CN101544683B - 热加工处理中保持纤维蛋白原活性的方法及物质 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种使纤维蛋白原在S/D法、干热病毒灭活两步病毒灭活处理后仍能保持蛋白活性的方法和物质。

Description

热加工处理中保持纤维蛋白原活性的方法及物质

技术领域

本发明涉及蛋白质的活性保持，尤其涉及使纤维蛋白原在干热灭活病毒处理中保持蛋白活性的物质和方法。

背景技术

人纤维蛋白原即凝血因子I，是血浆蛋白的主要成分之一，分子量约34万。纤维蛋白原在凝血酶的作用下可形成纤维蛋白，纤维蛋白进而与血小板等一起形成稳固的纤维蛋白血栓。在临床上，可单独通过静脉注射补充纤维蛋白原，纤维蛋白原也可与凝血酶一起用于急救止血、创口粘合。

随着科技的发展，血液制品的潜在风险性更加被重视。《中国药典》2005版三部颁布执行，已经明确提出“人纤维蛋白原的生产过程中应采用经批准的方法去除和灭活脂包膜病毒和非脂包膜病毒”。

目前用于血液制品中大规模生产的病毒灭活方法主要有巴氏法、有机溶剂/去污剂(S/D)法、干热灭活法等。

巴氏消毒法是法国微生物学家巴斯德为葡萄酒消毒时发明，并以他的名字来命名的一种消毒方法。指在规定时间内以不太高的温度处理液体食品的一种加热灭菌方法。它可消灭绝大部分细菌、酵母和霉菌。此法主要分为低温法(60～65℃)灭菌15～30分钟和高温法(70～80℃)消毒5～15分钟。

S/D法即有机溶剂/去污剂法能破坏脂包膜病毒的外膜结构，因而可有效地灭活艾滋病病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等脂包膜。可选择有机溶剂：磷酸三丁脂(TNBP)和非离子化的去污剂，如：Triton X-100或吐温-80结合灭活脂包膜病毒。调节溶液温度为24-26℃，至少保温4小时。由于S/D法灭活病毒时的条件比较温和，对凝血因子产品中活性蛋白的结构和生物活性几乎没有破坏作用，因此已用于凝血因子冻干制品的大规模生产中。然而S/D法不能灭活非脂包膜，仅用S/D法处理的凝血因子制品仍有传播甲肝、B19等非脂包膜病毒的可能。

干热处理能有效地灭活脂包膜和非脂包膜病毒，因此在90年代就已用于IX、VIII因子等血液制品地生产。干热灭活病毒工艺，加热条件主要有三种：60℃，144小时；80℃，72小时和100℃，30分钟；从产品的热处理工艺控制和操作的方便性看，选择100℃，30分钟的加热条件是最多被采用的。

人纤维蛋白原是一种本身不耐热的蛋白，加热处理很容易改变其结构，试验表明经过干热灭活病毒处理后，纤维蛋白原的溶解时间延长，甚至超过30分钟的可接受极限；产品外观变黄、萎缩，溶解后有絮状物、不澄清、发黄、稳定性下降；说明纤维蛋白原已经变性。

因此，本领域迫切需要提供一种新的物质和方法，它可以使纤维蛋白原产品在经过S/D法和干热病毒灭活处理后，不但病毒灭活效果佳，而且其中的纤维蛋白原的蛋白活性也能有效保持。

发明内容

本发明旨在提供一种使纤维蛋白原在经过热处理后仍能保持蛋白活性的物质。

本发明的另一个目的是提供一种方法，它能使纤维蛋白原在经过热处理后仍能保持蛋白活性。

本发明的再一个目的是提供一种在经过了S/D法和干热病毒灭活处理后，仍能保持蛋白活性的纤维蛋白原产品及其制备方法。

在本发明的第一方面，提供了一种氨基酸的用途，所述的氨基酸被用作或用于制备纤维蛋白原热加工处理过程中的蛋白活性保护剂。

在另一优选例中，所述的蛋白活性保护剂含有1-100％氨基酸。

在另一优选例中，所述的氨基酸是甘氨酸、精氨酸、或其组合；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，所述的蛋白活性保护剂是热稳定剂和/或蛋白复溶促进剂。

在另一优选例中，本发明提供了一种甘氨酸的用途，它被用作或用于制备纤维蛋白原热加工处理过程中的热稳定剂。

在另一优选例中，所述的热稳定剂含有1-100％甘氨酸。

在另一优选例中，所述的热稳定剂还含有1-99％精氨酸；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，所述的热稳定剂由甘氨酸和精氨酸组成；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，本发明提供了一种精氨酸的用途，它被用作或用于制备纤维蛋白原热加工处理过程中的蛋白复溶促进剂。

在另一优选例中，所述的蛋白复溶促进剂含有1-100％精氨酸；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，所述的蛋白复溶促进剂还含有1-99％甘氨酸。

在另一优选例中，所述的蛋白复溶促进剂由甘氨酸和精氨酸组成；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在本发明的第二方面，提供了一种制备纤维蛋白原的方法，所述的方法包括步骤：

(a)将纤维蛋白或纤维蛋白原与蛋白活性保护剂混合，形成混有蛋白活性保护剂的纤维蛋白原，其中所述蛋白活性保护剂含有氨基酸；

(b)干热灭活病毒处理所述的混有蛋白活性保护剂的纤维蛋白原，形成经干热灭活病毒处理的纤维蛋白原。

在另一优选例中，所述的氨基酸是甘氨酸、精氨酸、或其组合；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，所述的蛋白活性保护剂是热稳定剂和/或蛋白复溶促进剂。

在另一优选例中，本发明提供了一种制备纤维蛋白原的方法，所述的方法包括步骤：

(a)将纤维蛋白或纤维蛋白原与热稳定剂混合，形成混有热稳定剂的纤维蛋白原，其中所述热稳定剂含有甘氨酸；

(b)干热灭活病毒处理所述的混有热稳定剂的纤维蛋白原，形成经干热灭活病毒处理的纤维蛋白原。

在另一优选例中，所述步骤(a)前还包括步骤(a′)：用有机溶剂/去污剂(S/D)法对纤维蛋白原进行病毒灭活处理。

在另一优选例中，所述步骤(b)前还包括步骤(b’)：将混有热稳定剂的纤维蛋白原进行冷冻干燥。

在另一优选例中，本发明提供了一种制备纤维蛋白原的方法，所述的方法包括步骤：

(a)将纤维蛋白原与蛋白复溶促进剂混合，形成混有蛋白复溶促进剂的纤维蛋白原，其中所述蛋白复溶促进剂含有精氨酸；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

(b)干热灭活病毒处理所述的混有蛋白复溶促进剂的纤维蛋白原，形成经干热灭活病毒处理的纤维蛋白原。

在另一优选例中，所述步骤(a)前还包括步骤(a’)：用有机溶剂/去污剂(S/D)法对纤维蛋白原进行病毒灭活处理。

在另一优选例中，所述步骤(b)前还包括步骤(b’)：将混有热稳定剂的纤维蛋白或纤维蛋白原进行冷冻干燥。

在本发明的第三方面，提供了一种组合物，它含有1-200重量份甘氨酸和1-200重量份精氨酸，所述甘氨酸和精氨酸的重量是组合物总重量的1-99％；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，它还含有0.4-400重量份枸橼酸离子和0-200重量份蔗糖。

在另一优选例中，它还含有1-300重量份枸橼酸离子和0-150重量份蔗糖。

在另一优选例中，它还含有2-220重量份枸橼酸离子和0-100重量份蔗糖。

在另一优选例中，甘氨酸的浓度为0.5-10(w/v)％，精氨酸的浓度为0.5-10(w/v)％；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，所述的组合物由1-200重量份甘氨酸和1-200重量份精氨酸组成；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在本发明的第四方面，提供了一种上述组合物的用途，它被用作或用于制备纤维蛋白或纤维蛋白原热加工处理过程中的蛋白活性保护剂；所述的组合物含有1-200重量份甘氨酸和1-200重量份精氨酸，所述甘氨酸和精氨酸的重量是组合物总重量的1-99％；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在本发明的第五方面，提供了一种纤维蛋白原组合物，它含有1-10重量份纤维蛋白原，1-200重量份甘氨酸，和1-200重量份精氨酸；所述组合物为灰白色或淡黄色疏松体，复溶后溶液澄清；且复溶时间≤30分钟；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，所述的组合物的复溶时间为≤20分钟。

在另一优选例中，它含有3-8重量份纤维蛋白原，3-150重量份甘氨酸，和3-150重量份精氨酸；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，它含有4-7重量份纤维蛋白原，5-100重量份甘氨酸，和5-100重量份精氨酸；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，它还含有0.4-400重量份枸橼酸离子和0-200重量份蔗糖。

在另一优选例中，它还含有1-300重量份枸橼酸离子和0-150重量份蔗糖。

在另一优选例中，它还含有2-220重量份枸橼酸离子和0-100重量份蔗糖。

在另一优选例中，所述的纤维蛋白原组合物由包括以下步骤的方法制备：

(1)血浆经cohn低温乙醇法得到富含纤维蛋白原的沉淀；

(2)将步骤(1)获得的沉淀溶于枸橼酸钠-Tris缓冲液(pH 6.0-8.0)，然后经S/D法灭活脂包膜病毒；

(3)S/D病毒灭活处理后，用上述的缓冲液进行稀释，加入乙醇后离心取沉淀；

(4)将步骤(3)中得到的沉淀用枸橼酸钠-Tris缓冲液溶解(pH 6.0-8.0)，进行过滤、冷却，然后加入乙醇并离心得到纯化的沉淀；

(5)将步骤(4)得到的沉淀溶于枸橼酸钠-盐酸缓冲液(pH6.0-8.0)，所得到的溶液中含有纤维蛋白原、精氨酸和甘氨酸，除菌后冻干；精氨酸优选精氨酸盐酸盐；

(6)干热灭活病毒处理步骤(5)得到的冻干制品，从而制得如上述的纤维蛋白原组合物。

在本发明的第六方面，提供了一种制备纤维蛋白原组合物的方法，所述的方法包括步骤：

(1)血浆经cohn低温乙醇法得到富含纤维蛋白原的沉淀；

(2)将步骤(1)获得的沉淀溶于枸橼酸钠-Tris缓冲液(pH6.0-8.0)，然后经S/D法灭活脂包膜病毒；

(3)S/D病毒灭活处理后，用上述缓冲液进行稀释，加入乙醇后离心取沉淀；

(4)将步骤(3)中得到的沉淀用枸橼酸钠-Tris缓冲液(pH6.0-8.0)进行过滤、冷却，然后加入乙醇并离心得到纯化的沉淀；

(5)将步骤(4)得到的沉淀溶于枸橼酸钠-盐酸缓冲液(pH6.0-8.0)，所得到的溶液中含有纤维蛋白原、精氨酸和甘氨酸，除菌后冻干；精氨酸优选精氨酸盐酸盐；

(6)干热灭活病毒处理步骤(5)得到的冻干制品，从而制得纤维蛋白原组合物。

在本发明的第七方面，提供了一种纤维蛋白原组合物在制备止血剂中的应用，所述的纤维蛋白原组合物含有1-10重量份纤维蛋白原，1-200重量份甘氨酸，和1-200重量份精氨酸；所述的纤维蛋白原组合物是灰白色或淡黄色疏松体，复溶后溶液澄清；且复溶时间≤30分钟；精氨酸优选精氨酸盐酸盐。

在另一优选例中，所述的纤维蛋白原为人纤维蛋白原。

据此，本发明提供了一种新的物质和方法，它可以使纤维蛋白原产品在经过S/D法和干热病毒灭活处理后，不但病毒灭活效果佳，而且其中的纤维蛋白原的蛋白活性也能有效保持。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现，甘氨酸对纤维蛋白原产品的热稳定性有很大的影响；精氨酸对加热后的纤维蛋白原制品的复溶有很大的促进作用；而两者一起用的效果更明显。具体地，在纤维蛋白原的原液配制阶段加入甘氨酸和/或精氨酸等，能使纤维蛋白原制品在经过了S/D法和干热病毒灭活处理后，仍能保持良好的蛋白活性。

如本文所用，“热稳定剂”是指能使纤维蛋白或纤维蛋白原在热加工过程中不受高温破坏，仍然保持蛋白活性的物质。它包括1-100％甘氨酸，较佳地，它含有50-100％甘氨酸，更佳地，它含有80-100％甘氨酸。所述的热稳定剂中还可以包括精氨酸、枸橼酸钠、氯化钠。

如本文所用，“蛋白复溶促进剂”是指能使纤维蛋白或纤维蛋白原在热加工过程后仍能快速复溶的物质，其复溶时间≤30分钟，更佳地≤20分钟；复溶后的溶液澄清。所述的蛋白复溶促进剂包括1-100％精氨酸，较佳地，它含有50-100％精氨酸，更佳地，它含有80-100％精氨酸。所述的蛋白复溶促进剂中还可以包括甘氨酸、枸橼酸钠、氯化钠。

如本文所用，“蛋白活性保护剂”或“保护剂”是指能使纤维蛋白或纤维蛋白原在热加工过程中仍然保持蛋白活性的物质。所述的保护剂具有多重效果，如能维持组合物一定的渗透压；能使组合物在冻干时保持形态避免崩解；具有热稳定性，能保持蛋白活性；对纤维蛋白或纤维蛋白原制品具有助溶作用等。所述的保护剂包括1-200重量份甘氨酸和1-200重量份精氨酸，所述甘氨酸和精氨酸的重量是保护剂总重量的1-99％。较佳地，所述的保护剂包括3-150重量份甘氨酸和3-150重量份精氨酸；更佳地，所述的保护剂包括5-100重量份甘氨酸和5-100重量份精氨酸。所述的保护剂中还可以含有糖、醇和/或其它氨基酸。糖类包括但不限于：蔗糖、麦芽糖、海藻糖等。醇类包括但不限于：山梨醇、甘露醇等。其它的氨基酸优选色氨酸、组氨酸和赖氨酸。所述的保护剂中还可以添加枸橼酸离子，如枸橼酸钠、枸橼酸钾等。

如本文所用，“甘氨酸”是指结构如下式的化合物或其盐酸盐：

优选其药用级辅料，极易溶于水。

如本文所用，“精氨酸”是指结构如下式的化合物或其盐酸盐：

优选其药用级辅料，极易溶于水。

在本发明提供的一种纤维蛋白原组合物中含有纤维蛋白原和保护剂。所述的纤维蛋白原来自哺乳动物，其中优选人纤维蛋白原。所述的组合物由于精氨酸摄入量增多，增加了肝脏中精氨酸酶的活性，有助于将血液中氨转变为尿素而排出；促进了胶原组织的合成和伤口的愈合；促进了胸腺中淋巴细胞的增殖，防止胸腺功能退化，从而具有免疫调节功能。组合物中的甘氨酸参与嘌呤、腺苷、肌酸等的代谢。它在体内与多种物质结合，加快它们从胆汁和尿液中排出；甘氨酸具有解毒、抗变态反应作用，并可提供非必需氨基酸的氮源，改进氨基酸注射液在体内的耐受性。

本发明提供的纤维蛋白原组合物可以将纤维蛋白原和保护剂混合制得。

在一个优选例中，可以通过以下步骤得到本发明提供的纤维蛋白原组合物：

(1)人血浆经cohn低温乙醇法得到富含纤维蛋白原的沉淀。

所述的cohn低温乙醇法是本领域所熟知的，其中可以将血浆pH调至中性，加入乙醇至6-12(v/v)％浓度，温度降至冰点或以下，离心得到富含纤维蛋白原的沉淀。

(2)将步骤(1)获得的沉淀溶于枸橼酸钠-Tris缓冲液中，pH为6.0-8.0，然后经S/D法灭活脂包膜病毒。

可以在常温下将步骤(1)获得的沉淀溶于上述的缓冲液中，优选10-35℃，更优选15-30℃。

通过本领域熟知的S/D法进行病毒灭活，如选择有机溶剂：磷酸三丁脂(TNBP)和非离子化的去污剂，如：ritonX-100或吐温-80结合灭活脂包膜病毒。一种优选的方法是在溶液中加入植物源性吐温80(Tween80)和磷酸三丁酯(TNBP)，调节溶液温度为24-26℃，保温至少4小时，灭活脂包膜病毒。

所加入的Tween80至最终浓度为0.2-2(v/v)％，所加入的TNBP至最终浓度为0.05-1(v/v)％；优选地，Tween80最终浓度为0.5-1.5(v/v)％，TNBP最终浓度为0.08-0.6(v/v)％。

在另一优选例中，S/D处理前先用1μm滤器除去蛋白溶液中可能存在的颗粒(颗粒可能藏匿病毒从而影响病毒灭活效果)。

加入S/D后应确保是均一的混合物。如果在加入S/D后过滤，则须检测过滤后S/D的浓度是否发生变化，如有变化应进行适当调整。

(3)S/D病毒灭活处理后，用上述的缓冲液进行稀释，加入乙醇后离心取沉淀。

在用缓冲液进行稀释前将溶液降温至≥0℃，更佳地为0-2℃。所加入的乙醇浓度达3-20(v/v)％，优选地为5-15(v/v)％。离心时的温度需加以控制，一般≥0℃，更佳地为0-2℃。

(4)将步骤(3)中得到的沉淀用枸橼酸钠-Tris缓冲液中，pH为6.0-8.0进行溶解、过滤、冷却，然后加入乙醇并离心得到纯化的沉淀。

在常温下将步骤(3)获得的沉淀溶于上述的缓冲液中，优选10-35℃，更优选15-30℃。

步骤(3)获得的沉淀溶于缓冲液后过滤，使滤液温度≥0℃，更佳地为0-2℃。

所加入的乙醇浓度达3-20(v/v)％，优选地为5-15(v/v)％。

(5)将步骤(4)得到的沉淀溶于枸橼酸钠-盐酸缓冲液中，pH6.0-8.0，所得到的溶液中含有纤维蛋白原、精氨酸和甘氨酸，除菌后冻干。

步骤(4)得到的沉淀与缓冲液III的重量体积比为1∶1-10，优选1∶2-5；溶解温度为15-35℃，优选20-30℃。

(6)干热灭活病毒处理步骤(5)得到的冻干制品，从而制得人纤维蛋白原组合物。

可以使用本领域熟知的干热灭活病毒的方法，如60℃加热144小时；80℃加热72小时；或100±1℃加热30分钟。其中优选100±1℃加热30分钟。

本发明提供的纤维蛋白原组合物可用于制备止血的药物。

本发明的纤维蛋白原组合物可以通过常规方法制成任何注射用或局部用的常规制剂形式。注射剂如注射液、大输液、冻干粉等；局部用制剂如粉剂、贴剂等。

本发明纤维蛋白原组合物的施用量可根据用药途径、患者年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等而变化，其日剂量按纤维蛋白原量计可以是1-2g/70kg体重。可以一次或多次施用。

本发明的主要优点在于：

1、含有保护剂(氨基酸、糖等)的血液制品纤维蛋白或纤维蛋白原在S/D法和干热病毒灭活处理后，不仅将各类病毒灭活，而且能使纤维蛋白原的蛋白活性完整保留；

2、所选用的保护剂不仅可保持纤维蛋白原的蛋白活性，而且易于在体内代谢并具有多种生物功能。

3、本发明使用确定的保护剂和产品工艺，能够连续、稳定地生产合格的产品。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分比和份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1

制备纤维蛋白原组合物①

调整人血浆pH至5.0-9.0，加乙醇离心得到富含纤维蛋白原的沉淀。

将沉淀溶于溶解枸橼酸钠-Tris缓冲液中，pH为6.0-8.0，，过滤去除不溶颗粒，然后在溶液中加入吐温80(Tween80)及磷酸三丁酯(TNBP)至最终浓度Tween80为1.0％，TNBP为0.3％，调节溶液温度为24-26℃，保温至少6小时，灭活脂包膜病毒。

在S/D病毒灭活处理后，用枸橼酸钠-Tris缓冲液，pH为6.0-8.0，进行稀释，将溶液降温后加入乙醇离心得到沉淀。

将沉淀再溶于枸橼酸钠-Tris缓冲液中，pH为6.0-8.0，过滤，将溶液降温后加入乙醇离心得到纯化的沉淀。

将此沉淀一份溶于3份25℃溶于枸橼酸钠-盐酸缓冲液中，pH6.0-8.0，，所得溶液中含有纤维蛋白原3.0％，枸橼酸钠60mmol/L，L-精氨酸盐酸盐60g/L，甘氨酸60g/L。

除菌分装25ml/瓶，冻干，最后100℃30分钟干热灭活病毒处理，即可制成两步病毒灭活冻干人纤维蛋白原组合物①。

实施例2

制备纤维蛋白原组合物②

将此沉淀一份溶于3份25℃溶于枸橼酸钠-盐酸缓冲液中，pH6.0-8.0，，所得溶液中含有纤维蛋白原2.0％，枸橼酸钠5mmol/L，L-精氨酸盐酸盐5g/L，甘氨酸5g/L。

实施例3

制备纤维蛋白原组合物③

将此沉淀一份溶于3份25℃溶于枸橼酸钠-盐酸缓冲液中，pH6.0-8.0，，所得溶液中含有纤维蛋白原5.0％，枸橼酸钠100mmol/L，L-精氨酸盐酸盐100g/L，甘氨酸100g/L。

实施例4-6

病毒灭活验证

对实施例1-3制得的组合物①-③进行病毒灭活验证。冻干后产品经100±1℃30分钟加热处理。中间过程取样，分析病毒滴度。

干热法灭活病毒验证结果显示：

(1)干热法可灭活EMCV，组合物①≥4.00LgTCI D50/0.1ml，组合物②≥4.13LgTCI D50/0.1ml，组合物③≥4.25LgTCI D50/0.1ml；

(2)干热法可灭活PPV，组合物①≥4.38LgTCI D50/0.1ml，组合物②≥4.50LgTCI D50/0.1ml，组合物③≥4.50LgTCI D50/0.1ml。

结果表明，所制得的组合物中的病毒含量能符合《药典》的要求，说明加入保护剂后的组合物的干热病毒灭活处理是有效的。

实施例7-9

蛋白活性试验对实施例1-3制得的组合物①-③严格按照《药典》进行检测，结果见表1。

表1检测结果

结果表明，产品全部符合质量标准，说明加入保护剂后的组合物在干热病毒灭活处理后仍能有效地保持蛋白活性。

对比例1

不含保护剂的纤维蛋白原对热的耐受

人纤维蛋白原制品的制备：如上述方法得到人纤维蛋白原，其中不含保护剂L-精氨酸盐酸盐和甘氨酸：

最终产品配方主要成分	原配方
		纤维蛋白原	＞＝2.0(g/L)
枸橼酸离子含量	45mmol/L
		蔗糖	50g/L

100℃，30min加热处理得到的纤维蛋白原制品，然后对产品外观和复溶时间两个关键指标进行产品质量的考核。结果见表2。

表2加热处理(100℃，30min)对产品的影响结果

产品成分	外观	溶解时间	凝固活力	备注
					FNG、蔗糖、枸橼酸钠	不合格	＞30分钟	＞60秒	原生产工艺

加热工艺通过热辐射破坏病毒的分之结构从而灭活病毒，但同时人纤维蛋白原分子也可能受加热影响而发生变化，在质量上表现为外观和复溶情况、以及生物活性的变化。

以上结果表明，对不含保护剂的纤维蛋白原制品进行干热病毒灭活处理(100℃，30min加热)后，纤维蛋白原冻干物会出现轻度萎缩、发黄，冻干制品复溶时间大大延长，复溶后制品出现严重絮状物、不溶蛋白颗粒，且纤维蛋白原凝固活力超过60秒，这说明100℃干热破坏了纤维蛋白原的活性。

若以80℃加热72小时处理，则出现严重萎缩、发黄，制品甚至不能复溶，说明纤维蛋白原已严重变性。

结果表明，若要使用加热处理工艺，就必须解决产品的稳定性问题。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (11)

1.一种氨基酸的用途，其特征在于，它被用作或用于制备纤维蛋白原热加工处理过程中的蛋白活性保护剂；

所述的保护剂由60g/L甘氨酸、60g/L L-精氨酸盐酸盐和60mmol/L枸橼酸钠组成。

2.一种氨基酸的用途，其特征在于，它被用作或用于制备纤维蛋白原热加工处理过程中的蛋白活性保护剂；

所述的保护剂由5g/L甘氨酸、5g/L L-精氨酸盐酸盐和5mmol/L枸橼酸钠组成。

3.一种氨基酸的用途，其特征在于，它被用作或用于制备纤维蛋白原热加工处理过程中的蛋白活性保护剂；

所述的保护剂由100g/L甘氨酸、100g/L L-精氨酸盐酸盐和100mmol/L枸橼酸钠组成。

4.如权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于，所述的蛋白活性保护剂是热稳定剂和/或蛋白复溶促进剂。

5.一种制备纤维蛋白原的方法，其特征在于，它包括步骤：

(a)将纤维蛋白或纤维蛋白原与蛋白活性保护剂混合，形成混有蛋白活性保护剂的纤维蛋白原；

(b)干热灭活病毒处理所述的混有蛋白活性保护剂的纤维蛋白原，形成经干热灭活病毒处理的纤维蛋白原；

所述的保护剂由60g/L甘氨酸、60g/L L-精氨酸盐酸盐和60mmol/L枸橼酸钠组成。

6.一种制备纤维蛋白原的方法，其特征在于，它包括步骤：

(a)将纤维蛋白或纤维蛋白原与蛋白活性保护剂混合，形成混有蛋白活性保护剂的纤维蛋白原；

(b)干热灭活病毒处理所述的混有蛋白活性保护剂的纤维蛋白原，形成经干热灭活病毒处理的纤维蛋白原；

所述的保护剂由5g/L甘氨酸、5g/L L-精氨酸盐酸盐和5mmol/L枸橼酸钠组成。

7.一种制备纤维蛋白原的方法，其特征在于，它包括步骤： 

(a)将纤维蛋白或纤维蛋白原与蛋白活性保护剂混合，形成混有蛋白活性保护剂的纤维蛋白原；

(b)干热灭活病毒处理所述的混有蛋白活性保护剂的纤维蛋白原，形成经干热灭活病毒处理的纤维蛋白原；

所述的保护剂由100g/L甘氨酸、100g/L L-精氨酸盐酸盐和100mmol/L枸橼酸钠组成。

8.如权利要求5-7任一项所述的方法，其特征在于，所述的蛋白活性保护剂是热稳定剂和/或蛋白复溶促进剂。

9.一种纤维蛋白原组合物，其特征在于，它是灰白色或淡黄色疏松体，复溶后溶液澄清；且复溶时间≤30分钟；

所述灰白色或淡黄色疏松体由含有下述物质的溶液冻干后获得：3.0％纤维蛋白原，60mmol/L枸橼酸钠，60g/L L-精氨酸盐酸盐和60g/L甘氨酸。

10.一种纤维蛋白原组合物，其特征在于，它是灰白色或淡黄色疏松体，复溶后溶液澄清；且复溶时间≤30分钟；

所述灰白色或淡黄色疏松体由含有下述物质的溶液冻干后获得：2.0％纤维蛋白原，5mmol/L枸橼酸钠，5g/L L-精氨酸盐酸盐和5g/L甘氨酸。

11.一种纤维蛋白原组合物，其特征在于，它是灰白色或淡黄色疏松体，复溶后溶液澄清；且复溶时间≤30分钟；

所述灰白色或淡黄色疏松体由含有下述物质的溶液冻干后获得：5.0％纤维蛋白原，100mmol/L枸橼酸钠，100g/L L-精氨酸盐酸盐和100g/L甘氨酸。