JP2015198670A - 固体含有生物抽出物のウイルスおよび微生物含有量を低減する方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】(a)酵素、タンパク質及びペプチドから選択された、生物活性を示す少なくとも1種類の有効成分またはそのような有効成分の混合物を含む固体含有生物抽出物を調製するステップと、(b)ステップ(a)において調製された抽出物を3000〜6000barの圧力下で高圧処理にかけるステップとを含み、高圧処理後の固体含有生物抽出物の生物活性が、高圧処理前の固体含有生物抽出物の生物活性の少なくとも50%に相当する方法。固体含有抽出物がブタの膵臓から得られた抽出物である方法。
【選択図】図2
Description
以下の例は、ブタの膵臓から得られた固体含有生物抽出物としてのパンクレアチンの製造方法の中間段階の高圧処理について記述する。
処理は、高圧装置中でバッチ法により実施した。
得られた結果によると、濾過ケーク(図2)で測定された3種類の酵素活性は、6000barの高圧処理においても有意な低下を示さない(図4)。リパーゼ活性は、濾過液(図2)においてもすべての圧力で安定していた。これに反して、濾過液中のアミラーゼ活性は、4000barを超える圧力では明らかに低下していた(図3)。
以下の例は、ブタの膵臓から得られたパンクレアチンの製造方法における濾過ケークの高圧処理について記述する。
処理は、高圧装置中でバッチ法により実施した。
得られた結果によると、濾過ケーク(図2)における酵素の不活化は、圧力にも温度にも依存することが分かる。リパーゼ活性は最高の安定性を有し、7000barの圧力においても有意には不活化しなかった(図5)。これに反して、アミラーゼ活性は、高圧処理に対して最大の感度を示した。低い温度は、酵素活性を安定化させる影響を持っていた(図5)。
以下の例は、外皮を持たないウイルス、FCVの高圧による不活化について記述する(FCV:ネコカリシウイルス)。
処理は、高圧装置中でバッチ法により実施した。
得られた結果(表1)によると、20℃で5分間4000barで処理した試料を除いて、すべての試料において高圧処理によりウイルス力価は、1.9logの検出限界未満まで減少していることが分かる。未処理試料と処理試料からウイルス力価を求め、その差から、分離係数≧6.3logが得られる。FCVは、ブタで検出されヒトに病原性を示すが、それ自体は細胞培養で検出不可能な、同様に外皮を持たないHEVのウイルスモデルとして使用される。このウイルスの分離が>6log程度であることは、パンクレアチンの生物学的安全性が実質的に改善されたことを示している。
以下の例は、外皮を持たないウイルス、FCV、EMCV(脳心筋炎ウイルス)およびReo3の、高圧による不活化について記述する。
処理は、高圧装置中でバッチ法により実施した。
得られた結果(表2)によると、調べたすべてのウイルスの力価は、高圧処理により有意に減少していた。FCVでは、3.82logの減少係数を示した。他の2種類のウイルスでは、力価が1.5logの検出限界未満まで減少した。対応する投入力価から、EMCVでは≧4.98logの減少率、Reo3では≧3.78logの減少率が得られた。これら3種類の人獣共通感染性ウイルス(FCV=HEVモデル)の力価が3.5log程度を超えるまで減少したことは、パンクレアチンの生物学的安全性が格段に改善されたことを示す。この試験によれば、パンクレアチン製造処理の処理中間段階(Prozessintermediaten)における、様々なウイルスの力価は高圧処理により有意に減少し得ることが分かった。ウイルスの最適な不活化は、同時にパンクレアチン中に存在する酵素の最大の安定性が保証される条件下(温度≦0℃)で達せられる。
Claims (19)
- 固体含有生物抽出物のウイルスおよび微生物含有量を低減する方法において、
(a)酵素、タンパク質およびペプチドから選択される、生物活性を示す少なくとも1種類の有効成分またはそのような有効成分の混合物を含む固体含有生物抽出物を調製するステップと、
(b)ステップ(a)において調製された抽出物を高圧処理にかけるステップとを含み、高圧処理後の固体含有生物抽出物の生物活性が、高圧処理前の固体含有生物抽出物の生物活性の少なくとも50%に相当することを特徴とする方法。 - 固体含有生物抽出物が、液相および前記液相中に分散する固体微粒子を含む懸濁液として調製され、生物活性を示す有効成分の前記混合物は一部が液相に溶解し他の一部が固体微粒子に結合していることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 固体含有生物抽出物が固体状に調製されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 固体含有生物抽出物が動物の器官から得られたものであることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一つに記載の方法。
- 固体含有抽出物がブタの膵臓から得られた抽出物であることを特徴とする、請求項1〜4のいずれか一つに記載の方法。
- 高圧処理が1000〜8000barの圧力下で実施されることを特徴とする、請求項1〜5のいずれか一つに記載の方法。
- 圧力処理が一定の圧力下でまたはパルス圧力により実施されることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか一つに記載の方法。
- 固体含有生物抽出物を高圧処理前に濾過ステップにかけ、それにより濾過液および濾過ケークを得、前記濾過ケークを高圧処理にかけることを特徴とする、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 濾過ケークが、前記濾過ケークの重量に対して少なくとも40重量%の固体割合を有することを特徴とする、請求項8に記載の方法。
- 高圧処理後の固体含有生物抽出物の生物活性が、高圧処理前の固体含有生物抽出物の生物活性の少なくとも90%に相当することを特徴とする、請求項1〜9のいずれか一つに記載の方法。
- 生物活性を示す有効成分の少なくとも1種類が酵素である場合、高圧処理後の固体含有生物抽出物の酵素活性が、高圧処理前の固体含有生物抽出物の酵素活性の少なくとも50%に相当することを特徴とする、請求項1〜9のいずれか一つに記載の方法。
- 生物活性を示す有効成分の少なくとも1種類が酵素である場合、高圧処理後の固体含有生物抽出物の酵素活性が、高圧処理前の固体含有生物抽出物の酵素活性の>80%に相当することを特徴とする、請求項1〜11のいずれか一つに記載の方法。
- 高圧処理後における固体含有生物抽出物のウイルス感染性が、高圧処理前のウイルス感染性に比較して、1log10超の減少率まで低減されることを特徴とする、請求項1〜12のいずれか一つに記載の方法。
- 高圧処理後における固体含有生物抽出物のウイルス感染性が、高圧処理前のウイルス感染性に比較して、4log10超の減少率まで低減されることを特徴とする、請求項1〜12のいずれか一つに記載の方法。
- 高圧処理後の、有毒物質による固体含有生物抽出物の含有量が、処理前より大きくならないことを特徴とする、請求項1〜14のいずれか一つに記載の方法。
- 高圧処理後の、非胞子形成体による病原体含有量が、検出限界未満または50 KBE/g未満であることを特徴とする、請求項1〜15のいずれか一つに記載の方法。
- 請求項1〜16のいずれか一つに記載の方法によって得られる固体含有生物抽出物において、
前記固体含有生物抽出物の酵素活性が、ステップ(a)で調製された未高圧処理の固体含有生物抽出物の生物活性の少なくとも50%に相当し、
前記固体含有生物抽出物のウイルス感染性が、ステップ(a)で調製された固体含有生物抽出物のウイルス感染性に比較して、1log10超の減少率まで低減され、
前記抽出物の病原体含有量が、500 KBE/g未満である、
ことを特徴とする固体含有生物抽出物。 - 抽出物がブタの膵臓から得られた抽出物であることを特徴とする、請求項17に記載の固体含有生物抽出物。
- 食品もしくは食料品または栄養補助食品としての、請求項1〜16のいずれか一つに記載の方法によって製造された固体含有生物抽出物の使用。
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