CN101496828A - 葫芦巴总皂苷提取物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种葫芦巴总皂苷提取物在治疗或预防睾酮水平降低和运动耐量下降的药品或保健品的应用。需根据病人的病情，确定用法用量，可2－3次/日服用，人日用量为200－4000mg；优选600－1200mg；或者人日用量为0.0036－0.0145g/kg体重。葫芦巴总皂苷能提高血清睾酮水平，因此，在治疗或预防睾酮水平降低和运动耐量下降中有着重要的作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药葫芦巴总皂苷提取物的新用途，具体涉及一种葫芦巴总皂苷提取物在治疗或预防睾酮水平降低和运动耐量下降的药品或保健品的应用。
背景技术
睾酮是雄激素的主要成份，属C-19类固醇激素，主要在睾丸间质细胞中合成，睾酮除具有产生和维持男性生殖器官、生殖功能和第二性征等作用外，近年研究发现睾酮水平低下会引起还有诸多疾病和运动耐量降低：
男性冠心病患者血浆睾酮较正常人明显低下。对伴有雄激素水平下降的冠心病患者进行干预研究时也发现，长期干预治疗，可以明显缓解老年男性心绞痛患者的临床症状和ECG缺血改变，一次静脉注射的短期干预也可使运动诱发的心绞痛发生率下降，运动试验阳性率降低，并显著延长心绞痛患者的总运动时间和运动试验中出现段压低至的时间。可见睾酮水平下降可能是男性冠心病发病的重要危险因子，维持生理浓度的睾酮有对抗男性冠心病的作用(参见任国庆，孙广辉.睾酮与男性冠心病的关系.国外医学.心血管疾病分册，2002，29(2)：81-83)。
同时体内睾酮水平降低可导致中老年男子部分雄激素缺乏综合征(PADAM)，严重影响老年人的身心健康，降低生活质量。一般出现在50岁以后。因此提高睾酮水平对改善男性老年人的生活质量(参见陈倩，李小鹰.老年男性雄性激素补充治疗的临床应用.中华老年心脑血管病杂志，2007，9(11)：786-787)。
代谢综合征(MS)是一组以胰岛素抵抗为中心的多种代谢异常的集合，主要包括高血压、高脂血症、糖尿病、肥胖等代谢异常表现性功能减退及运动耐量降低。研究发现睾酮水平低下是MS的特征，与MS的发生、发展有密切关系，甚至有可能与MS的发展终点，比如2型糖尿病、心血管疾病的发生亦有关系。低睾酮水平者发生MS的概率明显增高。低睾酮水平是MS发生的重要标志，因此提高睾酮水平是对MS是必须的(参见姚玉婷，高天，陆惠华，沈丽蕴.老年血清睾酮与代谢综合征关系.老年医学与保健，2007，13(5)295-303)。
睾酮是体内主要的雄激素，许多研究证明，睾酮能显著增加运动员肌肉蛋白质的合成和肌肉力量，提高肌肉对葡萄糖的吸收和肌糖元的合成与贮备。此外，研究表明血清睾酮水平与最大摄氧量呈高度正相关，与耗氧量呈高度负相关，在一定条件下睾酮能增强运动员的运动能力。中医药学的应用是目前合理防治运动性低血睾酮的有效手段(参见王启荣，杨则宜.长时间运动导致低血睾酮的可能机制及其干预手段.西安体育学院学报，2005，22(1)：78-82)。
葫芦巴为豆科植物葫芦巴属葫芦巴(Trigonella foenum-graecum L.)种子，葫芦巴干燥成熟种子作为常用中药收入《中华人民共和国药典》。葫芦巴在我们属药食同源的品种，目前葫芦巴总皂苷主要在以下方面的应用，预防和治疗脂肪肝、降血糖血脂、对脑缺血的保护作用、改善学习记忆障碍、抗炎的作用。关于葫芦巴总皂苷的药理作用可参见兰卫，高晓黎，毛新民“葫芦巴药理作用的研究进展”[J].西北药学杂志，2008，23(5)：335-337。
从葫芦巴中提取皂苷常采用水回流提取法、有机溶剂提取法和酶解法等。张黎明等用乙醇提取工艺皂苷的收率高于水提工艺，皂苷提取率达78.3％(参见《从中药葫芦巴种子提取薯蓣皂甙元工艺的研究》[J].天津轻工业学院学报，2003，2(18)：6-8)。张黎明等采用酶解法提取葫芦巴中皂苷，加酶后皂苷提取率为83.6％，未加酶的结果则为58.4％(参见《纤维素酶法提取葫芦巴甾体总皂苷工艺条件的优化》[J].食品科学，2006，2(27)：157-159)。姜彬慧等报道在温度为50℃，pH4.4，反应72h的酶解条件下，皂苷提取率为2.0％(参见《纤维素酶提高葫芦巴有效成分收率的研究》[J].中草药，2004，6(35)：626-629)。荆宇，赵余庆将葫芦巴用85％乙醇提取两次，提取液浓缩后用水稀释成30％，采用D101大孔树脂吸附。结果表明提取液经过树脂处理后，溶液明显澄清，大量的水溶性胶体、色素被除去。树脂法能够有效地对葫芦巴中的有效成分进行富集，提高收率，使有效成分含量明显增加(参见《大孔吸附树脂提取纯化葫芦巴中总皂苷的工艺研究》[J].中药研究与信息，2005，7(6)：19-21.)。
发明内容
本发明的目的是提供一种葫芦巴总皂苷提取物在治疗或预防睾酮水平降低和运动耐量下降的药品或保健品的应用。
因此，本发明的技术方案就是：葫芦巴总皂苷用于制备治疗或预防睾酮水平降低和运动耐量下降药物或保健品中的用途。
所获得的药品或保健品在医学及运动领域有广泛的应用。
本发明通过实验研究发现，葫芦巴总皂苷能提高血清睾酮水平，但各剂量组对大鼠体重和生殖器官脏器系数的影响不明显。
本发明还研究发现，葫芦巴总皂苷能提高小鼠游泳时间，但对小鼠体重无影响。
本发明还研究发现，葫芦巴总皂苷能延长缺氧下小鼠呼吸停止时间。
上述提取物不加或加入其可接受的辅料制成相应的制剂。
本发明提供的葫芦巴总皂苷提取物经过加工制备的适合服用的任何单位剂量形式的制剂。剂型包括片剂，分散片，泡腾片，冻干粉针，糖衣片剂，肠溶衣片剂，胶囊剂，硬胶囊剂，软胶囊剂，颗粒剂，冲剂，丸剂，散剂，丹剂，混悬剂，粉剂，需要时可以制成缓释制剂，肠溶制剂。在制备成药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受载体选自：抗氧剂、鳌合剂，表面活性剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、溶剂缓释材料、肠溶材料、pH调剂、矫味剂、色素等，常用的载体如：乳糖、葡萄糖、纤维素及纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、糊精、淀粉、β-环糊精、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、羧甲基淀粉等。
按照人和动物的体表面积比计算，小鼠的每公斤体重用量除以9.1得人每公斤体重用量，大鼠的每公斤体重用量除以6.3得人每公斤体重用量。
本发明提供的技术方案为：本发明的制剂需根据病人的病情，确定用法用量，可2-3次/日服用，人日用量为200-4000mg；优选600--1200mg；或者人日用量为0.0036--0.0145g/kg体重。
本发明提供一种葫芦巴总皂苷提取物在治疗或预防睾酮水平降低和运动耐量下降的药品或保健品的应用。
具体实施方式
为了更好的理解本发明的应用实质，以下结合具体实施例对本发明进一步说明。
实施例1
取葫芦巴10公斤，加入50％乙醇120公斤，回流提取3次，每次时间为1小时，离心，合并离心液，浓缩，得浓缩液；浓缩液上D101大孔树脂柱吸附，水洗弃去，用0.05％NaOH溶液洗涤，80％乙醇洗脱，收集洗脱液，真空浓缩至稠膏，真空干燥得葫芦巴总皂苷提取物，以薯蓣皂苷元计，皂苷含量为35.7％。本提取物用于实施例2-5。
本实施例中提取总皂甙的方法是参照《大孔吸附树脂提取纯化葫芦巴中总皂苷的工艺研究》[J].中药研究与信息，2005，7(6)：19-21.。
实施例2
胡芦巴总皂苷提取物急性毒性试验
1 实验材料
1.1 药物：胡芦巴总皂苷粉末，取本品粉末15g，加水至100ml，制成1ml含0.15g提取物的混悬液，此浓度为最大浓度。
1.2 动物：清洁级昆明种小鼠，体重18～22g，60只，雄性，由长沙市开富区东创实验动物科技服务部提供，实验动物生产许可证：SCXK(湘)2006-0001号；湖南省药品检验所动物房提供，实验动物使用许可证：SYXK(湘)2003-0006号。实验室温度18～25℃，动物分笼饲养，每笼5只，标准颗粒饲料喂养，自由摄食、摄水。
2 实验方法与结果
2.1 预试先取小鼠20只(雄性)，体重18～22g。一次性灌胃给药0.8ml/只，观察七天，结果无动物死亡，故进行最大给药量测定。
2.2 最大给药量测定
取小鼠40只(雄性)，体重18～22g，均分成两组(n＝20)，给药组和对照组。隔食不隔水12小时后，给药组动物灌胃上述呋喃固醇混悬液0.8ml/20g，对照组动物灌胃等体积注射用水，间隔12小时，共给药二次，给药后连续观察15天动物的毒性反应，包括行为活动、精神状态、食欲、大小便，以及毛发、呼吸，口、鼻、眼、耳、肛门等有无异常分泌物，体重变化及死亡等情况。结果除给药组动物在给药后活动略有减少外，其它均未见异常。动物全部成活，对照组体重平均增加36.0％，给药组体重平均增加35.5％。第十五天处死小鼠解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，均未见表面与切面异常。结果小鼠ig呋喃固醇每日最大给药量为3.75g提取物/kg，相当于临床60公斤成人一日用量(0.6g提取物/日，0.6g/60kg＝0.01g提取物/kg)的375倍。
表1 胡芦巴总皂苷小鼠急性毒性试验结果表
3 结论
呋喃固醇小鼠灌胃3.75g提取物/kg，相当于临床60公斤成人一日用量的375倍，未见毒性反应，提示本品毒性小，在临床推荐的用药剂量下使用有一定的安全性。
实施例3
胡芦巴总皂苷提取物对大鼠体重和血清睾酮的影响
1 实验材料
试剂：本发明葫芦巴总皂苷粉末，实验时将粉末溶解于蒸馏水。动物：清洁级昆明种SD大鼠，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供；实验动物生产许可证：SCXK(湘)2006-0001号；湖南省药品检验所动物房，实验动物使用许可证：SYXK(湘)2003-0006号。实验前适应性喂养3日，且清洁级昆明种SD大鼠均为每笼5只饲养。
2 实验方法和结果
2.1 药物配制方法和实验动物分组
实验动物一般分为四组：第一组为正常对照组，给等体积蒸馏水；第二、三、四组分别为葫芦巴总皂苷高、中、低剂量组，用葫芦巴总皂苷粉末加蒸馏水分别配成0.91g/100ml、0.46g/100ml、0.23g/100ml的浓度供大鼠用；所有动物均灌胃给药，大鼠10ml/kg体重。除另有规定外，一般每天给药一次，连续灌胃，实验室温度控制在18～28℃。
2.2 结果：
将雄性大鼠40只(体重180.5±15.8g)随机分为4组，每组10只。每天灌胃给样1次，连续30天。分别于第1天、第8天、第15天、第22天、第30天大鼠称重。观察葫芦巴总皂苷对大鼠体重的影响，结果见表2，采用DAS1.0软件进行t检验。第30天每只大鼠腹股动脉取血，分离血清，采用放射免疫法(T RIA试剂盒)测定血清睾酮水平。结果见表3，采用DAS1.0软件进行Dunnet检验。同时取右睾丸、右附睾、右前列腺称重并计算脏器系数。结果见表4，采用DAS1.0软件进行t检验。
表2 葫芦巴总皂苷对大鼠体重的影响(X±SD，n＝10)
与空白对照组比较＊P>0.05 ＊＊P<0.05 ＊＊＊P<0.01
表3 葫芦巴总皂苷对大鼠血清睾酮水平的影响(X±SD，n＝10)
与空白对照组比较＊P>0.05 ＊＊P<0.05 ＊＊＊P<0.01
表4 葫芦巴总皂苷对大鼠生殖脏器系数的影响(X±SD，n＝10)
与空白对照组比较＊P>0.05 ＊＊P<0.05 ＊＊＊P<0.01
结果表明，葫芦巴总皂苷高、中剂量组能明显提高血清睾酮水平，但各剂量组对大鼠体重和生殖器官脏器系数的影响不明显。
实施例4
葫芦巴总皂苷抗疲劳作用(小鼠负重游泳实验)：
1 实验材料
试剂：本发明葫芦巴总皂苷粉末，实验时将粉末溶解于蒸馏水。动物：清洁级昆明种小鼠，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供；实验动物生产许可证：SCXK(湘)2006-0001号；湖南省药品检验所动物房，实验动物使用许可证：SYXK(湘)2003-0006号。实验前适应性喂养3日，且清洁级昆明种小鼠均为每笼5只饲养。
2 实验方法和结果
2.1 药物配制方法和实验动物分组
实验动物一般分为四组：第一组为正常对照组，给等体积蒸馏水；第二、三、四组分别为葫芦巴总皂苷高、中、低剂量组，用葫芦巴总皂苷粉末加蒸馏水分别配成0.65g/100ml、0.32g/100ml、0.16g/100ml的浓度供小鼠用；所有动物均灌胃给药，小鼠20ml/kg体重。除另有规定外，一般每天给药一次，连续灌胃，实验室温度控制在18～28℃。
2.2 结果：
取成年雄性小鼠40只(体重21.0±2.0g)，随机分为4组，每组10只。每天灌胃给样1次，连续7天。于实验第1天和第7天小鼠称重，观察葫芦巴总皂苷对小鼠体重的影响。结果见表5，采用DAS1.0软件进行t检验。实验第7天灌胃后60分钟小鼠尾根部负重10％体重的合金块，于游泳桶中游泳，桶宽30厘米，水深20厘米，水温20℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间。结果见表6，采用DAS1.0软件进行t检验。
表5 葫芦巴总皂苷对小鼠体重的影响(X±SD，n＝10)
与空白对照组比较＊P>0.05 ＊＊P<0.05 ＊＊＊P<0.01
表6 葫芦巴总皂苷对小鼠负重游泳实验的影响(X±SD，n＝10)
与空白对照组比较＊P>0.05 ＊＊P<0.05 ＊＊＊P<0.01
结果表明，葫芦巴总皂苷高、中剂量组能明显提高小鼠游泳时间，但葫芦巴总皂苷低剂量组对小鼠游泳时间作用不明显。葫芦巴总皂苷各剂量组均对小鼠体重无影响。
实施例5
葫芦巴总皂苷对小白鼠常压耐缺氧的作用
1 材料 试剂：本发明的葫芦巴总皂苷粉末，实验时将粉末溶解于蒸馏水。动物：清洁级昆明种小鼠，均由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供；实验动物生产许可证：SCXK(湘)2006-0001号；湖南省药品检验所动物房，实验动物使用许可证：SYXK(湘)2003-0006号。实验前适应性喂养3日，且清洁级昆明种小鼠均为每笼5只饲养。
2 实验方法和结果
2.1 药物配制方法和实验动物分组
实验动物一般分为四组：第一组为正常对照组，给等体积蒸馏水；第二、三、四组分别为葫芦巴总皂苷高、中、低剂量组，用葫芦巴总皂苷粉末加蒸馏水分别配成0.65g/100ml、0.32g/100ml、0.16g/100ml的浓度供小鼠用；所有动物均灌胃给药，小鼠给药体积为20ml/kg体重。除另有规定外，一般每天给药一次，连续灌胃，实验室温度控制在18～28℃。
2.2 结果 取清洁级昆明种成年雄性小鼠40只(体重21.0±2.0g)，随机分为4组，每组10只。每天灌胃给样1次，连续7天。第7天给药后1小时，腹腔注射盐酸异丙肾上腺素15mg·kg-1，15min后，放入150mL的密闭广口瓶内，瓶内装有10g的钠石灰。瓶口涂以凡士林，放入小鼠后将瓶密闭。以秒表记录小鼠存活时间。结果见表7，采用DAS1.0软件进行t检验。
表7 葫芦巴总皂苷对小鼠常压耐缺氧的影响(X±SD，n＝10)
与正常对照组比较###P<0.01
与模型对照组比较＊P>0.05 ＊＊P<0.05 ＊＊＊P<0.01
结果表明，葫芦巴总皂苷高、中剂量组能明显延长小鼠呼吸停止时间，但葫芦巴总皂苷低剂量组对显著延长小鼠呼吸停止时间不明显。
实施例6
取脱胶葫芦巴豆粉15公斤，加入药料量8倍的水，预浸泡30分钟，超声波提取2次，每次时间20分钟，离心，合并离心液，浓缩，得浓缩液，加乙醇至80％沉淀，离心，离心液浓缩挥醇得浓缩液；浓缩液上D101大孔树脂柱吸附，水洗弃去，用0.01％的HCl溶液洗涤，用0.15％NaOH溶液洗涤，85％乙醇洗脱，收集洗脱液，真空浓缩，喷雾干燥得提取物。以薯蓣皂苷元计，皂苷含量为50.2％。
本实施例中提取总皂甙的方法是参照《胡芦巴渣中有效成分的提取工艺及其应用研究》，西北大学博士论文，2008。
实施例7
用实施例6所得胡芦巴总皂苷提取物进行实施例7。
1材料
1.1 实施例5所得胡芦巴总皂苷粉末。实验时将粉末溶解于蒸馏水。
1.2 动物：清洁级昆明种小鼠，均由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供；实验动物生产许可证：SCXK(湘)2006-0001号；湖南省药品检验所动物房，实验动物使用许可证：SYXK(湘)2003-0006号。实验前适应性喂养3日，且清洁级昆明种小鼠均为每笼5只饲养。
2 实验方法和结果
2.1 药物配制方法和实验动物分组
实验动物分为二组：第一组为正常对照组，给等体积蒸馏水；第二组分别为葫芦巴总皂苷样组，用葫芦巴总皂苷提取物粉末加蒸馏水分别配成0.32g/100ml的浓度供小鼠用；所有动物均灌胃给药，小鼠给药体积为20ml/kg体重。除另有规定外，一般每天给药一次，连续灌胃7天，实验室温度控制在18～28℃。
2.2 抗疲劳作用实验(小鼠负重游泳实验)：取成年雄性小鼠20只(体重21.4±0.5g)，随机分为2组，每组10只。每天灌胃给样1次，连续7天。实验第7天灌胃后60分钟小鼠尾根部负重5％体重的合金块，于游泳桶中游泳，桶宽30厘米，水深20厘米，水温20℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间。结果见表8，采用DAS1.0软件进行t检验。
表8 呋喃固醇对小鼠负重游泳实验的影响(X±SD，n＝10)
与空白对照组比较＊P>0.05 ＊＊P<0.05 ＊＊＊P<0.01
结果表明，葫芦巴总皂苷样组能明显提高小鼠游泳时间。
按照人和动物的体表面积比计算，小鼠的每公斤体重用量除以9.1得人每公斤体重用量，大鼠的每公斤体重用量除以6.3得人每公斤体重用量。
Claims (4)
1、葫芦巴总皂苷用于制备治疗或预防睾酮水平降低和运动耐量下降药物或保健品中的用途。
2、根据权利要求1所述的用途，其特征在于人日用量为200-4000mg。
3、根据权利要求2所述的用途，其特征在于人日用量为600--1200mg。
4、根据权利要求1所述的用途，其特征在于人日用量为0.0036--0.0145g/kg体重。
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