CN101530417A - 桑皮苷在预防或治疗高尿酸血症和痛风中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了化合物桑皮苷用于预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品的新用途，以及该化合物为活性成分的用于预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品组合物。使化学结构为3－[2－[4－(β－D－葡萄吡喃糖基－氧－2－羟苯基)]－(E)－乙烯基]－5－羟苯基－β－D－葡萄吡喃糖苷的化合物桑皮苷可以在制备预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品中应用。所述的桑皮苷，可从含有该成分的植物、中药材及中药饮片中提取出来的，也可通过化学合成得到。用该化合物作为药效成分来制备预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品制剂，可单独或与制药可接受的赋形剂结合，用常规的制剂方法制成桑皮苷口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂、靶向制剂等剂型。

Description

桑皮苷在预防或治疗高尿酸血症和痛风中的应用

技术领域：

本发明涉及二苯乙烯苷类单体化合物桑皮苷(Mulberroside A，简称MA)的新用途，具体涉及桑皮苷在制备预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品中的新用途，以及以该化合物为活性成分的用于预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品组合物。

背景技术：

痛风是由于嘌呤类物质代谢紊乱，产生尿酸过多或尿酸排泄减少，血尿酸浓度持续增高导致尿酸盐结晶沉积软组织所致的一组代谢性疾病。其临床表现为反复发作的关节炎，痛风石形成和关节畸形，严重者可导致关节活动障碍，累及肾脏时可引起慢性间质性肾炎和尿酸性肾石病。尿酸水平升高是痛风的生化基础，无症状性高尿酸血症是痛风发生的前期状态，痛风必伴有高尿酸血症。近年来，痛风和高尿酸血症的发病率呈上升趋势，发病年龄呈现低龄化，给社会带来巨大的负担，并且与高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、肥胖、胰岛素抵抗的发生密切相关，已成为识别代谢综合征的早期标志。痛风症状以反复下肢关节红肿热痛为主，在中医辨证上多属湿热痹范畴。其病机或因先天禀赋不足，或因后天饮食不节，脏腑功能失调，分清别浊失常，于是湿、热、瘀、浊诸症随之产生。

西医对痛风和高尿酸血症的治疗主要有阻止内源性嘌呤合成的药物(如别嘌呤醇)及促尿酸排泄(丙磺舒、苯溴马龙)的药物。单用别嘌呤醇和丙磺舒均可使血尿酸降低，但毒副作用大，患者往往不能坚持长期服用以致不易控制病情。

中药治疗痛风、高尿酸血症倍受关注，有分阶段论治，也有专方治疗，近年来，由于中医药治疗痛风疗效确切，方法多而毒副反应少，显示出较大的优势，而越来越受到人们的关注。

桑皮苷结构式、分子式和美国化学文摘收录号(CASNo.)如下：

桑皮苷是一种可从天然植物、中药材或中药饮片中提取出来的具有降尿酸作用的二苯乙烯苷，可由天然产物中分离得到，其化学结构为3-[2-[4-(β-D-葡萄吡喃糖基-氧-2-羟苯基)]-(E)-乙烯基]-5-羟苯基-β-D-葡萄吡喃糖苷。许多文献报道了利用柱层析从天然植物、中药材或中药饮片(例如桑白皮、桑根皮、桑树皮、桑枝以及藜芦的地上部分或种子中)分离得到桑皮苷(Hirakura，Kazuhiro；Kimura，Yoshiyuki；Qiu，Feng；Kanchanapoom，Tripetch；Li，Haitao；Piao，Shujuan)。也有报道由化学结构/合成得到桑皮苷(Shimazaki，M.；Hano，Y.；Nomura，T.Faculty of Pharmaceutical Sciences，Toho University，Funabashi，Chiba，Japan.Naturwissenschaften(2000)，87(12)，546-548)。

桑皮苷有抑制黑色素，增白作用，是一种酪氨酸酶抑制剂(Li，Haitao；Cheng，Ka-Wing；Cho，Chi-Hin；He，Zhendan；Wang，Mingfu.Department of Botany，The University of Hong Kong，Hong Kong，Peop.Rep.China.Journal of Agricultural and Food Chemistry(2007)，55(7)，2604-2610.)，桑皮苷还有抗氧化、抗炎作用(Chung，Kyung-Ook；Kim，Bo-Young；Lee，Myung-Hee；Kim，Yeo-Ryun；Chung，H ae-Young；Park，Jong-Hee；Moon，Jeon-Ok.College ofPharmacy，Pusan National University，Pusan，S.Korea.Journal of Pharmacy andPharmacology(2003)，55(12)，1695-1700)以及止咳平喘的作用(阚启明)。

但化合物单体桑皮苷在用于制备预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品方面未见报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种桑皮苷在制药领域的新用途，具体地说，是提供一种桑皮苷在用于制备预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品方面的新用途；同时提供一种预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品组合物。

所述的降尿酸桑皮苷，可由天然产物中分离得到，也可由化学结构/合成得到，但较多的是由天然产物中分离得到天然产物桑皮苷。

所述的天然产物桑皮苷，它是从桑白皮、桑根皮、桑树皮、桑枝以及藜芦的地上部分或种子中提取出来的；提取和分离方法均为上述本专业中常见的方法。

所述的降尿酸桑皮苷，其化学结构为：3-[2-[4-(β-D-葡萄吡喃糖基-氧-2-羟苯基)]-(E)-乙烯基]-5-羟苯基-β-D-葡萄吡喃糖苷。

所述的具有降尿酸药效的桑皮苷，采用高效液相色谱法(紫外检测器)测得桑皮苷的含量大于98.0％。

桑皮苷对高尿酸血症表现出降尿酸作用，表明该化合物可用于制备预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品。

所述的具有降尿酸药效的桑皮苷，对小鼠高尿酸血症模型表现出降尿酸作用。

本发明的优点是：本发明发现了降尿酸作用的药效成分桑皮苷，作为一个天然的降尿酸剂，具有药效作用明确，服用量较小的特点。

本发明用于预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品组合物，含有预防或治疗高尿酸血症和痛风有效量的桑皮苷化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体；用该化合物作为药效成分来制备预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品制剂，可单独或与制药可接受的赋形剂等结合，按照常规方法制成口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂等剂型，优选的是靶向剂型。

本发明的化合物的药物组合物可用于制备预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物。

上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇等。另外还可以组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明化合物可以组合物的形式通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、颗粒剂、胶囊剂等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、胶囊剂、栓剂、鼻喷雾剂和注射剂，特别优选在肠道的特定部位释放的制剂。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明的药物组合物优选含有重量比为98％～100％的活性成分，最优选含有重量比为99％～100％的活性成分。

本发明化合物的使用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化，确定其日剂量，可以一次或多次施用。

附图说明：

图1为MA对小鼠高尿酸血症血清尿酸水平的影响结果图；

图2为MA对小鼠高尿酸血症血清肌酐水平的影响结果图；

图3为MA对小鼠高尿酸血症尿液尿酸水平的影响结果图；

图4为MA对小鼠高尿酸血症肝脏尿酸水平的影响结果图；

图5为蛋白质印迹法Western-blotting测定肾脏mURAT1蛋白水平结果图；

图6为逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定肾脏mURAT1mRNA水平结果图。

具体实施方式：

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

氧嗪酸钾盐是一种尿酸酶抑制剂，可诱导抑制尿酸分解，增加体内血清尿酸水平，造成高尿酸血症动物模型，国际上普遍用其评价药物的抗高尿酸血症和痛风作用。本发明亦采用高尿酸而症验证药物的降尿酸疗效，疗效可靠，效果显著。

实验动物：昆明种小鼠，24±2g克，雄性。

药物配制：含有重量比为98％～100％的的天然产物桑皮苷均匀分散于生理盐水中，用于灌胃给药，给药低剂量10mg/kg、高剂量为40mg/kg。

实验材料：HPD—600型大孔吸附树脂，Trizol Reagment(Invigen)，氯仿，异丙醇，无水乙醇，DEPC，M-MLV反转录酶，PCR试剂盒，RIPA裂解液，尿酸试剂盒，肌酐试剂盒。

实验仪器：高速冷冻离心机，高速匀浆机，Bio-rad垂直电泳槽，MBI-PCR仪、水平电泳槽等。

实验模型：小鼠高尿酸血症模型。

实验方法：

1.模型的建立：动物适应环境1周后，灌胃给予氧嗪酸钾盐250mg/kg；空白对照给予等体积生理盐水，造模周期7天。

2.给药：造模期间同时给药，在给予氧嗪酸钾盐造模/生理盐水对照1h后，灌胃给予桑皮苷单体化合物两个剂量10mg/kg、40mg/kg，别嘌呤醇(Apu)5mg/kg，对照组给予生理盐水。

3.小鼠处死及组织的保存：小鼠灌胃给予桑皮苷/生理盐水1h后处死，取血，另外注意收集小鼠的尿液，冰台上分离肝脏、肾脏组织，组织经液氮冷冻后保存于-80℃，待测。

4.蛋白质印迹法(Western-blotting)：提取肾脏组织刷状缘膜蛋白，考马氏亮蓝法法测蛋白浓度，提取蛋白经12％的SDS-PAGE胶电泳分离后，PVDF转膜，封闭液封闭1小时后加入mURAT1抗体(根据NCBI数据库mURAT1蛋白序列制备，使用浓度为1∶4000)4℃孵育过夜，二抗(1∶4000)室温摇床孵育1小时，HRP-ECL发光，暗室曝光显影。胶片扫描后对图片灰度分析。

5.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)：提取小鼠肾脏组织总RNA，逆转录到cDNA模板，根据NCBI数据库mURAT1基因设计引物，进行mURAT1目的基因扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后UV成像，对图片进行灰度分析。

6.实验结果：

(1)MA对小鼠高尿酸血症血清尿酸水平的影响，结果见图1。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较。

(2)MA对小鼠高尿酸血症血清肌酐水平的影响，结果见图2。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较。

(3)MA对小鼠高尿酸血症尿液尿酸水平的影响，结果见图3。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较。

(4)MA对小鼠高尿酸血症肝脏尿酸水平的影响，结果见图4。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较。

(5)蛋白质印迹法Western-blotting测定肾脏mURAT1蛋白水平，结果见图5。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较。

(6)逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定肾脏mURAT1mRNA水平，结果见图6。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较。

结果：单体化合物桑皮苷可显著降低高尿酸血症模型下动物血清尿酸水平、肝脏尿酸水平和血清肌酐水平，显著增加模型动物尿液尿酸水平，而对正常动物血清尿酸、肝脏尿酸、血清肌酐、尿液尿酸水平无显著影响，表明桑皮苷可降低高尿酸血症动物尿酸，并具有肾损伤保护作用，并可安全有效地治疗和预防高尿酸血症和痛风。桑皮苷可显著抑制高尿酸血症小鼠肾脏mURAT1mRNA和URAT1蛋白的高表达，表明桑皮苷降尿酸作用与其抑制尿酸重吸收转运子mURAT1以提高肾脏尿酸排泄。

Claims (4)

1.桑皮苷在制备预防或治疗高尿酸血症和痛风药物或保健食品中的应用。

2.根据权利要求1所述的桑皮苷在制备预防或治疗高尿酸血症和痛风药物或保健食品中的应用，其特征在于：所述桑皮苷的重量比含量在98％-100％。

3.根据权利要求1所述的桑皮苷在制备预防或治疗高尿酸血症和痛风药物或保健食品中的应用，其特征在于：所述桑皮苷的重量比含量在99％-100％。

4.用于预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品组合物，其中含有预防或治疗高尿酸血症和痛风有效量的桑皮苷化合物和药学上可接受的载体；用该化合物作为药效成分来制备预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品制剂，可单独或与制药可接受的赋形剂等结合，按照常规方法制成口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂、靶向制剂等剂型。

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