CN101531665A

CN101531665A - 补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法

Info

Publication number: CN101531665A
Application number: CN200810043168A
Authority: CN
Inventors: 张宁; 韩杨; 王拥军; 江雪芹; 刘新华
Original assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2008-03-11
Filing date: 2008-03-11
Publication date: 2009-09-16

Abstract

本发明涉及中药提取纯化技术领域，具体涉及补骨脂中有效成分补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法。该方法将补骨脂提取物通过大孔吸附树脂吸附后，先用低浓度乙醇洗脱杂质，再用的高浓度乙醇洗脱，收集高浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，粉碎即得补骨脂素和异补骨脂素富积物。采用本发明纯化获得的补骨脂素和异补骨脂素的总纯度达到50％以上，可适用于工业大生产。

Description

补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法

技术领域

本发明涉及中药提取纯化技术领域，具体涉及补骨脂中有效成分补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法。

背景技术

补骨脂是常用中药，在《本草图经》、《本草纲目》中都有收载。补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的果实，性味辛，苦，温，归肾、脾经。具有温肾助阳、纳气、止泻的功效。历代中医常用于治肾虚，冷泻，遗尿，滑精，小便频数，阳痿，腰膝冷痛，虚寒喘嗽，外治用于皮肤病、白癫风、秃发等。《中华人民共和国药典》2005年版一部对补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的总量限度作出明确规定，补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的总量不得少0.70％。

补骨脂具有多重药理活性。体外实验表明：补骨脂对分离破骨细胞有抑制作用。它能抑制分离破故细胞在骨片上形成的吸收陷窝的增加与扩张。补骨脂对新生大鼠成骨细胞的增殖有显著促进作用，补骨脂抗骨质疏松的作用与其增加成骨细胞的数量和促进成骨细胞增殖能力有关。补骨脂还具有增强免疫功能和扩冠作用

补骨脂的药理活性已被认识。现在临床中以补骨脂为原料制成制剂的使用已经很普遍如益肾康脉胶囊，宫炎平片等。根据补骨脂素和异补骨脂素的理化性质，采用化学的提取纯化技术对上述两种成分进行有效的提取和纯化，制备具有一定纯度的补骨脂素和异补骨脂素为制药提供原料。

刘志林等2005年在《第一军医大学学报》中介绍了补骨脂素和异补骨脂素的提纯方法。将补骨脂种子(未炮制过)碾碎，过100目筛，取该粉末300g用50％乙醇室温浸渍泡4次(1 x 900ml、3×450ml各浸泡2h)，过滤合并得到滤液2200ml滤液在水浴加热中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，得到840ml混悬液。将其置于冰箱过夜，待其分层，得补骨脂水溶部位和黑色粘稠部位；用滤布吊滤.得呈棕色树脂状浸膏8.5g。将浸膏置于100ml圆底烧瓶中，用浸膏85ml甲醇热溶，再加浸膏重1％活性炭回流15min；趁热抽滤，滤液在100℃油浴中蒸去甲醇后，放置过夜等待析出沉淀。加入10ml冰箱预冷甲醇稀释并迅速抽滤，沉淀用少许甲醇洗涤，得淡黄白色片状晶体粗品，80℃干燥，得粗品0.44g。加甲醇15ml，加热回流使粗品溶解，然后加入0.05g活性炭脱色，回流10min；趁热抽滤，放置冷却析晶，再过滤，得白色针状晶体；80℃干燥后重0.36g。母液在通风橱挥发至5ml，冰箱放置析晶，又得结晶0.05g，总计0.41g。

上述方法虽然得到较纯的补骨脂素和异补骨脂素，但该方法需要用甲醇作为溶剂进行洗涤。甲醇是一种有毒溶剂，可造成对视神经的损害，上述提纯工艺中几次用到甲醇，在工业大生产中不能实际操作。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法。该方法无需使用甲醇等有毒溶剂，且能获得高纯度的补骨脂素和异补骨脂素。

为了解决上述技术问题，本发明提出的补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法是通过下述技术方案实现的：将补骨脂药液通过大孔吸附树脂柱吸附后，先用浓度为20％-40％的乙醇洗脱杂质，再用浓度为50％-70％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，将残留物真空干燥，粉碎，制得补骨脂素和异补骨脂素富积物。

本发明所述补骨脂药液为符合中国药典质量要求的补骨脂经50％乙醇提取三次，每次1小时，提取液减压回收乙醇后，在20℃下浓缩至相对密度为0.80-0.98的药液。

本发明所述的大孔吸附树脂为市售的大孔吸附树脂。补骨脂药液通过前最好先用10-15倍量、pH为5-6的蒸馏水再生，搅拌洗涤时间为30-60分钟。

本发明所使用的大孔吸附树脂柱的径柱比最好为1：1.1-3.5，其中，层析柱所使用的材料可以是玻璃、不锈钢或玻璃钢。

本发明所述的乙醇为药用乙醇。

本发明中，补骨脂药液通过树脂柱，利用大孔树脂的吸附作用将补骨脂素和异补骨脂素提取吸附，再利用不同浓度乙醇对被吸附的补骨脂素和异补骨脂素有不同的洗脱性能，将其洗脱下来，先利用低浓度的乙醇将其他与吸附剂吸附性弱的杂质洗脱下来；再用高浓度的乙醇将补骨脂素和异补骨脂素洗脱并富集。

相对于现有技术，本发明的大孔吸附树脂用后可以再生后反复使用；乙醇溶液亦无污染和毒性，可以回收后再使用。用本发明纯化方法获得的补骨脂素和异补骨脂素经高效液相测试，按2005版中国药典一部中129页补骨脂素和异补骨脂素的检测方法，采用外标一点法测试结果表明补骨脂素和异补骨脂素的总纯度达到50％以上。另外，本发明的补骨脂素和异补骨脂素纯化方法，方便简便，纯度达到药用要求，无污染，对环境保护起到积极的作用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。

本发明下述实施例中所使用的补骨脂药液为符合中国药典质量要求的补骨脂经50％乙醇提取三次，每次1小时，提取液采用减压回收乙醇后，在20℃下浓缩至相对密度为0.80-0.98的药液。

另外，本发明下述实施例中，补骨脂药液通过大孔吸附树脂先用10-15倍量、pH为5-6的蒸馏水再生，搅拌洗涤时间为30-60分钟。

实施例1

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售HPD600大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：1.1，预吸附3小时，流速为6ml/min.用20-30倍树脂质量的20％-30％乙醇先洗脱杂质。再用6-8倍树脂质量的50％-60％乙醇洗脱杂质。收集50％-60％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量为56.5％。

实施例2

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售AB-8大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：2，预吸附3小时，流速为6ml/min.用30-40倍树脂质量的30％乙醇先洗脱杂质。再用7倍树脂质量的60％乙醇洗脱杂质。收集60％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量为57.8％。

实施例3

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售D-101大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：1.5，预吸附3小时，流速为6ml/min.用30倍树脂质量的40％乙醇先洗脱杂质。再用8倍树脂质量的60％乙醇洗脱杂质。收集60％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量为52.1％。

实施例4

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售ADK-17大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：3，预吸附3小时，流速为6ml/min.用30倍树脂质量的40％乙醇先洗脱杂质。再用7倍树脂质量的70％乙醇洗脱杂质。收集60％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量为58.1％。

实施例5

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售HPD-100大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：3.5，预吸附3小时，流速为6ml/min.用40倍树脂质量的40％乙醇先洗脱杂质。再用7倍树脂质量的60％乙醇洗脱杂质。收集60％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量为52.1％。

实施例6

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售HPD-100大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：2.8，预吸附3小时，流速为6ml/min.用25倍树脂质量的40％乙醇先洗脱杂质。再用7倍树脂质量的60％乙醇洗脱杂质。收集60％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量为60.1％。

实施例7

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售HPD-600大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：3.2，预吸附3小时，流速为6ml/min.用30倍树脂质量的25％乙醇先洗脱杂质。再用8倍树脂质量的60％乙醇洗脱杂质。收集60％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量为56.1％。

实施例8

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售AB-8大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：1.8，预吸附3小时，流速为6ml/min.用30倍树脂质量的40％乙醇先洗脱杂质。再用7倍树脂质量的60％乙醇洗脱杂质。收集60％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量大于50％。

实施例9

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售D-101大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：3.5，预吸附3小时，流速为6ml/min.用35倍树脂质量的45％乙醇先洗脱杂质。再用7倍树脂质量的50％乙醇洗脱杂质。收集50％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量为54.4％。

实施例10

取上述相对密度为0.80-0.98的药液用蒸馏水稀释(每毫升药液含生药量为0.01g，20℃)，通过市售ADK-17大孔吸附树脂，装入树脂后径柱比为1：3，预吸附3小时，流速为6ml/min.用40-50倍树脂质量的30％乙醇先洗脱杂质。再用7倍树脂质量的65％乙醇洗脱杂质。收集65％洗脱液。回收乙醇后浓缩，真空干燥即得补骨脂素和异补骨脂素的富积物。经高效液相测试，通过外标一点法测试，补骨脂素和异补骨脂素的含量为55.6％。

Claims

1、一种补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法，其特征是，将补骨脂药液通过大孔吸附树脂柱吸附后，先用浓度为20％-40％的乙醇洗脱杂质，再用浓度为50％-70％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，将残留物真空干燥，粉碎，制得补骨脂素和异补骨脂素富积物。

2、如权利要求1所述的补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法，其特征在于，补骨脂药液为符合中国药典质量要求的补骨脂经50％乙醇提取三次，每次1小时，提取液减压回收乙醇后，在20℃下浓缩至相对密度为0.80-0.98的药液。

3、如权利要求1所述的补骨脂素和异补骨脂素纯化方法，其特征在于，大孔吸附树脂为HPD-600、AB—8、HPD100、D101或ADK—17。

4、如权利要求1所述的补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法，其特征在于，大孔吸附树脂用10-15倍量、pH为5-6的蒸馏水再生，搅拌洗涤时间为30-60分钟。

5、如权利要求1所述的补骨脂素和异补骨脂素的纯化方法，其特征在于，大孔吸附树脂柱的径高比为1：1.1-3.5。