CN101528234A

CN101528234A - Mtki1用于治疗或预防骨癌的用途

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Publication number: CN101528234A
Application number: CNA2007800397940A
Authority: CN
Inventors: T·P·S·佩雷拉; M·M·F·贾尼科特; T·F·米尔特; E·J·E·弗雷恩
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 2006-10-27
Filing date: 2007-10-25
Publication date: 2009-09-09

Abstract

本发明涉及PCT公开WO2004/105765中描述为化合物22的大环喹唑啉衍生物4，6－联二亚甲基嘧啶并[4，5－b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环－十五因，17－溴－8，9，10，11，12，13，14，19－八氢－20－甲氧基－13－甲基，用于制备治疗或预防骨癌的药物和杀死骨癌细胞，包括骨肉瘤、软骨肉瘤、骨髓瘤骨病和其他原发位点的溶骨性骨转移的方法的发现。本发明因此提供治疗、预防、延缓或减轻骨癌，或预防和治疗与癌症转移相关的骨损失的方法。

Description

MTKI1用于治疗或预防骨癌的用途

发明领域

本发明涉及PCT公开WO2004/105765中描述为化合物22的大环喹唑啉衍生物4，6-联二亚甲基(ethanediylidene)嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因(benzoxadiazacyclo-pentadecine)，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基，用于制备治疗或预防骨癌的药物和杀死骨癌细胞，包括骨肉瘤、软骨肉瘤、骨髓瘤骨病和其他原发位点的溶骨性骨转移的方法的发现。本发明因此提供治疗、预防、延缓或减轻骨癌，或预防和治疗与癌症转移相关的骨损失的方法。

发明背景

“骨癌”包括原发性骨癌细胞，例如骨肉瘤细胞、Ewing`s家族肿瘤细胞、软骨肉瘤细胞、恶性巨细胞瘤细胞、恶性纤维组织细胞瘤细胞和釉质瘤细胞，以及由包括乳腺、肺、前列腺和肾的其他组织转移的继发性骨癌细胞。

骨肉瘤是骨的恶性肿瘤，在青少年和青年中最为流行。骨肉瘤占大约5％的儿童期肿瘤和80％的起源于膝周围的这些肿瘤。预后常常很差，并且在开始确定的治疗的1年后，大约30％诊断患有骨肉瘤的病人会发展肺转移。在诊断时或不同阶段的化疗后，预后似乎由转移的部位和转移性疾病的手术可切除性决定。在化疗后完全手术切除原发性和转移性肿瘤(当局限于肺时)的患者可以实现长期生存，虽然对于在诊断时患有转移性疾病的患者无事件生存保持约20％。发展复发性疾病的患者通常具有差的预后并在转移性疾病发展1年内死亡。

化疗通常是无效的，导致高的死亡率。因此，评价用于这种恶性疾病的新的治疗方法是重要的。

骨髓瘤骨病是骨髓中抗体-生成浆细胞癌症。癌性浆细胞增殖，称为骨髓瘤细胞，引发许多效应，包括骨中溶骨性病变(孔)、减少的红细胞数、异常蛋白的生成(具有对肾、神经和其他器官的伴随性损害)、降低的免疫系统功能和升高的血钙水平(高钙血症)。

当骨髓瘤细胞存在于不同的骨骼部位时，疾病称为多发性骨髓瘤。

虽然在美国只占所有癌症的1％，在2002年报道了14,6000个新病例，骨髓瘤是第二个最常见的血癌并且患病率可能会增加，特别是在小于55岁的个体中(国际骨髓瘤基金会)。许多不同的治疗选择是可得到的或者处于发展中，但是既没有治愈也没有就最佳的骨髓瘤治疗方案达成一致。患者使用化疗以及用于一种或多种的高钙血症、增加的感染风险、肾衰竭、贫血、血高粘性、升高的中风风险、骨组织破坏和疼痛以及肌无力的症状特异性疗法进行治疗。不幸地是，骨髓瘤细胞数目的显著减少不会必然地转变为更长的缓解或生存时间，在缓解前有效的疗法在疾病复发后未可能证明是无效的。

骨髓瘤最普遍的和显著的特点之一是破骨细胞的活化，吸收骨的多核细胞，导致骨变薄、溶骨性病变和骨折。溶骨性病变发生于70-80％的多发性骨髓瘤患者中，并且经常与严重的骨痛和病理性骨折相关。在正常的骨功能中，吸收骨的破骨细胞和生成骨的成骨细胞之间存在平衡。在骨髓瘤患者中这种平衡失常，吸收的骨比生成的更多。增加的破骨细胞性骨吸收邻近骨髓瘤细胞发生，不发生于正常骨髓区域内，表明破骨细胞活化通过局部机制发生。虽然公认骨髓瘤细胞激活破骨细胞，但其发生的精确机制是未知的。培养中的骨髓瘤细胞生成或诱导一些破骨细胞激活因子(OAF)的生成，破骨细胞激活因子在体内的特异性作用仍然需要确定。近来，趋化因子巨噬细胞炎性蛋白-1a涉及体外破骨细胞的活化(S.J.Choi等，Blood 96：671-675(2000))。解决涉及OAF机制的疗法目前正处于发展中。

目前，多发性骨髓瘤的骨症状主要使用二膦酸盐治疗，二膦酸盐是一类抑制破骨细胞活性或破骨细胞附着于骨表面并最终导致破骨细胞死亡的化学药物。它们也可以直接影响骨髓瘤细胞。二膦酸盐通过输注给药。第三代的二膦酸盐目前正处于研发中，但即使改进版本的药物可能具有潜在的副作用，包括低血钙症、肾损害和增加的疼痛。

二膦酸盐不会完全阻断骨组织破坏过程，患者最终发展新的骨损伤。能够口服给药的用于多发性骨髓瘤中骨组织破坏的可选择的疗法将是非常有利的。

骨转移通常与晚期癌症相关，最常见的是与乳腺、前列腺和甲状腺癌和多发性骨髓瘤(同上)相关。骨转移存在于65-75％的患有晚期(转移性)乳腺癌的患者中。转移性骨损伤在本质上可以是溶解性的或硬化的，取决于是增加的破骨性或是成骨性活性占优势；如果两个过程是相等活性的，它们被称为混合损伤。乳腺癌患者中骨转移通常涉及溶骨性疾病，其中正常的骨稳定被中断并向骨的过度吸收倾斜(Coleman RE，Cancer Treat Rev.27(3)，165-76(2001))。肿瘤诱导的骨胳损伤由破骨细胞介导，破骨细胞受到肿瘤细胞或相关免疫细胞释放的局部因子(例如，前列腺素E、白介素-1、肿瘤坏死因子和组织蛋白酶(procathepsin)D)或通过例如甲状旁腺素相关肽的全身性因子的直接或间接地刺激溶解骨。最常见的受侵袭的骨骼部位是椎骨、骨盆、肋骨、股骨和颅骨。

患有骨转移的患者经历相当大的发病率，包括骨痛、病理性骨折、高钙血症、降低的活动度和脊髓或神经根压迫。尽管这些临床问题很重要，但还没有针对与癌症转移相关的骨损失的治疗。因此，本领域存在对鉴定新的药物和预防或治疗骨转移，包括溶骨性骨转移的方法的需要。

发明概述

本发明部分地涉及利用WO2004/105765中描述的某些化合物治疗或预防骨癌的方法，和治疗或预防与癌症转移相关的骨损失的方法，其公开的内容在此整体引入作为参考。

在一个实施方案中，本发明提供PCT公开WO2004/105765中描述为化合物22的大环喹唑啉衍生物4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基，用于制备治疗或预防骨癌的药物的用途和杀死骨癌细胞，包括骨肉瘤、软骨肉瘤、骨髓瘤骨病和其他原发位点的溶骨性骨转移的方法。本发明因此提供治疗、预防、延缓或减轻骨癌，或预防和治疗与癌症转移相关的骨损失的方法。

在相关的实施方案中，本发明提供包括以有效抑制癌症向骨骼系统转移扩散的量给予怀疑患有转移性癌症的哺乳动物个体本发明的化合物，抑制哺乳动物个体中癌症向骨骼系统转移扩散的方法；以及包括以有效减少骨癌生长或肿瘤扩散的量给予诊断患有癌症的哺乳动物个体包含本发明化合物的组合物治疗骨癌的方法。应当理解任何癌症生长或扩散率的减少(能够延长生命和生活质量)预示成功的治疗。在优选的实施方案中，癌症生长完全停止。在更优选的实施方案中，癌症收缩或完全根除。优选的治疗个体是人类个体，但其它动物，尤其鼠类、大鼠、牛、猪、灵长类动物和其它癌症治疗的模型系统是期望的。本文使用的转移性癌症用于包括许多能够转移到骨的癌症，但最常见的转移性癌症是乳腺、肺、肾、多发性骨髓瘤、甲状腺和前列腺。举例来说，可能转移至骨的其他癌症包括但不限于腺癌，血细胞恶性肿瘤，包括白血病和淋巴瘤；头颈癌；胃肠癌，包括胃癌、结肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肝癌；女性生殖道恶性肿瘤，包括卵巢癌、子宫内膜癌和子宫颈癌；膀胱癌；脑癌，包括成神经细胞瘤；肉瘤；和皮肤癌，包括恶性黑素瘤和鳞状上皮细胞癌。本发明特别包括骨中肿瘤诱导的溶骨性病变的预防和治疗。

在上述治疗方法的一个变型中，化合物与第二癌症治疗药物一起给药。第二药物可以是任何化学治疗剂、放射性试剂、放射、编码癌症治疗剂的核酸、抗体、蛋白质和/或其他抗淋巴管生成剂或抗血管生成剂。第二药物可以在本发明的化合物之前、之后、或同时给药。

在一个变型中，治疗的个体已被诊断患有可行手术的肿瘤，并且给药步骤在肿瘤从个体切除之前、期间或之后进行。预期化合物治疗结合肿瘤切除术减少或消除肿瘤从未能切除的癌细胞的再生。

更通俗地讲，本发明提供治疗或预防骨癌的方法，以及包括给予需要其的哺乳动物(包括但不限于人、大鼠、犬、牛、猪和灵长类)本发明的化合物步骤的治疗或预防与癌症转移相关的骨损失的方法。

附图简述

图1：左后爪的自发性抬起行为的治疗效果。数据以在4分钟的观察期内抬起的爪时间的百分比表示。载体组每天通过口服管饲法给予pH4.0的20％HPCD溶液。化合物1以其200mg/kg的最大耐受剂量(MTD)每天给予1次，Iressa也以其50mg/kg最大耐受剂量每天通过口服管饲法给予14天。

图2：肿瘤接种动物中显示溶骨组织破坏的同侧左后肢的μCts的代表性重建。

图3：骨癌转移模型中乳腺肿瘤生长的剂量依赖性抑制。MDA B231

发明详述

WO-2004/105765描述了作为多靶点激酶抑制剂(MTKI)的式(I)大环喹唑啉衍生物的制备、制剂和药学性质。

现已发现上述种类的一个化合物，即上述PCT公开中描述为化合物22的4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基，本文也称为MTKI 1或化合物1，在骨癌模型中具有临床活性，并因此提供这些化合物制备治疗骨癌，包括上文中定义的原发性骨癌和骨转移的药物组合物的用途。

本发明也涉及治疗哺乳动物骨中肿瘤诱导的溶骨性病变的方法，包含给予所述哺乳动物治疗有效量的本发明的化合物的步骤。

因此，在一个方面本发明提供4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基或其药物学上可接受的酸或碱加成盐在制备用于治疗或预防骨癌，包括上文中定义的原发性骨癌和骨转移的药物中的用途。

本发明的进一步方面涉及治疗或预防哺乳动物个体骨癌的方法，包含给予需要这种治疗的哺乳动物个体治疗有效量的4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基或其药学上可接受的酸或碱加成盐。

如上文所述的药学上可接受的酸或碱加成盐是指包含MTKI 1能够形成的有治疗活性的无毒的酸和无毒的碱加成盐的形式。碱性可以通过使用合适的酸处理所述碱形式而转化成它们药学上可接受的酸加成盐。合适的酸包括，例如，无机酸例如氢卤酸，如氢氯酸或氢溴酸；硫酸；硝酸；磷酸等酸；或有机酸，例如，乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即，丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸、环拉酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸等酸。

酸性可以通过使用合适的有机或无机碱处理所述的酸形式而转化为它们药学上可接受的碱加成盐。合适的碱盐的形式包括，例如，铵盐，碱和碱土金属盐，例如，锂、钠、钾、镁、钙盐等，与有机碱的盐，例如苄星(benzathine)、N-甲基-D-葡糖胺、哈胺青霉素(hydrabamine)盐，以及与氨基酸例如精氨酸、赖氨酸等的盐。

术语酸或碱加成盐也包括MTKI 1能够形成的水合物和溶剂加成形式。这种形式的实例是例如水合物、醇化物等。

特别地，本发明涉及4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基的二氢溴酸盐的用途，即，任何MTKI 1上述用途中的17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基-4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因二氢溴酸盐。

在进一步的实施方案中，本发明提供上述MTKI 1用于制备预防和/或治疗骨癌的药物组合物的用途。

本发明也涉及预防和/或治疗哺乳动物骨癌的方法，包括给予所述哺乳动物治疗有效量的上述MTKI 1的步骤。

在进一步的实施方案中，本发明提供MTKI 1用于制备预防和/或治疗骨损失的药物组合物的用途。

本发明还涉及预防和/或治疗哺乳动物与癌症转移相关的骨损失的方法，包括给予所述哺乳动物治疗有效量的MTKI 1的步骤。

因此，在进一步的方面，根据本发明应用的最优选的化合物选自那些具有下列结构的化合物：

通过本领域已知的方法，特别是根据本文提及并引入作为参考的公开专利说明书WO-2004/105765中描述的方法，制备根据本发明的化合物并配制成药物组合物。

摘录自WO-2004/105765的本发明使用的优选化合物的合适制备如下：

实施例1

a)1-戊醇，5-[[(4-溴-2-硝基苯基)甲基]氨基]-的制备(中间体1)

4-溴-2-硝基-苯甲醛(0.013mol)、5-氨基-1-戊醇(0.013mol)和钛、四(2-丙醇化物)(0.014mol)在EtOH(15ml)中的溶液在RT下搅拌1小时，然后反应混合物加热至50℃并搅拌30min。混合物冷却至RT，分批加入NaBH₄(0.013mol)。反应混合物搅拌过夜，然后倒入冰水(50ml)中。所得混合物搅拌20min，滤出形成的沉淀(得到滤液(I))，用H₂O洗涤并在DCM中搅拌(溶解产物并将其从Ti-盐中去除)。过滤混合物，然后干燥滤液(MgSO₄)并过滤，最后蒸发溶剂。蒸发滤液(I)直至除去EtOH，使用DCM萃取含水浓缩液2次。分离有机层，干燥(MgSO₄)，滤出并蒸发溶剂，得到3.8g(93％)的中间体1。

实施例2

a)1-戊醇，5-[[(4-溴-2-硝基苯基)甲基]甲基氨基]-的制备(中间体2)

中间体50(0.0047mol)、甲醛(0.025mol)和四(2-丙醇)钛(0.0051mol)在EtOH(150ml)中的溶液加热至50℃并搅拌1小时，然后在RT下分批加入NaBH4(0.026mol)。反应混合物搅拌过夜，然后用水(100ml)骤冷。所得混合物搅拌1小时；滤出并洗涤形成的沉淀。浓缩有机滤液，然后使用DCM萃取含水浓缩液并干燥。蒸发溶剂，通过硅胶过滤残余物(洗脱剂：DCM/CH₃OH从98/2至95/5)。收集产品馏份并蒸发溶剂，得到0.5g的中间体2。

b)1-戊醇，5-[[(4-溴-2-硝基苯基)甲基]甲基氨基]-，乙酸(酯)的制备(中间体3)

中间体2(0.0015mol)和吡啶(0.015mol)在乙酸酐(8ml)的溶液在RT下搅拌过夜，然后蒸发溶剂并且与甲苯共蒸发，得到中间体3。

c)1-戊醇，5-[[(2-氨基-4-溴苯基)甲基]甲基氨基]-，乙酸(酯)的制备(中间体4)

使用Pt/C 5％(0.5g)作为催化剂，在噻吩溶液(0.5ml)(H179-034)存在下氢化中间体3(0.0015mol)在THF(50ml)中的混合物。在消耗H2(3当量)后，滤出催化剂并蒸发滤液，得到0.5g的中间体4。

d)6-喹唑啉醇(quinazolinol)，4-[[2-[[[5-(乙酰氧基)戊基]甲基氨基]甲基]-5-溴苯基]氨基]-7-甲氧基-，乙酸(酯)的制备(中间体5)

中间体4(0.0015mol)和4-氯-7-甲氧基-6-喹唑啉醇乙酸(酯)(0.0015mol)在2-丙醇(30ml)中的混合物加热至80℃，反应混合物搅拌1天。在减压条件下蒸发溶剂，像这样残余物用于下一步反应步骤，得到0.83g的中间体5。

e)6-喹唑啉醇，4-[[5-溴-2-[[(5-羟基戊基)甲基氨基]甲基]苯基]氨基]-7-甲氧基-的制备(中间体6)

中间体5(0.0015mol)在乙醇(25ml)中的溶液在RT下搅拌，加入K₂CO₃(0.003mol)在H₂O(2.5ml)中的溶液，然后反应混合物加热至60℃并搅拌18小时。蒸发溶剂并加入H₂O(20ml)，然后使用乙酸中和混合物，滤出形成的沉淀。在减压条件下浓缩滤液，使用DCM萃取浓缩液，过滤，然后干燥(MgSO₄)，在减压条件下浓缩混合物，得到0.5g(70％)的中间体6。

实施例3

a)4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基-(化合物MTKI 1)的制备

中间体6(0.0011mol)在THF(50ml)中的溶液在RT下搅拌并加入三丁基磷(0.0016mol)，然后加入1，1′-(偶氮二羰基)二-哌啶(0.0016mol)，反应混合物搅拌2小时。蒸发溶剂直至初始体积的1/3。滤出并洗涤所得的沉淀。蒸发滤液，通过RP高效液相色谱法纯化残余物。收集产品馏份，蒸发有机溶剂。使用DCM萃取含水浓缩液2次，干燥有机层(MgSO₄)，然后滤出。蒸发溶剂，在50℃下干燥(真空)残余物，得到0.004g(0.8％)的化合物MTKI1。

为了制备上述药物组合物，治疗有效量的特定的化合物，任选以加成盐的形式，作为活性成分与药学上可接受的载体结合形成紧密的混合物，该载体可以采取多种不同的形式，取决于给药所需的制剂形式。这些药物组合物理想地是单位剂型，优选，适合全身用药，例如口服、经皮或胃肠外注射；或局部给药，例如通过吸入、鼻喷雾、滴眼剂或通过乳剂、凝胶、洗发剂等。例如，在制备口服剂型的组合物中，可以使用任意常用的药物介质，例如，在例如混悬液、糖浆剂、酏剂和溶液剂的口服液体制剂情况中的水、乙二醇、油、醇等；或在粉剂、丸剂、胶囊剂和片剂的情况中例如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等固体载体。由于易于给药，片剂和胶囊剂代表了最有利的口服剂量单位剂型，在这种情况下显然会使用固体药学载体。对于肠道外组合物，载体通常至少包括大部分的无菌水，虽然也可以包括例如辅助溶解的其它组分。例如，可以制备注射溶液，其中载体包括盐水溶液、葡萄糖溶液或盐水和葡萄糖溶液的混合物。包含式(I)化合物的注射溶液可以在油中配制以延长作用。为此目的合适的油是，例如，花生油、芝麻油、棉子油、玉米油、大豆油、长链脂肪酸的合成甘油酯以及这些与其他油的混合物。也可以制备注射混悬液，在这种情况中可以使用合适的液体载体、混悬剂等。在适于经皮给药的组合物中，载体任选包含渗透促进剂和/或合适的润湿剂，任选与以较小比例的任何性质的合适添加剂组合，所述添加剂不会对皮肤引起显著的有害作用。所述添加剂可以促进向皮肤给药和/或有助于制备所需的组合物。这些组合物可以以多种方式给药，例如作为透皮贴剂、点剂(spot-on)或软膏。作为局部应用的合适的组合物，可以提及所有通常用于局部给药的组合物，例如乳膏剂、凝胶剂、敷料、洗发剂、酊剂、糊剂、软膏剂、油膏剂、粉剂等。所述组合物的应用可以通过气雾剂，例如，使用例如氮气、二氧化碳、氟利昂的推进剂，或不使用推进剂，例如泵式喷雾剂、滴剂、洗剂、或半固体，例如可以通过拭子应用的增稠组合物。特别地，例如油膏剂、乳膏剂、凝胶剂、软膏剂等的半固体组合物可以方便地使用。

将上述药物组合物配制成剂量单位剂型对方便给药和剂量一致性是特别有利的。本说明书和权利要求书中使用的剂量单位剂型是指适合作为单位剂量的物理分散的单位，每个单位含有经计算产生所需治疗效果的预定量的活性成分以及所需的药物载体。这种剂量单位剂型的实例是片剂(包括刻痕片或包衣片)、胶囊剂、丸剂、粉末袋、糯米纸囊剂(wafers)、可注射溶液或混悬液、茶匙量制剂(teaspoonfuls)、汤匙量制剂(tablespoonfuls)等，及其分开的复合体(segregatedmultiples)。

优选地，治疗有效量的包含根据本发明化合物的药物组合物通过口服或肠道外给药。所述的治疗有效量是有效防止转移和/或生长或减少患者许多肿瘤性疾病或细胞增殖性疾病(上文)的大小的量。在目前的数据的基础上，包含本发明化合物，特别是4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基-(MTKI1或化合物1)作为活性成分的药物组合物可以以每天10mg至数(1-5)克的量口服给药，以单剂量或分成多个剂量，包括，例如，每天两、三或者甚至四次。优选的量地范围是每天500-4,000mg。这种化合物特别优选的剂量是每天750mg-3,000mg。应当理解需要获得治疗效果的根据本发明化合物的量，本文也称为活性成分，当然会随给药途径、个体的年龄和症状和治疗的特定障碍或疾病而不同。本领域技术人员使用常规方法并根据本文提供的信息可以容易地确定最适宜的剂量和方案。这种治疗可以连续地或间歇地给予，包括，例如，但不限于，3-4周的周期，每周期治疗1-21天，或其他有效并安全的方案。

一个示例性的制剂如下所示：

实施例4：制剂

产品MTKI1可以制备成10-mg/mL口服溶液，pH2。其包含在纯水中的赋形剂、

(化学名：磺丁基-β-环糊精，SBE-β-CD)、柠檬酸、吐温20、HCl和NaOH。制剂可以冷藏储存(2-8℃；36-46°F)并允许在剂量配制前最大1小时内加热至室温。

产品MTKI 1也可以制备成50-mg、100-mg和300-mg的口服速释胶囊，分别包含在3、4和00大小的硬胶囊中活性化学个体MTKI1、乳糖一水合物(200目)、月桂基硫酸钠和硬脂酸镁。胶囊也可以包含任意或所有下列组分：明胶、三氧化铁和氧化钛。

上述MTKI1可以与一种或多种其它癌症治疗组合使用。这种组合可以包括任意确定的抗肿瘤疗法，例如，但不限于，化学治疗、放射和靶向治疗，例如抗体和小分子(例如二膦酸盐、紫杉烷类、蒽环类抗生素、卡培他滨、多西紫杉醇、沙铂(satraplatin)、西妥昔抗体、阿瓦斯汀(avastin)、芳构酶(aromatase)抑制剂和甲氨喋呤)。这些疗法可以结合系统疗法，或局部滴注或给药(例如鞘内)，取决于最佳的效果/安全性需要。

MTKI1和另外的抗癌剂可以同时(例如，在分开或单元组合物)或以任一顺序连续给药。在后一种情况中，两种化合物在一段时间内以足以保证获得有利或协同作用的量和方式给药。应当理解优选的方法和给药顺序和组合中每种组分的各自剂量和方案取决于给予的特定的MTKI和另外的抗癌剂，它们的给药途径、治疗的特定的肿瘤和治疗的特定主体。本领域技术人员使用常规方法并根据本文提供的信息可以容易地确定最佳的方法和给药顺序和剂量和方案。

试验数据

MTKI1(本文也成为化合物1)独特的理化参数导致非常有利的组织分布性质，包括在仍保持良好的细胞活性和口服生物利用度的同时通过完整的血脑屏障的能力。这里，我们进一步证实使用骨转移试验模型，这种向骨髓腔的选择性组织分布导致显著的抗肿瘤活性。

NCTC2472纤维肉瘤(ATCC Rockvile，MD USA)或MDA-MB231乳腺癌细胞(Yoneda博士，密歇根大学，USA)(骨归巢变种)注射入裸鼠的胫骨，封闭孔并在预定的时间观察肿瘤生长(Vermeirsch等，Pharmacol Biochem Behav.2004，10月；79(2)：243-51)。自发性‘爪抬起’用作疼痛反应指示剂，μCt和组织学用于表示溶骨性抗肿瘤活性和肿瘤生长。

方法

动物模型

使用用于NCTC2472小鼠纤维肉瘤细胞(20-25g，Charles River，Sulzfeld，德国)的雄性C3H/HeNCrl小鼠和用于MDA MB 231人乳腺癌细胞(Janvier，法国)的雌性NMRI裸小鼠。按照以前描述的(Schwei等，1999¹)进行骨癌的诱导作用。在4％的异氟烷于30％O₂和70％空气(1000ml/min)混合物中进行全身麻醉的诱导作用。然后在外科手术期间2.5％的异氟烷下保持麻醉。剃光左后爪并用聚维酮碘和70％的乙醇消毒。在压在髌骨上的膝上开浅表性1cm的切口，切断髌韧带，暴露股骨远端的踝。在髁间切迹和股骨的髓管水平插入23号针形成细胞注射的腔。然后使用0.3ml的注射器将肿瘤细胞(2.5×10⁶细胞/20μl)注射入骨腔中。为防止骨外的细胞溢出，使用牙科丙烯酸树脂封闭注射部位(Paladur，Heraeus Kulzer，GmbH，Wehrheim，德国)并使用皮肤缝线闭合伤口。对于假手术(sham-operated)组，除注射没有细胞的介质外，进行相同的操作。

药物治疗

在肿瘤细胞诱导后的第1天开始治疗。使用载体(20％羟丙基-β-环糊精，pH 4.0)或配制提供200或50mg/kg化合物1的载体分别通过管饲法(口服)以10ml/kg体重的体积每天一次(Q1D)治疗小鼠。治疗小鼠直至骨肿瘤诱导后的第18天。

疼痛评价

在假手术(sham)和骨肿瘤小鼠组中评价疼痛行为(见下文)并且在肿瘤接种前的两周内和肿瘤接种后第7、9、12和14天进行行为测试。在试验的结束时，取样左后肢的股骨并用于Vermeirsh等，(2004)².Spontaneous lifting behavior中描述的μCT扫描：在直径20cm透明的丙烯酸圆筒中使动物习惯实验室至少30分钟，此后在4分钟内观察左后爪的自发性抬起行为。

骨组织破坏的评价

在细胞注射之前和之后的第7、12、15和18天对同侧左后肢进行骨分析。在10％磷酸盐缓冲甲醛中固定四肢并转移到装有70％乙醇的塑料容器中用于使用SkyScan微型断层扫描术(Skyscan

Skyscan，Aartselaar，比利时)的扫描。对于中等分辨率的测定，X-射线横臂对准18mm的直径，行间隔和点分辨率分别设定为0.254和0.127mm。在标准化重建后，使用计算机软件(Ant，3D-creator vs.2.2e，Skyscan，Aartselaar，比利时)对每个骨的数据组再取样，以便骨的中轴中心定向于每个骨。处理扫描并使用免费软件(CTanalyzer vs.1.02，Skyscan，Aartselaar，比利时)对髌骨滑车近端的5mm股骨片段进行二维和三维形态测定分析。

1.Schwei MJ，Honore P，Rogers SD，Salak-Johnson JL，Finke MP，Ramnaraine ML，等，骨癌疼痛的鼠模型中的脊髓的神经化学和细胞重组(Neurochemical and cellular reorganization of the spinal cord in amurine model of bone cancer pain).J Neurosci 1999；19：10886-97。

2.Vermeirsch，H.，Nuydens，R.，Salmon，P.L，和Meert，T.F.Pharmacol.Biochem.Behav.2004.79：243-251。

结果

疼痛评价

在直径20cm透明的丙烯酸圆筒中使动物习惯实验室至少30分钟，此后在4分钟内观察左后爪的自发性抬起行为。数据以在这段时间内爪抬起时间的百分比表示。载体组通过口管饲法每天给予20％HPCDpH4.0的溶液。化合物1以200mg/kg的最大耐受剂量(MTD)每天给予一次，Iressa也以其50mg/kg最大耐受剂量每天通过口服管饲法给予14天。动物的载体治疗组显示在肿瘤细胞接种后7天开始的可检测的爪抬起行为。在观察期间动物爪抬起时间的百分比在接种后的第9、12和14天增加，此时爪抬起次数增加至80％的时间。发现以MTD给予化合物1的动物十分显著地减少动物不使用它们爪的时间，这样在第14天，仅发现自发性爪抬起行为发生～8％的时间。在该研究中使用的对照化合物Iressa，当以其MTD给药时也导致自发性爪抬起行为统计学上显著地减少，但是其效果远不广泛，观察到自发性爪抬起超过35％的时间。

骨组织破坏的评价

同侧左后肢的μCts的代表性重建显示肿瘤接种动物中溶骨性骨组织破坏(图2)。在载体和Iressa治疗组中观察到相当多的骨损失，同时在化合物1治疗的动物中可以看到显著更少的骨组织破坏。假手术(sham operated)动物未显示溶骨活性症状。

动物模型

在骨癌症转移模型MDA B231中骨回巢克隆细胞接种到所述的胫骨中。在42天后，处死动物，截肢的爪置于固定剂中。腿脱钙化并且切片测定骨组织破坏的水平。观察到载体治疗的动物具有大的肿瘤块(图3中环绕的区域)，其已经扩散出接种的最初部位(图3中黑色箭头)，在该过程中导致显著的骨组织破坏(参见图2)。在该研究中观察到使用最大剂量的测试化合物1，100mg/kg，口服，每天，肿瘤生长的量和骨组织破坏的量是剂量依赖性降低的，未显示肿瘤细胞征兆和任何骨组织破坏征兆。后者在图3组织学切片中也是显而易见的。在载体治疗动物中大的肿瘤块扩展到股骨(灰色箭头)中，在使用100mg/kg、口服、每天的MTKI 1治疗的动物中，可检测的肿瘤几乎不存在(灰色箭头)并且接近接种的部位(黑色箭头)。

虽然为了说明上述说明书通过实施例教导了本发明的原理，但应当理解本发明的实施包括落入以下权利要求及其等价物的范围内的所有常用的变化、改变和/或修改。

Claims

1.治疗或预防哺乳动物骨癌或骨癌症转移的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的选自下列的化合物：4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基-或其药学上可接受的酸或碱加成盐；或17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基-4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环十五因二氢溴酸盐。

2.权利要求1的方法，其中所述化合物具有下列结构：

3.权利要求1的方法，其中治疗有效量的化合物通过口服或肠道外给药。

4.权利要求1的方法，其中4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基-或其药学上可接受的酸或碱加成盐与另外的抗癌剂联合给药。

5.权利要求1的方法，其中另外的抗癌剂选自二膦酸盐、放射、紫杉烷类、蒽环类抗生素、卡培他滨、赫赛汀、多西紫杉醇、沙铂、西妥昔单抗、阿瓦斯汀、芳构酶抑制剂或甲氨蝶呤。

6.选自4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环-十五因，17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基-或其药学上可接受的酸或碱加成盐；或17-溴-8，9，10，11，12，13，14，19-八氢-20-甲氧基-13-甲基-4，6-联二亚甲基嘧啶并[4，5-b][6，1，12]苯并氧杂二氮杂环十五因二氢溴酸盐的化合物在制备用于治疗骨癌或骨癌症转移的药物中的用途。

7.权利要求6的用途，其中所述化合物选自具有下列结构的化合物：

8.权利要求6或7的用途，其中治疗有效量的药物通过口服或肠道外给药。

9.权利要求6-8任一项的用途，其中式(I)化合物与另外的抗癌剂联合给药。

10.权利要求9的用途，其中另外的抗癌剂选自二膦酸盐、放射、紫杉烷类、蒽环类抗生素、卡培他滨、赫赛汀、多西紫杉醇、沙铂、西妥昔单抗、阿瓦斯汀、芳构酶抑制剂或甲氨蝶呤。