CN101480503A - 配制生物材料的方法 - Google Patents

配制生物材料的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101480503A
CN101480503A CNA2008100020620A CN200810002062A CN101480503A CN 101480503 A CN101480503 A CN 101480503A CN A2008100020620 A CNA2008100020620 A CN A2008100020620A CN 200810002062 A CN200810002062 A CN 200810002062A CN 101480503 A CN101480503 A CN 101480503A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fish scale
biological material
formulating
formulating biological
dehydration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2008100020620A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101480503B (zh
Inventor
赖弘基
林建成
林尚明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Body Organ Biomedical Corp
Original Assignee
Body Organ Biomedical Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to CN200810002062A priority Critical patent/CN101480503B/zh
Application filed by Body Organ Biomedical Corp filed Critical Body Organ Biomedical Corp
Priority to EP08706682.5A priority patent/EP2241606B1/en
Priority to PCT/CN2008/070309 priority patent/WO2009086743A1/zh
Priority to JP2010541677A priority patent/JP5301565B2/ja
Priority to KR1020107017516A priority patent/KR101816139B1/ko
Priority to ES08706682.5T priority patent/ES2692537T3/es
Priority to EP18150067.9A priority patent/EP3329944B1/en
Priority to BRPI0819960A priority patent/BRPI0819960B8/pt
Publication of CN101480503A publication Critical patent/CN101480503A/zh
Priority to IL206873A priority patent/IL206873A/en
Application granted granted Critical
Publication of CN101480503B publication Critical patent/CN101480503B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A61K8/987—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of species other than mammals or birds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3641—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the site of application in the body
    • A61L27/3645—Connective tissue
    • A61L27/365—Bones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/40—Preparation and treatment of biological tissue for implantation, e.g. decellularisation, cross-linking

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

本发明是关于一种配制生物材料的方法，配制过程主要包括将去细胞化的鱼鳞脱水直到含水量少于50％，并磨碎这些脱水过后的鱼鳞直到磨碎的颗粒直径平均尺寸小于10,000μm，其中磨碎的颗粒包含海绵态基质以及粉末的混合物。本发明还涉及由鱼鳞所配制得到的生物材料，所述的配制过程包括在200℃以下的温度进行加热处理。

Description

配制生物材料的方法
技术领域
本发明是关于一种生物材料及其配制方法，特别是关于一种由去细胞化的鱼鳞配制生物材料的方法，所配制的生物材料可以用于组织修复与移植方面。
背景技术
组织工程与生物以及药物的生物材料息息相关，其能够使进行移植手术的病人增强血管造影、组织整合，以及组织重建；生物材料是经由人工所合成的材料，应用于重建人造器官、修复或修补，甚至取代人体组织。
数十年来，胶原纤维、羟基磷灰石(HAP)以及三钙磷酸盐(TCP)皆是经由许多数据证实且可安全用于人体移植组织的生物材料，然而，这些生物材料具有一些缺点，如机械支撑力不足、在交联过程有化学物残留，以及人畜共通疾病传染等缺点。
因此，需要提出一种新的生物材料，增强机械支撑力，且于组织修复以及移植过程中减低人畜共通疾病传染机率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的生物材料，以增强机械支撑力，且于组织修复以及移植过程中减低人畜共通疾病传染机率。
本发明的另一目的在于提供如上所述的生物材料以用以修复组织以及组织移植。
本发明的另一目的在于提供配制如上所述的生物材料的方法。
本发明提供了一种从鱼鳞配制生物材料的方法，该方法包括步骤：
将鱼鳞去细胞化，再将其磨碎至一定量的颗粒，其中这些颗粒包含海绵态基质以及粉末的混合物。
本发明的配制生物材料的方法还可包括：挤压所述海绵态基质以及粉末，以在200℃以下的温度形成片状或块状或通过特定模具得到特定形状。
本发明的配制生物材料的方法中，在磨碎鱼鳞之前，还可包括将鱼鳞脱水的步骤。所述脱水步骤可包括将鱼鳞脱水直到含水量少于50％。在所述将鱼鳞脱水步骤之前，还可包括将鱼鳞洗净的步骤。其中，将鱼鳞去细胞化的步骤可以是在所述将鱼鳞洗净步骤之前。将鱼鳞去细胞化的步骤也可以是在将鱼鳞脱水步骤之前。
本发明的配制生物材料的方法还可包括将海绵态基质以及粉末从颗粒中分离的步骤。
本发明中的原料鱼鳞可以是直径平均尺寸小于20cm的鱼鳞，例如大尺寸(10-20cm)的鱼鳞，也可以是较小尺寸的鱼鳞。本发明的配制生物材料的方法中，重点是保留鱼鳞生物材料的天然键结与立体结构，对于鱼鳞的磨碎程度没有特别限定，一般是将鱼鳞磨碎至颗粒直径平均尺寸小于10,000μm。如果所用鱼鳞原料的直径平均尺寸小于10,000μm，仍需要进行适当磨碎，将其磨碎至更小的颗粒尺寸，例如，可将其磨碎至颗粒直径平均尺寸小于10μm。
本发明还提供了另一种从鱼鳞配制生物材料的方法，该方法包括步骤：
将鱼鳞去细胞化，再将其进行挤压过程以形成片状或块状或通过特定模具得到特定形状的材料。
本发明的配制生物材料的方法中，所述挤压过程是在200℃以下的温度进行。其中，在进行鱼鳞挤压过程之前，还可包括洗净鱼鳞的步骤。在洗净步骤结束后，且在进行鱼鳞挤压过程之前，还可包括将鱼鳞脱水的步骤。所述脱水步骤包括将鱼鳞脱水直到含水量少于50％。其中，将鱼鳞去细胞化的步骤可以是在将鱼鳞洗净步骤之前。将鱼鳞去细胞化的步骤也可以是在将鱼鳞脱水步骤之前。在进行鱼鳞挤压过程之前，还可包括将鱼鳞浸泡于水中的步骤。
根据本发明的一具体的由鱼鳞配制生物材料的方法，所述的配制过程包括将去细胞化的鱼鳞脱水直到含水量少于50％，以及磨碎该脱水过后的鱼鳞直到磨碎的颗粒直径平均尺寸小于10,000μm，其中每一磨碎的颗粒皆包含海绵态基质以及粉末的混合物。在本发明的一实施例中，是将鱼鳞脱水到含水量少于25％，且磨碎的颗粒直径平均尺寸小于5000μm。
另一方面，本发明由鱼鳞配制生物材料的过程包括在200℃以下的温度进行处理。
本发明还提供了利用所述方法由鱼鳞配制得到的生物材料。
利用本发明的方法配制得到的生物材料，保留了鱼鳞生物材料的天然键结与立体结构，该生物材料具有较佳的机械支撑力，可以用以修复组织以及组织移植，且于组织修复以及移植过程中人畜共通疾病传染机率大幅减低。
为使本发明的优点及精神能更进一步的被揭示，现配合图式作一详细说明如后。
附图说明
图1A为本发明的配制生物材料的方法的第一流程示意图；
图1B为本发明的配制生物材料的方法的第二流程示意图；
图1C为本发明第一实施例以及第二实施例配制生物材料的方法的第一流程示意图；
图1D为本发明第一实施例以及第二实施例配制生物材料的方法的第二流程示意图；
图1E为本发明第三实施例配制生物材料的方法的第一流程示意图；
图1F为本发明第三实施例配制生物材料的方法的第二流程示意图；
图2A为本发明的生物材料培养3T3(纤维细胞)细胞五天的SEM图；
图2B为本发明的生物材料培养成骨细胞五天的SEM图；
图3A为本发明的生物材料培养3T3(纤维细胞)细胞五天的共焦显微镜图；
图3B为本发明的生物材料培养成骨细胞五天的共焦显微镜图；
图4为本发明的生物材料培养成骨细胞五天的H&E染色图。
具体实施方式
请参照图1A，其为本发明的配制生物材料的方法的第一流程示意图，本发明的生物材料配制过程包括：将鱼鳞9去细胞化(步骤S10)且脱水(步骤S12)直到鱼鳞9含水量少于50％；这些脱水磨碎过后的鱼鳞9颗粒直径平均尺寸小于10,000μm，优选的，是将鱼鳞9脱水至含水量少于25％，且磨碎至其颗粒直径平均尺寸小于5000μm。
该鱼鳞9是以冷藏或冷冻的方式以提供给生物材料作配制，本发明选用直径平均尺寸小于20cm的鱼鳞9，首先，将鱼鳞9去细胞化(步骤S10)，去细胞化是利用低渗液(hypotonic solution)、清洁剂(detergent)、TritonX-100、十二烷基硫酸钠(SDS)、蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)、脱氧核糖核酸酶(DNase)及核糖核酸酶(RNase)等试剂去除鱼鳞9上的细胞，目的是避免由鱼鳞9所配制而成的生物材料会因为上面所附着的细胞影响组织修复以及移植，甚至可能引发宿主免疫反应，进而产生排斥现象；要进行鱼鳞9脱水动作(步骤S12)之前，须先将鱼鳞9利用其它洗剂洗净(步骤S11)，这些洗剂可以例如是表面活性剂、洗洁剂、温水以及极性溶剂，极性溶剂如约60℃的乙醇，但均不以此为限。然而，本发明并无限制任何特定的洗净步骤，但皆须将鱼鳞9洗净至可以通过LAL鉴定(limulusamebocyte lysate，LAL test)，而洗净后的鱼鳞9在LAL鉴定中的检验值必须小于1000 Eu/ml。
请参照图1B，其为本发明的配制生物材料的方法的第二流程示意图，其步骤大致与第一流程示意图所述的步骤相同，唯一不同之处在于去细胞化(步骤S10)的步骤是位在洗净(步骤S11)步骤之后，不论是在将鱼鳞9洗净(步骤S11)前进行去细胞化(步骤S10)动作，或是将鱼鳞9洗净(步骤S11)后进行去细胞化(步骤S10)动作，二者皆能如序进入以下的步骤。
之后，将鱼鳞9脱水(步骤S12)，脱水方法可以使用压缩空气脱水器(空气喷器)、烤箱、冷冻干燥或其它传统的脱水方法，此外，也可将鱼鳞9浸泡于乙醇或其它极性有机溶剂中以干燥该鱼鳞9，目的是将鱼鳞9脱水直到含水量少于50％，最佳状态是含水量少于25％；接着将这些脱水后的鱼鳞9磨碎至颗粒直径平均尺寸小于10,000μm，颗粒最佳状态是直径约5000μm，而磨碎过后颗粒包含海绵态基质14以及粉末15的混合物，因此，本发明使用过筛器例如筛网对该磨碎过后的颗粒进行过筛动作，进而分离海绵态基质与粉末；该过筛步骤中，可使用震动工具以加强过筛效果，藉由过筛器所过筛出的颗粒以粉末的形式提供生物材料使用，而过筛后所剩余的颗粒则是以基质的形式提供生物材料使用；因此，磨碎鱼鳞9的设备并没有限定为特定的研磨器，只要能使磨碎后的颗粒平均尺寸不超过10,000μm，最佳状态是直径小于5000μm，研磨机或是任何减小鱼鳞9尺寸的设备皆可。
配制过程中还可包括挤压(步骤S16)、过筛、全部或部分干燥以及消毒的步骤，以产生无菌的生物材料，在最佳实施例中，这些步骤可于不论是否加热的条件下皆可进行。该生物材料可用于与不同种的连接修复组织或是活化与非活化的组成物结合。
此外，可将脱水后的鱼鳞9通过加压处理以产生一片状或块状或通过特定模具得到特定形状的生物材料，其中该加压处理可包括一温度改变(可为加温或是低温甚至冷冻)过程，但不可高于200℃以上的温度。在洗净步骤(步骤S11)之后，将鱼鳞9置于200℃以下的温度进行一挤压过程(步骤S16)以配制片状或块状或通过特定模具得到特定形状形式17的生物材料，而脱水后的鱼鳞9易于进行挤压动作。在进行挤压过程(步骤S16)之前，可选择性地外加一将鱼鳞9浸泡于水中的步骤(步骤S18)，但该步骤需于洗净步骤(步骤S11)之后进行；此外，本发明还有另一个实施例，该生物材料不论是基质或是粉末形式皆可通过挤压过程(步骤S16)，以将该生物材料转换为片状或块状或通过特定模具得到特定形状形式17，而该挤压过程是于200℃以下的温度进行。然而，本发明的加热处理并非如上所述限定于挤压过程，任何熟知该项技术的人员也可能采用其它加热处理方式，如任何形式的热挤压、热重压、模制的步骤，以配制该片状或块状或通过特定模具得到特定形状的生物材料。
本发明的生物材料包含组织修复因子且可产生组织修复材料，该组织修复材料是用于修复不同组织伤害以及组织缺陷部位；举例而言，本发明的生物材料可用于调制注射剂于邻近骨骼缺陷部位、软骨修复部位、齿槽修复部位，或其它软组织缺陷部位；另一实施例是将该生物材料制作为外科手术于邻近骨骼缺陷部位、软骨修复部位，或其它组织缺陷部位移植或植入用的覆盖材料，因此，本发明可用于由鱼鳞取得具有组织修复材料的外科手术移植的连接组织，特别是用于连接组织缺陷部位。
综上所述，本发明是关于一种由鱼鳞9所配制的生物材料，且该生物材料是以粉末、基质或是片状或块状或通过特定模具得到特定形状形式存在的材料，可应用于不同组织修复以及移植方面。这些由鱼鳞9取得的材料亦指出不论是粉末、基质或是片状或块状或通过特定模具得到特定形状的生物材料皆包含组织修复因子，且甚至有可能产生不同的定则(不同形状可能产生不同修复方式，例如修复骨骼与修复皮肤则有所不同)。
本发明将于以下详细叙述说明技术内容，但均并不以此为限。
第一实施例：基质形式
请参照图1C，其为本发明第一实施例配制生物材料的第一流程示意图，该过程是起始于将鱼鳞进行去细胞化的步骤(步骤S20)，接着将鱼鳞进行洗净动作(步骤S19)，而洗净后的鱼鳞在LAL鉴定中的检验值必须小于1000Eu/ml；请参照图1D，其为本发明第一实施例配制生物材料的第二流程示意图，该过程是起始于将鱼鳞进行洗净动作(步骤S19)，而洗净后的鱼鳞在LAL鉴定中的检验值必须小于1000 Eu/ml，接着将鱼鳞进行去细胞化的步骤(步骤S20)。
不论是在将鱼鳞洗净(步骤S19)前进行去细胞化(步骤S20)动作，或是将鱼鳞洗净(步骤S19)后进行去细胞化(步骤S20)动作，二者皆能如序进入以下的步骤。
之后进入到步骤S21，鱼鳞将被脱水直到含水量少于50％，接着是步骤S22，脱水的鱼鳞将被磨碎直到其颗粒直径平均尺寸小于10000μm，这些颗粒包含海绵态基质以及粉末的混合物；步骤S23是进行过筛步骤，利用过筛器将基质由混合物中分离出来。
因此，经过过筛步骤后得到基质，该基质包含由HAP、TCP以及胶原蛋白所组成的纤维组织。
第二实施例：粉末形式
请再次参照图1C以及图1D，其分别为本发明第二实施例配制生物材料的第一流程图以及本发明第二实施例配制生物材料的第二流程图，配制粉末形式的生物材料的过程相似于配制基质形式的生物材料的过程，如上所述，磨碎后的颗粒包含海绵态基质以及粉末的混合物；步骤S23是进行过筛步骤，配制粉末形式的生物材料的不同之处在于，其是利用过筛器将粉末由混合物中分离出来，因此粉末形式具有一个确切的机械结构(这里所提及的机械结构指的是因为本发明并无将生物材料经过酵素或酶处理，所以生物材料原本的机械结构被完整保存，也就是不只胶原蛋白与羟基磷灰石等成分被保留下来，甚至连该材料天然的立体结构与交链都被完整保留)，进而使其不同于基质形式，而粉末颗粒的直径尺寸是小于5000μm。
第三实施例：片状或块状或通过特定模具得到特定形状形式
请参照图1E，其为本发明第三实施例配制生物材料的第一流程示意图，目的是利用鱼鳞配制片状或块状或通过特定模具得到特定形状的生物材料。该过程是起始于将鱼鳞去细胞化步骤(步骤S30)，之后将鱼鳞进行洗净动作(步骤S29)，洗净后的鱼鳞在LAL鉴定中的检验值必须小于1000 Eu/ml。请参照图1F，其为本发明第三实施例配制生物材料的第二流程示意图，目的是利用鱼鳞配制片状或块状或通过特定模具得到特定形状的生物材料，该过程是起始于将鱼鳞进行洗净动作(步骤S29)，洗净后的鱼鳞在LAL鉴定中的检验值必须小于1000 Eu/ml，之后进行将鱼鳞去细胞化步骤(步骤S30)。
不论是在将鱼鳞洗净(步骤S29)前进行去细胞化(步骤S30)动作，或是将鱼鳞洗净(步骤S29)后进行去细胞化(步骤S30)动作，二者皆能如序进入以下的步骤。
之后进入到步骤S31，在步骤S31中，鱼鳞将被脱水直到含水量少于25％，接着是步骤S32，脱水的鱼鳞将被磨碎直到其颗粒直径平均尺寸小于5000μm，该些颗粒包含海绵态基质以及粉末的混合物；步骤S33是进行过筛步骤，利用过筛器将混合物分离为基质以及粉末；步骤S34是将该基质以及粉末进行挤压。可将基质或粉末分别进行挤压，也可将基质与粉末混合后进行挤压。根据所配制生物材料的使用用途的不同，例如修复骨骼用的生物材料或是修复皮肤用的生物材料，可将基质与粉末按不同的所需用量比例进行混合。
配制片状或块状或通过特定模具得到特定形状的生物材料有二种方法，方法一是在洗净步骤(步骤S29)之后，直接进行后续的动作；方法二如图1E以及图1F所示，在挤压步骤之前，先将鱼鳞进行洗净以及脱水步骤。
因此，不论是脱水过后的鱼鳞，未脱水但已洗净后的鱼鳞，或是由鱼鳞所取得的基质形式以及粉末形式的生物材料，皆进行挤压步骤以产生片状或块状或通过特定模具得到特定形状的生物材料；利用完整的鱼鳞或是由鱼鳞取得不同类型的生物材料，先将其于一低温下以大于100g/2.5cm3的压力进行挤压，而最佳压力为1kg/2.5cm3，再将其送至一小于200℃高温下的压模进行挤压(该步骤的重点是挤压动作，挤压温度仅是示例性说明，可以在低温(例如-18℃到4℃)下挤压，或是高温(例如约30-60℃)下挤压，最好应不超过200℃，因温度不同具体的挤压力与挤压时间会有所不同，以得到片状或块状或通过特定模具得到特定形状的生物材料)；在进行挤压动作之前，该生物材料的交联作用可藉由加热或加入适当浓度的化学交联剂(例如可以是戊二醛(glutaaldehyde)、EDC或是其它通常所用的化学交联剂)达成；其中，在生物材料中，交联剂会与胺群或其它反应物产生反应。
本发明中的去细胞化的过程中，除了洗去了部分的水溶性蛋白质与葡萄糖胺聚合醣外，原来的胶原蛋白与弹性蛋白纤维与大部分的葡萄糖胺聚合醣仍然保存于其天然细胞外间质的结构内，因此去细胞化的生物材料能够提供细胞迁入的自然结构，进而具有相当好的生物兼容性。
图2A是利用本发明的生物材料20培养3T3(纤维细胞22)细胞五天的SEM图，图2B是利用本发明的生物材料20培养成骨细胞24细胞5天的SEM图，这些图显示不论是纤维细胞22或是成骨细胞24利用本发明的生物材料20皆能够生长得相当完整。
图3A是利用本发明的生物材料20培养3T3(纤维细胞)细胞五天的共焦显微镜(confocol microscope)图，图3B是利用本发明的生物材料20培养成骨细胞五天的共焦显微镜(confocol microscope)图，这些图显示不论是纤维细胞或是成骨细胞利用本发明的生物材料20皆能够生长得相当完整。
图4是利用本发明的生物材料20培养成骨细胞24五天的H&E染色图，这些图显示成骨细胞24利用本发明的生物材料20皆能够生长得相当完整。
以上所述是利用一较佳实施例及不同实施例以详细说明本发明，其并非用以限制本发明的实施范围，并且熟悉该技术的人员都能明了，适当做些微的修改仍不脱离本发明的精神及范围。

Claims (19)

1.一种从鱼鳞配制生物材料的方法，该方法包括步骤：
将鱼鳞去细胞化，再将其磨碎成颗粒，其中这些颗粒包含海绵态基质以及粉末的混合物。
2.如权利要求1所述的配制生物材料的方法，该方法还包括：挤压所述海绵态基质以及粉末，以在200℃以下的温度形成片状或块状或通过特定模具得到特定形状。
3.如权利要求1所述的配制生物材料的方法，其中，在磨碎鱼鳞之前，还包括将鱼鳞脱水的步骤。
4.如权利要求3所述的配制生物材料的方法，其中，所述脱水步骤包括将鱼鳞脱水直到含水量少于50％。
5.如权利要求3所述的配制生物材料的方法，其中，在将鱼鳞脱水步骤之前，还包括将鱼鳞洗净的步骤。
6.如权利要求5所述的配制生物材料的方法，其中，将鱼鳞去细胞化的步骤是在将鱼鳞洗净步骤之前。
7.如权利要求3所述的配制生物材料的方法，其中，将鱼鳞去细胞化的步骤是在将鱼鳞脱水步骤之前。
8.如权利要求1所述的配制生物材料的方法，该方法还包括将海绵态基质以及粉末从颗粒中分离的步骤。
9.如权利要求1所述的配制生物材料的方法，其中是将鱼鳞磨碎至颗粒直径平均尺寸小于10,000μm。
10.如权利要求1所述的配制生物材料的方法，其中，所述鱼鳞直径平均尺寸小于20cm。
11.一种从鱼鳞配制生物材料的方法，该方法包括步骤：
将鱼鳞去细胞化，再将其进行挤压过程以形成片状或块状或通过特定模具得到特定形状的材料。
12.如权利要求11所述的配制生物材料的方法，其中，所述挤压过程是在200℃以下的温度进行。
13.如权利要求11所述的配制生物材料的方法，其中，在进行鱼鳞挤压过程之前，还包括洗净鱼鳞的步骤。
14.如权利要求13所述的配制生物材料的方法，其中，在洗净步骤结束后，且在进行鱼鳞挤压过程之前，还包括将鱼鳞脱水的步骤。
15.如权利要求14所述的配制生物材料的方法，其中，所述脱水步骤包括将鱼鳞脱水直到含水量少于50％。
16.如权利要求14所述的配制生物材料的方法，其中，将鱼鳞去细胞化的步骤是在将鱼鳞脱水步骤之前。
17.如权利要求13所述的配制生物材料的方法，其中，将鱼鳞去细胞化的步骤是在将鱼鳞洗净步骤之前。
18.如权利要求11所述的配制生物材料的方法，其中，在进行鱼鳞挤压过程之前，还包括将鱼鳞浸泡于水中的步骤。
19.如权利要求11所述的配制生物材料的方法，其中，所述鱼鳞直径平均尺寸小于20cm。
CN200810002062A 2008-01-09 2008-01-09 配制生物材料的方法 Expired - Fee Related CN101480503B (zh)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200810002062A CN101480503B (zh) 2008-01-09 2008-01-09 配制生物材料的方法
PCT/CN2008/070309 WO2009086743A1 (zh) 2008-01-09 2008-02-15 配制生物材料的方法
JP2010541677A JP5301565B2 (ja) 2008-01-09 2008-02-15 生体材料の製造方法
KR1020107017516A KR101816139B1 (ko) 2008-01-09 2008-02-15 바이오물질 및 그 제조방법
EP08706682.5A EP2241606B1 (en) 2008-01-09 2008-02-15 A method for preparing a biomaterial
ES08706682.5T ES2692537T3 (es) 2008-01-09 2008-02-15 Un método para preparar un biomaterial
EP18150067.9A EP3329944B1 (en) 2008-01-09 2008-02-15 A method for preparing a biomaterial
BRPI0819960A BRPI0819960B8 (pt) 2008-01-09 2008-02-15 dispositivos de reparo de tecido preparados a partir de escamas de peixe e métodos para preparação dos mesmos
IL206873A IL206873A (en) 2008-01-09 2010-07-07 Biological material and its method of preparation

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200810002062A CN101480503B (zh) 2008-01-09 2008-01-09 配制生物材料的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101480503A true CN101480503A (zh) 2009-07-15
CN101480503B CN101480503B (zh) 2012-10-17

Family

ID=40852802

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200810002062A Expired - Fee Related CN101480503B (zh) 2008-01-09 2008-01-09 配制生物材料的方法

Country Status (8)

Country Link
EP (2) EP3329944B1 (zh)
JP (1) JP5301565B2 (zh)
KR (1) KR101816139B1 (zh)
CN (1) CN101480503B (zh)
BR (1) BRPI0819960B8 (zh)
ES (1) ES2692537T3 (zh)
IL (1) IL206873A (zh)
WO (1) WO2009086743A1 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102327646A (zh) * 2010-07-13 2012-01-25 柏登生医股份有限公司 鱼鳞衍生的组织修复结构
CN107335094A (zh) * 2016-05-03 2017-11-10 薛培贤 一种可采用自体指甲制作人体组织修复的材料的方法
CN107335088A (zh) * 2016-05-03 2017-11-10 薛培贤 一种可采用自体的毛发制作伤口敷料的方法
TWI715089B (zh) * 2019-06-28 2021-01-01 柏登生醫股份有限公司 鱗片衍生生活用品及其製造方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3101880B1 (fr) * 2019-10-14 2023-01-13 Haddock Composition à base d’écailles de poisson
JP7514633B2 (ja) 2020-03-05 2024-07-11 日本電熱株式会社 細胞培養用添加剤、培地および細胞の培養方法

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05125100A (ja) * 1991-09-30 1993-05-21 Nippon Kasei Chem Co Ltd 高純度のペプシン可溶性魚鱗コラーゲンおよびその製造法
JPH05155900A (ja) * 1991-09-30 1993-06-22 Nippon Kasei Chem Co Ltd 高純度の酸不溶性魚鱗コラーゲンおよびその製造法
EP0900560A1 (en) * 1997-09-09 1999-03-10 Hironori Oka Tooth coating composite and its preparation
JP4400039B2 (ja) * 2002-06-07 2010-01-20 チッソ株式会社 魚鱗由来コラーゲンペプチド及びカルシウムアパタイトの製造方法
JP2004059437A (ja) * 2002-07-24 2004-02-26 Nitta Gelatin Inc 新規なコラーゲンおよびその用途
CN1727304A (zh) * 2004-07-30 2006-02-01 段维新 羟磷灰石粉末、多孔体及其制备方法
JP2006217876A (ja) * 2005-02-14 2006-08-24 Chisso Corp 魚鱗由来のゼラチンまたはコラーゲンペプチドの製造方法
JP4863433B2 (ja) * 2005-03-16 2012-01-25 独立行政法人物質・材料研究機構 魚鱗由来コラーゲンの取得方法
CN100370033C (zh) * 2005-10-19 2008-02-20 由守谊 一种鱼鳞胶原蛋白生产工艺
CN100485043C (zh) * 2005-12-22 2009-05-06 法玛智财科技顾问股份有限公司 鱼鳞胶原蛋白及其制造方法
CN100381528C (zh) * 2006-11-06 2008-04-16 四川大学 未变性鱼鳞胶原的制备方法
US7838038B2 (en) * 2006-12-04 2010-11-23 Chien-Cheng Lin Biomaterial and preparation method thereof
JP2008206470A (ja) * 2007-02-27 2008-09-11 Shinhui Bio-Tech Co Ltd 魚鱗由来のコラーゲンペプチドの製造方法
JP4369969B2 (ja) * 2007-10-26 2009-11-25 株式会社アールビーエス 生体適合性材料並びにその製造方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102327646A (zh) * 2010-07-13 2012-01-25 柏登生医股份有限公司 鱼鳞衍生的组织修复结构
CN107335094A (zh) * 2016-05-03 2017-11-10 薛培贤 一种可采用自体指甲制作人体组织修复的材料的方法
CN107335088A (zh) * 2016-05-03 2017-11-10 薛培贤 一种可采用自体的毛发制作伤口敷料的方法
TWI715089B (zh) * 2019-06-28 2021-01-01 柏登生醫股份有限公司 鱗片衍生生活用品及其製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0819960A2 (pt) 2015-06-16
BRPI0819960B1 (pt) 2021-01-26
IL206873A (en) 2014-05-28
IL206873A0 (en) 2010-12-30
KR101816139B1 (ko) 2018-01-08
EP2241606A1 (en) 2010-10-20
EP3329944A1 (en) 2018-06-06
WO2009086743A1 (zh) 2009-07-16
KR20100111714A (ko) 2010-10-15
BRPI0819960B8 (pt) 2021-05-25
JP2011509128A (ja) 2011-03-24
EP2241606A4 (en) 2013-01-02
JP5301565B2 (ja) 2013-09-25
CN101480503B (zh) 2012-10-17
EP2241606B1 (en) 2018-08-15
ES2692537T3 (es) 2018-12-04
EP3329944B1 (en) 2019-12-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Adamski et al. Two methods for decellularization of plant tissues for tissue engineering applications
CN101480503B (zh) 配制生物材料的方法
Green et al. Natural marine sponge fiber skeleton: a biomimetic scaffold for human osteoprogenitor cell attachment, growth, and differentiation
CN106075598A (zh) 一种光交联丝胶蛋白水凝胶及其制备方法和应用
CN104307045B (zh) 一种天然组织来源的脱细胞骨膜材料的制备方法
KR20170126913A (ko) 생물학적 기능성 연조직 스캐폴드 및 임플란트
Ling et al. Improved the biocompatibility of cancellous bone with compound physicochemical decellularization process
CN106492281B (zh) 一种生物相容性骨移植物及其制备方法
EP1941916A1 (en) Method for producing biomaterials from a bone tissue and the thus obtained material used for osteoplasty and tissue engineering
CN108245708A (zh) 一种诱导肌腱组织再生的生物活性支架及其制备方法和用途
US20200405912A1 (en) Decellularized bone biomaterial enriched with a hydrogel containing decellularized extracellular bone matrix
CN110947031A (zh) 一种具有高生物活性的骨组织工程支架材料及其制备方法和应用
WO2021119830A1 (en) Biomaterials for bone tissue engineering
Shi et al. Construction of a Decellularized Multicomponent Extracellular Matrix Interpenetrating Network Scaffold by Gelatin Microporous Hydrogel 3D Cell Culture System
US20110064822A1 (en) Biomaterial and preparation method thereof
Song et al. Development and fabrication of a two-layer tissue engineered osteochondral composite using hybrid hydrogel-cancellous bone scaffolds in a spinner flask
CN106943623A (zh) 一种促进骨再生天然骨修复材料的制备方法
CN101822851B (zh) 一种制备组织工程骨软骨支架的方法
CN101695583A (zh) 一种用于组织修复的颗粒状生物材料及其制备方法
CN102114272A (zh) 一种负载季铵化壳聚糖和质粒dna复合粒子的皮肤再生材料的制备方法
TWI396564B (zh) 生物材料及其配製方法
CN113509596A (zh) 一种3d打印支架及制备方法和应用
Akbay et al. Myocardial Tissue Engineering: A Comparative Study of Different Solutions for Use as a Natural Scaffold Being of Heart a Comparative Study of Different Solutions for Decellularization Heart Scaffold
Haasper et al. Influence of fibrin glue on proliferation and differentiation of human bone marrow stromal cells seeded on a biologic 3-dimensional matrix
Wolfinbarger et al. Demineralized bone matrix: maximizing new bone formation for successful bone implantation

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20121017

Termination date: 20220109

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee