CN101460623B - 新型抗cd98抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了与来自癌细胞的细胞膜、且与具有氨基酸转运活性的蛋白质(例如，LAT1)形成复合体的CD98具有特异性结合能力的人抗体或其功能性片段。该抗体与在癌细胞表面与LAT1形成二聚体的CD98结合，使用ADCC或CDC的免疫系统对表达CD98的癌细胞特异性攻击，并且抑制经LAT1介导的癌细胞对氨基酸的摄取，由此抑制其增殖。本发明继而提供含有该抗体或其抗体片段的、作用于多种癌症、或对癌为特异性的、没有副作用的癌症的预防或治疗药。

Description

新型抗CD98抗体
相关申请的参照 
本专利申请主张享有在先申请的日本国专利特愿2006-105013号(申请日：2006年4月6日)的优先权。日本特愿2006-105013号的全部公开内容均通过引用的方式成为本说明书的一部分。 
发明背景 
本发明是涉及独立行政法人科学技术振兴机构的“氨基酸转运蛋白抗体抗癌药物”相关新技术开发委托中的开发成果的发明。 
技术领域
本发明涉及与来自癌细胞的细胞膜、且与具有氨基酸转运活性的蛋白质形成复合体的CD98具有特异性结合能力的单克隆抗体、以及使用该抗体的肿瘤生长抑制或癌症治疗的药物用途。 
背景技术
癌症(恶性肿瘤)在日本占死亡原因的第一位。其患者数目逐年增加，强烈需求有效性和安全性高的药物或治疗方法的开发。目前的抗癌药常常是特异性杀死癌细胞的能力低，也作用于正常的细胞，引起较多的药物有害反应。近年来，以在癌细胞中高表达的分子(癌相关抗原)为靶的抗癌药物的开发得到进展，在白血病、乳癌、肺癌等中成为有效的治疗手段。 
与在细胞的细胞膜上表达的癌相关抗原特异性结合的抗体经由抗体依赖性细胞毒活性(ADCC)或补体依赖性细胞毒活性(CDC)等介导的免疫反应攻击癌细胞，或者抑制癌细胞生长所必须的细胞生长信号传递，对癌症治疗有效。 
但是，抗体可在治疗中涉及的癌症种类仅限于乳癌、难治性慢性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病等的癌症种类，另外，一种抗体可以应用于多种癌症种类治疗的抗体尚未出现。因此，人们需求可以与多种癌细胞强烈结合、具有抗癌活性的抗体的获得。 
CD98(4F2)是已知在多种癌细胞中高表达的、含有529个氨基酸残基、约80kDa的II型跨膜糖蛋白链。CD98通过二硫键与具有氨基酸转运活性的约40kDa的蛋白质形成异源二聚体，在细胞膜上表达。作为可能与CD98结合的氨基酸转运蛋白已知有6种。CD98鉴定为淋巴细胞的活化抗原，与细胞生长信号传递、整联蛋白的活化、细胞融合等很多生物学功能有关(Haynes B.F.等人.，J.Immunol.，(1981)，126，1409～1414；Lindsten T.等人.，Mol.Cell Biol.，(1988)，8，3820～3826；Teixeira S.等人.，Eur.J.Biochem.，(1991)，202，819～826；L.A.Diaz Jr.等人.，J Biol Regul Homeost Agents，(1998)12，25～32)。 
癌细胞为了确保生长的优势而具有各种机理。例如，癌细胞为了比周围细胞优先摄入生长所必要的必需氨基酸而过量表达中性氨基酸转运蛋白即是其中一种。近年来，在癌细胞中特异性高表达的氨基酸转运蛋白——L型氨基酸转运蛋白1(LAT1)已得到克隆(Kanai等人.，J.Biol.Chem.(1998)，273，23629～23632)。LAT1与CD98形成复合体，钠离子非依赖性地转运亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、组氨酸等具有大型的支链的中性氨基酸。还已知LAT1在除脑、胎盘、骨髓、睾丸之外的几乎所有正常组织中虽然表达低或未见表达，但在结肠直肠癌、胃癌、乳癌、胰腺癌、肾癌、喉头癌、食道癌、肺癌等人恶性肿瘤组织中与CD98一起表达亢进(Yanagida等人.，Biochem.Biophys.Acta，(2001)，1514，291～302)。如果降低LAT1的表达、抑制氨基酸的摄入，则可以抑制肿瘤的生长，这在癌症移植小鼠模型中有报道(日本特开2000-157286号公报)，可以认为抑制LAT1的活性有望作为癌症的治疗方法。 
关于人CD98的抗体，报道的有通过将人CD98表达细胞株免疫 小鼠等非人哺乳动物而制备的小鼠单克隆抗体(上述文献Haynes等人，Masuko T.等人.，Cancer Res.，(1986)，46，1478～1484，以及FreidmanAW等人.，Cell.Immunol.，(1994)，154，253～263)。但是，这些抗CD98抗体是否抑制LAT1的氨基酸摄取则尚未所知。并且，LAT1的细胞内区域的抗体虽已获得，但是可以与活细胞膜上的LAT1结合的抗体尚未见报道。因此，如果可以获得与在癌细胞膜上表达的CD98或LAT1结合、抑制LAT1的氨基酸摄取的抗体，则可以得到广范围的癌症的优异的治疗药物。 
发明内容
本发明人等成功地获得了与CD98具有特异性结合能力的抗体，该CD98来自癌细胞的细胞膜、且与具有氨基转运活性的蛋白质形成复合体。该抗体具有抑制癌细胞生长的作用，因此利用该性质，可用作药物组合物的有效成分，更具体地说，可用作肿瘤的预防或治疗药的有效成分。本发明基于上述发现完成。 
本发明的目的在于提供与CD98具有特异性结合能力的人抗体及其功能性片段，其中，该CD98来自癌细胞的细胞膜、且与具有氨基酸转运活性的蛋白质形成复合体。 
本发明的目的还在于提供以上述本发明的人抗体及其功能性片段作为有效成分的药物组合物或肿瘤的预防或治疗药。 
本发明的人抗体及其功能性片段的特征在于：与CD98具有特异性结合能力，其中，该CD98来自癌细胞的细胞膜、且与具有氨基酸转运活性的蛋白质形成复合体。 
本发明的药物组合物或肿瘤的预防或治疗药含有上述本发明的人抗体或其功能性片段作为有效成分。 
附图简述 
图1是表示人抗CD98单克隆抗体与表达人CD98/人LAT1的 CT26细胞株的结合性的图。 
图2A是表示人抗CD98单克隆抗体与表达人CD98的L929细胞株的结合性的图。 
图2B是表示人抗CD98单克隆抗体与表达人CD98的L929细胞株的结合性的图。 
图3是表示人抗CD98单克隆抗体与经衣霉素处理的K562人细胞株的结合性的图。 
图4A是表示人抗CD98单克隆抗体与表达各种小鼠、人嵌合体CD98的L929细胞株的结合性的图。 
图4B是表示人抗CD98单克隆抗体与表达各种小鼠、人嵌合体CD98的L929细胞株的结合性的图。 
图5是表示人抗CD98单克隆抗体对抑制T24人膀胱癌细胞株的氨基酸摄取的活性的图。 
图6A是表示人抗CD98单克隆抗体与人末梢血T细胞、B细胞、单核细胞的结合性的图。 
图6B是表示人抗CD98单克隆抗体与人末梢血T细胞、B细胞、单核细胞的结合性的图。 
图7是表示人抗CD98单克隆抗体与PHA活化人末梢血T细胞、B细胞的结合性的图。 
图8是表示人抗CD98单克隆抗体与人主动脉内皮细胞(HAEC)和人结肠直肠癌细胞株(DLD-1)的结合性的图。 
图9A是表示人抗CD98单克隆抗体与各种癌细胞株的结合性的图。 
图9B是表示人抗CD98单克隆抗体与各种癌细胞株的结合性的图。 
图10A是表示人抗CD98单克隆抗体与各种癌细胞株的结合性的图。 
图10B是表示人抗CD98单克隆抗体与各种癌细胞株的结合性的 图。 
图11是表示将人抗CD98单克隆抗体K3、3-69-6、C2IgG1给予移植了肿瘤细胞的裸小鼠时各小鼠中的肿瘤块的大小的图。 
图12是表示对具有生长至90mm3的肿瘤的担癌小鼠以100μg/小鼠个体隔日给予三次人抗CD98单克隆抗体C2IgG1时测定肿瘤大小的结果的图。 
图13是表示人抗CD98单克隆抗体K3、C2IgG1与猴细胞株COS-7的交叉反应性的图。 
图14是表示在移植了伯基特淋巴瘤细胞株Ramos的担癌小鼠中，在肿瘤生长至30～140mm3之后分别以100mg/小鼠个体、以3次/周给予人抗CD98单克隆抗体C2IgG1和利妥昔单抗时测定肿瘤大小的结果的图。 
图15是表示通过HPLC测定的、人抗CD98单克隆抗体C2IgG1NS氨基酸修饰抗体的纯化后的聚集物含有率的图。 
图16A是表示人抗CD98单克隆抗体K3和C2IgG1、以及C2IgG1的各氨基酸修饰抗体与强制表达人CD98或人LAT1的L929细胞的结合性的图。 
图16B是表示人抗CD98单克隆抗体K3和C2IgG1、C2IgG1的各氨基酸修饰抗体与人结肠直肠癌细胞株(DLD-1)、伯基特淋巴瘤细胞株(Ramos)、人结肠直肠癌细胞株(Colo205)和人主动脉内皮细胞(HAEC)的结合性的图。 
发明的具体说明 
微生物的保藏
本发明提供的含有编码人抗体可变区的核酸序列的质粒载体C2IgG1/pCR4和K3/pCR4分别以FERM BP-10551(用于识别的标记为：C2IgG1/pCR4)和FERM BP-10552(用于识别的标记为：K3/pCR4)于2006年3月14日保藏于独立行政法人产业技术综合研究所特许生 物寄托中心(日本国茨城县筑波市东1丁目1番1中央第6)。 
定义
本说明书或附图中，用于标记氨基酸而使用的单一英文字母分别表示以下的氨基酸。(G)甘氨酸、(A)丙氨酸、(V)缬氨酸、(L)亮氨酸、(I)异亮氨酸、(S)丝氨酸、(T)苏氨酸、(D)天冬氨酸、(E)谷氨酸、(N)天冬酰胺、(Q)谷氨酰胺、(K)赖氨酸、(R)精氨酸、(C)半胱氨酸、(M)甲硫氨酸、(F)苯丙氨酸、(Y)酪氨酸、(W)色氨酸、(H)组氨酸、(P)脯氨酸。用于标记DNA的单一英文字母的含义分别如下。(A)腺嘌呤、(C)胞嘧啶、(G)鸟嘌呤、(T)胸腺嘧啶。 
CD98及其单克隆抗体
与本发明的人单克隆抗体及其功能性片段(如无特别说明，以下在本说明书中简称为“本发明的抗体”)具有特异性结合能力的CD98，如上所述，是含有529个氨基酸残基的II型跨膜糖蛋白链，与具有氨基酸转运活性的蛋白质在细胞膜上形成异源二聚体。其中，具有氨基酸转运活性的蛋白质的优选具体例子有LAT1。根据本发明的优选方案，CD98为人CD98。人CD98的蛋白质的一级结构是公知的(SEQ IDNO.66；GenBank/EMBL/DDBJ accession No.AB018010)，人LAT1的蛋白质也是公知的(SEQ ID NO.68；GenBank/EMBL/DDBJ accession No.AB018009)。 
本发明的抗体与来自癌细胞的细胞膜、且与具有氨基酸转运活性的蛋白质形成复合体的CD98具有特异性结合能力，而不与人正常细胞例如正常人血管内皮细胞、正常人末梢血单核细胞和淋巴细胞结合。具有结合能力的癌细胞的例子有：构成结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、黑素瘤、脑肿瘤、淋巴瘤、膀胱癌、胰腺癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、白血病、T细胞淋巴瘤、胃癌、胰腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、食道癌、肝癌、头颈部扁平上皮细胞癌、皮肤癌、尿道癌、前列腺癌、绒毛癌、咽癌、喉癌、胸膜肿瘤、男性细胞瘤、子宫内膜增生症、子宫内膜异位症、胚胎瘤、纤维肉瘤、卡 波济氏肉瘤、血管瘤、海绵状血管瘤、血管母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、神经纤维瘤、少突胶质细胞瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质细胞瘤、横纹肌瘤、胶质母细胞瘤、骨原性肉瘤、平滑肌瘤、甲状腺肉瘤或肾母细胞瘤等的癌细胞，更具体地说，例如有结肠直肠癌细胞株(DLD-1、Colo205、SW480、SW620、LOVO、LS180和HT29)、肺癌细胞株(H226)、前列腺癌细胞株(DU145)、黑素瘤细胞株(G361、SKMEL28和CRL1579)、非霍奇金淋巴瘤细胞株(Ramos)、膀胱癌细胞株(T24)、乳腺癌细胞株(MCF和MDA-MB-231)、胰腺癌细胞株(HS766T)、多发性骨髓瘤细胞株(IM9)、成红细胞白血病细胞株(K562)。本发明的抗体与上述各种各样的癌细胞具有结合能力，因此有利。 
本发明的抗体与癌细胞的特异性结合能力使得本发明的抗体的有效性高。即，如后所述，本发明的优选方案的抗体显著抑制氨基酸摄入到经由LAT1介导的细胞内，因此只与癌细胞结合，较为有利，还可以将本发明的抗体与其它药物结合，有利地用作将药物传递至癌细胞的靶向药物。 
本发明的抗体具有抗肿瘤活性。本发明的优选方案的抗体具有显著抑制氨基酸摄入到经由LAT1介导的细胞内的性质。因此，本发明的抗体的抗肿瘤活性除通过ADCC和CDC的使用免疫系统进行特异性毒性之外，通过抑制上述氨基酸的摄取也可带来该活性。根据本发明的具体方案，本发明的抗体显著抑制膀胱癌细胞株T24细胞的氨基酸摄入。 
根据本发明的优选方案，本发明的抗体具有后述(a)SEQ IDNO.29和31、(b)SEQ ID NO.41和47、以及(c)SEQ ID NO.43和47中的任意一对序列作为重链可变区和轻链可变区。并且，根据另一方案，本发明的抗体具有含在质粒载体K3/pCR4(FERM BP-10552)或C2IgG1/pCR4(FERM BP-10551)中的、由来自载体pCR4的序列以外的序列编码的序列作为可变区。该方案的抗体可变区的氨基酸序列是 由从上述任意的质粒载体中得到的、不含有来自载体pCR4的序列的BglII-BsiWI片段(轻链可变区)和SlI-NheI片段(重链可变区)所编码。 
本发明的抗体的功能性片段是指与本发明的抗体特异性结合的抗原可特异性结合的抗体的片段。更具体地说，有F(ab’)2、Fab，、Fab、Fv、二硫键抗体(disulphide-linked FV，dsFV)、单链FV(Single-Chain FV，scFV)以及它们的聚合物等(D.J.King.，Applications and Engineering of Monoclonal Antibodies.，1998，T.J.International Ltd)。上述抗体片段可通过常用方法例如木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等蛋白酶进行抗体分子的消化或通过公知的遗传工程方法获得。 
本发明中，“人抗体”是指作为来自人的抗体基因的表达产物的抗体。如后所述，人抗体可通过对具有导入人抗体基因座、生产来自人的抗体的能力的转基因动物给予抗原获得。该转基因动物例如有小鼠，可生产人抗体的小鼠的制备方法例如如国际公开WO02/43478号公报中所记载。 
本发明的抗体也包含下述单克隆抗体：由具有在构成抗体的重链和/或轻链的各氨基酸序列中有一或多个氨基酸缺失、置换或附加所得到的氨基酸序列的重链和/或轻链形成。上述氨基酸的部分修饰(缺失、置换、插入、附加)可通过将编码该氨基酸序列的核苷酸序列部分修饰而导入到本发明的抗体的氨基酸序列中。该核苷酸序列的部分修饰可采用已知的位点特异性诱变法、按照常规方法导入(Proc Natl Acsd Sci USA.，1984，8卷，15662；Sambrook等人.，Molecular Cloning A Laboratory Manual(1989)Second edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press)。 
根据本发明的优选方案，本发明的抗体是轻链第117号的异亮氨酸被置换为其它氨基酸残基，例如甲硫氨酸、天冬酰胺、亮氨酸或半胱氨酸。上述抗体的优选例子有：具有(d)SEQ ID NO.43和77、(e)SEQID NO.43和79、(f) SEQ ID NO.43和81、以及(g)SEQ ID NO.43和83的任意一对序列作为重链可变区和轻链可变区。 
本发明的抗体也包含具有任意免疫球蛋白类和亚类的抗体，根据本发明的优选方案，是具有人免疫球蛋白类和亚类的抗体，优选的类、亚类有免疫球蛋白G(IgG)，特别是IgG1，优选的轻链是κ。 
本发明的抗体也包含通过本领域技术人员周知的基因工程修饰(例如EP0314161号公报)而变换为不同的亚类的抗体。即，使用编码本发明的抗体可变区的DNA，通过基因工程方法，可获得与原有的亚类不同亚类的抗体。 
ADCC是指经由在巨噬细胞、NK细胞、嗜中性粒细胞等的表面表达的Fc受体介导，与抗体的恒定区结合，由此识别细胞，通过活化识别的细胞而诱导的细胞毒活性。而CDC是指通过抗体与抗原结合，由活化的补体系统引发的细胞毒活性，已经了解这些活性根据抗体的亚类不同而活性强弱各异，并且这起因于抗体的恒定区结构的不同(Charles A.Janeway，等人.Immunobiology，1997，Current Biology Ltd/Garland Publishing Inc.)。 
因此，例如将本发明的抗体的亚类变换为IgG2或IgG4，则可以获得与Fc受体结合度低的抗体。相反，将本发明的抗体的亚类变换为IgG1或IgG3，则可以获得与Fc受体结合度高的抗体。希望得到上述ADCC和CDC活性时，优选抗体亚类为IgG1。 
将不同的亚类抗体变换为IgG1时，例如可从抗体生成杂交瘤中只分离可变区，导入到含有人IgG1的恒定区的载体、例如N5KG1-ValLark载体(IDEC Pharmaceuticals，N5KG1(美国专利6001358))中制备。 
通过将本发明的抗体恒定区的氨基酸序列进行基因工程修饰、或者与具有上述序列的恒定区序列结合，可以改变与Fc受体的结合度(参照Janeway CA.Jr.和Travers P.(1997)，Immunobiology，Third Edition，Current Biology Ltd./Garland Publishing Inc.)，或者可以改变与补体的结合度(参照Mi-Hua Tao，等人.，1993，J.Exp.Med)。例如，将编码重链恒定部分的EU编号系统(参照Sequences of proteins of immunological interest，NIH Publication No.91～3242)的第331号脯氨 酸(P)的序列CCC突变为编码丝氨酸(S)的TCC，将脯氨酸置换为丝氨酸，由此可以改变与补体的结合度。 
例如，假设本发明的抗体单独没有细胞死亡诱导活性，则优选具有经Fc受体介导的抗体依赖性细胞毒活性(ADCC)或补体依赖性细胞毒活性(CDC)产生的抗肿瘤活性的抗体，如果单独的抗体具有细胞死亡诱导活性，则更优选与Fc受体的结合度低的抗体。 
考虑免疫抑制药物时，优选只对T细胞和抗原呈递细胞的结合有空间位阻时等、不具有ADCC活性或CDC活性的抗体。ADCC活性或CDC活性可能成为毒性的原因时，优选通过突变Fc区域或变更亚类来避免成为毒性原因的活性的抗体。 
考虑以上，如果需要，通过对不同的亚类进行基因工程修饰，则可将本发明的抗体制成通过ADCC或CDC特异性伤害癌细胞的抗体。 
根据本发明的另一优选方案，本发明的抗体优选识别由人CD98的氨基酸序列(SEQ ID NO.66)中的连续或不连续的至少8个氨基酸残基构成的表位。根据本发明的更优选方案，本发明的抗体优选与人CD98的氨基酸序列中的第371～529号氨基酸的区域的一部分具有结合性，或者与第1～371号氨基酸的区域的一部分具有结合性。 
根据本发明的另一方案，提供具有与人CD98和猴CD98显示交叉反应的性质的抗体作为本发明的抗体。可以想到：上述抗体在人CD98和猴CD98中识别同一或极为类似的表位结构，在对人进行临床实验之前可以以猴作为实验动物进行各种实验，因此具有优势。 
CD98抗体的制备
本发明的抗体例如可通过以下所述方法制备。将细胞表面大量表达人CD98/人LAT1或其一部分、或为提高抗原的抗原性而与适当的物质(例如牛血清白蛋白等)的缀合物、或人CD98/人LAT1的细胞根据需要与免疫刺激剂(弗氏佐剂等)等一起免疫小鼠、兔、山羊、马等非人哺乳动物，或者将整合了人CD98/人LAT1的表达载体给予非人哺乳动物进行免疫致敏。本发明的抗体如下获得：从由免疫致敏动物 得到的抗体生成细胞和没有自身抗体生成能力的骨髓瘤系细胞(骨髓瘤细胞)中制备杂交瘤，将杂交瘤克隆，选择可生成与免疫中使用的抗原显示特异性亲和性的单克隆抗体的克隆。 
以下进一步对本发明的抗体的制备方法进行详述，抗体的制备方法并不限于此，例如可以使用脾细胞以外的抗体生成细胞和骨髓瘤细胞。 
抗原可以将编码CD98的DNA整合到动物细胞用表达载体中，将该表达载体导入动物细胞，使用获得的转化细胞株本身。 
CD98在很多癌细胞表面上与LAT1形成异源二聚体，因此将编码LAT1的DNA同样整合到表达载体中，使用CD98和LAT1共表达的转化细胞株作为抗原，由此，有望获得抑制LAT1的氨基酸摄入的抗体。 
动物细胞用表达载体例如可使用pEGF-N1(Becton Dickinson Bioscience Clontech公司制备)等载体，用适当的限制酶使插入位点切断，将用同一酶切断的人CD98或人LAT1连接，由此可以制备用于导入目标基因的载体。通过将制备的表达载体例如导入到作为宿主的L929细胞(American Type Culture Collection No.CCL-1)中，可以制备高表达人CD98和人LAT1的细胞。 
将基因导入宿主的方法是公知的，例如有任意的方法(例如使用钙离子的方法、电穿孔法、原生质球法、乙酸锂法、磷酸钙法、脂转染法等)。 
这样制备的转化细胞可以作为制备CD98抗体的免疫原。还可以将表达载体本身作为免疫原。 
人CD98可根据公知的核苷酸序列或氨基酸序列，除基因重组技术之外，还可适当使用化学合成法、细胞培养方法等的技术领域中已知的方法制备。可以以这样得到的人CD98蛋白质作为抗原制备CD98抗体。人CD98的部分序列可按照在后述的技术领域中已知的方法，通过基因重组技术或化学合成法制备，还可以使用蛋白分解酶等将人 CD98适当切断来制备。 
上述得到的抗原如下进行免疫。即，将制备的抗原与用于提高抗原性的适当的物质(例如牛血清白蛋白等)、以及根据需要与免疫刺激剂(弗氏完全或不完全佐剂等)一起混合，对小鼠、兔、山羊、马等非人哺乳动物进行免疫。优选保持未重新排序的人抗体基因，使用通过免疫致敏、生成对该免疫原为特异性的人抗体的非人动物，则本发明的抗体也可以是人抗体。此时，生成人抗体的动物例如有富塚等人的文献[Tomizuka等人.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2000，97卷：722]中记载的生成人抗体的转基因小鼠。 
分泌单克隆抗体的杂交瘤的制备可按照Kohler和Milstein的方法(Nature，1975，256卷：495～497)以及与其相近的方法进行。即，将从如上所述的免疫致敏的动物中获得的脾脏、淋巴结、骨髓或扁桃体等、优选淋巴结或脾脏中所含的抗体生成细胞，和优选来自小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔或人等哺乳动物的没有自身抗体生成能力的骨髓瘤细胞通过细胞融合来制备。细胞融合例如可在聚乙二醇(例如分子量1500～6000)等高浓度的聚合物溶液中、在通常约30～40℃下，将抗体生成细胞和骨髓瘤细胞混合、进行约1～10分钟。生成单克隆抗体的杂交瘤克隆的筛选可如下进行：将杂交瘤例如在微量滴定板中培养，例如采用ELISA等酶联免疫测定法、放射免疫、荧光抗体法等免疫学方法测定在可见到生长的孔中的培养上清对免疫抗原的反应性。 
由杂交瘤制备单克隆抗体时，可以将杂交瘤进行体外培养，由培养上清中分离。还可以在小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠或兔等腹水中等进行体内培养，从腹水中分离。还可以从杂交瘤等的抗体生成细胞中克隆编码单克隆抗体的基因，整合到适当的载体中，将其导入到宿主(例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞等哺乳类细胞株、大肠杆菌、酵母细胞、昆虫细胞、植物细胞等)中，采用基因重组技术制备重组抗体(P.J.Delves.ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES.，1997，WILEY，P.Shepherd和C.Dean.，Monoclonal Antibodies.，2000， OXFORD UNIVERSITY PRESS，J.W.Goding，Monoclonal Antibodies：principles and practice.，1993，ACADEMIC PRESS)。还可以采用转基因动物制备技术，制备目标抗体基因整合到内源性基因中所得的转基因的牛、山羊、绵羊或猪，从该转基因动物的乳汁中可大量获得来自该抗体基因的单克隆抗体。将杂交瘤在体外培养时，配合培养的细胞种类的特性、实验研究的目的和培养方法等各种条件，可以使杂交瘤生长、维持和保存，使用在培养上清中用于生成单克隆抗体的已知的营养培养基或由已知的基础培养基诱导制备的所有营养培养基来实施。 
生成的单克隆抗体可通过将本领域所周知的方法例如蛋白A柱的层析、离子交换层析、疏水层析、硫酸铵盐析法、凝胶过滤、亲和层析等适当组合来制备。 
抗体的药物用途
本发明的抗体，首先，由于与来自该癌细胞的细胞膜、且与具有氨基酸转运活性的蛋白质形成复合体的CD98的特异性结合能力，因此通过与治疗用药物缀合，可以形成可用于向癌细胞送达药物或在可用于导弹疗法等的治疗目的复合体。 
对与抗体缀合的治疗用药物的例子没有特别限定，例如有碘(131碘：131I，125碘：125I)、钇(90钇：90Y)、铟(111铟：111In)、锝(99m锝：99mTc)铟等放射核素(J.W.Goding.Monoclonal Antibodies：principles and practice.，1993，ACADEMIC PRESS)，绿脓杆菌毒素(Pseudomonal toxin)、白喉毒素(diphtheria toxin)、蓖麻毒素(Ricin)等细菌毒素，以及甲氨喋呤(Methopterin)、丝裂霉素(mitomycin)、加利车霉素(calicheamicin)等化学疗法药物(D.J.King.，Applications and Engineering of Monoclonal Antibodies.，1998，T.J.International Ltd，M.L Grossbard.，Monoclonal Antibody-Based Therapy of Cancer.，1998，Marcel Dekker Inc)等，更优选诱导自由基生成的硒化合物。 
抗体与治疗用药物的结合可以是共价或非共价键(例如离子键)的任意形式。例如，利用抗体分子中的反应性基团(例如氨基、羧基、羟基等)或配位性基团，根据需要使反应性的基团结合或者变换为反应性 基团，然后使具有可在可与该反应性基团反应形成络合物的官能团(为细菌毒素、化学疗法药物时)或该配位性基团之间形成络合物的离子性基团(为放射性核素时)的治疗用药物与抗体接触，可得到本发明的复合体。或者在形成复合体时可利用生物素-亲和素系统。 
治疗用药物为蛋白质或肽时，可通过基因工程的方法，以抗体与上述蛋白质或与肽融合的蛋白质的形式生产。 
另外，由于本发明的抗体具有抗肿瘤活性，因此可以将该本身作为抗肿瘤药物使用。可进一步用作药物组合物、尤其是用作肿瘤的预防或治疗药的有效成分。 
因此，本发明的抗体或药物组合物可适用具有起因于表达人CD98/人LAT1的细胞的可能性的各种疾病或症状的治疗或预防。该疾病或症状例如有各种恶性肿瘤，肿瘤的例子有：结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、黑素瘤、脑肿瘤、淋巴瘤、膀胱癌、胰腺癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、白血病、T细胞淋巴瘤、胃癌、胰腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、食道癌、肝癌、头颈部扁平上皮细胞癌、皮肤癌、尿道癌、前列腺癌、绒毛癌、咽癌、喉癌、胸膜肿瘤、男性细胞瘤、子宫内膜增生症、子宫内膜异位症、胚胎瘤、纤维肉瘤、卡波济氏肉瘤、血管瘤、海绵状血管瘤、血管母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、神经纤维瘤、少突胶质细胞瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质细胞瘤、横纹肌瘤、胶质母细胞瘤、骨原性肉瘤、平滑肌瘤、甲状腺肉瘤或肾母细胞瘤等，适用本发明的抗体时的肿瘤不限于一种，可以是多种肿瘤并发。另外，本发明的人单克隆抗体可适用于罹患了原发性局部癌的患者的寿命延长。另外，对于表达CD98的免疫活性细胞可以选择性地使本发明的药物组合物与其作用。 
含有本发明的抗体或与治疗用药物结合的抗体的药物优选以药物组合物的形式提供。 
上述药物组合物含有治疗上有效量的治疗用药物，可以制成口 服、非口服给药用的各种形式的制剂。这里，治疗上有效量是指对于给予的症状或给予的计划是可以获得治疗效果的量。 
本发明的组合物除抗体之外，可以含有生理学上可接受的制剂上的添加物，例如稀释剂、防腐剂、溶解剂、乳化剂、佐剂、抗氧化剂、等渗剂、赋形剂和载体的一种或多种。还可以制成与其它抗体或抗生素等其它药物的混合物。 
适当的载体中可以含有生理盐水、磷酸缓冲生理盐水、磷酸缓冲生理盐水葡萄糖液、以及缓冲生理盐水，但并不限于此。也可以含有该领域中周知的氨基酸、糖类、表面活性剂等稳定剂，防止与表面吸附的防吸附剂。 
制剂的形式可以根据治疗目的、治疗计划选择包含冻干制剂(这种情况下，可以通过添加上述缓冲水溶液重构后使用)、缓释制剂、肠溶性制剂、注射剂或输液剂等的制剂。 
给药途径可适当确定，例如可以是口服途径、以及包含静脉内、肌内、皮下和腹腔内注射或配药的非肠道途径。或者也可以是使本发明的组合物与患者的患部直接接触的方法。 
给药量根据使用动物的试验、临床实验的实施来适当确定，但通常应考虑患者的状态或严重程度、年龄、体重、性别等。通常在口服给药时，成人每天约为0.01mg～1000mg，可将其一次或分多次给药。非口服给药时，可以通过皮下注射、肌肉注射或静脉注射每次给药约0.01mg～1000mg。 
本发明也包含使用本发明的抗体或药物组合物进行上述疾病的预防或治疗的方法，本发明还包含本发明的抗体在上述疾病的预防或治疗药的制备中的应用。 
根据本发明的优选方案，本发明的抗体可以以溶解于水或除此之外的药理学可接受的溶液而得到的无菌性溶液或悬浮液的安瓿剂的形式使用。还可以将无菌粉末制剂(优选将本发明的分子冷冻干燥)填充到安瓿瓶中，在使用时用药理学可接受的溶液稀释。 
实施例
以下，通过实施例进一步详细说明本发明，但本发明并不受这些实施例记载的方案的限定。 
实施例1：人CD98或人LAT1表达载体的制备
以保有人CD98(hCD98，GenBank/EMBL/DDBJ accession no.AB018010；SEQ ID NO.65)和人LAT1(hLAT1，GenBank/EMBL/DDBJaccession no.AB018009；SEQ ID NO.67)的DNA的质粒载体pcDNA3.1-hCD98和pcDNA3.1-hLAT1为模板，进行聚合酶链反应(PCR)。为了在全长人CD98cDNA的5′末端附加EcoRI序列、在其3′末端附加NocI序列和终止密码子，使用引物5’-CCG GAA TTC CCACCA TGA GCC AGG ACA CCG AGG TGG ATA TGA-3’(SEQ IDNO.59)和5’-AAG GAA AAA AGC GGC CGC TCA TCA GGC CGCGTA GGG GAA GCG GAG CAG CAG-3’(SEQ ID NO.60)，以KOD-PlusDNA聚合酶(东洋纺公司制备)和hCD98cDNA(约20ng)为模板，进行94℃15秒、55℃30秒和68℃1分30秒的30个循环的PCR反应。将经修饰的hCD98序列以EcoRI-NotI片段的形式分离，然后连接到用相同的酶切断的pTracer-EF/Bsd载体(Invitrogen公司制备)上。以所得质粒为模板，使用CD98v2U(5’-AGT CTC TTG CAA TCGGCT AAG AAG AAG AGC ATC CGT GTC ATT CTG-3’(SEQ IDNO.61))引物和CD98v2L(5’-CAG AAT GAC ACG GAT GCT CTTCTT CTT AGC CGA TTG CAA GAG ACT-3’(SEQ ID NO.62))引物，将hCD98DNA的第591和第594号(SEQ ID NO.65中的第702号和第705号)的A变为G。由所得质粒制备EcoRI-hCD98-NotI片段，与用相同的酶切断的pEF6myc-His/Dsd(Invitrogen)载体连接。将所得质粒命名为pEF6/hCD98。 
同样，为了在全长人LAT1cDNA的5′末端附加EcoRI序列、在其3′末端附加Kpnl序列，使用引物5’-CCG GAA TTC CCA CCA TGGCGG GTG CGG GCC CGA AGC GGC-3’(SEQ ID NO.63)和5’-CGG GGT ACC GTC TCC TGG GGG ACC ACC TGC ATG AGC TTC-3’(SEQ ID NO.64)，以KOD-Plus DNA聚合酶和hLAT1 cDNA(约20ng)为模板，进行94℃15秒、55℃30秒和68℃1分30秒的30个循环的PCR反应。将经修饰的hLAT1序列以EcoRI-KpnI片段的形式分离，然后连接到用相同的酶切断的pEGFP-N1(Clontech公司制备)载体上。再将所得质粒以EcoRI-NotI片段的形式分离，然后连接到用相同的酶切断的pEF1V5His/Neo(Invitrogen公司制备)载体上。将所得质粒命名为pEF1/hLAT1-EGFP。 
实施例2：hCD98/hLAT1表达细胞的制备
hCD98/hLAT1表达细胞的制备是使用Invitrogen公司制备的脂转染试剂和Plus试剂，将实施例1中制备的表达载体pEF6/hCD98和pEF1/hLAT1-EGFP(hLAT1-E)导入到Colon26(CT26)细胞和L929细胞(American Type Culture Collection No.CCL-1)中。基因导入按照手册说明书的方法进行。导入了基因的细胞使用细胞培养板(6孔板，Becton Dickinson公司制备)、在37℃、5％CO2下培养24小时后，如果为CT26细胞株，则用含有5μg/mL杀稻瘟素和500μg/mL G418的培养基，如果为L929细胞株，则用含有5μg/mL杀稻瘟素和1mg/mL G418的培养基进一步培养三天。接着，用RPE荧光标记小鼠抗人CD98抗体(Becton Dickinson公司制备，Ca.No.556076)的FACS Vantage分离hLAT1-E和CD98阳性细胞。用同样的方法制备表达hCD98的L929细胞或表达hLAT1-E的L929细胞。 
实施例3：生成人抗体的小鼠的制备
免疫中使用的小鼠对于内源性Ig重链和κ轻链的破坏两者均具有同型接合体的遗传背景，并且同时保有含有人Ig重链基因座的14号染色体片段(SC20)和人Igκ链转基因(kCo5)。该小鼠是通过具有人Ig重链基因座的系统A的小鼠和具有人Igκ链转基因的系统B的小鼠的交配来制备。系统A对于内源性Ig重链和κ轻链的破坏两者为同型接合体，是保有可进行子代传递的14号染色体片段(SC20)的小鼠系 统，例如记载于富塚的报告(Tomizuka.等人.，Proc Natl Acad Sci USA，2000，97卷：722)中。另外，系统B是对于内源性Ig重链和κ轻链的破坏两者为同型接合体，是保有人Igκ链转基因(kCo5)的小鼠系统(转基因小鼠)，例如记载于Fishwild的报告(Nat Biotechnol.，1996，14卷：845)。 
系统A的雄性小鼠和系统B的雌性小鼠、或系统A的雌性小鼠与系统B的雄性小鼠交配得到的子代小鼠用富塚的报告(Tomizuka等人.，Proc Natl Acad Sci USA，2000，97卷：722)的方法进行分析，筛选在血清中同时检测出人Ig重链和κ轻链的个体(生成人抗体的小鼠)(Ishida和Lonberg，IBC & apos；s 11th Antibody Engineering，Abstract，2000；Ishida，I.等人.，Cloning & Stem Cells 4，85～96(2002))，用于以下的免疫实验。免疫实验也使用了使上述小鼠的遗传背景改变的小鼠等(石田功(2002)实验医学20，6846851)。 
实施例4：人单克隆抗体的制备
人单克隆抗体的制备是按照单克隆抗体实验操作入门(安东民卫等人著作，讲谈社发行1991)等记载的一般方法进行。 
作为免疫原的hCD98/hLAT1，使用实施例2制备的表达hCD98/hLAT1-E的CT26细胞和确认有hCD98表达的人结肠直肠癌细胞株Colo205细胞。 
被免疫动物使用实施例3中制备的生产人免疫球蛋白的生成人抗体的小鼠。 
使用表达hCD98/hLAT1-E的CT26细胞时，将5×106个细胞与IRBI佐剂(Corixa公司制备)混合，在腹腔内初次免疫。自初次免疫后的第7、24天，腹腔内追加免疫5×106个细胞/小鼠。并且在获得下述的脾脏细胞之前3天时同样地腹腔内追加免疫5×106个细胞/小鼠。 
使用Colo205细胞时，腹腔内初次免疫5×106个细胞。自初次免疫后的第14天，腹腔内追加免疫5×106个细胞/小鼠，3天后获得以下所述的脾脏细胞。 
由免疫的小鼠中外科取得脾脏，将回收的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0(ATCC No.CRL1581)按照5∶1混合，使用聚乙二醇1500(Roche公司制备)作为融合剂，进行细胞融合，制备大量杂交瘤。杂交瘤的选择通过在含有10％胎牛血清(FCS)和次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)、胸腺嘧啶核苷(T)的含HAT的DMEM培养基(Gibco公司制备)中培养、进行。再使用含有HT的DMEM培养基，通过极限稀释法进行单一克隆。培养是在96孔微量滴定板(Becton Dickinson公司制备)中进行。生成目标人单克隆抗体的杂交瘤的选择(筛选)以及各杂交瘤所生成的人单克隆抗体的特征可通过后述的荧光活化细胞分选仪(FACS)测定来进行。 
生成人单克隆抗体的杂交瘤的筛选如下进行。即，通过下述FACS分析，获得200个以上生成具有人免疫球蛋白μ链(hIgμ)、γ链(hIgγ)和人免疫球蛋白轻链κ(hIgκ)、且与表达hCD98/hLAT1-E的CT26细胞具有特异性反应性的人单克隆抗体的杂交瘤。 
需要说明的是，本说明书的实施例中，在表示结果的表或图中，用符号对生成人单克隆抗体的杂交瘤克隆进行命名。以下的杂交瘤克隆表示单一克隆：4-35-14(C2)、4-32-9(K3)，7-95-8，10-60-7，3-69-6，5-80-1(以上克隆，免疫原是表达hCD98/hLAT1-E的CT26细胞)，1-40-1(所述克隆，免疫原是Colo205细胞)。 
实施例5：各单克隆抗体的亚类的鉴定
通过FACS分析，对实施例4中获得的各单克隆抗体的亚类进行鉴定。将2×106/mL的Colo205细胞悬浮于含有1mM EDTA、0.1％NaN3、5％FCS的PBS的SB(染色缓冲液)中。将细胞悬浮液分注在96孔圆底板中(Becton Dickinson公司制备，50μL/孔)。再加入50μL实施例4培养的杂交瘤的培养上清，进行搅拌，在冰点温度下反应30分钟，然后离心(2000rpm，4℃，2分钟)，除去上清。将沉淀物(pellet)用100μL/孔的SB清洗一次，然后将FITC荧光标记兔抗人IgμF(ab′)2抗体(Dako Cytomation公司制备)用SB稀释为50倍，或者将RPE荧 光标记山羊抗人IgγF(ab′)2抗体(SuthernBiotech公司制备)用SB稀释为200倍，或者将RPE荧光标记兔抗人IgκF(ab′)2抗体(DakoCytomation公司制备)用SB稀释为200倍，加入，在冰点温度下反应30分钟。用SB清洗一次，然后悬浮于300μL SB中，通过FACS(FACSCan，Becton Dickinson公司制备)测定表示抗体结合的荧光强度。所得抗体的一部分结果如表1所示。C2是重链为μ链、轻链为κ链，K3、3-69-6、7-95-8、10-60-7、1-40-1和5-80-1均是重链为γ链、轻链为κ链。 
[表1]各抗体的亚类 
Figure GSB00000705415000201
实施例6：编码单克隆抗体的基因的制备和重组抗体表达载体的构建
按照以下方法实施C2、K3、7-95-8、10-60-7、3-69-6和1-40-1各抗体基因的克隆和表达载体的构建。 
(1)抗体基因的cDNA克隆和表达载体的制备 
将杂交瘤在含有10％FCS的DMEM培养基(Gibco公司制备)中培养，通过离心收集细胞，然后添加ISOGEN(Nippon Gene公司制备)，按照使用说明书提取总RNA。抗体cDNA的可变区的克隆是使用SMART RACE cDNA扩增试剂盒(Clontech公司制备)，按照所附说明书进行。 
以5μg总RNA为模板，制备单链cDNA。 
(a)单链cDNA的合成 
将含有5μg/3μL总RNA、1μL 5′CDS和1μL SMART oligo的组成的反应液在70℃下温育2分钟，然后加入2μL 5×缓冲液、1μL DTT、1μL dNTP mix，然后加入1μL Superscirpt II，在42℃下温育15小时。再加入100μL Tricine缓冲液(两性离子缓冲液)，然后在72℃下温育7分钟，获得单链cDNA。 
(b)通过PCR进行重链基因、轻链基因的扩增，以及重组抗体表达载体的构建 
cDNA的扩增使用东洋纺公司制备的KOD-Plus。 
将含有15μL cDNA、5μL 10xKOD-Plus缓冲液、5μL dNTP mix、1μL KOD-Plus、3μL 25mM MgSO4、引物1和引物2组成的反应液用重蒸馏水定容为终容量50μL，供给PCR。 
对于K3、1-40-1、3-69-6、C2给出具体实验例，如下所示。 
K3
为了扩增轻链，使用UMP和hk-2(5’-GTT GAA GCT CTT TGTGAC GGG CGA GC-3’(SEQ ID NO.1))引物，进行5次94℃5秒、75℃3分钟的循环，接着进行5次94℃5秒、70℃10秒、72℃3分钟的循环，再进行25次94℃5秒、68℃10秒、72℃3分钟的循环。再以1μL该反应液的5倍稀释液为模板，使用NUMP和hk5(5’-AGG CAC ACAACA GAG GCA GTT CCA GAT TTC-3’(SEQ ID NO.2))引物，进行30次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给2％琼脂糖凝胶电泳，将扩增的PCR产物用QIA quick凝胶纯化试剂盒(Quiagen公司制备)纯化。将纯化的PCR产物与pCR4Blunt-TOPO载体(Invitrogen公司制备)连接，按照所附说明书进行亚克隆。接着以T3(5’-ATT AAC CCT CAC TAA AGG GA-3’(SEQ ID NO.3))和hk5作为引物，进行核苷酸序列的确定。基于序列信息合成DNPL15Bglp(5’-AGA GAG AGA GAT CTC TCA CCA TGG AAG CCC CAG CTCAGC TTC TCT-3’(SEQ ID NO.4))，以在pCR4Blunt-TOPO载体中亚克隆得到的轻链基因作为模板，使用DNPL15Bglp和202LR(5’-AGA GAG AGA GCG TAC GTT TAA TCT CCA GTC GTG TCC CTTGGC-3’(SEQ ID NO.5))作为引物，进行30次94℃15秒、55℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给2％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒(Quiagen公司制备)纯化约400bp的片段。将轻链扩增cDNA片段用BglII、BsiWI消化，导入到用相同的酶切断的N5KG1-Val Lark载体(IDEC Pharmaceuticals，a modified vector of N5KG1(美国专利6001358))中。将所得载体命名为N5KG1-Val K3L。 
为了扩增重链，使用UMP和IgG1p(5’-TCT TGT CCA CCT TGGTGT TGC TGG GCT TGT G-3’(SEQ ID NO.6))引物，进行5次94℃5秒、72℃3分钟的循环，接着进行5次94℃5秒、70℃10秒、72℃3分钟的循环，再进行25次94℃5秒、68℃10秒、72℃3分钟的循环。再以1μL该反应液的5倍稀释液为模板，使用NUMP和IgG2p(5’-TGCACG CCG CTG GTC AGG GCG CCT GAG TTC C-3’(SEQ ID NO.7))，进行30次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给2％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化扩增的PCR产物。将纯化的PCR产物与pCR4Blunt-TOPO载体连接，进行亚克隆。接着以T3和hh2(5’-GCT GGA GGG CAC GGT CAC CACGCT G-3’(SEQ ID NO.8))作为引物，进行核苷酸序列的确定。根据序列信息合成K3HcSalI(5’-AGA GAG AGA GGT CGA CCA CCA TGGGGT CAA CCG CCA TCC TCG CCC TCC TC-3’(SEQ ID NO.9))，以在pCR4Blunt-TOPO载体中亚克隆得到的重链基因作为模板，使用K3HcSalI和F24HNhe(5’-AGA GAG AGA GGC TAG CTG AGG AGACGG TGA CCA GGG TTC-3’(SEQ ID NO.10))，进行25次94℃15秒、55℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给2％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化约450bp的片段。将重链扩增cDNA片段用SalI、NheI消化，导入到用相同的酶切断的N5KG1-ValK3L中。确定插入部分的DNA核苷酸序列，进行PCR扩增，确认插入的序列与作为模板的基因序列没有不同。将所得载体命名为 N5KG1-Val K3IgG1。为了确认将N5KG1-Val K3IgG1基因导入到后述的FreeStyle293细胞中得到的重组体K3抗体是否与来自K3杂交瘤的抗体相同，通过研究与表达hCD98/hLAT1的细胞株的结合活性来进行。 
1-40-1
为了扩增重链，使用UMP和IgG1p引物，进行5次94℃5秒、72℃3分钟的循环，接着进行5次94℃5秒、70℃10秒、72℃3分钟的循环，再进行25次94℃5秒、68℃10秒、72℃3分钟的循环。再以1μL该反应液的5倍稀释液为模板、使用NUMP和IgG2p引物，进行30次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化扩增的PCR产物。将纯化的PCR产物与pCR4Blunt-TOPO载体连接，进行亚克隆。接着以T3和hh2为引物，进行核苷酸序列的确定。根据序列信息合成205HP5SalI(5’-AGA GAG AGA GGT CGA CCA CCATGG AGT TTG GGC TGA GCT GGG TTT-3’(SEQ ID NO.11))，以在pCR4Blunt-TOPO载体中亚克隆得到的重链基因作为模板，使用205HP5SalI和F24Hnhe引物，进行25次94℃15秒、55℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给2％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化约450bp的片段。将重链扩增cDNA片段用SalI、NheI消化，导入到用相同的酶切断的N5KG1-Val Lark载体中。将所得载体命名为N5KG1-Val 1-40-1H。 
为了扩增轻链，使用UMP和hk-2引物，进行5次94℃5秒、75℃3分钟的循环，接着进行5次94℃5秒、70℃10秒、72℃3分钟的循环，再进行25次94℃5秒、68℃10秒、72℃3分钟的循环。再以1μL该反应液的5倍稀释液为模板，使用NUMP和hk5，进行30次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给2％琼脂糖凝胶电泳，将扩增的PCR产物用QIA quick凝胶纯化试剂盒纯化。将纯化的PCR产物与pCR4Blunt-TOPO载体连接，进行亚克隆。接着以T3 和hk5作为引物，进行核苷酸序列的确定。基于序列信息合成A27RN202(5’-AGA GAG AGA GCG TAC GTT TGA TTT CCA CCTTGG TCC CTT GGC-3’(SEQ ID NO.12))，以在pCR4Blunt-TOPO载体中亚克隆得到的轻链基因作为模板，使用DNPL15Bg1p和A27RN202，进行25次94℃15秒、55℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给2％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化约400bp的片段。将轻链扩增cDNA片段用BglII、BsiWI消化，导入到用相同的酶切断的N5KG1-Val 1-40-1H载体中。确定插入部分的DNA核苷酸序列，进行PCR扩增，确认插入的序列与作为模板的基因序列没有不同。将所得载体命名为N5KG1-Val 1-40-1IgG1。为了确认将N5KG1-Val1-40-1IgG1基因导入到后述的FreeStyle293细胞中得到的重组体1-40-1抗体是否与来自1-40-1杂交瘤的抗体相同，通过研究与表达hCD98/hLAT1的细胞株的结合活性来进行。 
3-69-6
为了扩增轻链，使用UMP和hk-2引物，进行5次94℃15秒、75℃3分钟的循环，接着进行5次94℃15秒、70℃10秒、72℃3分钟的循环，再进行25次94℃15秒、68℃15秒、72℃3分钟的循环。再以2μL该反应液的5倍稀释液为模板，使用NUMP和hk5，进行30次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，将扩增的PCR产物用QIA quick凝胶纯化试剂盒纯化。将纯化的PCR产物与pCR4Blunt-TOPO载体连接，进行亚克隆。接着以M13正向(-20)引物(5’-GTA AAA CGA CGG CCA G-3’(SEQID NO.13))和M13反向引物(5’-CAG GAA ACA GCT ATG AC-3’(SEQ ID NO.14))、hk5(5’-AGG CACACA ACA GAG GCAGTTCCAGA TTT C-3’(SEQ ID NO.2))作为引物，进行核苷酸序列的确定。基于序列信息合成A27_F(5’-AGA GAG AGA GAT CTC TCACCA TGG AAA CCC CAG CGCAGC TTC TCT TC-3’(SEQ ID NO.15))和39_20_L3Bsi(5’-AGA GAG AGA GCG TAC GTT TGA TCT CCAGCT TGG TCC CCT G-3’(SEQ ID NO.16))，以在pCR4Blunt-TOPO载 体中亚克隆得到的轻链基因作为模板，使用A27_F和39_20_L3Bsi，进行25次94℃30秒、55℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化约400bp的片段。将轻链扩增cDNA片段用BglII、BsiWI消化，导入到用相同的酶切断的N5KG1-Val Lark载体中。将所得载体命名为N5KG1-Val3-69-6L。 
为了扩增重链，使用UMP和IgG1p(5’-TCT TGT CCA CCT TGGTGT TGC TGG GCT TGT G-3’(SEQ ID NO.6))引物，进行5次94℃15秒、72℃3分钟的循环，接着进行5次94℃15秒、70℃10秒、72℃3分钟的循环，再进行30次94℃15秒、68℃15秒、72℃3分钟的循环。再以2μL该反应液的5倍稀释液为模板、使用NUMP和IgG2p(IgG1.3.4)(5’-TGC ACG CCG CTG GTCAGG GCG CCT GAG TTCC-3’(SEQ ID NO.7))，进行25次94℃30秒、55℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化扩增的PCR产物。将纯化的PCR产物与pCR4Blunt-TOPO载体连接，进行亚克隆。接着以M13F、M13R和IgG2p为引物，进行核苷酸序列的确定。根据序列信息合成Z3HP5Sal(5’-AGA GAG AGA GGT CGA CCCACCATG GAC TGG AGCATCCTT TT-3’(SEQ ID NO.17))和F24HNhe(5’-AGA GAG AGA GGCTAG CTG AGG AGA CGG TGA CCA GGG TTC-3’(SEQ ID NO.10))，以在pCR4Blunt-TOPO载体中亚克隆得到的重链基因作为模板，使用Z3HP5SalF和F24HNhe，进行25次94℃30秒、55℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化约450bp的片段。将重链扩增cDNA片段用SalI、NheI消化，导入到用相同的酶切断的N5KG1-Val 3-69-6L载体中。确定插入部分的DNA核苷酸序列，进行PCR扩增，确认插入的序列与作为模板的基因序列没有不同。将所得载体命名为N5KG1-Val3-69-6IgG1。为了确认将N5KG1-Val 3-69-6IgG1基因导入到后述的 FreeStyle293细胞中得到的重组体3-69-6抗体是否与来自3-69-6杂交瘤的抗体相同，通过研究与表达hCD98/hLAT1的细胞株的结合活性来进行。 
C2IgG1
生成杂交瘤的C2的亚类是IgM，因此，使用设计成含有设想的可变区的引物，通过PCR，由来自相同种系的IgG分离C2抗体可变区(C2IgG1)。 
为了扩增轻链，使用UMP和hk-2引物，进行5次94℃5秒、75℃3分钟的循环，接着进行5次94℃5秒、70℃10秒、72℃3分钟的循环，再进行25次94℃5秒、68℃10秒、72℃3分钟的循环。再以1μL该反应液的5倍稀释液为模板，使用NUMP和hk5，进行30次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，将扩增的PCR产物用QIA quick凝胶纯化试剂盒纯化。将纯化的PCR产物与pCR4Blunt-TOPO载体连接，进行亚克隆。接着以M13F、M13R和hk5作为引物，进行核苷酸序列的确定。基于序列信息合成C2-1Lc Bgl II F(5’-AGA GAG AGA GAT CTC TCA CCA TGG AAACCC CAG CGCAGC TTC TCT TC-3’(SEQ ID NO.18))和C2-1LcBsiWI R (5’-AGA GAG AGA GCG TAC GTT TGA TAT CCA CTTTGG TCC CAG GG-3’(SEQ ID NO.19))，以在pCR4Blunt-TOPO载体中亚克隆得到的轻链基因作为模板，使用C2-1Lc Bgl II F和C2-1LcBsiWIR，进行25次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化约400bp的片段。将轻链扩增cDNA片段用BglII、BsiWI消化，导入到用相同的酶切断的N5KG1-Val Lark载体中。将所得载体命名为N5KG1-Val C2L。 
为了扩增重链，使用UMP和M655R(5’-GGC GAA GAC CCGGAT GGC TAT GTC-3’(SEQ ID NO.20))引物，进行30次94℃15秒、68℃30秒、68℃1分钟的循环。再以1μL该反应液的5倍稀释液为模板、使用NUMP和M393R(5’-AAA CCC GTG GCC TGG CAG ATG AGC-3’(SEQ ID NO.21))，进行30次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化扩增的PCR产物。将纯化的PCR产物与pCR4Blunt-TOPO载体连接，进行亚克隆。接着以M13正向(-20)引物(5’-GTA AAA CGA CGG CCA G-3’(SEQ ID NO.13))、M13反向引物(5’-CAG GAA ACA GCT ATG AC-3’(SEQ ID NO.14))和M393R作为引物，进行核苷酸序列的确定。基于序列信息合成C2hcSalIF(5’-AGAGAG AGA GGT CGA CCA CCA TGA AGCACC TGT GGT TCT TCCTCC TGC T-3’(SEQ ID NO.22))和C2hcNheI(5’-AGA GAG AGA GGCTAG CTG AGG AGA CGG TGA CCA GGG TTC CCT GG-3’(SEQ IDNO.58))，以在pCR4Blunt-TOPO载体中亚克隆得到的重链基因作为模板，使用C2hcSalIF和C2hcNheI，进行25次94℃15秒、60℃30秒、68℃30秒的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化约450bp的片段。将重链扩增cDNA片段用SalI、NheI消化，导入到用相同的酶切断的N5KG1-Val C2L载体中。确定插入部分的DNA核苷酸序列，进行PCR扩增，确认插入的序列与作为模板的基因序列没有不同。将所得载体命名为N5KG1-Val C2IgG1。 
C2IgG1NS
在上述克隆的C2IgG1基因中，重链的构架区有原有的种系中未曾见过的突变。因此，按照以下方法分离具有原有种系的序列的C2的可变区序列。 
以上述得到的载体N5KG1-Val C2IgG1为模板，使用C2hc NSF(5’-CGT CCA AGA ACC AGT TCT CCC TGA AGC TGA-3’(SEQ IDNO.23))引物和C2hc NS R(5’-TCA GCT TCA GGG AGA ACT GGTTCT TGG ACG-3’(SEQ ID NO.24))引物，将C2抗体重链的第290和第299号的G和T分别变化为A和C，制备N5KG1-Val C2IgG1NS。将N5KG1-Val C2IgG1和N5KG1-Val C2IgG1NS基因导入后述的FreeStyle293细胞中，对于由此得到的重组体C2IgG1和C2IgG1NS抗 体与来自C2杂交瘤的IgM抗体的特异性是否相同的确认可通过研究与表达hCD98/hLAT1的细胞株的结合活性来进行。C2IgG1和C2IgG1NS的结合活性大致相同。 
C2IgμG1
如果为上述C2IgG1中使用的方法，则重链与轻链的结合部位的形式可能与原有的IgM不同，因此进行了以下的序列转换。即，将由IgG的γ链和IgM的μ链的位于CH1恒定区的共通序列(GCL序列)朝向可变区一侧方向上相邻的26个氨基酸作为μ链序列，由GCL序列将恒定区一侧的全部转换成γ链(C2IgμG1)。按以下方法进行以上的序列转换。 
为了扩增C2cDNA的重链，使用UMP和M655R引物，进行30次94℃15秒、68℃30秒、68℃1分钟的循环。再以1μL该反应液的5倍稀释液为模板、使用NUMP和M393R，进行30次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化扩增的PCR产物。将纯化的PCR产物与pCR4 Blunt-TOPO载体连接，进行亚克隆。接着以M13正向(-20)引物(5’-GTA AAA CGA CGG CCA G-3’(SEQ ID NO.13))、M13反向引物(5’-CAG GAA ACA GCT ATG AC-3’(SEQ ID NO.14))和M393R作为引物，进行核苷酸序列的确定。基于序列信息合成C2hcSalIF(5’-AGA GAG AGA GGT CGA CCA CCA TGA AGCACC TGT GGTTCT TCC TCC TGC T-3’(SEQ ID NO.22))和Mu-GCL-Gamma L(5’-CAC CGG TTC GGG GAA GTA GTC CTT GAC GAG GCA GCAAAC GGC CAC GCT GCT CGT-3’(SEQ ID NO.25))，以在pCR4Blunt-TOPO载体中亚克隆得到的重链基因作为模板，使用C2hcSalIF和MU-GCL-Gamma L，进行25次94℃15秒、60℃30秒、68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR扩增产物。将该PCR扩增产物命名为C2Vμ。接着，以N5KG1-Val Lrak载体为模板，使用Mu-GCL-Gamma U (5’-ACG AGC AGC GTG GCC GTT GGC TGC CTC GTC AAG GACTACTTC CCC GAA CCG GTG-3’(SEQ IDNO.26))和hIgG 1BamHI L(5’-CGC GGA TCC TCA TCA TTT ACCCGG AGA CAG GGA GAG GCT-3’(SEQ ID NO.27))，进行25次94℃15秒、60℃30秒、68℃90秒的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR扩增产物。将该PCR扩增产物命名为Cγ1。各加入5μl C2Vμ和Cγ1的3倍稀释液，无引物，进行3次94℃15秒、55℃30秒、68℃2分钟的循环。将该反应液在99℃加热5分钟后稀释10倍，以5μl为模板，使用C2hcSalIF和hIgG1BamHI L，进行25次94℃15秒、60℃30秒、68℃2分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR扩增产物。将该PCR扩增cDNA片段用SalI、SamI消化，导入到含有用相同的酶切断的上述C2轻链基因的N5KG1-ValLark载体中。确定插入部分的DNA核苷酸序列，进行PCR扩增，确认插入的序列与作为模板的基因序列没有不同。将所得载体命名为N5KG1-Val C2IgμG1。C2IgμG1抗体的结合活性，通过研究将N5KG1-Val C2IgμG1基因导入到后述的FreeStyle293细胞中得到的重组体与表达hCD98/hLAT1的细胞株的结合活性来进行。 
含有K3、1-40-1和3-69-6的重链可变区和轻链可变区的DNA序列、以及含有重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别是以下SEQID NO.的序列。 
<K3重链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.28) 
GTCTGGAGCAGAAGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCT 
GTAAGGGTTCTGGATACAGGTTTACCGACTACTGGATCGGCTGGGTGC 
GCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCTTCTATCCT 
GGTGACTCTGATGCCAGATACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCAC 
CATCTCAGCCGACAAGTCCATCAACACCGCCTACCTGCAGTGGAGCA 
GCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTATTGTGCGAGACGGCGA 
GATATAGTGGGAGGTACTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCAC 
CGTCTCCTCA 
AGAGAGAGAGGTCGACCACCATGGGGTCAACCGCCATCCTCGCCCTC 
CTCCTGGCTGTTCTCCAAGGAGTCTGTGCCGAGGTGCAGCTGGTGCA 
<K3重链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.29) 
MGSTAILALLLAVLQGVCAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYRFT 
DYWIGWVRQMPGKGLEWMGIFYPGDSDARYSPSFQGQVTISADKSIN 
TAYLQWSSLKASDTAMYYCARRRDIVGGTDYWGQGTLVTVSS 
<K3轻链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.30) 
AGAGAGAGAGATCTCTCACCATGGAAGCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCC 
TCCTGCTACTCTGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACAC 
AGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT 
CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGACTGGTACCAA 
CAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAGC 
AGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGA 
CAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTGCAG 
TTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGATCACCTTCGGCCAAGGGA 
CACGACTGGAGATTAAA 
<K3轻链可变区>(SEQ ID NO.31) 
MEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVS 
SYLDWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP 
EDFAVYYCQQRSNWITFGQGTRLEIK 
<1-40-1重链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.32) 
AGAGAGAGAGGTCGACCACCATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTC 
CTTGTTGCTATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAG 
TCTGGGGGAGGTGTGGTACGGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCT 
GTGCAGCCTCTG GATTCACCTTTGATGATTATGGCATGACCTGGGTCC 
GCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCTACTATTAGTTGG 
AATGGTGGTGGCACAGGTTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCAC 
CATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAG 
TCTGAGAGCCGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCGGGATATTGTAT 
TATTACCGGCTGCTATGCGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCA 
CCGTCTCCTCA 
<1-40-1重链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.33) 
MEFGLSWVFLVAILKGVQCEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTF 
DDYGMTWVRQAPGKGLEWVSTISWNGGGTGYADSVKGRFTISRDNA 
KNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAGYCIITGCYADYWGQGTLVTVSS 
<1-40-1轻链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.34) 
AGAGAGAGAGATCTCTCACCATGGAAGCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCC 
TCCTGCTACTCTGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACAC 
AGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT 
CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAA 
CAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAAC 
AGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGA 
CAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAG 
TTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGTGGACGTTCGGCCAAGGGA 
CCAAGGTGGAAATCAAA 
<1-40-1轻链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.35) 
MEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVS 
SYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP 
EDFAVYYCQQRSNWWTFGQGTKVEIK 
<3-69-6重链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.36) 
GTCGACCCACCATGGACTGGACCTGGAGCATCCTTTTCTTGGTGGCA 
GCAGCAACAGGTGCCCACTCCCAGGTTCAACTGGTGCAGTCTGGAGC 
TGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGTAAGGCTT 
CTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGATGCGACAGGCCC 
CTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGT 
AATACGAACTATGTACAGAAGTTCCAGGACAGAGTCACCATGACCAGA 
GACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATC 
TGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGGGGCAGCAATT 
GGTATGGGTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGT 
CTCCTCA 
<3-69-6重链可变区>(SEQ ID NO.37) 
RRPTMDWTWSILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS 
GYTFTSYGISWMRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYVQKFQDRVTMT 
RDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDRGSNWYGWFDPWGQGTLVT 
VSS 
<3-69-6轻链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.38) 
AGATCTCTCACCATGGAAACCCCAGCGCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTA 
CTCTGGCTCCCAG ATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACG CAGTCTCCA 
GGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAG 
GGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGA 
AACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGG 
GCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAG 
ACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGT 
ATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCA 
AGCTGGAGATCAAA 
<3-69-6的轻链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.39) 
RSLTMETPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQ 
SVSSSYLAWYQQKPGQApRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTI 
SRLEPEDFAVYYCQQYGSSYTFGQGTKLEIK 
含有C2重链可变区和轻链可变区的DNA、以及含有重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如下所示。 
<C2IgG1重链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.40) 
GTCGACCACCATGAAGCACCTGTGGTTCTTCCTCCTGCTGGTGGCGG 
CTCCCAGATGGGTCCTGTCCCAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCA 
GGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTC 
TGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCA 
GCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTG 
GGAGTACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCG 
TAGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTTCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACC 
GCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAAGGGACGGGGC 
TCGCCCTATTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCT 
CA 
<C2IgG1重链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.41) 
STTMKHLWFFLLLVAAPRWVLSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGG 
SISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTS 
KSQFFLKLSSVTAADTAVYYCARQGTGLALFDYWGQGTLVTVSS 
<C2IgG1NS重链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.42) 
GTCGACCACCATGAAGCACCTGTGGTTCTTCCTCCTGCTGGTGGCGG 
CTCCCAGATGGGTCCTGTCCCAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCA 
GGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTC 
TGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCA 
GCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTG 
GGAGTACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCG 
TAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACC 
GCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAAGGGACGGGGC 
TCGCCCTATTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCT 
CA 
<C2IgG1NS重链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.43) 
STTMKHLWFFLLLVAAPRWVLSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGG 
SISSSSYYWGWIRQ PPGKGLEWIGSIYYSGSTYYN PSLKSRVTISVDTS 
KNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGTGLALFDYWGQGTLVTVSS 
<C2IgμG1重链可变区与人IgG1的结合部位的核酸序列>(SEQ IDNO.44) 
GTCGACCACCATGAAGCACCTGTGGTTCTTCCTCCTGCTGGTGGCGG 
CTCCCAGATGGGTCCTGTCCCAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCA 
GGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTC 
TGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCA 
GCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTG 
G GAGTACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCG 
TAGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTTCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACC 
GCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAAGGGACGGGGC 
TCGCCCTATTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCT 
CAGGGAGTGCATCCGCCCCAACCCTTTTCCCCCTCGTCTCCTGTGAGA 
ATTCCCCGTCGGATACGAGCAGCGTGGCCGTT 
<C2IgμG1重链可变区与人IgG1的结合部位的氨基酸序列>(SEQ ID NO.45) 
STTMKHLWFFLLLVAAPRWVLSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGG 
SISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTS 
KSQFFLKLSSVTAADTAVYYCARQGTGLALFDYWGQGTLVTVSSGSASA 
PTLFPLVSCENSPSDTSSVAV 
<C2IgG1和C2IgμG1的轻链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.46) 
AGATCTCTCACCATGGAAACCCCAGCGCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTA 
CTCTGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCA 
GGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAG 
GGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTTCTTAGCCTGGTACCAGCAGA 
AACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGG 
GCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAG 
ACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTCGCAGTGT 
ATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTATATTCACTTTCGGCCCTGG 
GACCAAAGTGGATATCAAA 
<C2IgG1和C2IgμG1的轻链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.47) 
RSLTMETPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQ 
SVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTI 
SRLEPEDFAVYYCQQYGSSPIFTFGPGTKVDIK 
上述各抗体序列内，将K3和C2IgG1的轻链可变区和重链可变区(即SEQ ID NO.28和30以及SEQ ID NO.40和46的序列的核酸)导入pCR4Blunt-TOPO载体中，将所得保藏于独立行政法人产业技术综合研究所特许生物寄托中心，其保藏号分别为FERMBP-10552(用于识别的标记：K3/pCR4)和FERMBP-10551(用于识别的标记：C2IgG1/pCR4)。 
上述各抗体可变区除重链和轻链部分之外，还可以含有结合和分离中使用的限制酶识别序列，分离各抗体的轻链可变区时可使用限制酶BglII和BsiWI进行分离，分离重链可变区时使用限制酶SalI和NheI进行分离。以下给出含有插入到pCR4Blunt-TOPO载体中的各抗体可变区和限制酶识别位点等的基因序列。 
<K3/pCR4>(SEQ ID NO.48) 
AGAGAGAGAGATCTCTCACCATGGAAGCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCC 
TCCTGCTACTCTGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACAC 
AGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT 
CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGACTGGTACCAA 
CAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAGC 
AGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGA 
CAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAG 
TTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGATCACCTTCGGCCAAGGGA 
CACGACTGGAGATTAAACGTACGCTCTCTCTCTAGAGAGAGAGGTCG 
ACCACCATGGGGTCAACCGCCATCCTCGCCCTCCTCCTGGCTGTTCTC 
CAAGGAGTCTGTGCCGAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAAG 
TGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGA 
TACAGGTTTACCGACTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGG 
GAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCTTCTATCCTGGTGACTCTGATG 
CCAGATACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGAC 
AAGTCCATCAACACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTC 
GGACACCGCCATGTATTATTGTGCGAGACGGCGAGATATAGTGGGAG 
GTACTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCT 
AG CCTCTCTCTCT 
<C2IgG1/pCR4>(SEQ ID NO.49) 
AGAGAGAGAGATCTCTCACCATGGAAACCCCAGCGCAGCTTCTCTTCC 
TCCTGCTACTCTGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACGC 
AGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTC 
TCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTTCTTAGCCTGGTA 
CCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCAT 
CCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCT 
GGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTC 
GCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTATATTCACTTTCG 
GCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTACGCTCTCTCTCTAGAGAG 
AGAGGTCGACCACCATGAAGCACCTGTGGTTCTTCCTCCTGCTGGTG 
GCGGCTCCCAGATGGGTCCTGTCCCAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGG 
GCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACT 
GTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATC 
CGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTA 
TAGTGGGAGTACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCAT 
ATCCGTAGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTTCCTGAAGCTGAGCTCTGT 
GACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAAGGGACG 
GGGCTCGCCCTATTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGT 
CTCCTCAGCTAGCCTCTCTCTCT 
实施例7：重组型抗体的制备
将实施例6中构建的重组型抗体表达载体导入宿主细胞，制备重组型抗体表达细胞。用于表达的宿主细胞使用CHO细胞的dhfr缺损株(ATTC CRL-9096)。载体向宿主细胞的导入通过电穿孔实施。将约2μg抗体表达载体用限制酶实行线状化，使用Bio-Rad electrophoreter、在350V、500μF的条件下，向4×106个CHO细胞中导入基因，接种于96孔培养板中。添加与表达载体的选择标记对应的试剂继续培养。确认有集落后，按照实施例4所示的方法筛选抗体表达株。由筛选的细胞进行抗体纯化，该纯化按照实施例8进行。按照所附说明书，将重组型抗体表达载体导入FreeStyle293细胞(Invitrogen公司制备)中，使重组型抗体表达。 
实施例8：抗体的纯化
含有人IgG抗体的杂交瘤培养上清的制备按以下方法进行。将生成抗体的杂交瘤在含有牛胰岛素(5μg/mL，Gibco公司制备)、人转铁蛋白(5μg/mL，Gibco公司制备)、乙醇胺(0.01mM，Sigma公司制备)、亚硒酸钠(2.5×10-5mM，Sigma公司制备)的eRDF培养基(极东制药公司制备)中驯化。在组织培养瓶中培养，在杂交瘤的活细胞率达到90％时回收培养上清，回收的上清供给10μm和0.2μm的滤器(Gelman Science公司制造)，除去杂交瘤等的杂质。将含有抗体的培养上清用蛋白A(Amersham公司制造)、使用PBS作为吸附缓冲液、20mM柠檬酸钠缓冲液(pH 3.0)作为洗脱缓冲液进行亲和纯化。洗脱组分是添加50mM磷酸钠缓冲液(pH 7.0)，调节至pH 6.0附近。制备的抗体溶液使用透析膜(截止分子量10,000，Spectrum Laboratories公司制造)置换成PBS，用孔径0.22μm的膜滤器MILLEX-GV(Millpore公司制造)过滤灭菌，得到纯化抗体。纯化抗体的浓度是测定280nm的吸光度，以1mg/mL作为1.45优化密度(Optimal density)进行计算。 
实施例9：各单克隆抗体的特异性
按照与实施例5所标记的FACS分析同样的方法进行实施例4中获得的各单克隆抗体的反应性研究。实施例2中制备的细胞株用染色缓冲液(SB)制备成2×106/mL，将该细胞悬浮液分注在96孔圆底板(Becton Dickinson公司制造)中(50μL/孔)。将实施例4至实施例8中制备的各重组体抗体用SB制备成5μg/mL，将50μL加入到各孔中进行搅拌。阴性对照是使用用KM小鼠制备的抗二硝基苯基(DNP)人IgG1抗体。在冰点温度下反应30分钟，然后离心(2000rpm，4℃，2分钟)，除去上清。将沉淀物用100μL/孔的SB洗涤一次，然后添加50μL/孔稀释为200倍的RPE荧光标记兔抗人IgκF(ab′)2抗体(Dako Cytomation公司制备)，在冰点温度下反应30分钟。用SB洗涤一次，然后悬浮于300μL的SB中，用FACS测定表示抗体结合的荧光强度。 
结果，任何抗体均对表达hCD98/hLAT1-E的CT26细胞(图1)或 表达hCD98/hLAT1-E的L929细胞(图2)具有强的结合活性，而未观察到对CT26细胞和L929细胞的结合活性。并且，任何抗体均未与表达hLAT1-E的L929细胞结合，而与表达hCD98的L929细胞结合，由此表明，C2、K3、7-95-8、10-60-7、3-69-6和1-40-1抗体的结合部位位于hCD98(图2)。 
实施例10：与各单克隆抗体的抗原结合相关的hCD98蛋白的区域
对各单克隆抗体结合中重要的hCD98的分子的区域进行了研究。 
首先，通过对与衣霉素处理的K562细胞株的反应性进行了研究。将2×105个K562细胞接种于6孔板中(4mL/孔)，在5μg/mL衣霉素(Sigma公司制备)的存在下、非存在下、在37℃下、在5％CO2下培养72小时。该条件下，通过蛋白质印迹确认了约为80Kda的hCD98的分子量为获得了N-link糖链时的理论值约60kDa。培养后，回收细胞，将2×106/mL的细胞株悬浮于染色缓冲液(SB)中。将细胞悬浮液分注到96孔圆底板中(50μL/孔)(Becton Dickinson公司制造)。加入50μL/孔用SB制备为5μg/mL的各重组体抗体，在冰点温度下反应30分钟。阴性对照使用抗DNP人IgG1抗体。用SB洗涤一次，然后将RPE荧光标记山羊抗人IgγF(ab′)2抗体(SuthernBiotech公司制备)，用SB稀释为200倍加入，在冰点温度下温育30分钟。用SB洗涤一次，然后悬浮于300μL的FACS缓冲液中，用FACS测定表示抗体结合的荧光强度。 
其结果，与衣霉素未处理的K562细胞比较，任何抗体均未观察到处置细胞的结合活性降低(图3)。由以上结果表明，各抗体的结合部位均不是N-link糖链，强烈显示这些单克隆抗体为hCD98的抗体。并在实施例11中研究了各单克隆抗体的结合中重要的hCD98的区域。 
实施例11：各抗体结合反应中重要的人CD98蛋白质的区域
各抗体对于小鼠CD98(mCD98)不显示交叉反应性，因此利用将mCD98和hCD98人工结合而成的嵌合体CD98，对各抗体结合反应中重要的人CD98蛋白质的区域进行了研究。 
嵌合体CD98如下制备。由mCD98和hCD98的序列信息合成以下序列： 
EcoRI hCD98U(5′-CCG GAA TTC cCa cCa TGA GCC AGG ACACCG AGGTGGATA TGA-3′(SEQ ID NO：50))，NotI hCD98(5′-AAG GAA AAA AGC GGC CGC TCA TCA GGC CGC GTA GGG GAAGCG GAG CAG CAG-3′(SEQ ID NO：51))，EcoRI mCD98(5′-CCG GAA TTCCCA CCA TGA GCC AGG ACA CCG AAG TGG ACATGA AA-3′(SEQ ID NO：52))，NotI mCD98L(5′-AAG GAA AAAAGC GGC CGC TCA TCA GGC CAC AAA GGG GAA CTG TAA CAGCA-3′(SEQ ID NO：53))，cCD98D2-F(5′-TCA TTC TGG ACC TTACTC CCA ACT ACC-3′(SEQ ID NO：54))，cCD98D2-R(5′-GGTAGT TGG GAG TAA GGT CCA GAA TGA-3′(SEQ ID NO：55))，cCD98D3-F(5′-TGC TCT TCA CCC TGC CAG GGA CCC CTG TTTT-3′(SEQ ID NO：56))，and cCD98D3-R(5′-AAA ACA GGG GTCCCT GGC AGG GTG AAG AGC A-3′(SEQ ID NO：57)) 
在进行PCR时作为模板使用的是保有编码mCD98(GenBanl/EMBL/DDBJ accession no.U25708)和人CD98的cDNA的质粒载体pcDNA3.1-mCD98和实施例1中制备的pEF6/hCD98。 
cDNA的扩增使用东洋纺公司制备的KOD-Plus。将含有15μLcDNA、5μL 10xKOD-Plus缓冲液、5μL dNTP mix、1μL KOD-Plus、3μL 25mM MgSO4、F引物和R引物的组成的反应液用重蒸馏水定容为终容量50μL，供给PCR。 
使用cDNA1和F引物1和R引物1、或者cDNA2和F引物2和R引物2，进行25次94℃15秒、60℃30秒、68℃90秒(94℃15秒、55℃30秒、68℃50秒)的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR扩增产物。将该PCR扩增产物分别命名为P1、P2。接着各加入5μL P1和P2的2～3倍稀释液，在无引物下进行3次94℃15秒、55℃30秒、68℃2分钟的循环。将该反应液在99℃加热5分钟后稀释5～10倍，以5μL作为模板，使用F引物1和R引物2，进行25次94℃15秒、60(55℃)30秒、68℃2 分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR产物。 
嵌合体CD98-1、嵌合体CD98-2、嵌合体CD98-3分别按照(cDNA1：F引物1：R引物1；cDNA2和F引物2：R引物2)以下组合(pEF6/hCD98：EcoRIhCD98U：cCD98D2-R；pcDNA3.1-mCD98：cCD98D2-F：NotImCD98L)、(pEF6/hCD98：EcoRIhCD98U：cCD98D3-R；pcDNA3.1-mCD98：cCD98D3-F：NotImCD98L)；(pcDNA3.1-mCD98：EcoRImCD98U：cCD98D2-R；pEF6/hCD98：cCD98D2-F：NotIhCD98L)制备。将各PCR扩增cDNA片段用EcoRI、NotI消化，与用相同的酶切断的pEF6myc-His/Bsd载体(Invitrogen公司制备)连接。确定插入部分的DNA核苷酸序列，进行PCR扩增，确认插入的序列与作为模板的基因序列没有不同。按照与实施例2同样的方法，将各载体与在实施例1中制备的pEF1/hLAT1-EGFP载体一起在L929细胞中表达，按照与实施例10相同的FACS分析，研究各FITC标记抗体的结合。其结果(图4)，K3、7-95-8、10-60-7和3-69-6抗体与市售的FITC标记抗人CD98抗体(克隆UM7F8，Becton Dickinson公司制备的Ca.No.556076)同样，只与表达嵌合CD98-3的L929细胞结合，显示由hCD98的第372号氨基酸残基至第530号氨基酸残基的区域对于这些抗体的结合是重要的。另一方面，C2抗体和1-40-1中和抗体只与嵌合体CD98-2强烈结合，表明hCD98的第104号氨基酸残基至第371号氨基酸残基对于这些抗体的结合是重要的。 
实施例12：各单克隆抗体的抑制氨基酸摄取的活性
为了研究各单克隆抗体是否影响人膀胱癌细胞株T24细胞摄取氨基酸，使用亮氨酸作为底物，按照金井等人的方法(Kim等人.，Biochim.Biophys.Acta 1565：112～122，2002)，进行如下所述的底物的摄取实验。将1×105的T24细胞株接种于24孔培养板中，在含有10％FCS的MEM培养基(SIGMA ALDRICH公司制备)、在37℃下、5％CO2下培养2天。培养后除去培养基，添加0.25mL/孔含有200μg/mL抗体 的HBSS(-)(不含Na+)，再在37℃、5％CO2下培养10分钟。C2、K3、7-95-8、10-60-7、3-69-6、1-40-1和抗DNP人抗体是使用重组体抗体，5-80-1使用来自杂交瘤的抗体。然后除去上清，加入0.5mL/孔含有1μM的14C-Leu(MORAVEK BIOCHEMICALS制备)的HBSS(-)(不含Na+)，培养1分钟。用冰冷却HBSS(-)(不含Na+)溶液洗涤3次，然后以0.5mL/孔添加0.1N氢氧化钠，回收细胞。回收的溶液中14C-Leu的量通过液体闪烁计数器型号LSC-5100(ALOKA公司制造)测定。各细胞的14C-Leu的摄取量是通过BCA法测定回收的溶液中的蛋白质浓度，以蛋白质量进行标准化。其结果(图5)，与对照抗体(DNP人抗体)相比，1-40-1、K3、C2IgG1、10-60-7和3-69-6显著抑制亮氨酸的摄取。以下的实验使用显著抑制亮氨酸的摄取的1-40-1、K3、C2IgG1、10-60-7和3-69-6来实施。 
实施例13：各单克隆抗体的抗hCD98/hLAT1抗体的荧光标记
各抗体的荧光标记按以下方法进行。按照所附说明书，将荧光物质异硫氰酸荧光素(FITC，Sigma公司制备)与实施例4至实施例8中制备的各重组体抗体结合。将溶解于二甲基甲酰胺的FITC以抗体分子的20～40倍的量添加到用200mM的碳酸钠缓冲液(pH 8.3～8.5)制成的1～2mg/mL的抗体中，边搅拌边在室温下反应2～3小时。将混合液供给用PBS平衡的凝胶过滤柱(NAP5，Amersham Pharmacia Biotech)，除去与抗体未结合的FITC。在该条件下，约3个FITC与1分子抗体结合。荧光标记的抗体与均确认了hCD98表达的人结肠直肠癌细胞株DLD-1细胞株结合。 
实施例14：各单克隆抗体与来自人末梢血的T细胞、B细胞、单核细胞和正常人主动脉内皮细胞(HAEC)的反应性
已知CD98在单核细胞、活化T细胞、培养的正常内皮细胞中表达。由此研究各抗体与来自人末梢血的T细胞、B细胞、单核细胞和人主动脉内皮细胞(HAEC)的反应性。来自人末梢血的细胞按以下方法制备。将10mL含有1mL肝素(Novo公司制备)的人末梢血用PBS稀 释为2倍，铺在20mL的Ficoll-Paque PLUS液上(Amersham Pharmacia Biotech公司制备)，以1500rpm离心30分钟后回收。用PBS洗涤2次，制备单核细胞。一部分单核细胞用含有10μg/ml植物血凝素(Sigma公司制备，PHA)、10％FCS、0.1mM非必需氨基酸溶液(Gibco制备)、5.5×10-6M 2-巯基乙醇(Gibco公司制备)、青霉素/链霉素/谷氨酰胺(Gibco公司制备)的RPMI培养基(Gibco公司制备)，在5％CO2、37℃下培养72小时。通过PHA刺激，在来自人末梢血的T细胞、B细胞中观察到作为活化标志的CD25的表达(使用FITC标记抗人CD25抗体(Becton Dickinson公司制备的Ca.555431)的FACS分析)。制备的各细胞在染色缓冲液(SB)中以2×106/mL悬浮，将细胞悬浮液分注到96孔圆底板(Becton Dickinson公司制备)中(50μL/孔)。将实施例13中制备的各FITC标记抗体以5μg/mL的浓度与抗人CD3抗体(Becton Dickinson公司制备的Ca.No.555340)或抗人CD14抗体(Becton Dickinson公司制备的Ca.No.347497)或抗人CD19抗体(Immunotech公司制备的Ca.No.IM1285)一起在冰点温度下反应30分钟。使用市售的FITC标记抗人CD98抗体(克隆UM7F8)作为阳性对照，使用FITC标记抗DNP人IgG1抗体作为阴性对照。用SB洗涤一次，然后悬浮于300μL的FACS缓冲液中，用FACS研究各抗体的反应性。 
结果，C2IgG1以外的抗体显示与UM7F8同样的结合方式，与单核细胞、活化T细胞、活化B细胞显著结合(图6和图7)。而C2IgG1对于各种细胞均未观察到显著结合(图6和图7)。 
HAEC(Cambrex公司制备)按照所附说明书培养，使用继代数为四以内的细胞。C2IgG1、K3、7-95-8、10-60-7、3-69-6和1-40-1抗体与培养的HAEC的反应性按照与上述同样的方法进行研究。以3.2ng/mL-50μg/mL的浓度进行各抗体的反应，结果K3、7-95-8、10-60-7、3-69-6和1-40-1与HAEC结合，但C2IgG1不与HAEC结合(图8)。 
另一方面，在相同条件下与人结肠直肠癌细胞株DLD-1反应，则任何抗体均在某种条件下(本实施例中为3μg/mL以下的抗体浓度)显 示比UM7F8高的DLD-1癌细胞特异性(图8)。特别是C2IgG1强烈显示为癌症特异性高的抗体。以下实验使用C2IgG1、K3、3-69-6来实施。 
实施例15：各单克隆抗体与癌细胞株的反应性
按照与实施例9相同方法的FACS分析进行C2IgG1、K3以及3-69-6与结肠直肠癌细胞株(DLD-1)、肺癌细胞株(H226)、前列腺癌细胞株(DU145)、黑素瘤细胞株(G361、SKMEL28、CRL1579)、非霍奇金淋巴瘤株(Ramos)、膀胱癌细胞株(T24)、乳腺癌细胞株(MCF、MDA-MB-231)、胰腺癌细胞株(HS766T)、多发性骨髓瘤细胞株(IM9)、成红细胞白血病细胞株(K562，参照图3)的各抗体反应性的研究。将细胞株用染色缓冲液(SB)制备成2×106/mL，将该细胞悬浮液分注到96孔圆底板(Becton Dickinson公司制备)中(50μL/孔)。加入50μL/孔制备成5μg/mL的抗体或FITC标记抗体，在冰点温度下反应30分钟。阴性对照是使用抗DNP人IgG1抗体或FITC标记抗DNP人IgG1抗体。用SB洗涤一次，然后加入50μL用SB将RPE荧光标记山羊抗人IgγF(ab′)2抗体(SuthernBiotech公司制备)稀释为200倍所得，在冰点温度下孵育30分钟。采用FITC标记抗体时不实施该操作。用SB洗涤一次，然后悬浮于300μL FACS缓冲液中，用FACS测定各细胞的平均荧光强度。 
结果可知，任何抗体均是与各种癌细胞株具有结合活性的抗体(图9、图10)。任何抗体均与Colo205、SW480、SW620、LOVO、LS180和HT29的人结肠直肠癌细胞株强烈结合。 
实施例16：小鼠癌症模型中K3、C2IgG1和3-69-6的抗肿瘤效果
按照以下所述方法，使用小鼠癌症模型对实施例4至实施例8中制备的重组体单克隆抗体K3、C2IgG1和3-69-6的抗肿瘤效果进行研究。 
将5周龄的Balb/c裸小鼠(购自日本Clea(株)公司)根据各个体的体重以5只为一组进行分组。在100μL PBS中混合5×106的结肠直肠 癌细胞Colo205和5μg抗体，将所得移植到腹部皮下。移植后第2天、第4天、第6天，将100μg/100μL的溶解于溶剂(含1％小鼠血清的PBS)的抗体给予小鼠腹腔内，测定肿瘤大小。使用溶剂作为抗体的阴性对照。 
以上实验结果如图11所示。图中的各折线表示各小鼠的数据。对照组中，在第5天，在所有的个体中均观察到癌细胞株的移入物生长(engraftment)，第12天，肿瘤的平均体积(以长径×短径×短径×0.5计算)±SE为165.55±31.71mm3。而C2IgG1组只有一个个体显示与对照组同样的肿瘤生长(第12天肿瘤块为169.44mm3)，其它个体通过给予C2IgG1抗体而观察到强的抗肿瘤活性，第28天，对照组的肿瘤块平均体积±SE为1977.64±442.04，而C2IgG1抗体给药组为775.31±622.47，C2IgG1抗体显著抑制来自Colo205癌细胞的肿瘤的生长(p＜0.01)。K3组和3-69-6组中，所有个体即使经过30天以上也未见癌的移入物生长。另外，各组的平均体重只有对照组中降低(移植第30天时比K3组约低20％)。 
由这些结果可以观察到，K3、C2IgG1和3-69-6是具有癌细胞生长抑制活性的抗体。 
实施例17：C2IgG1单克隆抗体对于小鼠同系担癌模型的抗肿瘤效果
按照以下所述方法，使用小鼠同系癌症模型，对实施例4至实施例8中制备的重组体单克隆抗体C2IgG1的抗肿瘤效果进行研究。 
将移植了5×106个细胞的实施例2中制备的表达hCD98/hLAT1-E的CT26细胞的Balb/c(雌性)按照肿瘤的体积分成两组，每组5只。肿瘤体积生长至约90mm3(以长径×短径×短径×0.5计算)时(第0天)和第3天、第5天，小鼠腹腔内给予溶解于溶剂(含1％小鼠血清的PBS)的100μg/100μL的C2IgG1。对照是给予溶剂。其结果，观察到C2IgG1具有显著的强烈抑制移入的肿瘤生长的活性(图12)。 
实施例18：C2IgG1和K3抗体与猴细胞的交叉反应性
通过FACS分析，研究C2IgG1和K3与猴细胞(COS-7细胞)的交 叉反应性。将2×106/mL细胞悬浮于染色缓冲液(SB)中。将细胞悬浮液分注到96孔圆底板(Becton Dickinson公司制造)中(50μL/孔)。加入50μL用SB制备成5μg/mL的抗体，在冰点温度下反应30分钟。阴性对照是使用DNP人IgG1抗体。用SB洗涤一次，然后加入50μL/孔用SB稀释为200倍的RPE荧光标记山羊抗人IgγF(ab′)2抗体(SuphernBiotech公司制备)，在冰点温度下反应30分钟。用SB洗涤一次，然后悬浮于300μL的FACS缓冲液中，通过FACS测定表示抗体结合的荧光强度。其结果，任何抗体均与COS-7细胞株结合，C2IgG1、K3是与猴细胞具有交叉反应性的抗体(图13)。 
实施例19：C2IgG1对小鼠担癌模型的效果
按照以下所述方法，使用小鼠担癌模型对C2IgG1的抗肿瘤活性进行研究。 
将伯基特淋巴瘤细胞株Ramos(购自ATCC)以3×106/小鼠个体移植到6周龄的Balb/c-SCID小鼠(购自日本Clea(株)公司)的背部皮下。移植13天后，测定移入的肿瘤大小，将肿瘤大小为30～140mm3的担癌小鼠分为一组，每组6只。在担癌小鼠的腹腔内分别以3次/周给药100mg/小鼠个体C2IgG1(溶解于200mL的PBS中)。阳性对照是使用利妥昔单抗(全药工业株式会社)，阴性对照使用PBS。每周测定三次肿瘤体积和体重。测定肿瘤块的长径、短径、高度，以(长径)×(短径)×(高度)÷2的值作为肿瘤体积。 
结果如图14所示。通过给予C2IgG1，自肿瘤移植后第16天，可见显著的抑制肿瘤生长的效果。 
实施例20：C2IgG1NS氨基酸修饰体
C2IgG1和C2IgG1NS在制备重组抗体时其聚集物含量均高。因此，在SEQ ID NO.47所示的C2IgG1NS的轻链可变区序列中，以相当于翻译起始密码子ATG的第5号M(甲硫氨酸)作为1位氨基酸，将由其计数的第117号的I(异亮氨酸)置换为其它的氨基酸，进行修饰体的制备。 
C2IgG1NS/I117N载体的制备
为了制备将轻链117位异亮氨酸置换为天冬酰胺的C2IgG1NS/I117N，以实施例6中制备的N5KG1-Val C2IgG1NS载体作为模板，使用GeneEditorTM体外位点定向诱变系统(Promega公司的No.Q9280)，通过位点特异性突变导入法制备编码氨基酸置换体的各种突变DNA。 
突变导入用的寡核苷酸(5′末端已进行磷酸化)是使用C2NS Lc117I/HYND-p：(5’-TCAGTATGGT  AGCTCACCTN  ATTTCACTTTCGGCCCTGGG ACC-3’(N＝A·T·G·C)(SEQ ID NO.69))。将作为目标的突变导入用寡核苷酸和上述试剂盒附属的选择寡核苷酸与模板DNA退火，合成突变导入链，然后在GeneEditorTM Antibiotic Selection Mix的存在下，利用只有突变体生长来选择突变体。更具体地说，在碱性条件下(0.2M NaOH、0.2mM EDTA(终浓度))、在室温下将dsDNA模板温育5分钟，然后加入十分之一容量的2M乙酸铵(pH 4.6)，进行中和，然后通过乙醇沉淀来回收。进行了碱性改性处理的模板DNA中加入突变导入用的寡核苷酸和新的用于获得抗生素抗性的选择寡核苷酸(Bottom Select Oligo，5’-末端磷酸化的5’-CCGCGAGACC CACCCTTGGA GGCTCCAGAT TTATC-3’(SEQID NO.85))、以及试剂盒所附的退火缓冲液，然后在75℃下保温5分钟，缓慢降至37℃，由此进行退火。接着，为了进行突变链的合成和连接，加入试剂盒所附的合成10×缓冲液、T4DNA聚合酶和T4DNA连接酶，在37℃下进行90分钟的反应。在GeneEditorTM Antibiotic Selection Mix的存在下，转化感受态BMH71-18mutS，由所培养的转化体大肠杆菌中制备质粒DNA，再通过电穿孔法转化ElectroMAX.DH10B细胞(Invitrogen公司的No.18290-015)后，将该DNA接种于含有GeneEditorTM Antibiotic Selection Mix的LB板上。培养在板上生成的转化体，纯化质粒DNA，分析DNA核苷酸序列。DNA核苷酸序列的结果显示，获得了导入有目标氨基酸突变的C2IgG1NS突变体的 表达载体。将得到的表达一个氨基酸置换突变体蛋白的质粒DNA命名为N5KG1-Val C2IgG1NS/I117N载体。 
C2IgG1NS/I117C载体的制备
为了制备将轻链117位异亮氨酸置换为半胱氨酸的C2IgG1NS/I117C，以实施例6中制备的N5KG1-Val C2IgG1NS载体作为模板，使用GeneEditorTM体外位点定向诱变系统(Promega公司的No.Q9280)，通过位点特异性突变导入法制备编码氨基酸置换体的各种突变DNA。 
突变导入用的寡核苷酸(5′末端已进行磷酸化)是使用C2NS Lc117I/GRC-p：(5’-TCAGTATGGT  AGCTCACCTB  GTTTCACTTTCGGCCCTGGG ACC-3’(B＝C·G·T)(SEQ ID NO.70))。将作为目标的突变导入用寡核苷酸和上述试剂盒附属的选择寡核苷酸与模板DNA退火，合成突变导入链，然后在GeneEditorTM Antibiotic Selection Mix的存在下，利用只有突变体生长来选择突变体。更具体地说，在碱性条件下(0.2M NaOH、0.2mM EDTA(终浓度))、在室温下将dsDNA模板温育5分钟，然后加入十分之一容量的2M乙酸铵(pH 4.6)，进行中和，然后通过乙醇沉淀来回收。进行了碱性改性处理的模板DNA中加入突变导入用的寡核苷酸和新的用于获得抗生素抗性的选择寡核苷酸(Bottom Select Oligo，5’-末端磷酸化的5’-CCGCGAGACCCACCCTTGGA GGCTCCAGAT TTATC-3’(SEQ ID NO.85))、以及试剂盒所附的退火缓冲液，然后在75℃下保温5分钟，缓慢降至37℃，由此进行退火。接着，为了进行突变链的合成和连接，加入试剂盒所附的合成10×缓冲液、T4DNA聚合酶和T4DNA连接酶，在37℃下进行90分钟的反应。在GeneEditorTM Antibiotic Selection Mix的存在下，转化感受态BMH71-18mutS，由所培养的转化体大肠杆菌中制备质粒DNA，再通过电穿孔法转化ElectroMAX.DH10B细胞(Invitrogen公司的No.18290-015)后，将该DNA接种于含有GeneEditorTMAntibiotic Selection Mix的LB板上。培养在板上生成的转化体，纯化 质粒DNA，分析DNA核苷酸序列。DNA核苷酸序列的结果显示，获得了导入有目标氨基酸突变的C2IgG1NS突变体的表达载体。将得到的表达一个氨基酸置换突变体蛋白的质粒DNA命名为N5KG1-ValC2IgG1NS/I117C载体。 
C2IgG1NS/117IL载体的制备
以实施例6中制备的N5KG1-Val C2IgG1NS载体作为模板，按照以下方法制备将轻链117位异亮氨酸置换为亮氨酸的C2IgG1NS/I117L。 
DNA的扩增是使用东洋纺公司的KOD-Plus。将含有1μL cDNA、5μL 10xKOD-Plus缓冲液、5μL dNTP mix、1μL KOD-Plus、2μL 25mM MgSO4、F引物和R引物组成的反应液用重蒸馏水定容为终容量50μL，供给PCR。 
合成C2NS Lc 117IL R(5’-GGTCCCAGGG CCGAAAGTGAATAGAGGTGA GCTACCATAC TGCTG-3’(SEQ ID NO.71))，使用C2NS Lc 117IL R和C2-1Lc Bgl II F(5’-AGA GAG AGA GAT CTCTCA CCA TGG AAA CCC CAG CGCAGC TTC TCT TC-3’(SEQ IDNO.18))，以N5KG1-Val C2IgG1NS载体为模板，进行25次94℃15秒、60℃30秒和68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR扩增产物。将该PCR扩增产物命名为C2NSI117L-F。接着，使用C2NS Lc 117IL F(5’-GCAGTATGGT AGCTCACCTC TATTCACTTT CGGCCCTGGGACC-3’(SEQ ID NO.72))和C2NS EcoRI R(5’-CCGGAATTCAACACTCTCCC  CTGTTGAAGC  TCTTTGTGAC  GG-3’(SEQ  IDNO.73))，以N5KG1-Val C2IgG1NS载体为模板，进行25次94℃15秒、60℃℃30秒和68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化该反应液。将该PCR扩增产物命名为C2NSI117L-R。接着，各加入5μl C2NSI117L-F和C2NSI117L-R的2倍稀释液，无引物，进行3次94℃15秒、55℃30秒、68℃60秒的循环。将该反应液在99℃加热5分钟后稀释5倍， 以5μl为模板，使用C2-1 Lc BglII F引物和C2NS EcoRI R引物，进行25次94℃15秒、55℃30秒、68℃60秒的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR扩增产物。将该PCR扩增cDNA片段用BglII、EcoRI消化，导入到含有用相同的酶切断的上述C2重链基因的N5KG1-Val Lark载体中。确定插入部分的DNA核苷酸序列，进行PCR扩增，确认插入的序列与作为模板的基因序列没有不同。将所得表达1个氨基酸置换突变体蛋白的质粒DNA命名为N5KG1-Val C2IgG1NS/I117L载体。 
C2IgG1NS/117IM载体的制备
以实施例6中制备的N5KG1-Val C2IgG1NS载体作为模板，按照以下方法制备将轻链117位异亮氨酸置换为甲硫氨酸的C2IgG1NS/I117M。 
DNA的扩增是使用东洋纺公司的KOD-Plus。将含有1μL cDNA、5μL 10xKOD-Plus缓冲液、5μL dNTP mix、1μL KOD-Plus、2μL 25mM MgSO4、F引物和R引物组成的反应液用重蒸馏水定容为终容量50μL，供给PCR。 
合成C2NS Lc117IM R(5’-GGTCCCAGGG CCGAAAGTGAACATAGGTGA GCTACCATAC TGCTG-3’(SEQ ID NO.74))，使用C2NS Lc117IM R和C2-1Lc Bgl II F(5’-AGA GAG AGA GAT CTCTCA CCA TGG AAA CCC CAG CGCAGC TTC TCT TC-3’(SEQ IDNO.18))，以N5KG1-Val C2IgG1NS载体为模板，进行25次94℃15秒、60℃30秒和68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR扩增产物。将该PCR扩增产物命名为C2NSI117M-F。接着，使用C2NS Lc117IM F(5’-GCAGTATGGT AGCTCACCTA TGTTCACTTT CGGCCCTGGGACC-3’(SEQ ID NO.75))和C2NS EcoRI R(5’-CCGGAATTCAACACTCTCCC CTGTTGAAGC TCTTTGTGAC GG-3’(SEQ IDNO.76))，以N5KG1-Val C2IgG1NS载体为模板，进行25次94℃15秒、60℃30秒和68℃1分钟的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝 胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR扩增产物。将该PCR扩增产物命名为C2NSI117M-R。接着，各加入5μl C2NSI117M-F和C2NSI117M-R的2倍稀释液，无引物，进行3次94℃15秒、55℃30秒、68℃60秒的循环。将该反应液在99℃加热5分钟后稀释5倍，以5μl为模板，使用C2-1Lc Bgl II F引物和C2NS EcoRI R引物，进行25次94℃15秒、55℃30秒、68℃60秒的循环。将该反应液供给0.8％琼脂糖凝胶电泳，通过QIAquick凝胶纯化试剂盒纯化PCR扩增产物。将该PCR扩增cDNA片段用BglII、EcoRI消化，导入到含有用相同的酶切断的上述C2重链基因的N5KG1-Val Lark载体中。确定插入部分的DNA核苷酸序列，进行PCR扩增，确认插入的序列与作为模板的基因序列没有不同。将所得表达1个氨基酸置换突变体蛋白的质粒DNA命名为N5KG1-Val C2IgG1NS/I117M载体。 
C2IgG1NS氨基酸修饰体的制备
按照实施例7所示的方法，按照所附说明书，将C2IgG1NS/I117L载体、C2IgG1NS/I117M载体、C2IgG1NS/I117N载体和C2IgG1NS/I117C载体导入FreeStyle293细胞(Invitrogen公司制备)中，使重组型抗体表达。抗体的纯化是将实施例8所示的方法部分改良来进行。回收第6天的培养上清，用Steriflip-GP(MILLIPORE，SCGP00525)进行过滤，由此排除细胞等杂质。使用蛋白A(Amersham公司制造)，使用PBS作为吸附缓冲液、20mM柠檬酸钠缓冲液(pH 3.4)作为洗脱缓冲液，对含有抗体的培养上清进行亲和纯化。洗脱组分是添加200mM磷酸钠缓冲液(pH 7.0)，调节成pH 5.5附近。制备的抗体溶液使用vivascin6(截止分子量10KMV，VIVA SCIENCE，VS0601)进行浓缩(3000rpm)，再添加PBS，通过离心获得置换为PBS的纯化抗体。纯化抗体的浓度是测定280nm的吸光度，以1mg/mL为1.45优化密度进行计算。 
C2IgG1NS氨基酸修饰体的聚集物含有率的测定
使用10μg(0.1mg/mL)所得氨基酸修饰抗体，测定各纯化抗体的 聚集物含有率。 
抗体溶液的聚集物含有率是使用高效液相色谱装置(岛津制造)和TSK-G3000SW柱(Toso公司制造)，使用20mM磷酸钠、500mM NaClpH7.0作为溶剂进行分析。将洗脱位置与凝胶过滤HPLC用分子量标志(Oriental酵母公司)(Cat No.40403701)比较，鉴定抗体蛋白的单体和聚集物的峰。由各峰面积计算聚集物的含有率。 
结果如图15所示。由图15可知，通过进行上述氨基酸的修饰，聚集物含有率减少。 
C2IgG1NS氨基酸修饰体的聚集物含量的测定
按照实施例14和15的方法，通过FACS分析C2IgG1NS氨基酸修饰体与肿瘤细胞株、人CD98/人LAT1强制表达株以及HAEC的反应性。 
结果如图16A和图16B所示。上述氨基酸修饰抗体、特别是C2IgG1NS/I117L与强制表达人CD98和LAT1的L929细胞结合，与未经处理的L929不结合(图16A)。这些氨基酸修饰抗体不与HAEC结合，对于Colo205、Ramos、和DLD-1等各种癌细胞显示结合性(图16B)。 
这些结果显示，图2A和图8所示的C2IgG1的结合特性同样，由此可以说，上述氨基酸修饰抗体、特别是C2IgG1NS/I117L的聚集物含有率低，对癌细胞具有与C2IgG1同样的结合特异性，且是有望获得与C2IgG1同样的抗肿瘤活性的抗体。 
<C2IgG1NS氨基酸修饰体的重链可变区氨基酸序列(与C2IgG1重链可变区氨基酸序列相同)>(SEQ ID NO.43) 
STTMKHLWFFLLLVAAPRWVLSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSY 
YWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKSQFFLKLSSVTAAD 
TAVYYCARQGTGLALFDYWGQGTLVTVSS 
<C2IgG1NS氨基酸修饰体的重链可变区核酸序列(与C2IgG1NS重链可变区核酸序列相同)>(SEQ ID NO.42) 
GTCGACCACCATGAAGCACCTGTGGTTCTTCCTCCTGCTGGTGGCGGCTCC 
CAGATGGGTCCTGTCCCAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGT 
GAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCAT 
CAGCAGTAGTAGTTAGTAGTGGGGGTGGATGGGGGAGCCGGGAGGGAAGGG 
GCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGAGTACCTACTACAACCC 
GTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTT 
CTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTG 
TGCGAGACAAGGGACGGGGCTCGCCCTATTTGACTACTGGGGCCAGGGAAC 
CCTGGTCACCGTCTCCTCA 
<C2IgG1NS/117IL的轻链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.77) 
RSLTMETPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSF 
LAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAWYC 
QQYGSSPLFTFGPGTKVDIK 
<C2IgG1NS/117IL的轻链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.78) 
AGATCTCTCACCATGGAAACCCCAGCGCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTACTC 
TGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACC 
CTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAG 
AGTGTTAGCAGCAGCTTCTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCT 
CCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGAC 
AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGA 
CTGGAGCCTGAAGATTTCGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCA 
CCTCTATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 
<C2IgG1NS/117IM的轻链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.79) 
RSLTMETPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSF 
LAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC 
QQYGSSPMFTFGPGTKVDIK 
<C2IgG1NS/117IM的轻链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.80) 
AGATCTCTCACCATGGAAACCCCAGCGCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTACTC 
TGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACC 
CTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGGCAGTCAG 
AGTGTTAGCAGCAGCTTCTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCT 
CCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGAC 
AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGA 
CTGGAGCCTGAAGATTTCGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCA 
CCTATGTTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 
<C2IgG1NS/117IN的轻链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.81) 
RSLTMETPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSF 
LAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC 
QQYGSSPNFTFGPGTKVDIK 
<C2IgG1NS/117IN的轻链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.82) 
AGATCTCTCACCATGGAAACCCCAGCGCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTACTC 
TGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACC 
CTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAG 
AGTGTTAGCAGCAGCTTCTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCT 
CCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGAC 
AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGA 
CTGGAGCCTGAAGATTTCGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCA 
CCTAATTTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 
<C2IgG1NS/117IC的轻链可变区氨基酸序列>(SEQ ID NO.83) 
RSLTMETPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSF 
LAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC 
QQYGSSPCFTFGPGTKVDIK 
<C2IgG1NS/117IC的轻链可变区核酸序列>(SEQ ID NO.84) 
AGATCTCTCACCATGGAAACCCCAGCGCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTACTC 
TGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACC 
CTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAG 
AGTGTTAGCAGCAGCTTCTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCT 
CCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGAC 
AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGA 
CTGGAGCCTGAAGATTTCGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCA 
CCTTGTTTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 
序列表
<110>麒麟医药株式会社
<120>新型抗CD98抗体
<130>165882
<150>JP 2006-105013
<151>2006-04-06
<160>85
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>1
gttgaagctc tttgtgacgg gcgagc    26
<210>2
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>2
aggcacacaa cagaggcagt tccagatttc    30
<210>3
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>3
attaaccctc actaaaggga    20
<210>4
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>4
agagagagag atctctcacc atggaagccc cagctcagct tctct 45
<210>5
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>5
agagagagag cgtacgttta atctccagtc gtgtcccttg gc 42
<210>6
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>6
tcttgtccac cttggtgttg ctgggcttgt g    31
<210>7
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>7
tgcacgccgc tggtcagggc gcctgagttc c    31
<210>8
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>8
gctggagggc acggtcacca cgctg    25
<210>9
<211>50
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>9
agagagagag gtcgaccacc atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc    50
<210>10
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>10
agagagagag gctagctgag gagacggtga ccagggttc    39
<210>11
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>11
agagagagag gtcgaccacc atggagtttg ggctgagctg ggttt    45
<210>12
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>12
agagagagag cgtacgtttg atttccacct tggtcccttg gc    42
<210>13
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>13
gtaaaacgac ggccag    16
<210>14
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>14
caggaaacag ctatgac    17
<210>15
<211>47
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>15
agagagagag atctctcacc atggaaaccc cagcgcagct tctcttc    47
<210>16
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>16
agagagagag cgtacgtttg atctccagct tggtcccctg 40
<210>17
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>17
agagagagag gtcgacccac catggactgg agcatccttt t 41
<210>18
<211>47
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>18
agagagagag atctctcacc atggaaaccc cagcgcagct tctcttc 47
<210>19
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>19
agagagagag cgtacgtttg atatccactt tggtcccagg g    41
<210>20
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>20
ggcgaagacc cggatggcta tgtc    24
<210>21
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>21
aaacccgtgg cctggcagat gagc    24
<210>22
<211>49
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>22
agagagagag gtcgaccacc atgaagcacc tgtggttctt cctcctgct    49
<210>23
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>23
cgtccaagaa ccagttctcc ctgaagctga    30
<210>24
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>24
tcagcttcag ggagaactgg ttcttggacg    30
<210>25
<211>54
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>25
caccggttcg gggaagtagt ccttgacgag gcagcaaacg gccacgctgc tcgt    54
<210>26
<211>54
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>26
acgagcagcg tggccgttgg ctgcctcgtc aaggactact tccccgaacc ggtg    54
<210>27
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>27
cgcggatcct catcatttac ccggagacag ggagaggct    39
<210>28
<211>434
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体K3的H链可变区
<400>28
agagagagag gtcgaccacc atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc    60
tccaaggagt ctgtgccgag gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaagtg aaaaagcccg    120
gggagtctct gaagatctcc tgtaagggtt ctggatacag gtttaccgac tactggatcg    180
gctgggtgcg ccagatgccc gggaaaggcc tggagtggat ggggatcttc tatcctggtg    240
actctgatgc cagatacagc ccgtccttcc aaggccaggt caccatctca gccgacaagt    300
ccatcaacac cgcctacctg cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt    360
attgtgcgag acggcgagat atagtgggag gtactgacta ctggggccag ggaaccctgg    420
tcaccgtctc ctca                                                      434
<210>29
<211>138
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体K3的H链可变区
<400>29
Met Gly Ser Thr Ala Ile Leu Ala Leu Leu Leu Ala Val Leu Gln Gly
1               5                   10                  15
Val Cys Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
            20                  25                  30
Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe
        35                  40                  45
Thr Asp Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Met Gly Ile Phe Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Ala Arg Tyr Ser
65                  70                  75                  80
Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn
                85                  90                  95
Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met
            100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Asp Ile Val Gly Gly Thr Asp Tyr Trp
        115                 120                 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
    130                 135
<210>30
<211>398
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体K3的L链可变区
<400>30
agagagagag atctctcacc atggaagccc cagctcagct tctcttcctc ctgctactct    60
ggctcccaga taccaccgga gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt    120
ctccagggga aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag    180
actggtacca acagaaacct ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccagca    240
gggccactgg catcccagcc aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca    300
ccatcagcag cctagagcct gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact    360
ggatcacctt cggccaaggg acacgactgg agattaaa                            398
<210>31
<211>126
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体K3的L链可变区
<400>31
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1               5                   10                  15
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
            20                  25                  30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
        35                  40                  45
Val Ser Ser Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
    50                  55                  60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
65                  70                  75                  80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
                85                  90                  95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser
            100                 105                 110
Asn Trp Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
        115                 120                 125
<210>32
<211>437
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体1-40-1的H链可变区
<400>32
agagagagag gtcgaccacc atggagtttg ggctgagctg ggttttcctt gttgctattt    60
taaaaggtgt ccagtgtgag gtgcagctgg tggagtctgg gggaggtgtg gtacggcctg    120
gggggtccct gagactctcc tgtgcagcct ctggattcac ctttgatgat tatggcatga    180
cctgggtccg ccaagctcca gggaaggggc tggagtgggt ctctactatt agttggaatg    240
gtggtggcac aggttatgca gactctgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg    300
ccaagaactc cctgtatctg caaatgaaca gtctgagagc cgaggacacg gccttgtatt    360
actgtgcggg atattgtatt attaccggct gctatgcgga ctactggggc cagggaaccc    420
tggtcaccgt ctcctca                                                   437
<210>33
<211>139
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体1-40-1的H链可变区
<400>33
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg
            20                  25                  30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
Asp Asp Tyr Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser Trp Asn Gly Gly Gly Thr Gly Tyr Ala
65                  70                  75                  80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
                85                  90                  95
Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu
            100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Cys Ile Ile Thr Gly Cys Tyr Ala Asp Tyr
        115                 120                 125
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
    130                 135
<210>34
<211>398
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体1-40-1的L链可变区
<400>34
agagagagag atctctcacc atggaagccc cagctcagct tctcttcctc ctgctactct    60
ggctcccaga taccaccgga gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt    120
ctccagggga aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag    180
cctggtacca acagaaacct ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca    240
gggccactgg catcccagcc aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca    300
ccatcagcag cctagagcct gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact    360
ggtggacgtt cggccaaggg accaaggtgg aaatcaaa                            398
<210>35
<211>126
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体1-40-l的L链可变区
<400>35
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1               5                   10                  15
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
            20                  25                  30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
        35                  40                  45
Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
    50                  55                  60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
65                  70                  75                  80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
               85                  90                  95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser
            100                 105                 110
Asn Trp Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
        115                 120                 125
<210>36
<211>431
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体3-69-6的H链可变区
<400>36
gtcgacccac catggactgg acctggagca tccttttctt ggtggcagca gcaacaggtg  60
cccactccca ggttcaactg gtgcagtctg gagctgaggt gaagaagcct ggggcctcag  120
tgaaggtctc ctgtaaggct tctggttaca cctttaccag ctatggtatc agctggatgc  180
gacaggcccc tggacaaggg cttgagtgga tgggatggat cagcgcttac aatggtaata  240
cgaactatgt acagaagttc caggacagag tcaccatgac cagagacaca tccacgagca  300
cagcctacat ggagctgagg agcctgagat ctgacgacac ggccgtgtat tactgtgcga  360
gagatcgggg cagcaattgg tatgggtggt tcgacccctg gggccaggga accctggtca  420
ccgtctcctc a                                                       431
<210>37
<211>144
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体3-69-6的H链可变区
<400>37
Arg Arg Pro Thr Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala
1               5                   10                  15
Ala Ala Thr Gly Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala
            20                  25                  30
Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
        35                  40                  45
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Ile Ser Trp Met Arg Gln Ala Pro
    50                  55                  60
Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn
65                  70                  75                  80
Thr Asn Tyr Val Gln Lys Phe Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp
                85                  90                  95
Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp
            100                 105                 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly Ser Asn Trp Tyr
        115                 120                 125
Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
    130                 135                 140
<210>38
<211>393
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体3-69-6的L链可变区
<400>38
agatctctca ccatggaaac cccagcgcag cttctcttcc tcctgctact ctggctccca    60
gataccaccg gagaaattgt gttgacgcag tctccaggca ccctgtcttt gtctccaggg    120
gaaagagcca ccctctcctg cagggccagt cagagtgtta gcagcagcta cttagcctgg    180
taccagcaga aacctggcca ggctcccagg ctcctcatct atggtgcatc cagcagggcc    240
actggcatcc cagacaggtt cagtggcagt gggtctggga cagacttcac tctcaccatc    300
agcagactgg agcctgaaga ttttgcagtg tattactgtc agcagtatgg tagctcgtac    360
acttttggcc aggggaccaa gctggagatc aaa                                 393
<210>39
<211>131
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体3-69-6的L链可变区
<400>39
Arg Ser Leu Thr Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Trp Leu Pro Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
            20                  25                  30
Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
        35                  40                  45
Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
    50                  55                  60
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala
65                  70                  75                  80
Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                85                  90                  95
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
            100                 105                 110
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
        115                 120                 125
Glu Ile Lys
    130
<210>40
<211>427
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1的H链可变区
<400>40
gtcgaccacc atgaagcacc tgtggttctt cctcctgctg gtggcggctc ccagatgggt    60
cctgtcccag ctgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct    120
gtccctcacc tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt agtagttact actggggctg    180
gatccgccag cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatt atagtgggag    240
tacctactac aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tccgtagaca cgtccaagag    300
ccagttcttc ctgaagctga gctctgtgac cgccgcagac acggctgtgt attactgtgc    360
gagacaaggg acggggctcg ccctatttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt 420
ctcctca                                                           427
<210>41
<211>142
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1的H链可变区
<400>41
Ser Thr Thr Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala
1               5                   10                  15
Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
            20                  25                  30
Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly
        35                  40                  45
Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro
    50                  55                  60
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser
65                  70                  75                  80
Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp
                85                  90                  95
Thr Ser Lys Ser Gln Phe Phe Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala
            100                 105                 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Thr Gly Leu Ala Leu
        115                 120                 125
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
    130                 135                 140
<210>42
<211>427
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1NS的H链可变区
<400>42
gtcgaccacc atgaagcacc tgtggttctt cctcctgctg gtggcggctc ccagatgggt  60
cctgtcccag ctgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct  120
gtccctcacc tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt agtagttact actggggctg  180
gatccgccag cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatt atagtgggag  240
tacctactac aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tccgtagaca cgtccaagaa  300
ccagttctcc ctgaagctga gctctgtgac cgccgcagac acggctgtgt attactgtgc  360
gagacaaggg acggggctcg ccctatttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt  420
ctcctca                                                            427
<210>43
<211>142
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1NS的H链可变区
<400>43
Ser Thr Thr Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala
1               5                   10                  15
Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
            20                  25                  30
Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly
        35                  40                  45
Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro
    50                  55                  60
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser
65                  70                  75                  80
Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp
                85                  90                  95
Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala
            100                 105                 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Thr Gly Leu Ala Leu
        115                 120                 125
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
    130                 135                 140
<210>44
<211>505
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgμG1自H链可变区到IgG1结合位点的部分序列
<400>44
gtcgaccacc atgaagcacc tgtggttctt cctcctgctg gtggcggctc ccagatgggt  60
cctgtcccag ctgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct  120
gtccctcacc tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt agtagttact actggggctg  180
gatccgccag cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatt atagtgggag  240
tacctactac aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tccgtagaca cgtccaagag  300
ccagttcttc ctgaagctga gctctgtgac cgccgcagac acggctgtgt attactgtgc  360
gagacaaggg acggggctcg ccctatttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt  420
ctcctcaggg agtgcatccg ccccaaccct tttccccctc gtctcctgtg agaattcccc  480
gtcggatacg agcagcgtgg ccgtt                                        505
<210>45
<211>168
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgμG1自H链可变区到IgG1结合位点的部分序列
<400>45
Ser Thr Thr Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala
1               5                   10                  15
Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
            20                  25                  30
Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly
        35                  40                  45
Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro
    50                  55                  60
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser
65                  70                  75                  80
Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp
                85                  90                  95
Thr Ser Lys Ser Gln Phe Phe Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala
            100                 105                 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Thr Gly Leu Ala Leu
        115                 120                 125
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser
    130                 135                 140
Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro
145                 150                 155                 160
Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val
                165
<210>46
<211>399
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1或C2IgμG1的L链可变区
<400>46
agatctctca ccatggaaac cccagcgcag cttctcttcc tcctgctact ctggctccca  60
gataccaccg gagaaattgt gttgacgcag tctccaggca ccctgtcttt gtctccaggg  120
gaaagagcca ccctctcctg cagggccagt cagagtgtta gcagcagctt cttagcctgg  180
taccagcaga aacctggcca ggctcccagg ctcctcatct atggtgcatc cagcagggcc  240
actggcatcc cagacaggtt cagtggcagt gggtctggga cagacttcac tctcaccatc    300
agcagactgg agcctgaaga tttcgcagtg tattactgtc agcagtatgg tagctcacct    360
atattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa                           399
<210>47
<211>133
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1或C2IgμG1的L链可变区
<400>47
Arg Ser Leu Thr Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Trp Leu Pro Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
            20                  25                  30
Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
        35                  40                  45
Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
    50                  55                  60
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala
65                  70                  75                  80
Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                85                  90                  95
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
            100                 105                 110
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Ile Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr
        115                 120                 125
Lys Val Asp Ile Lys
    130
<210>48
<211>864
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>在K3/pCR4中含有可变区和限制位点的插入序列
<400>48
agagagagag atctctcacc atggaagccc cagctcagct tctcttcctc ctgctactct    60
ggctcccaga taccaccgga gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt    120
ctccagggga aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag    180
actggtacca acagaaacct ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccagca    240
gggccactgg catcccagcc aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca    300
ccatcagcag cctagagcct gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact    360
ggatcacctt cggccaaggg acacgactgg agattaaacg tacgctctct ctctagagag    420
agaggtcgac caccatgggg tcaaccgcca tcctcgccct cctcctggct gttctccaag    480
gagtctgtgc cgaggtgcag ctggtgcagt ctggagcaga agtgaaaaag cccggggagt    540
ctctgaagat ctcctgtaag ggttctggat acaggtttac cgactactgg atcggctggg    600
tgcgccagat gcccgggaaa ggcctggagt ggatggggat cttctatcct ggtgactctg    660
atgccagata cagcccgtcc ttccaaggcc aggtcaccat ctcagccgac aagtccatca    720
acaccgccta cctgcagtgg agcagcctga aggcctcgga caccgccatg tattattgtg    780
cgagacggcg agatatagtg ggaggtactg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg    840
tctcctcagc tagcctctct ctct                                           864
<210>49
<211>876
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>在C2IgG1/pCR4中含有可变区和限制位点的插入序列
<400>49
agagagagag atctctcacc atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct    60
ggctcccaga taccaccgga gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt    120
ctccagggga aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagcttct    180
tagcctggta ccagcagaaa cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca    240
gcagggccac tggcatccca gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc    300
tcaccatcag cagactggag cctgaagatt tcgcagtgta ttactgtcag cagtatggta    360
gctcacctat attcactttc ggccctggga ccaaagtgga tatcaaacgt acgctctctc    420
tctagagaga gaggtcgacc accatgaagc acctgtggtt cttcctcctg ctggtggcgg    480
ctcccagatg ggtcctgtcc cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc    540
cttcggagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt    600
actactgggg ctggatccgc cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct    660
attatagtgg gagtacctac tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag    720
acacgtccaa gagccagttc ttcctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg    780
tgtattactg tgcgagacaa gggacggggc tcgccctatt tgactactgg ggccagggaa    840
ccctggtcac cgtctcctca gctagcctct ctctct                              876
<210>50
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>50
ccggaattcc caccatgagc caggacaccg aggtggatat ga 42
<210>51
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>51
aaggaaaaaa gcggccgctc atcaggccgc gtaggggaag cggagcagca g    51
<210>52
<211>44
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>52
ccggaattcc caccatgagc caggacaccg aagtggacat gaaa 44
<210>53
<211>50
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>53
aaggaaaaaa gcggccgctc atcaggccac aaaggggaac tgtaacagca    50
<210>54
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>54
tcattctgga ccttactccc aactacc    27
<210>55
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>55
ggtagttggg agtaaggtcc agaatga    27
<210>56
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>56
tgctcttcac cctgccaggg acccctgttt t    31
<210>57
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>57
aaaacagggg tccctggcag ggtgaagagc a    31
<210>58
<211>44
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>58
agagagagag gctagctgag gagacggtga ccagggttcc ctgg 44
<210>59
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>59
ccggaattcc caccatgagc caggacaccg aggtggatat ga    42
<210>60
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>60
aaggaaaaaa gcggccgctc atcaggccgc gtaggggaag cggagcagca g    51
<210>61
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>61
agtctcttgc aatcggctaa gaagaagagc atccgtgtca ttctg 45
<210>62
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>62
cagaatgaca cggatgctct tcttcttagc cgattgcaag agact 45
<210>63
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>63
ccggaattcc caccatggcg ggtgcgggcc cgaagcggc    39
<210>64
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>64
cggggtaccg tctcctgggg gaccacctgc atgagcttc    39
<210>65
<211>1879
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<220>
<221>CDS
<222>(112)..(1698)
<400>65
ctgcgcggag gcacagaggc cggggagagc gttctgggtc cgagggtcca ggtaggggtt    60
gagccaccat ctgaccgcaa gctgcgtcgt gtcgccggtt ctgcaggcac c atg agc    117
                                                         Met Ser
                                                         1
cag gac acc gag gtg gat atg aag gag gtg gag ctg aat gag tta gag    165
Gln Asp Thr Glu Val Asp Met Lys Glu Val Glu Leu Asn Glu Leu Glu
        5                   10                  15
ccc gag aag cag ccg atg aac gcg gcg tct ggg gcg gcc atg tcc ctg    213
Pro Glu Lys Gln Pro Met Asn Ala Ala Ser Gly Ala Ala Met Ser Leu
    20                  25                  30
gcg gga gcc gag aag aat ggt ctg gtg aag atc aag gtg gcg gaa gac    261
Ala Gly Ala Glu Lys Asn Gly Leu Val Lys Ile Lys Val Ala Glu Asp
35                  40                  45                  50
gag gcg gag gcg gca gcc gcg gct aag ttc acg ggc ctg tcc aag gag    309
Glu Ala Glu Ala Ala Ala Ala Ala Lys Phe Thr Gly Leu Ser Lys Glu
                55                  60                  65
gag ctg ctg aag gtg gca ggc agc ccc ggc tgg gta cgc acc cgc tgg    357
Glu Leu Leu Lys Val Ala Gly Ser Pro Gly Trp Val Arg Thr Arg Trp
            70                  75                  80
gca ctg ctg ctg ctc ttc tgg ctc ggc tgg ctc ggc atg ctt gct ggt    405
Ala Leu Leu Leu Leu Phe Trp Leu Gly Trp Leu Gly Met Leu Ala Gly
        85                  90                  95
gcc gtg gtc ata atc gtg cga gcg ccg cgt tgt cgc gag cta ccg gcg    453
Ala Val Val Ile Ile Val Arg Ala Pro Arg Cys Arg Glu Leu Pro Ala
    100                 105                 110
cag aag tgg tgg cac acg ggc gcc ctc tac cgc atc ggc gac ctt cag    501
Gln Lys Trp Trp His Thr Gly Ala Leu Tyr Arg Ile Gly Asp Leu Gln
115                 120                 125                 130
gcc ttc cag ggc cac ggc gcg ggc aac ctg gcg ggt ctg aag ggg cgt    549
Ala Phe Gln Gly His Gly Ala Gly Asn Leu Ala Gly Leu Lys Gly Arg
                135                 140                 145
ctc gat tac ctg agc tct ctg aag gtg aag ggc ctt gtg ctg ggt cca    597
Leu Asp Tyr Leu Ser Ser Leu Lys Val Lys Gly Leu Val Leu Gly Pro
            150                 155                 160
att cac aag aac cag aag gat gat gtc gct cag act gac ttg ctg cag    645
Ile His Lys Asn Gln Lys Asp Asp Val Ala Gln Thr Asp Leu Leu Gln
        165                 170                 175
atc gac ccc aat ttt ggc tcc aag gaa gat ttt gac agt ctc ttg caa    693
Ile Asp Pro Asn Phe Gly Ser Lys Glu Asp Phe Asp Ser Leu Leu Gln
    180                 185                 190
tcg gct aaa aaa aag agc atc cgt gtc att ctg gac ctt act ccc aac    741
Ser Ala Lys Lys Lys Ser Ile Arg Val Ile Leu Asp Leu Thr Pro Asn
195                 200                 205                 210
tac cgg ggt gag aac tcg tgg ttc tcc act cag gtt gac act gtg gcc    789
Tyr Arg Gly Glu Asn Ser Trp Phe Ser Thr Gln Val Asp Thr Val Ala
                215                 220                 225
acc aag gtg aag gat gct ctg gag ttt tgg ctg caa gct ggc gtg gat    837
Thr Lys Val Lys Asp Ala Leu Glu Phe Trp Leu Gln Ala Gly Val Asp
            230                 235                 240
ggg ttc cag gtt cgg gac ata gag aat ctg aag gat gca tcc tca ttc    885
Gly Phe Gln Val Arg Asp Ile Glu Asn Leu Lys Asp Ala Ser Ser Phe
        245                 250                 255
ttg gct gag tgg caa aat atc acc aag ggc ttc agt gaa gac agg ctc    933
Leu Ala Glu Trp Gln Asn Ile Thr Lys Gly Phe Ser Glu Asp Arg Leu
    260                 265                 270
ttg att gcg ggg act aac tcc tcc gac ctt cag cag atc ctg agc cta    981
Leu Ile Ala Gly Thr Asn Ser Ser Asp Leu Gln Gln Ile Leu Ser Leu
275                 280                 285                 290
ctc gaa tcc aac aaa gac ttg ctg ttg act agc tca tac ctg tct gat    1029
Leu Glu Ser Asn Lys Asp Leu Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu Ser Asp
                295                 300                 305
tct ggt tct act ggg gag cat aca aaa tcc cta gtc aca cag tat ttg    1077
Ser Gly Ser Thr Gly Glu His Thr Lys Ser Leu Val Thr Gln Tyr Leu
            310                 315                 320
aat gcc act ggc aat cgc tgg tgc agc tgg agt ttg tct cag gca agg    1125
Asn Ala Thr Gly Asn Arg Trp Cys Ser Trp Ser Leu Ser Gln Ala Arg
        325                 330                 335
ctc ctg act tcc ttc ttg ccg gct caa ctt ctc cga ctc tac cag ctg    1173
Leu Leu Thr Ser Phe Leu Pro Ala Gln Leu Leu Arg Leu Tyr Gln Leu
    340                 345                 350
atg ctc ttc acc ctg cca ggg acc cct gtt ttc agc tac ggg gat gag    1221
Met Leu Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu
355                 360                 365                 370
att ggc ctg gat gca gct gcc ctt cct gga cag cct atg gag gct cca    1269
Ile Gly Leu Asp Ala Ala Ala Leu Pro Gly Gln Pro Met Glu Ala Pro
                375                 380                 385
gtc atg ctg tgg gat gag tcc agc ttc cct gac atc cca ggg gct gta    1317
Val Met Leu Trp Asp Glu Ser Ser Phe Pro Asp Ile Pro Gly Ala Val
            390                 395                 400
agt gcc aac atg act gtg aag ggc cag agt gaa gac cct ggc tcc ctc    1365
Ser Ala Asn Met Thr Val Lys Gly Gln Ser Glu Asp Pro Gly Ser Leu
        405                 410                 415
ctt tcc ttg ttc cgg cgg ctg agt gac cag cgg agt aag gag cgc tcc    1413
Leu Ser Leu Phe Arg Arg Leu Ser Asp Gln Arg Ser Lys Glu Arg Ser
    420                 425                 430
cta ctg cat ggg gac ttc cac gcg ttc tcc gct ggg cct gga ctc ttc    1461
Leu Leu His Gly Asp Phe His Ala Phe Ser Ala Gly Pro Gly Leu Phe
435                 440                 445                 450
tcc tat atc cgc cac tgg gac cag aat gag cgt ttt ctg gta gtg ctt    1509
Ser Tyr Ile Arg His Trp Asp Gln Asn Glu Arg Phe Leu Val Val Leu
                455                 460                 465
aac ttt ggg gat gtg ggc ctc tcg gct gga ctg cag gcc tcc gac ctg    1557
Asn Phe Gly Asp Val Gly Leu Ser Ala Gly Leu Gln Ala Ser Asp Leu
            470                 475                 480
cct gcc agc gcc agc ctg cca gcc aag gct gac ctc ctg ctc agc acc    1605
Pro Ala Ser Ala Ser Leu Pro Ala Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ser Thr
        485                 490                 495
cag cca ggc cgt gag gag ggc tcc cct ctt gag ctg gaa cgc ctg aaa    1653
Gln Pro Gly Arg Glu Glu Gly Ser Pro Leu Glu Leu Glu Arg Leu Lys
    500                 505                 510
ctg gag cct cac gaa ggg ctg ctg ctc cgc ttc ccc tac gcg gcc         1698
Leu Glu Pro His Glu Gly Leu Leu Leu Arg Phe Pro Tyr Ala Ala
515                 520                 525
tgacttcagc ctgacatgga cccactaccc ttctcctttc cttcccaggc cctttggctt    1758
ctgatttttc tcttttttaa aaacaaacaa acaaactgtt gcagattatg agtgaacccc    1818
caaatagggt gttttctgcc ttcaaataaa agtcacccct gcatggtgaa gtcttccctc    1878
t                                                                    1879
<210>66
<211>529
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>66
Met Ser Gln Asp Thr Glu Val Asp Met Lys Glu Val Glu Leu Asn Glu
1               5                   10                  15
Leu Glu Pro Glu Lys Gln Pro Met Asn Ala Ala Ser Gly Ala Ala Met
            20                  25                  30
Ser Leu Ala Gly Ala Glu Lys Asn Gly Leu Val Lys Ile Lys Val Ala
        35                  40                  45
Glu Asp Glu Ala Glu Ala Ala Ala Ala Ala Lys Phe Thr Gly Leu Ser
    50                  55                  60
Lys Glu Glu Leu Leu Lys Val Ala Gly Ser Pro Gly Trp Val Arg Thr
65                  70                  75                  80
Arg Trp Ala Leu Leu Leu Leu Phe Trp Leu Gly Trp Leu Gly Met Leu
                85                  90                  95
Ala Gly Ala Val Val Ile Ile Val Arg Ala Pro Arg Cys Arg Glu Leu
            100                 105                 110
Pro Ala Gln Lys Trp Trp His Thr Gly Ala Leu Tyr Arg Ile Gly Asp
        115                 120                 125
Leu Gln Ala Phe Gln Gly His Gly Ala Gly Asn Leu Ala Gly Leu Lys
    130                 135                 140
Gly Arg Leu Asp Tyr Leu Ser Ser Leu Lys Val Lys Gly Leu Val Leu
145                 150                 155                 160
Gly Pro Ile His Lys Asn Gln Lys Asp Asp Val Ala Gln Thr Asp Leu
                165                 170                 175
Leu Gln Ile Asp Pro Asn Phe Gly Ser Lys Glu Asp Phe Asp Ser Leu
            180                 185                 190
Leu Gln Ser Ala Lys Lys Lys Ser Ile Arg Val Ile Leu Asp Leu Thr
        195                 200                 205
Pro Asn Tyr Arg Gly Glu Asn Ser Trp Phe Ser Thr Gln Val Asp Thr
    210                 215                 220
Val A1a Thr Lys Val Lys Asp Ala Leu Glu Phe Trp Leu Gln Ala Gly
225                 230                 235                 240
Val Asp Gly Phe Gln Val Arg Asp Ile Glu Asn Leu Lys Asp Ala Ser
                245                 250                 255
Ser Phe Leu Ala Glu Trp Gln Asn Ile Thr Lys Gly Phe Ser Glu Asp
            260                 265                 270
Arg Leu Leu Ile Ala Gly Thr Asn Ser Ser Asp Leu Gln Gln Ile Leu
        275                 280                 285
Ser Leu Leu Glu Ser Asn Lys Asp Leu Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu
    290                 295                 300
Ser Asp Ser Gly Ser Thr Gly Glu His Thr Lys Ser Leu Val Thr Gln
305                 310                 315                 320
Tyr Leu Asn Ala Thr Gly Asn Arg Trp Cys Ser Trp Ser Leu Ser Gln
                325                 330                 335
Ala Arg Leu Leu Thr Ser Phe Leu Pro Ala Gln Leu Leu Arg Leu Tyr
            340                 345                 350
Gln Leu Met Leu Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly
        355                 360                 365
Asp Glu Ile Gly Leu Asp Ala Ala Ala Leu Pro Gly Gln Pro Met Glu
    370                 375                 380
Ala Pro Val Met Leu Trp Asp Glu Ser Ser Phe Pro Asp Ile Pro Gly
385                 390                 395                 400
Ala Val Ser Ala Asn Met Thr Val Lys Gly Gln Ser Glu Asp Pro Gly
                405                 410                 415
Ser Leu Leu Ser Leu Phe Arg Arg Leu Ser Asp Gln Arg Ser Lys Glu
            420                 425                 430
Arg Ser Leu Leu His Gly Asp Phe His Ala Phe Ser Ala Gly Pro Gly
        435                 440                 445
Leu Phe Ser Tyr Ile Arg His Trp Asp Gln Asn Glu Arg Phe Leu Val
    450                 455                 460
Val Leu Asn Phe Gly Asp Val Gly Leu Ser Ala Gly Leu Gln Ala Ser
465                 470                 475                 480
Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser Leu Pro Ala Lys Ala Asp Leu Leu Leu
                485                 490                 495
Ser Thr Gln Pro Gly Arg Glu Glu Gly Ser Pro Leu Glu Leu Glu Arg
            500                 505                 510
Leu Lys Leu Glu Pro His Glu Gly Leu Leu Leu Arg Phe Pro Tyr Ala
        515                 520                 525
Ala
<210>67
<211>4539
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<220>
<221>CDS
<222>(66)..(1586)
<400>67
cggcgcgcac actgctcgct gggccgcggc tcccgggtgt cccaggcccg gccggtgcgc    60
agagc atg gcg ggt gcg ggc ccg aag cgg cgc gcg cta gcg gcg ccg gcg    110
      Met Ala Gly Ala Gly Pro Lys Arg Arg Ala Leu Ala Ala Pro Ala
      1               5                  10                  15
gcc gag gag aag gaa gag gcg cgg gag aag atg ctg gcc gcc aag agc    158
Ala Glu Glu Lys Glu Glu Ala Arg Glu Lys Met Leu Ala Ala Lys Ser
                20                  25                  30
gcg gac ggc tcg gcg ccg gca ggc gag ggc gag ggc gtg acc ctg cag    206
Ala Asp Gly Ser Ala Pro Ala Gly Glu Gly Glu Gly Val Thr Leu Gln
            35                  40                  45
cgg aac atc acg ctg ctc aac ggc gtg gcc atc atc gtg ggg acc att    254
Arg Asn Ile Thr Leu Leu Asn Gly Val Ala Ile Ile Val Gly Thr Ile
        50                  55                  60
atc ggc tcg ggc atc ttc gtg acg ccc acg ggc gtg ctc aag gag gca    302
Ile Gly Ser Gly Ile Phe Val Thr Pro Thr Gly Val Leu Lys Glu Ala
    65                  70                  75
ggc tcg ccg ggg ctg gcg ctg gtg gtg tgg gcc gcg tgc ggc gtc ttc    350
Gly Ser Pro Gly Leu Ala Leu Val Val Trp Ala Ala Cys Gly Val Phe
80                  85                  90                  95
tcc atc gtg ggc gcg ctc tgc tac gcg gag ctc ggc acc acc atc tcc    398
Ser Ile Val Gly Ala Leu Cys Tyr Ala Glu Leu Gly Thr Thr Ile Ser
                100                 105                 110
aaa tcg ggc ggc gac tac gcc tac atg ctg gag gtc tac ggc tcg ctg    446
Lys Ser Gly Gly Asp Tyr Ala Tyr Met Leu Glu Val Tyr Gly Ser Leu
            115                 120                 125
ccc gcc ttc ctc aag ctc tgg atc gag ctg ctc atc atc cgg cct tca    494
Pro Ala Phe Leu Lys Leu Trp Ile Glu Leu Leu Ile Ile Arg Pro Ser
        130                 135                 140
tcg cag tac atc gtg gcc ctg gtc ttc gcc acc tac ctg ctc aag ccg    542
Ser Gln Tyr Ile Val Ala Leu Val Phe Ala Thr Tyr Leu Leu Lys Pro
    145                 150                 155
ctc ttc ccc acc tgc ccg gtg ccc gag gag gca gcc aag ctc gtg gcc    590
Leu Phe Pro Thr Cys Pro Val Pro Glu Glu Ala Ala Lys Leu Val Ala
160                 165                 170                 175
tgc ctc tgc gtg ctg ctg ctc acg gcc gtg aac tgc tac agc gtg aag    638
Cys Leu Cys Val Leu Leu Leu Thr Ala Val Asn Cys Tyr Ser Val Lys
                180                 185                 190
gcc gcc acc cgg gtc cag gat gcc ttt gcc gcc gcc aag ctc ctg gcc    686
Ala Ala Thr Arg Val Gln Asp Ala Phe Ala Ala Ala Lys Leu Leu Ala
            195                 200                 205
ctg gcc ctg atc atc ctg ctg ggc ttc gtc cag atc ggg aag ggt gat    734
Leu Ala Leu Ile Ile Leu Leu Gly Phe Val Gln Ile Gly Lys Gly Asp
        210                 215                 220
gtg tcc aat cta gat ccc aac ttc tca ttt gaa ggc acc aaa ctg gat    782
Val Ser Asn Leu Asp Pro Asn Phe Ser Phe Glu Gly Thr Lys Leu Asp
    225                 230                 235
gtg ggg aac att gtg ctg gca tta tac agc ggc ctc ttt gcc tat gga    830
Val Gly Asn Ile Val Leu Ala Leu Tyr Ser Gly Leu Phe Ala Tyr Gly
240                 245                 250                 255
gga tgg aat tac ttg aat ttc gtc aca gag gaa atg atc aac ccc tac    878
Gly Trp Asn Tyr Leu Asn Phe Val Thr Glu Glu Met Ile Asn Pro Tyr
                260                 265                 270
aga aac ctg ccc ctg gcc atc atc atc tcc ctg ccc atc gtg acg ctg    926
Arg Asn Leu Pro Leu Ala Ile Ile Ile Ser Leu Pro Ile Val Thr Leu
            275                 280                 285
gtg tac gtg ctg acc aac ctg gcc tac ttc acc acc ctg tcc acc gag    974
Val Tyr Val Leu Thr Asn Leu Ala Tyr Phe Thr Thr Leu Ser Thr Glu
        290                 295                 300
cag atg ctg tcg tcc gag gcc gtg gcc gtg gac ttc ggg aac tat cac    1022
Gln Met Leu Ser Ser Glu Ala Val Ala Val Asp Phe Gly Asn Tyr His
    305                 310                 315
ctg ggc gtc atg tcc tgg atc atc ccc gtc ttc gtg ggc ctg tcc tgc    1070
Leu Gly Val Met Ser Trp Ile Ile Pro Val Phe Val Gly Leu Ser Cys
320                 325                 330                 335
ttc ggc tcc gtc aat ggg tcc ctg ttc aca tcc tcc agg ctc ttc ttc    1118
Phe Gly Ser Val Asn Gly Ser Leu Phe Thr Ser Ser Arg Leu Phe Phe
                340                 345                 350
gtg ggg tcc cgg gaa ggc cac ctg ccc tcc atc ctc tcc atg atc cac    1166
Val Gly Ser Arg Glu Gly His Leu Pro Ser Ile Leu Ser Met Ile His
            355                 360                 365
cca cag ctc ctc acc ccc gtg ccg tcc ctc gtg ttc acg tgt gtg atg    1214
Pro Gln Leu Leu Thr Pro Val Pro Ser Leu Val Phe Thr Cys Val Met
        370                 375                 380
acg ctg ctc tac gcc ttc tcc aag gac atc ttc tcc gtc atc aac ttc    1262
Thr Leu Leu Tyr Ala Phe Ser Lys Asp Ile Phe Ser Val Ile Asn Phe
    385                 390                 395
ttc agc ttc ttc aac tgg ctc tgc gtg gcc ctg gcc atc atc ggc atg    1310
Phe Ser Phe Phe Asn Trp Leu Cys Val Ala Leu Ala Ile Ile Gly Met
400                 405                 410                 415
atc tgg ctg cgc cac aga aag cct gag ctt gag cgg ccc atc aag gtg    1358
Ile Trp Leu Arg His Arg Lys Pro Glu Leu Glu Arg Pro Ile Lys Val
                420                 425                 430
aac ctg gcc ctg cct gtg ttc ttc atc ctg gcc tgc ctc ttc ctg atc    1406
Asn Leu Ala Leu Pro Val Phe Phe Ile Leu Ala Cys Leu Phe Leu Ile
            435                 440                 445
gcc gtc tcc ttc tgg aag aca ccc gtg gag tgt ggc atc ggc ttc acc    1454
Ala Val Ser Phe Trp Lys Thr Pro Val Glu Cys Gly Ile Gly Phe Thr
        450                 455                 460
atc atc ctc agc ggg ctg ccc gtc tac ttc ttc ggg gtc tgg tgg aaa    1502
Ile Ile Leu Ser Gly Leu Pro Val Tyr Phe Phe Gly Val Trp Trp Lys
    465                 470                 475
aac aag ccc aag tgg ctc ctc cag ggc atc ttc tcc acg acc gtc ctg    1550
Asn Lys Pro Lys Trp Leu Leu Gln Gly Ile Phe Ser Thr Thr Val Leu
480                 485                 490                 495
tgt cag aag ctc atg cag gtg gtc ccc cag gag aca tagccaggag         1596
Cys Gln Lys Leu Met Gln Val Val Pro Gln Glu Thr
                500                 505
gccgagtggc tgccggagga gcatgcgcag aggccagtta aagtagatca cctcctcgaa    1656
cccactccgg ttccccgcaa cccacagctc agctgcccat cccagtccct cgccgtccct    1716
cccaggtcgg gcagtggagg ctgctgtgaa aactctggta cgaatctcat ccctcaactg    1776
agggccaggg acccaggtgt gcctgtgctc ctgcccagga gcagcttttg gtctccttgg    1836
gccctttttc ccttccctcc tttgtttact tatatatata ttttttttaa acttaaattt    1896
tgggtcaact tgacaccact aagatgattt tttaaggagc tgggggaagg caggagcctt    1956
cctttctcct gccccaaggg cccagaccct gggcaaacag agctactgag acttggaacc    2016
tcattgctac gacagacttg cactgaagcc ggacagctgc ccagacacat gggcttgtga    2076
cattcgtgaa aaccaaccct gtgggcttat gtctctgcct tagggtttgc agagtggaaa    2136
ctcagccgta gggtggcact gggagggggt gggggatctg ggcaaggtgg gtgattcctc    2196
ccaggaggtg cttgaggccc cgatggactc ctgaccataa tcctagcccc gagacaccat    2256
cctgagccag ggaacagccc cagggttggg gggtgccggc atctccccta gctcaccagg    2316
cctggcctct gggcagtgtg gcctcttggc tatttctgtt ccagttttgg aggctgagtt    2376
ctggttcatg cagacaaagc cctgtccttc agtcttctag aaacagagac aagaaaggca    2436
gacacaccgc ggccaggcac ccatgtgggc gcccaccctg ggctccacac agcagtgtcc    2496
cctgccccag aggtcgcagc taccctcagc ctccaatgca ttggcctctg taccgcccgg    2556
cagccccttc tggccggtgc tgggttccca ctcccggcct aggcacctcc ccgctctccc    2616
tgtcacgctc atgtcctgtc ctggtcctga tgcccgttgt ctaggagaca gagccaagca    2676
ctgctcacgt ctctgccgcc tgcgtttgga ggcccctggg ctctcaccca gtccccaccc    2736
gcctgcagag agggaactag ggcacccctt gtttctgttg ttcccgtgaa tttttttcgc    2796
tatgggaggc agccgaggcc tggccaatgc ggcccacttt cctgagctgt cgctgcctcc    2856
atggcagcag ccaaggaccc ccagaacaag aagacccccc cgcaggatcc ctcctgagct    2916
cggggggctc tgccttctca ggccccgggc ttcccttctc cccagccaga ggtggagcca    2976
agtggtccag cgtcactcca gtgctcagct gtggctggag gagctggcct gtggcacagc    3036
cctgagtgtc ccaagccggg agccaacgaa gccggacacg gcttcactga ccagcggctg    3096
ctcaagccgc aagctctcag caagtgccca gtggagcctg ccgcccccac ctgggcaccg    3156
ggaccccctc accatccagt gggcccggag aaacctgatg aacagtttgg ggactcagga    3216
ccagatgtcc gtctctcttg cttgaggaat gaagaccttt attcacccct gccccgttgc    3276
ttcccgctgc acatggacag acttcacagc gtctgctcat aggacctgca tccttcctgg    3336
ggacgaattc cactcgtcca agggacagcc cacggtctgg aggccgagga ccaccagcag    3396
gcaggtggac tgactgtgtt gggcaagacc tcttccctct gggcctgttc tcttggctgc    3456
aaataaggac agcagctggt gccccacctg cctggtgcat tgctgtgtga atccaggagg    3516
cagtggacat cgtaggcagc cacggccccg ggtccaggag aagtgctccc tggaggcacg    3576
caccactgct tcccactggg gccggcgggg cccacgcacg acgtcagcct cttaccttcc    3636
cgcctcggct aggggtcctc gggatgccgt tctgttccaa cctcctgctc tgggaggtgg    3696
acatgcctca aggatacagg gagccggcgg cctctcgacg gcacgcactt gcctgttggc    3756
tgctgcggct gtgggcgagc atgggggctg ccagcgtctg ttgtggaaag tagctgctag    3816
tgaaatggct ggggccgctg gggtccgtct tcacactgcg caggtctctt ctgggcgtct    3876
gagctggggt gggagctcct ccgcagaagg ttggtggggg gtccagtctg tgatccttgg    3936
tgctgtgtgc cccactccag cctggggacc ccacttcaga aggtaggggc cgtgtcccgc    3996
ggtgctgact gaggcctgct tccccctccc cctcctgctg tgctggaatt ccacagggac    4056
cagggccacc gcaggggact gtctcagaag acttgatttt tccgtccctt tttctccaca    4116
ctccactgac aaacgtcccc agcggtttcc acttgtgggc ttcaggtgtt ttcaagcaca    4176
acccaccaca acaagcaagt gcattttcag tcgttgtgct tttttgtttt gtgctaacgt    4236
cttactaatt taaagatgct gtcggcacca tgtttattta tttccagtgg tcatgctcag    4296
ccttgctgct ctgcgtggcg caggtgccat gcctgctccc tgtctgtgtc ccagccacgc    4356
agggccatcc actgtgacgt cggccgacca ggctggacac cctctgccga gtaatgacgt    4416
gtgtggctgg gaccttcttt attctgtgtt aatggctaac ctgttacact gggctgggtt    4476
gggtagggtg ttctggcttt tttgtggggt ttttattttt aaagaaacac tcaatcatcc    4536
tag                                                                  4539
<210>68
<211>507
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>68
Met Ala Gly Ala Gly Pro Lys Arg Arg Ala Leu Ala Ala Pro Ala Ala
1               5                   10                  15
Glu Glu Lys Glu Glu Ala Arg Glu Lys Met Leu Ala Ala Lys Ser Ala
            20                  25                  30
Asp Gly Ser Ala Pro Ala Gly Glu Gly Glu Gly Val Thr Leu Gln Arg
        35                  40                  45
Asn Ile Thr Leu Leu Asn Gly Val Ala Ile Ile Val Gly Thr Ile Ile
    50                  55                  60
Gly Ser Gly Ile Phe Val Thr Pro Thr Gly Val Leu Lys Glu Ala Gly
65                  70                  75                  80
Ser Pro Gly Leu Ala Leu Val Val Trp Ala Ala Cys Gly Val Phe Ser
                85                  90                  95
Ile Val Gly Ala Leu Cys Tyr Ala Glu Leu Gly Thr Thr Ile Ser Lys
            100                 105                 110
Ser Gly Gly Asp Tyr Ala Tyr Met Leu Glu Val Tyr Gly Ser Leu Pro
        115                 120                 125
Ala Phe Leu Lys Leu Trp Ile Glu Leu Leu Ile Ile Arg Pro Ser Ser
    130                 135                 140
Gln Tyr Ile Val Ala Leu Val Phe Ala Thr Tyr Leu Leu Lys Pro Leu
145                 150                 155                 160
Phe Pro Thr Cys Pro Val Pro Glu Glu Ala Ala Lys Leu Val Ala Cys
                165                 170                 175
Leu Cys Val Leu Leu Leu Thr Ala Val Asn Cys Tyr Ser Val Lys Ala
            180                 185                 190
Ala Thr Arg Val Gln Asp Ala Phe Ala Ala Ala Lys Leu Leu Ala Leu
        195                 200                 205
Ala Leu Ile Ile Leu Leu Gly Phe Val Gln Ile Gly Lys Gly Asp Val
    210                 215                 220
Ser Asn Leu Asp Pro Asn Phe Ser Phe Glu Gly Thr Lys Leu Asp Val
225                 230                 235                 240
Gly Asn Ile Val Leu Ala Leu Tyr Ser Gly Leu Phe Ala Tyr Gly Gly
                245                 250                 255
Trp Asn Tyr Leu Asn Phe Val Thr Glu Glu Met Ile Asn Pro Tyr Arg
            260                 265                 270
Asn Leu Pro Leu Ala Ile Ile Ile Ser Leu Pro Ile Val Thr Leu Val
        275                 280                 285
Tyr Val Leu Thr Asn Leu Ala Tyr Phe Thr Thr Leu Ser Thr Glu Gln
    290                 295                 300
Met Leu Ser Ser Glu Ala Val Ala Val Asp Phe Gly Asn Tyr His Leu
305                 310                 315                 320
Gly Val Met Ser Trp Ile Ile Pro Val Phe Val Gly Leu Ser Cys Phe
                325                 330                 335
Gly Ser Val Asn Gly Ser Leu Phe Thr Ser Ser Arg Leu Phe Phe Val
            340                 345                 350
Gly Ser Arg Glu Gly His Leu Pro Ser Ile Leu Ser Met Ile His Pro
        355                 360                 365
Gln Leu Leu Thr Pro Val Pro Ser Leu Val Phe Thr Cys Val Met Thr
    370                 375                 380
Leu Leu Tyr Ala Phe Ser Lys Asp Ile Phe Ser Val Ile Asn Phe Phe
385                 390                 395                 400
Ser Phe Phe Asn Trp Leu Cys Val Ala Leu Ala Ile Ile Gly Met Ile
                405                 410                 415
Trp Leu Arg His Arg Lys Pro Glu Leu Glu Arg Pro Ile Lys Val Asn
            420                 425                 430
Leu Ala Leu Pro Val Phe Phe Ile Leu Ala Cys Leu Phe Leu Ile Ala
        435                 440                 445
Val Ser Phe Trp Lys Thr Pro Val Glu Cys Gly Ile Gly Phe Thr Ile
    450                 455                 460
Ile Leu Ser Gly Leu Pro Val Tyr Phe Phe Gly Val Trp Trp Lys Asn
465                 470                 475                 480
Lys Pro Lys Trp Leu Leu Gln Gly Ile Phe Ser Thr Thr Val Leu Cys
                485                 490                 495
Gln Lys Leu Met Gln Val Val Pro Gln Glu Thr
            500                 505
<210>69
<211>43
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(20)
<223>n是a，t，c or g.
<400>69
tcagtatggt agctcacctn atttcacttt cggccctggg acc 43
<210>70
<211>43
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸
<400>70
tcagtatggt agctcacctb gtttcacttt cggccctggg acc 43
<210>71
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>71
ggtcccaggg ccgaaagtga atagaggtga gctaccatac tgctg 45
<210>72
<211>43
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>72
gcagtatggt agctcacctc tattcacttt cggccctggg acc 43
<210>73
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>73
ccggaattca acactctccc ctgttgaagc tctttgtgac gg 42
<210>74
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>74
ggtcccaggg ccgaaagtga acataggtga gctaccatac tgctg 45
<210>75
<211>43
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>75
gcagtatggt agctcaccta tgttcacttt cggccctggg acc 43
<210>76
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>76
ccggaattca acactctccc ctgttgaagc tctttgtgac gg 42
<210>77
<211>133
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1NS/117IL的L链可变区
<400>77
Arg Ser Leu Thr Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Trp Leu Pro Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
            20                  25                  30
Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
        35                  40                  45
Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
    50                  55                  60
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala
65                  70                  75                  80
Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                85                  90                  95
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
            100                 105                 110
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr
        115                 120                 125
Lys Val Asp Ile Lys
    130
<210>78
<211>399
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1NS/117IL的L链可变区
<400>78
agatctctca ccatggaaac cccagcgcag cttctcttcc tcctgctact ctggctccca  60
gataccaccg gagaaattgt gttgacgcag tctccaggca ccctgtcttt gtctccaggg  120
gaaagagcca ccctctcctg cagggccagt cagagtgtta gcagcagctt cttagcctgg  180
taccagcaga aacctggcca ggctcccagg ctcctcatct atggtgcatc cagcagggcc  240
actggcatcc cagacaggtt cagtggcagt gggtctggga cagacttcac tctcaccatc  300
agcagactgg agcctgaaga tttcgcagtg tattactgtc agcagtatgg tagctcacct    360
ctattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa                           399
<210>79
<211>133
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1NS/117IL的L链可变区
<400>79
Arg Ser Leu Thr Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Trp Leu Pro Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
            20                  25                  30
Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
        35                  40                  45
Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
    50                  55                  60
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala
65                  70                  75                  80
Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                85                  90                  95
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
            100                 105                 110
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Met Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr
        115                 120                 125
Lys Val Asp Ile Lys
    130
<210>80
<211>399
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgGlNS/117IM的L链可变区
<400>80
agatctctca ccatggaaac cccagcgcag cttctcttcc tcctgctact ctggctccca    60
gataccaccg gagaaattgt gttgacgcag tctccaggca ccctgtcttt gtctccaggg    120
gaaagagcca ccctctcctg cagggccagt cagagtgtta gcagcagctt cttagcctgg    180
taccagcaga aacctggcca ggctcccagg ctcctcatct atggtgcatc cagcagggcc    240
actggcatcc cagacaggtt cagtggcagt gggtctggga cagacttcac tctcaccatc    300
agcagactgg agcctgaaga tttcgcagtg tattactgtc agcagtatgg tagctcacct    360
atgttcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa                           399
<210>81
<211>133
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1NS/117IN的L链可变区
<400>81
Arg Ser Leu Thr Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Trp Leu Pro Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
            20                  25                  30
Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
        35                  40                  45
Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
    50                  55                  60
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala
65                  70                  75                  80
Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                85                  90                  95
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
            100                 105                 110
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Asn Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr
        115                 120                 125
Lys Val Asp Ile Lys
    130
<210>82
<211>399
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1NS/117IN的L链可变区
<400>82
agatctctca ccatggaaac cccagcgcag cttctcttcc tcctgctact ctggctccca    60
gataccaccg gagaaattgt gttgacgcag tctccaggca ccctgtcttt gtctccaggg    120
gaaagagcca ccctctcctg cagggccagt cagagtgtta gcagcagctt cttagcctgg    180
taccagcaga aacctggcca ggctcccagg ctcctcatct atggtgcatc cagcagggcc    240
actggcatcc cagacaggtt cagtggcagt gggtctggga cagacttcac tctcaccatc    300
agcagactgg agcctgaaga tttcgcagtg tattactgtc agcagtatgg tagctcacct    360
aatttcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa                           399
<210>83
<211>133
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1NS/117IC的L链可变区
<400>83
Arg Ser Leu Thr Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Trp Leu Pro Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
            20                  25                  30
Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
        35                  40                  45
Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
    50                  55                  60
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala
65                  70                  75                  80
Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                85                  90                  95
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
            100                 105                 110
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Cys Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr
        115                 120                 125
Lys Val Asp Ile Lys
    130
<210>84
<211>399
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>抗体C2IgG1NS/117IC的L链可变区
<400>84
agatctctca ccatggaaac cccagcgcag cttctcttcc tcctgctact ctggctccca    60
gataccaccg gagaaattgt gttgacgcag tctccaggca ccctgtcttt gtctccaggg    120
gaaagagcca ccctctcctg cagggccagt cagagtgtta gcagcagctt cttagcctgg    180
taccagcaga aacctggcca ggctcccagg ctcctcatct atggtgcatc cagcagggcc    240
actggcatcc cagacaggtt cagtggcagt gggtctggga cagacttcac tctcaccatc    300
agcagactgg agcctgaaga tttcgcagtg tattactgtc agcagtatgg tagctcacct    360
tgtttcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa                           399
<210>85
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸
<400>85
ccgcgagacc cacccttgga ggctccagat ttatc    35

Claims (9)

1.人单克隆抗体或其功能性片段，该抗体或其功能性片段与SEQID NO：66氨基酸序列所示的CD98具有特异性结合能力，所述CD98来自癌细胞的细胞膜且与具有氨基酸转运活性的蛋白质形成复合体，并且该抗体或其功能性片段具有下述(c)～(g)中任意一对序列作为重链可变区和轻链可变区：
(c)SEQ ID NO.43和47；
(d)SEQ ID NO.43和77；
(e)SEQ ID NO.43和79；
(f)SEQ ID NO.43和81；和
(g)SEQ ID NO.43和83，
其中，上述功能性片段选自抗体的Fab、Fab’、(Fab′)2、Fv、scFv、sdFv以及它们的组合。
2.缀合物，该缀合物包含：
权利要求1所述的人单克隆抗体或其功能性片段；和
异源结构域，其含有药物或可检测的部分。
3.权利要求2的缀合物，其中所述可检测的部分为标志物。
4.缀合物，该缀合物包含：
权利要求1所述的人单克隆抗体或其功能性片段；和
异源结构域，其含有结合蛋白。
5.缀合物，该缀合物包含：
权利要求1所述的人单克隆抗体或其功能性片段；和
异源结构域，其含有酶。
6.缀合物，该缀合物包含：
权利要求1所述的人单克隆抗体或其功能性片段；和
异源结构域，其含有毒素或免疫调节剂。
7.细胞，该细胞表达权利要求1所述的人单克隆抗体或其功能性片段。
8.抗体的制备方法，该方法包含：将含有下述(c)～(g)中任意一对序列或其简并核苷酸序列的表达载体导入宿主；培养该宿主；由培养物获得该抗体：
(c)SEQ ID NO.42和46，
(d)SEQ ID NO.42和78，
(e)SEQ ID NO.42和80，
(f)SEQ ID NO.42和82，和
(g)SEQ ID NO.42和84。
9.权利要求8所述的制备方法，其中，宿主选自大肠杆菌、酵母细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞和植物细胞。
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