情况下，通过蒸煮含有稳定剂醋酸锌的麦芽根粉末水溶液，就能获得5`-PDE，将此种方法获得的5`-PDE用于生产富含5`-核苷酸的酵母提取物，所增加的额外成本很少。

例如在US-A-4810509、EP-A-0299078、FR 7508446，以及G. Reed和.T.W.Nagodawithana所编著的“酵母技术”(Yeast Technology)，第2版(VanNostrand Reinhold，ISBN 0-442-31892-8)，382-385页中，都描述以大麦芽作为酶的来源，进而生产富含5`-核苷酸的酵母衍生物的方法。

一个主要问题是，从麦芽或大麦芽中获得的5`-PDE能够引起过敏反应。这是因为产生酶的原料中，这种情况下大麦含有大麦醇溶蛋白，其是一种和小麦醇溶蛋白相类似的醇溶谷蛋白，具有引发过敏的特性，能够引起不耐受症状(如，乳糜泄celiac desease)。实际上，在2000/13/EC和2003/89/EC修订版的EC指令中，大麦被列入到含有谷蛋白的谷物。因此，据此指令，其为“过敏源”指令，含有大麦或者大麦衍生物的产品，需要标明。

这些蛋白质的主要特性是，不论是在胃的酸性环境中，还是在肠道消化酶作用下，都不会分解。这些蛋白质保持完整地被肠道吸收，因此能引起免疫反应。至于乳糜泄，其是引起体内反应的醇溶谷蛋白分解所致。所有这些醇溶谷蛋白质对空腹的人都有毒副作用，因为其分解引起强烈的炎症反应，破坏小肠表面的细胞，导致小肠吸收如蛋白质、脂肪、碳水化合物、维他命和矿物质等营养成分的能力减弱。过敏伴随的肠胃症状为：胃痛、胀气、慢性腹泻。由此还会导致对一些营养物质(铁、钙、叶酸)的吸收能力减弱，进而引发营养不良(贫血、体重下降)、疲惫、骨痛、肌肉抽搐和应激性。

如果能从大麦醇溶蛋白中成功分离出酶，这将是由大麦芽纯化制得PDE的另一方式。然而，由Ai-Yu Wang等((1993)Biochemistry and Molecular BiologeInternatioanl，1095-1102，vol.29，No.6)和Beluhan等((2003)Biotechnology Letters25，1099-1103)发表的研究都只关注由大麦芽制得的纯化PDE的特性，而并没有考虑在制备过程中大麦醇溶蛋白的存在。这种纯化的成本较高，而且没有分析数据证实在酶制备中去除了谷蛋白，但是临床数据表明，由此制得的酶并没有导致过敏现象。

第二个可选择的方式包括，用微生物源的5`-PDE，微生物有如桔青霉菌(Penicillium citrinum)或黑曲霉菌(Aspergillus niger)等的丝状真菌、如放线菌(Actinomyces)或链霉菌链霉菌(Streptomyces)等的细菌。然而，这种较长的发展涉及菌株改进阶段。另外，这种方式需要工业发酵/净化的厂房，以及最终所获得的酶的成本很高较的过程，因此。

第三种方式，是将植物5`-PDE克隆到工业微生物中。这种方式已经得到申请人研究团队评估。但是，除了编码酶的序列是未知的外，还将得到基因改造生物(GMO)衍生的一种酶，这种产品也不被各个使用者看好。

因此，目前未解决的问题包括，找到一种没有谷蛋白的食用酶，并且这种酶没有与现在市场上的可获得的商品酶一样的经济上的劣势。同时，在加工过程中不用降解RNA片段或者核苷酸的核酸酶或磷酸酶，而导致不具有增强味道能力的降解产物。也不能在食用中产生能察觉到的不适宜的味道或调味特性。

申请人刚刚发现，特别意料不到和令人惊奇的表明，在制备富含5`-核苷酸的酵母提取物时，高梁芽完全能够取代具有令人过敏的大麦芽。更重要的是，根据C2003/89/EC指令，高梁未被列入含有谷蛋白的谷物，因此，它也不具有象谷蛋白一样的令人过敏的性质。

申请人发明了从高梁胚芽和高梁芽幼根的混合物中酶制备5`-PDE的方法。

更具体地说，这种高梁5`-PDE通过蒸煮高梁芽幼根的方式获得。因此，高梁芽幼根粉末的粒径为20-2000μm，优选为100-200μm，粉末被悬浮于醋酸锌或者等同试剂的水溶液中，也就是说，具有相同的能够起到稳定5`-PDE作用的试剂。该悬浮液在50-80℃下，培育30min到4h，并最好加以搅拌。举例来说，高梁芽幼根粉末所使用的比例为5-20％(w/w)，优选为10-15％，最优选为13％；醋酸锌溶液浓度优选为0.2-5g/l。在一个实施例中，用含有高梁芽幼根的高粱芽。在另一个优选的实施例中，回收溶液中的可溶部分，如通过离心瓶分离制剂，然后将上清液在澄清瓶中澄清。。

由此所制得的高梁5`-PDE制剂，能被用来制造无谷蛋白的富含5`-核苷酸的组合物，或者富含5`-核苷酸的酵母提取物。

因此，本发明涉及一种制备高梁5`-PDE的方法，该方法包括蒸煮醋酸锌水溶液(0.2-5g/l)中的高梁芽幼根，温度为50-80℃，时间为30min到4h，并除去不溶解的部分。还可以包括一个浓缩的步骤。

本发明涉及一种由上述方法所制得的高梁5`-PDE制剂，及其分解RNA的应用，具体来说，用于制备富含5`-核苷酸的组合物，较佳为酵母提取物，所述组合物中无谷蛋白。本发明还涉及从高梁芽中提取的5`-PDE的应用，其用来增加5`-核苷酸中的含有RNA组合物。因此，本发明还涉及一种制备无谷蛋白且富含5`-核苷酸的组合物，尤其是酵母提取物的方法，其包括通过处理微生物的细胞，将RNA释放到细胞外介质中，然后处理从高梁5`-PDE得到的悬浮液，使得RNA释放出5`-核苷酸；能够使用该方法的其他微生物举例来说有如曲霉菌的丝状真菌(filamentours fungus)、木霉菌类(Trichoderma type)、或者细菌，优选为乳杆菌类(the genus Lactobacillus)的乳酸菌。该方法还可以包括一个中间步骤，即完全或部分地纯化RNA(参见JP51106791)。

在一个优选实施例中，其包括用高梁5`-PDE制剂处理酵母提取物或者酵母悬浮液的步骤。

因此，本发明更具体地涉及中制备富含5`-PDE且无谷蛋白的酵母提取物的方法，其包括：

-加热酵母悬浮液；

-用5`-PDE处理酵母悬浮液；

-从悬浮液中分离出不溶物；和

-回收酵母提取物；

其特征在于，所述5`-PDE是从高梁中提取的，优选从高梁芽，更优选从高粱芽幼根中提取(malted sorghum rootlets)。

本发明中所用的酵母是可食用酵母。根据本发明，用来制备提取物的酵母优选为酵母菌类(Saccharomyces)，更优选为酿酒酵母类(Saccharomycescerevisiae)，包括Saccharomyces carlsbergensis。所述酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的酵母细胞在用于制造啤酒时也被叫做Saccharomyces carlsbergensis。根据N.J.W.Kreger van Rij所出版的“THE YEASTS，a taxonomic study”1984第3版中(另一方面，根据该手册1998年第4版中，Saccharomyces carlsbergensis有两个同义字，为Saccharomyces cerevisiae和Saccharomyces pastorianus，在本发明中引用的是1984年第3版中的内容)，确切的分类命名应为Saccharomycescerevisiae。而且，酵母还可以源自假丝酵母类(Candida，如C.utilis)、毕赤酵母类(pichia)、汉逊酵母类(Hansenula)、克鲁维酵母菌类(Kluyveromyces，如K.lactis，K.marxanius或K.fragilis)、圆酵母(Torula)、镰刀酶(Fusarium)、发酵单胞菌(Zymonomas)等。酵母还可以来源自新鲜酵母培养、或者被用在酿造工艺中的酵母。在一个优选的实施例中，所使用的酵母源自酵母菌类(Saccharomyces)、假丝酵母类(Candida)或者克鲁维酵母菌类(Kluyveromyces)。

要选择具有高RNA含量的酵母，在一个具体实施例中，RNA的质量含量为干重的6-15％。

酵母可以进行初步处理以增加其中的RNA含量，这种处理在US3,909,352和JP 11-196856中描述，其为酵母的突变和选择；JP5-176757中为在培育培养基中使用限量的硫酸钾。

可以通过添加由微生物中得到的RNA，来增加酵母悬浮液中RNA的含量，这种微生物能够用于人类食品或动物饲料。这样的微生物的实施例有如曲霉菌(Aspergillus)的丝状真菌、木霉菌类(Trichoderma)、或细菌，优选为乳杆菌类的乳酸菌。在这种情况下，所述微生物经处理以释放出其中的RNA。在一个具体实施例中，可以通过已知的方法完全或部分地纯化RNA(超滤、层析或沉淀法)。

制备酵母提取物的方法是所属领域技术人员已知的。以下专利中都列举了相应的方法：EP 249435、EP 299078、EP 354610、EP 466922、EP 1199353、EP 1479299、US 3,961,080、US 4,303,680、US 4,810,509。上述方法中通常包括的步骤有：加热酵母悬浮液、任选步骤酵母的自解和/或水解、优选的步骤为从悬浮液中分离不溶物。所述酵母悬浮液是有活酵母悬浮液。

优选地，酵母悬浮液被进行细胞质壁分离，以钝化包括磷酸酶和核酸酶在内的酵母酶的活性；渗透酵母以使其释放出细胞内容和RNA，较佳在细胞外介质中选择性地溶解RNA，最后可得到的5`-核苷酸含量大于酵母悬浮液中RNA含量。优选地，所述酵母悬浮液包括干重的10-25％。在一较佳实施例中，所述酵母悬浮液在5-95℃的温度范围内加热5min到3h。具体来说，所述悬浮液在75℃下被加热2h，然后冷却至60℃。

可以使用所属领域技术人员已知的其它技术来释放酵母的细胞内容，例如机械处理(如弗氏压碎器French press、玻璃珠glass beads、脉冲电磁等类似方法)、化学处理(酸、碱、盐、溶剂、去污剂等类似方法)、或者酶处理(β-葡聚糖酶、壳多糖酶、蛋白酶等类似物)。

而且，所述方法还包括酶解步骤，所选择的酶可有蛋白酶、β-葡聚糖酶、淀粉酶、脂肪酶和相类似的酶。

因此，本发明涉及制备富含5`-核苷酸的酵母提取物的方法，其包括：

a)加热酵母悬浮液；

b)酵母的自解和/或者酶水解；

c)从悬浮液中分离出不溶物；和

d)回收酵母提取物；

其特征在于，所述方法包括用从高梁芽提取的5`-磷酸二酯酶处理酵母悬浮液。

b步骤中最好使用所述酵母的外生酶，尤其是蛋白酶，以增加酵母蛋白的降解。这种蛋白酶的实施例有植物蛋白酶(木瓜蛋白酶、波萝蛋白酶和其它类似的酶)、或者微生物蛋白酶(枯草杆菌Bacillus subtilis、米曲霉Aspergillus oryzae和其它类似物)。

上述方法中还可以包括在用高梁5`-磷酸二酯酶处理之前完全或部分纯化RNA的步骤。

在一个优选的实施例中，用高梁5`-磷酸二酯酶处理酵母悬浮液的步骤优选的条件为pH值为5.0-7.5，温度为35-70℃。含有高梁5`-磷酸二酯酶的酵母悬浮液的培育时间为5-30h。加入到酵母悬浮液中的高梁5`-磷酸二酯酶制剂优选为10％w/w。例如，用高梁5`-磷酸二酯酶处理酵母悬浮液的步骤可在pH值为6.3，在60℃下处理18h。

优选地，酵母提取物含有较多的5`-GMP和/或5`-IMP。具体来说，5`-GMP和5`-IMP含量均能达到0.1-15％(以七水合二钠盐的形式计量)，优选2-5％。所获得的酵母提取物不含有谷蛋白。

该方法还可以包括一个附加步骤，即用脱氨酶处理酵母悬浮液的步骤。该步骤可以在高梁PDE处理酵母悬浮液过程中进行，或者在高梁PDE处理酵母悬浮液后进行。在一个较佳实施例中，使用脱氨酶处理的步骤与使用高梁PDE的步骤同时进行，或者在使用高梁PDE之后进行。例如，脱氨酶可以在5`-PDE处理步骤的后几个小时内加入，即在冷却至一定温度，如45℃后进行。这一附加步骤能使得5`-AMP转化为想要得到的5`-IMP。这一附加步骤对所属领域技术人员是已知的，在如EP 249435和EP 354610中也都有介绍。市售的脱氨酶为Amano制造的Deamizyme 50000G。在一具体实施例中，该方法还包括发酵步骤，使其可以将多糖转化为有机酸，如乳酸或者琥珀酸。该发酵步骤对所属领域技术人员是已知的，在EP 191513和EP 354610中也都有介绍。所述发酵较佳可以在乳杆菌类(the genus Lactobacillus)或者等同的菌类帮助下进行。

然后优选将酵母提取物从酵母细胞的不溶部分中分离。由于对不溶部分中油脂膜的氧化，而没有表现出香料气味，因此，从不溶部分中分离出的酵母提取物有更易于保存的优点。例如，该步骤可以通过离心、过滤或者回收液体部分的方式进行。

然后液体部分可经受已知酵母提取物后续的处理方式，具体为浓缩、过滤、加热杀菌和/或烘干。

如前文所述，酵母提取物被广泛地用作味道增强剂。在本发明中“酵母提取物”的含义被理解为一般通过自解或水解获得的酵母溶解部分的浓缩物。

富含5`-核苷酸的酵母提取物可以具有多种形式，如液态、糊状或者固态形式。所述酵母提取物中最好含有重量百分比至少90％，优选94-98％的干性物质。

因此，本发明涉及通过本发明的相应方法获得或者能获得的酵母提取物，或它们在食品领域中的应用。这些酵母提取物中无谷蛋白。酵母提取物中优选含有的5`-GMP和5`-IMP的含量都为0.1-15％(以七水合二钠盐的形式计量)。

本发明还涉及根据本发明的酵母提取物在饮食配方中的应用，这样所获得的饮食配方和基于这种配方而得到的消费食品产品。饮食配方举例来说，可以是肉汤、汤、沙司、肉制品、焙烤食品或者调味品。

本发明还涉及含有根据本发明的酵母提取物的香料改良剂，根据本发明的这一香料改良剂还可以含有不溶物质。

本发明还涉及根据本发明的香料改良剂在饮食配方中的应用，如此获得的饮食配方和基于这种配方所获得的消费食品产品。饮食配方举例来说，可以是肉汤、汤、沙司、肉制品、焙烤食品或者调味品。

因此，本发明涉及一种生产香料食品的方法，其特征在于使用了根据本发明的香料改良剂。

以下的实施例仅是为了进一步说明本发明的内容，而不应理解为是对本发明保护范围的限定。

实施例1

制备高梁幼根提取物

所用幼根从非洲高梁芽工厂获得。取13g高粱幼根研磨或粉碎，得到平均粒径为500μm的粉末。该粉末以13％(w/w)比例放入到0.2g/l的醋酸锌水溶液中，在60℃下蒸煮2h。通过两次离心分离后，提取蒸煮液中的固体和不溶物即得到高梁幼根的提取物。

实施例2

制备富含5`-核苷酸的酵母提取物-由高梁制得的5`-PDE与商业产品酶的对比

取1000g酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)乳，其中干性物质含量为15％，RNA的含量为9.5％(通过Trevelyan方法进行水解，水解方法参见“Induction ofAutolytic Breakdown of RNA in Yeast by Addition of Ethanol and byDrying/Rehydration”，Trevelyan，J.，Sci.FoodAgric.，1977，28，579-588，和“ProcessingYeast to Reduce its Nucleic Acid Content.Indution of Intracellular RNAse Action by aSimple Heat-shock Procedure”和“an Efficient Chemical Method Based on Extractionof RNA by Salt Solution at low pH”，Trevelyan，J.，Soc.Cherm.Ind.，1978，141-174)，将该酿酒酵母乳在75℃下加热2h，再冷却至56℃，调节pH值为5.3(细胞质壁分离)。

将该酵母乳与含有5`-PDE(10％w/w)的高梁幼根蒸煮液的上清液进行混合。然后，将混合物在56℃下缓慢搅拌15h，以使得RNA水解成5`-核苷酸。通过离心方法分离出固体物质，并且在再次离心前，用去离子水清洗该固体物质。将两种上清液混合，经浓缩后烘干。分析表明，烘干的粉末中5`-GMP的含量为2.44％(以七水合二钠盐的形式计量)。测定通过RP-HPLC进行，具体方法参见Enzymatic Production of Ribonucleotides from Autolysates ofKluyveromyces marxiamus grow on whey；Belem，M.A.F.，等人.，Journal of FoodScience，62，851-854。

1kg同样的酵母乳，加入1g从Amano购得的5`-PDE(商品名PDERP-1，Amano Enzyme Europe，Ltd)在同样的条件下培育15h，经分离、浓缩和干燥后得到含有5`-GMP为2.60％的粉末。这两个比较例中，水解的效率是相似的，即从高梁中获得的5`-PDE的水解效率与更加昂贵的商业产品酶的效率是基本一致的。

实施例3

所述方法和前面的实施例一样，由13g高粱芽幼根和1000g的酵母乳开始，但是经过15h培育后，温度降至45℃，并加入0.1g Amino的5`-腺苷酸脱氨酶(商品名为Deamizyme 50000G，Amano Enzyme Europe，Ltd)。然后，再培育5h，以使得5`-AMP在5`-腺苷酸脱氨酶作用下转化为5`-IMP。然后通过离心方法分离出固体物质，并且在再次离心前，用去离子水清洗该固体物质。将两种上清液混合，浓缩后烘干。分析表明，烘干的粉末中5`-GMP的含量为2.80％，5`-IMP的含量为3.21％(通过RP-HPLC进行测定，均以七水合二钠盐的形式计量)。

实施例4

所述方法和前面的实施例一样，由13g高粱芽幼根和1000g的酵母乳开始。然而，在加入高梁芽5`-PDE之前，加入0.5g木瓜蛋白酶以促进酵母中干性物质的溶解，所述方法余下步骤与实施例3一致，也加入5`-腺苷酸脱氨酶。分析表明，得到的粉末中5`-GMP的含量为1.96％，5`-IMP的含量为2.07％(通过RP-HPLC进行测定，均以七水合二钠盐的形式计量)。

实施例5

所述方法如实施例1和2进行，除了用假丝酵母乳(Candida)取代酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)乳，该假丝酵母乳中，干性物质含量为13％，RNA为12.5％。分析表明，得到的粉末中5`-GMP的含量为3.75％，5`-IMP的含量为3.98％(均以七水合二钠盐的形式计量)。

Claims (14)

1、制备富含5`-核苷酸、且不含谷蛋白的酵母提取物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)加热酵母悬浮液；

b)用5`-磷酸二酯酶处理酵母悬浮液；

c)从悬浮液中分离出不溶物；和

d)回收酵母提取物；

其特征在于，所述5`-磷酸二酯酶是从高梁芽幼根中提取的。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于，从高梁芽幼根中提取的5`-磷酸二酯酶通过以下方法制备：蒸煮醋酸锌水溶液(0.2-5g/l)中的高梁芽粉末悬浮液，温度为50-80℃，时间为30min到4h，并除去不溶解的部分。

3、如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述粉末粒径为20-2000μm，优选为100-200μm。

4、如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述用5`-磷酸二酯酶处理酵母悬浮液的步骤在pH值为5.0-7.5，温度为35-70℃，时间为5-30h下进行。

5、如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在加热步骤后，对酵母悬浮液进行酶解的步骤。

6、如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在用高梁5`-磷酸二酯酶处理步骤前，完全或部分纯化RNA的步骤。

7、如权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括用脱氨酶处理的步骤。

8、如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述酵母中RNA的质量含量为干重的6-15％。

9、如权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述酵母是酵母菌类(genus Saccharomyces)、假丝酵母类(genus Candida)或克鲁维酵母菌类(Kluyveromyces)。

10、富含5`-核苷酸、且不含谷蛋白的酵母提取物，其特征在于，所述酵母提取物按照权利要求1-9的方法所得到。

11、一种香料改良剂，包含如权利要求10所述的富含5`-核苷酸的酵母提取物，或者能通过权利要求1-9中任一项所述的方法而得到的富含5`-核苷酸的酵母提取物。

12、制造含有香料食品的方法，其特征在于，所述方法使用了如权利要求11所述的香料改良剂。

13、一种食品，其特征在于，所述食品含有如权利要求11所述的香料改良剂。

14、从高梁芽中提取的5`-磷酸二酯酶的应用，其特征在于，所述应用为制造富含5`-核苷酸的组合物。