CN101502527A - 桑皮苷在制备抑制尿酸重吸收转运子药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了化合物桑皮苷用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物中的新用途，以及该化合物为活性成分的用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物组合物。使化学结构为3－[2－[4－(β－D－葡萄吡喃糖基－氧－2－羟苯基)]－(E)－乙烯基]－5－羟苯基－β－D－葡萄吡喃糖苷的化合物桑皮苷可以在制备抑制尿酸重吸收转运子药物中应用。所述的桑皮苷，可从含有该成分的植物、中药材及中药饮片中提取出来的，也可通过化学合成得到。用该化合物作为药效成分来制备抑制尿酸重吸收转运子药物制剂，可单独或与制药可接受的赋形剂结合，用常规的制剂方法制成桑皮苷口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂、靶向制剂等剂型。

Description

桑皮苷在制备抑制尿酸重吸收转运子药物中的应用

技术领域：

本发明涉及二苯乙烯苷类单体化合物桑皮苷(Mulberroside A，简称MA)的新用途，具体涉及桑皮苷在制备抑制尿酸重吸收转运子药物中的新用途，以及以该化合物为活性成分的用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物的组合物。

背景技术：

近年来，国内外大量流行病学研究表明高尿酸血症/痛风的患病率正逐年升高，高尿酸血症不仅诱发痛风性关节炎、尿石症、尿酸性肾病，而且血尿酸水平升高与脂质代谢异常、肥胖等疾病密切相关，高尿酸血症/痛风已成为威胁人类健康的重要疾病。尿酸排泄减少和/或生成增加是原发性高尿酸血症的主要病因。嘌呤代谢过程中关键酶的缺陷所导致的嘌呤利用障碍和/或嘌呤氧化酶的活性增强是尿酸生成增加的主要原因，肾近端小管对尿酸的重吸收增加和/或分泌减少是尿酸排泄减少的主要原因。尿酸排出减少或生成增加，可导致血液中尿液浓度增高，直接或间接引起相关疾病。尿酸的排泄是一复杂过程，尿酸随血液循环流入肾小球时，游离型的尿酸将全部滤过，在近端肾小管约99％尿酸盐被重吸收。

研究表明尿酸排泄过程受多种基因和表达产物共同调控，是一个复杂过程。由于尿酸带负电荷，不能自由通过细胞膜脂质双层，因此肾小管对尿酸的排泄依赖于离子通道。有学者发现，有一些尿酸盐转运蛋白参与了近曲肾小管对尿酸盐的重吸收和主动分泌。而且有研究发现，通过肾皮质细胞膜的尿酸转运有两种方式：一种是通过电中性的阴离子转运体与一系列有机和无机阴离子的交换来转运尿酸盐；另一种是通过产电的尿酸盐转运体，它是一种单向转运体。近年来，已从分子水平证实4种蛋白质参与了尿酸盐的转运：产电的尿酸盐单向转运体(UAT)；有机阴离子转运体(OAT)家族的两种蛋白：OAT1(Ichida K，Hosoyamada M，KimuraH，etal.Urate transport via human PAHtrans porterhOAT1and its gene structure[J].Kid ney Int，2003，63：143-155)和OAT3(Cha SH，Sekine T，Fukushima J I，et al.Identification andcharacterization of human organic anion transporter 3 exp ressing predominantly in the kidney[J].Mol Pharmacol，2001，59：1277-1286)参与了尿酸盐的转运；与OAT4有部分同源性的蛋白质，命名为人尿酸盐阴离子交换器(URAT1)，已证实它主要参与尿酸的重吸收(Enomoto A，KimuraH，Chairoungdua A，et al.Molecular identification of a renal urate anion exchanger that regulatesblood urate levels[J].Nature，2002，417：4472452.)。

桑皮苷结构式、分子式和美国化学文摘收录号(CASNo.)如下：

桑皮苷可由天然产物中分离得到，许多文献报道了利用柱层析从天然植物、中药材或中药饮片(例如桑白皮、桑根皮、桑树皮、桑枝以及藜芦的地上部分或种子中)分离得到桑皮苷(Hirakura，Kazuhiro；Kimura，Yoshiyuki；Qiu，Feng；Kanchanapoom，Tripetch；Li，Haitao；Piao，Shujuan)。也有报道由化学结构/合成得到桑皮苷(Shimazaki，M.；Hano，Y.；Nomura，T.Faculty of Pharmaceutical Sciences，Toho University，Funabashi，Chiba，Japan.Naturwissenschaften(2000)，87(12)，546-548)。

桑皮苷有抑制黑色素，增白作用，是一种酪氨酸酶抑制剂(Li，Haitao；Cheng，Ka-Wing；Cho，Chi-Hin；He，Zhendan；Wang，Mingfu.Department of Botany，The University of HongKong，Hong Kong，Peop.Rep.China.Journal of Agricultural and Food Chemistry(2007)，55(7)，2604-2610.)桑皮苷还有抗氧化、抗炎作用(Chung，Kyung-Ook；Kim，Bo-Young；Lee，Myung-Hee；Kim，Yeo-Ryun；Chung，Hae-Young；Park，Jong-Hee；Moon，Jeon-Ok.College ofPharmacy，Pusan National University，Pusan，S.Korea.Journal of Pharmacy andPharmacology(2003)，55(12)，1695-1700.)以及止咳平喘的作用(阚启明)。但化合物单体桑皮苷在用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物方面未见报道。

发明内容：

木发明的目的是提供单体化合物桑皮苷用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物的新用途，具体地说，是提供一种桑皮苷在用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物的新用途；同时提供一种制备抑制尿酸重吸收转运子药物的组合物。

本发明的优点是，提供了对尿酸重吸收转运子具有抑制调节作用的桑皮苷，用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物，可用于制备与尿酸重吸收转运子异常高表达相关的疾病。本发明提供的单体化合物桑皮苷在制备抑制尿酸重吸收转运子药物应用中具有以下优点：1、药效成分确切(单体化合物)；2、作用机制明确(通过尿酸重吸收转运子)；3、调节作用明确(抑制调节)。

本发明利用高尿酸血症动物模型在基因转录水平和蛋白表达水平上科学地评价并确定了单体化合物桑皮苷对尿酸重吸收转运子的抑制调节作用。

本发明所涉及的单体化合物桑皮苷对模型动物表达异常增高的尿酸重吸收转运子具有确切的抑制作用；而对正常动物的正常水平尿酸重吸收转运子表达无显著抑制作用，具有很好的安全性。

本发明用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物的组合物，含有制备抑制尿酸重吸收转运子药物的有效量的桑皮苷化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体；用该化合物作为药效成分来制备抑制尿酸重吸收转运子药物的制剂，可单独或与制药可接受的赋形剂等结合，按照常规方法制成口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂等剂型，优选的是靶向剂型。

本发明的化合物的药物组合物可用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物。

上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇等。另外还可以组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明化合物可以组合物的形式通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、颗粒剂、胶囊剂等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、胶囊剂、栓剂、鼻喷雾剂和注射剂，特别优选在肠道的特定部位释放的制剂。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明的药物组合物优选含有重量比为98％～100％的活性成分，最优选含有重量比为99％～100％的活性成分。

本发明化合物的使用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化，确定其日剂量，可以一次或多次施用。

附图说明：

图1为MA对小鼠高尿酸血症血清尿酸水平的影响结果图；

图2为MA对小鼠高尿酸血症血清肌酐水平的影响结果图；

图3为MA对小鼠高尿酸血症尿液尿酸水平的影响结果图；

图4为MA对小鼠高尿酸血症肝脏尿酸水平的影响结果图；

图5为蛋白质印迹法Western-blotting测定肾脏mURAT1蛋白水平结果图；

图6为逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定肾脏mURAT1mRNA水平结果图。

具体实施方式：

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

单体化合物桑皮苷对尿酸重吸收转运子URAT1的抑制调节作用。

实验动物：昆明种小鼠，24±2g克，雄性。

药物配制：含有重量比为98％～100％的的天然产物桑皮苷均匀分散于生理盐水中，用于灌胃给药，给药低剂量10mg/kg、高剂量为40mg/kg。

实验材料：HPD—600型大孔吸附树脂，Trizol Reagment(Invigen)，氯仿，异丙醇，无水乙醇，DEPC，M-MLV反转录酶，PCR试剂盒，RIPA裂解液，尿酸试剂盒，肌酐试剂盒。

实验仪器：高速冷冻离心机，高速匀浆机，Bio-rad垂直电泳槽，MBI-PCR仪、水平电泳槽等。

实验模型：小鼠高尿酸血症模型。

实验方法：

1.模型的建立：动物适应环境1周后，灌胃给予氧嗪酸钾盐250mg/kg；空白对照给予等体积生理盐水，造模周期7天。

2.给药：造模期间同时给药，在给予氧嗪酸钾盐造模/生理盐水对照1h后，灌胃给予桑皮苷单体化合物两个剂量10mg/kg、40mg/kg，别嘌呤醇(Apu)5mg/kg，对照组给予生理盐水。

3.小鼠处死及组织的保存：小鼠灌胃给予桑皮苷/生理盐水1h后处死，取血，另外注意收集小鼠的尿液，冰台上分离肝脏、肾脏组织，组织经液氮冷冻后保存于-80℃，待测。

4.蛋白质印迹法(Western-blotting)：提取肾脏组织刷状缘膜蛋白，考马氏亮蓝法法测蛋白浓度，提取蛋白经12％的SDS-PAGE胶电泳分离后，PVDF转膜，封闭液封闭1小时后加入mURAT1抗体(根据NCBI数据库mURAT1蛋白序列制备，使用浓度为1∶4000)4℃孵育过夜，二抗(1∶4000)室温摇床孵育1小时，HRP-ECL发光，暗室曝光显影。胶片扫描后对图片灰度分析。

5.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)：提取小鼠肾脏组织总RNA，逆转录到cDNA模板，根据NCBI数据库mURAT1基因设计引物，进行mURAT1目的基因扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后UV成像，对图片进行灰度分析。

6.实验结果：

(1)MA对小鼠高尿酸血症血清尿酸水平的影响，结果见图1。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较

(2)MA对小鼠高尿酸血症血清肌酐水平的影响，结果见图2。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较

(3)MA对小鼠高尿酸血症尿液尿酸水平的影响，结果见图3。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较

(4)MA对小鼠高尿酸血症肝脏尿酸水平的影响，结果见图4。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较

(5)蛋白质印迹法Western-blotting测定肾脏mURAT1蛋白水平，结果见图5。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较

(6)逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定肾脏mURAT1mRNA水平，结果见图6。

⁺⁺⁺P<0.001，⁺⁺P<0.01，⁺P<0.05与空白组比较；^***P<0.001，^**P<0.01，^*P<0.05与模型组比较

小结：单体化合物桑皮苷可显著降低高尿酸血症模型下动物血清尿酸水平、肝脏尿酸水平和血清肌酐水平，显著增加模型动物尿液尿酸水平，而对正常动物血清尿酸、肝脏尿酸、血清肌酐、尿液尿酸水平无显著影响，表明桑皮苷具有降低高尿酸血症动物尿酸和肾保护作用损伤，可安全有效地治疗和预防高尿酸血症和痛风。桑皮苷可显著抑制模型小鼠肾脏mURAT1mRNA和蛋白水平表达，表明桑皮苷的降尿酸作用与其抑制尿酸重吸收转运子mURAT1mRNA和蛋白表达有关，以增加高尿酸血症动物肾脏尿酸排泄。表明桑皮苷可用来制备抑制尿酸重吸收转运子mURAT1药物。

Claims (4)

1.桑皮苷在制备抑制尿酸重吸收转运子药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的桑皮苷在制备抑制尿酸重吸收转运子药物中的应用，其特征在于：所述桑皮苷的重量比含量在98％-100％。

3.根据权利要求1所述的桑皮苷在制备抑制尿酸重吸收转运子药物组合物中的应用，其特征在于：所述桑皮苷的重量比含量在99％-100％。

4.用于制备抑制尿酸重吸收转运子药物的组合物，其中含有制备抑制尿酸重吸收转运子药物的有效量的桑皮苷化合物和药学上可接受的载体；用该化合物作为药效成分来制备抑制尿酸重吸收转运子药物，可单独或与制药可接受的赋形剂等结合，按照常规方法制成口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂、靶向制剂等剂型。

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