CN105385694B

CN105385694B - 抗人cd98单克隆抗体98-3h3轻、重链可变区基因及其应用

Info

Publication number: CN105385694B
Application number: CN201510814554.XA
Authority: CN
Inventors: 陈志南; 杨向民; 王斌; 张阳; 吴波
Original assignee: Fourth Military Medical University FMMU
Current assignee: Fourth Military Medical University FMMU
Priority date: 2015-11-20
Filing date: 2015-11-20
Publication date: 2019-01-18
Anticipated expiration: 2035-11-20
Also published as: CN105385694A

Abstract

本发明公开了抗人CD98单克隆抗体98‑3H3轻、重链可变区基因及其应用，从培养的抗肿瘤特异性单抗CD98‑3H3杂交瘤细胞中克隆了该抗体轻、重链可变区基因。所得重链和轻链可变区基因可编码正确的小鼠抗体可变区。基于上述已克隆到的抗人CD98单克隆抗体98‑3H3轻、重链可变区基因，可以采用基因工程方法，构建和表达多种小分子基因工程抗体，如单链抗体、嵌合抗体、Fab抗体等，以便用于制备治疗肿瘤，特别是治疗肺癌的药物。

Description

抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻、重链可变区基因及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻、重链可变区基因及其应用。

背景技术

肺癌是全球发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位，据统计，我国每年大约有超过60万人死于肺癌，因此研究肺癌的诊断和治疗具有重要的意义。

自1975年Kohler和Milstein创建B淋巴细胞杂交瘤技术以来,各种单克隆抗体(McAb)相继出现,它们在疾病诊治的基础研究和临床应用方面发挥了积极的作用,其中肺癌单抗的研制更是为这种难治性肿瘤带来了新的希望。近二十年，关于肺癌单抗的研究大多为甲胎蛋白和抗生长因子单抗。在肺癌单抗的制备方面,多采用传统免疫方法，即以可溶性物质或肺癌培养细胞为免疫原，由于肿瘤抗原的变异或部分丢失，因而该方法难以获得高亲和性、高特异性的肺癌单抗。用肿瘤特异性高表达抗原免疫动物制备单抗已有成功报道。该法虽然制备抗原麻烦，但能较好地筛选到目的靶点的单抗，不失为治疗性单抗制备的好方法。

CD98为细胞表面跨膜蛋白二聚体，通过激活相关蛋白来调控细胞内的信号传导，进而影响细胞的极性、增殖、黏连、迁移等特性，在肿瘤组织中均有明显高表达，特别是在肺癌的表达上呈现强阳性表达，该分子的表达提示其表达量可能与肺癌的发生发展密切相关，有望成为治疗肿瘤的新靶点。

CD98是人细胞表面Ⅱ型跨膜糖蛋白二聚体，位于11号染色体的SLC3A2基因编码，在哺乳动物中高度保守。CD98分子是由529个氨基酸组成的糖蛋白，约80kDa。最初发现该分子的表达与T细胞和B细胞的激活有关。目前的研究显示CD98可以在除血小板以外的所有细胞表面表达，但在肿瘤中程高表达，其序列和结构在不同物种进化过程中高度保守，并且在一些处于增殖状态的正常组织如血脑屏障、皮肤的基底层、近端肾小管、胎盘、睾丸及多种肿瘤组织中高表达。CD98由一条重链(CD98hc)和一条轻链(L-type amino acidtransporter，LAT)通过二硫键共价连接而成。CD98hc是溶质载体家族的一员，为单跨膜的糖蛋白，由529个氨基酸组成：1～81位氨基酸组成胞内区，82～104位氨基酸组成跨膜区，其中CD98hc通过二硫键在第109位半胱氨酸位点与轻链共价连接；105—529位氨基酸组成胞外区，在胞外C末端存在一个突触后密度蛋白结合结构域。

目前，确定的CD98的轻链为初在神经胶质瘤中发现的LAT。研究发现，在脊椎动物中，存在着5种氨基酸转运蛋白：LAT1、LAT2、y LAT1、Y LAT-2和xCT，其中任何一种都可以单独与CD98hc连接组成CD98蛋白二聚体。在肺泡上皮中，以LAT1为主与CD98hc连接，在小肠上皮中，以LAT2为主。CD98hc在G0期处于低水平表达，但是一旦细胞被激活，G0-G1期CD98hc的表达快速增加，并一直保持着很高的水平，直至细胞周期完成，CD98hc才开始降低并于细胞分化成熟后重新处于低水平表达。CD98hc表现CD98的抗原性，在细胞表面，CD98hc作为整合素的调节因子，与整合素1特异性结合发挥其调节作用。CD98hc与整合素发生作用后，激活磷酯酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase，PI3K)以及下游的3，4，5一三磷酸磷脂酰肌醇，产生整合素样信号通路，从而引发细胞的极性、黏附等特性的改变，导致疾病的发生和发展。

一般来说，CD98的轻链是一种不依赖于钠离子的L型氨基酸转运蛋白，能将细胞外大的、中性的氨基酸如亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、组氨酸等转运入细胞内合成相关蛋白质。但轻链氨基酸转运蛋白需要与CD98hc共价结合后，才能发挥其转运氨基酸的功能。研究发现，LAT广泛表达于原发肿瘤及其细胞株，并且在肿瘤生长和患者预后方面发挥作用。LAT在肿瘤发生发展中的作用机制尚不清楚，目前大多数的观点认为LAT通过调节胞内相关氨基酸的浓度，实现对信号通路如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)信号通路的调控，导致目标蛋白的磷酸化。这种观点也被相关研究所证实。

Kurayama等证实胞内亮氨酸浓度能够调节胞内mTOR信号通路，引起p70s6激酶的激活，进而导致细胞功能的变化。

与此不同的是，CD98的重链却保持了较好的保守性和抗原性。应用CD98的重链蛋白即重链区域进行单抗的制备则能获得针对该分子的通用型单抗。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种抗人CD98的单克隆抗体98-3H3重链和轻链可变区基因，以便两者重组后可表达出特异性识别和结合肺癌相关抗原CD98的抗体活性片段。本发明的另一目的在于所述基因和多肽在制备用于诊断和治疗肺癌药物中的应用。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻、重链可变区基因，所述的抗人CD98单克隆抗体98-3H3重链可变区基因如SEQ ID NO：1所示；所述的抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻链可变区基因如SEQ ID NO：2所示。

一种抗人CD98单克隆抗体，包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

所述的抗人CD98单克隆抗体在制备治疗肺癌药物中的应用。

一种杂交瘤细胞株CD98-3H3，所述的杂交瘤细胞株CD98-3H3的保藏编号为CCTCCC2015117，保藏日期：2015年7月8日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学。

本发明人应用一套设计的引物成功地从培养的抗肺癌特异性单抗CD98-3H3杂交瘤细胞中克隆了抗体轻、重链可变区基因；所得VH与VL基因可编码正确的小鼠抗体可变区。基于上述已克隆到的抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻、重链可变区基因，可以采用基因工程方法，构建和表达多种小分子基因工程抗体，具备识别肺癌抗原分子的特异性，能够应用于制备抗肺癌的药物或基因产品。

附图说明

图1为RT-PCR扩增的抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻、重链可变区基因的琼脂糖凝胶电泳图，图中M表示DL-2000 Marker，1表示98-3H3重链可变区基因，2表示98-3H3轻链可变区基因；

图2为98-3H3单抗与不同肺癌细胞表达CD98的Western-blot检测结果；

图3为98-3H3单抗在肺癌组织中的免疫组织化学染色结果图；

以下结合说明书附图和具体实施方式对本发明做具体说明。

具体实施方式

根据本发明的一个方面，本发明涉及一种抗人CD98的单克隆抗体98-3H3重链和轻链可变区基因。该单克隆抗体的重链和轻链可变区基因是从能够分泌较高活性的鼠源性98-3H3单抗的杂交瘤细胞株CD98-3H3中克隆的。

本发明人应用一套设计的引物成功地从培养的抗肺癌特异性CD98-3H3杂交瘤细胞中克隆了抗体轻、重链可变区基因。培养物名称：杂交瘤细胞株CD98-3H3；保藏编号：CCTCC C2015117；

抗人CD98单克隆抗体98-3H3重链可变区基因全长为445bp，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，其编码的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:3所示。抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻链可变区基因全长为421bp，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，其编码的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:4所示，两个基因重组后可用于表达特异性识别和结合肺癌相关抗原CD98的抗体活性片段。

本发明人应用引物成功地从培养的抗肺癌特异性单抗CD98-3H3杂交瘤细胞中克隆了抗体轻、重链可变区基因。经美国国立生物技术信息中心NCBI(National Center forBiotechnology Information，http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi，2015-11-16)序列分析平台和IMGT数据库(Lefranc,2001)进行序列分析，结果表明重链同源性最高的是Mus musculus clone 7/08PEC B1b IgM 2 immunoglobulin mu heavy chain variableregion mRNA(EU934884.1|Length:325)；而轻链同源性最高的是：Mus musculus kappalight chain of Mab7mRNA(AF152371.1|AF152371Length:642)；两者均属于小鼠免疫球蛋白重排的重链或轻κ链V-J区基因。所得VH与VL基因可编码正确的小鼠抗体可变区。基于上述已克隆到的抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻、重链可变区基因，可以采用基因工程方法，构建和表达多种小分子基因工程抗体。

本发明人用表达的CD98分子免疫小鼠，通过杂交瘤制备方法获得特异性抗人CD98单抗3株，其中与肺癌组织具有良好特异性的单抗为98-3H3，该单抗无论在体内体外均可结合靶点分子CD98，免疫组化染色阳性率大于80％，所制备杂交瘤细胞已递送中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号：CCTCC C2015117，细胞活性100％，同时所制样品符合《人用鼠源性单克隆抗体制备及质量控制要点》的要求。

一、CD98-3H3杂交瘤细胞株的制备过程

CD98-3H3杂交瘤的制备是采用常规传统的融合方法进行免疫和制备，具体所用的方法如下：

1、以表达的抗原CD98为免疫原[Bo Wu et al.J Exp Clin Cancer Res.2015 Oct6；34(1):110.]，对8-10周龄重18g左右雌性Balb/c小鼠进行皮下常规免疫，抗原用量100μg/只。

2、每隔2周以相同剂量抗原加不完全福氏佐剂腹腔加强免疫。

3、细胞融合前3天检测小鼠血清多抗的效价，效价高者尾静脉再追加免疫1次，剂量同上。

4、3天后收集免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0以数量比为5:1的比例在PEG-l000作用下融合，HAT培养液选择培养。

5、以抗原CD98为筛选蛋白，进行间接ELISA筛选阳性克隆。

6、将阳性孔连续有限稀释2-3次后，大量扩增并液氮冻存。10-15天后取上清进行ELISA筛选阳性克隆，将筛选的阳性克隆孔作有限稀释，进行3次亚克隆。大量扩增并液氮冻存所获得杂交瘤细胞即得CD98-3H杂交瘤细胞。

所制备CD98-3H3杂交瘤细胞已递送中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号：CCTCC C2015117，细胞活性100％，中国典型培养物保藏中心的地址为：中国.武汉.武汉大学；联系方式：027-68752319。

二、抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻、重链可变区基因的克隆

所用细胞株为第四军医大学细胞工程研究中心采用传统的融合方法获得的一株分泌高亲和力、高特异性鼠源性抗人CD98抗体的杂交瘤细胞株CD98-3H3；

1、98-3H3单抗可变区基因的克隆

取处于对数生长期的CD98-3H3杂交瘤细胞(5×10⁶)，采用异硫氰酸胍一步法提取CD98-3H3杂交瘤细胞的总RNA，取少量进行紫外分光光度计定量及1％甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测；

随后以Oligo(dT)₁₅(Promega公司)为随机引物，反转录合成cDNA第一链。Oligo(dT)₁₅(Promega公司)为随机引物的反转录方案如下：20μL反应体系中依次加入1μgCD98-3H3杂交瘤细胞的总RNA(2μL)，0.5ug随机引物Oligo(dT)₁₅(1μL),4ulMgCL₂(25mM)2μL 5×dNTPs,2μL 10×缓冲液,0.5μL RNase抑制剂，加入反转录酶AMV 15U(0.75μL)，用水补至20μL，混匀，42℃水浴1h，煮沸3min，反应产物置于-20℃备用；

然后，利用设计的98-3H3单抗可变区基因PCR扩增引物扩增出抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻链可变区基因(VH)和抗人CD98单克隆抗体98-3H3重链可变区基因(VL)。

设计的98-3H3单抗可变区基因PCR扩增引物序列如下：

小鼠重链可变区(V)区扩增引物：

上游引物(VH-F):

5’-GGGGATATCCACCATGGCTGTCTTGGGGCTGCTCTTCT-3’；

下游引物(VH-R)：

5’GACTCATGGGGGTGTCGTGCTAGCTGAAGAGACAGTGA-3’；

小鼠轻链可变区(V)区扩增引物：

上游引物(VL-F)：

5’-GATGTGAGCTCGTGATGACCCAGACTCC-3’；

下游引物(VL-R)：

5’-GGATACAGTTGGTGGTGCAGTCGACTTACGTTTTGTTTCAGCTT-3’；

其中：划线处为限制性酶切位点

PCR扩增反映按常规方法进行：以反转录合成的cDNA为模板，分别用3对小鼠重链可变区(V)区扩增引物和5对小鼠轻链可变区(V)区扩增引物扩增得到抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻链可变区基因(VH)和抗人CD98单克隆抗体98-3H3重链可变区基因(VL)。反应体系为：模板cDNA 2.5u1， dNTP(各0.4mM),10×Buffer 5ul,Ex Taq DNA聚合酶1.25u,5’端和3’端引物各5ul(约30pmol)，加水至50ul,混匀，瞬时离心后，加入1-2滴液体石蜡，置PCR仪上反应。反应条件:94℃1min，54℃1min，72℃1min，35个循环，最后72℃延伸10min。

扩增产物VH的基因序列如SEQ ID NO:1所示，扩增产物VL的基因序列如SEQ IDNO:2所示，VH编码的多肽产物如SEQ ID NO:3所示，VL编码的多肽产物如SEQ ID NO:4所示；

扩增产物VH(约450bp)和VL(约420bp)经低溶点琼脂糖凝胶(1.5％)电泳后，切胶分离靶片段。通过凝胶纯化试剂盒(promega Inc)回收纯化后，凝胶电泳鉴定(见附图1)。之后将目的片段克隆至T载体，目的片段T载体克隆测序方案如下：将PCR产物凝胶电泳分离后回收，连入pMD18-T载体。连接反应体系为：pMD18-T载体1ul，PCR产物凝胶纯化重链(或轻链)3ul，去离子水1ul，连接缓冲液5ul，混匀后4℃过夜，转化大肠杆菌JM109，筛选重组克隆，然后采用通用测序引物测序分析。

2、抗体轻重链可变区同源性及CDR区分析

(1)、同源性分析

利用美国国立生物技术信息中心NCBI(National Center for BiotechnologyInformation，http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi，2015-11-16)，同时也采用IMGT数据库(Lefranc,2001)对1中扩增得到的抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻链可变区基因(VH)和抗人CD98单克隆抗体98-3H3重链可变区基因(VL)进行同源性分析。结果表明，VH与数据库中“Mus musculus clone 7/08PEC B1b IgM 2 immunoglobulin mu heavy chainvariable region mRNA,partial cds”的同源性最高，同源性为92％，如表1所示；VL与数据库中“Mus musculus kappa light chain of Mab7 mRNA,partial cds”同源性最高，同源性为95％，如表2所示。以上结果表明本发明所获得的抗体是一株全新的抗体。

表1.重链可变区基因同源性分析

表2.轻链可变区基因同源性分析

(2)、CDR区分析

为了确认抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻链可变区和抗人CD98单克隆抗体98-3H3重链可变区上的CDR，本发明人借助源自IMGT蛋白质数据库提供的抗体序列信息数据库进行分析比对，结果表明本发明所涉及的抗体包括重链CDR1-3和轻链CDR1-3；

所述重链CDR1-3的氨基酸序列为：

CDR1：GFTFSSFG(SEQ ID NO:5)；

CDR2：ISGGSNTI(SEQ ID NO:6)；

CDR3：ARWGTGTRFAY(SEQ ID NO:7)；

所述轻链CDR1-3的氨基酸序列为：

CDR1：QDINSY(SEQ ID NO:8)；

CDR2：RAN(SEQ ID NO:9)；

CDR3：LQYDEFPFT(SEQ ID NO:10)；

三、抗人CD98单克隆抗体98-3H3生物学功能

1.western blot检测肺癌细胞中CD98的表达

1.1方法

将1×10⁶的肺癌细胞系NCI-H1299，NCI-H460，A549和95-D种植于6孔板中，37℃，5％CO₂条件下培养过夜。第二天用RIPA细胞裂解液裂解细胞，离心，取上清。加入5×上样缓冲液，煮沸。各取5μL上样，经10％SDS-PAGE电泳分离后，常规方法转至PVDF上。5％脱脂奶粉封闭1h，加入抗人CD98单克隆抗体98-3H3(1μL/mL)室温静置2h，PBST洗膜后，加至HRP-羊抗鼠IgG二抗(PIERCE)室温静置1h，PBST洗膜后，加入ECL发光缓冲液，Image Station 4000MM(KODAK)荧光/化学发光成像系统采集信号，拍照。

1.2结果

如图2所示，在4株肺癌细胞裂解上清中，均出现特异性条带，表明制备的98-3H3抗体可识别细胞裂解液中的CD98分子。

2.免疫组织化学法检测肺癌组织中CD98的表达

用免疫组织化学方法，检测抗人CD98单克隆抗体98-3H3与肿瘤组织的特异性结合能力，考察该抗体的免疫组织交叉反应。具体操作如下：取肺癌组织石蜡切片，常规二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水、水化组织芯片；3％H₂O₂阻断灭活内源性过氧化物酶；正常羊血清工作液封闭；以抗人CD98单克隆抗体98-3H3为一抗，生物素标记的兔抗鼠IgG抗体为二抗，辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液为三抗，DAB显色，苏木精复染，脱水透明后封片、镜检。

结果如图3所示，抗人CD98单克隆抗体98-3H3在肺癌组织中可见特异性着色,着色程度均为强阳性，其着色部位为癌细胞胞膜和胞浆；而与正常组织极少结合。以上结果表明，本发明所涉及的抗人CD98单克隆抗体 98-3H3具备识别抗原分子的特异性。

四、抗人CD98单克隆抗体在制备治疗肺癌等抗肿瘤药物中的应用。

肺癌单抗应用方面的研究主要集中在(1)肺癌单抗在肺癌相关抗原研究中的应用：单克隆抗体的发展提供了一个发现新肿瘤相关抗原或肿瘤抗原新位点的有效手段。这些抗原可用于临床血清学检查，具有一定的诊断和评价治疗效果的意义。(2)肺癌单抗导向药物研究：以单抗为载体的放免显像诊断、导向化疗和导向放疗近年取得了实质性进展。主要有：①化学药物—单抗交联物；②细胞毒素—单抗交联物；③放射性核素—单抗交联物等。

以本发明所述的轻、重链可变区基因重构成一定形式的蛋白药物，可直接用于有关疾病特别是肿瘤、炎症的诊断及导向治疗。另外，以本发明所述的轻、重链可变区基因编码的多肽及其衍生物作为载体，交联上细胞毒性药物、毒素、放射性核素、酶和生物反应调节剂等作为导向药物，可用于有关疾病特别是肿瘤的诊断及治疗。

从本发明所述的轻、重链可变区基因编码的多肽出发，可重组成的新型抗体主要有下列几种形式：

(1)嵌合抗体。是用鼠MAb的V区与人Ig的C区连接而成为人-鼠嵌合抗体。由于其完整地保留了鼠MAb的特异性和亲和力，同时降低了HAMA等不良反应，故在肿瘤等疾病的治疗中显示出良好的效果。

(2)人源化抗体。针对可变区基因结构的人源化改造，包括CDR移植、表面氨基酸残基镶饰、骨架区交换、定位保留和表位导向选择等，从而不但降低了可变区的鼠源性同时又保持了鼠MAb的特异性和亲和力。

(3)小分子抗体。主要有由VH-CH1和VL-C1组成Fab抗体、用一多肽(GLy4Ser)₃接头连接VH基因和VL基因而成的单链抗体、由VH和VL以非共价键结合而成Fv片段抗体、由VH或VL一个功能结构域组成的单域抗体、由单个CDR构成的最小识别单位等。

(4)多价微型抗体。主要有双链抗体、(ScFv)₂、Flex微型抗体、LD微型抗体、F(ab’)₂、F(ab’)₃、(ScFv)₄等。由于有多价抗原结合位点，亲和力高，分子大小适中，既能穿透肿瘤组织，亦在肾脏中的清除率较慢的特点而具有较高的临床应用价值。

(5)双特异性抗体。是一类具有双重特异性和双重功能的抗体，又称双功能抗体。

(6)重组抗体融合蛋白。把Fab或Fv等基因片段，与非抗体的毒素或酶等其它蛋白基因连接形成的具有把特定的生物活性导向靶部位的一种重组蛋白。

(7)重组免疫毒素。将编码抗体和毒素的基因重组而产生，特点是高效，非特异毒性低，体内稳定性好，易穿透肿瘤及体内使用较安全。

(8)噬菌体抗体。把Ig的V区基因与丝状噬菌体DNA上基因Ⅲ或基因Ⅷ连接经转染宿主菌后，使其在膜表面外壳蛋白表达Fab或ScFv的融合蛋白产物。通过对此产物多轮相关抗原的亲和吸附，从中淘筛出所需的特异性抗体。

以上述由轻、重链可变区基因编码的多肽重组或衍生的抗体分子为载体，交联上各种抗癌或抗炎症的效应物质而形成的免疫偶联物或导向药物主要有下列几种形式：

(1)抗体-核素偶联物。该偶联物可将核素有效地导向肿瘤组织局部，从而减少了因放疗外照射引起的正常组织损伤及有关的不良反应，并可对肿瘤进行定位诊断和导向治疗。这种方法即为放射免疫显像和放射免疫治疗。与单抗偶联的常用核素有¹²⁵I，¹³¹I，¹¹¹In，⁹⁰Y，⁹⁹Tc^m，¹⁸⁸Re和¹⁸⁶Re等。

(2)抗体-化疗药物偶联物。该偶联物能特异地导向肿瘤，可减低对正常组织的损伤，减少化疗药物的毒副作用。常偶联的化疗药物如：烷化剂中的磷酸酰胺；抗代谢中的氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶；抗生素类阿霉素、表阿霉素、柔红霉素；植物类长春新碱、丝裂霉素等。

(3)抗体-毒素偶联物。该偶联物又称免疫毒素。其杀伤细胞作用强且不依赖于生物辅助机制。其杀伤肿瘤机制与放疗，化疗不同，所以一般放疗、化疗效果差的肿瘤可用，应用前景广阔。常用的毒素有篦麻毒素、白喉毒素、红豆毒素、肥皂草毒素、假单孢菌外毒素、链球菌溶血素、穿孔素等。

(4)抗体-生物反应调节剂(BRM)偶联物。BRM单独调节机体的免疫能力和杀伤肿瘤细胞已取得较好的疗效。但由于其输入体内后仅有部分到达肿瘤靶部位，其杀伤作用得不到充分发挥且有毒副作用。将BRM与单抗偶联，通过单抗携带其到达靶部位而发挥杀伤肿瘤的作用，使这些因子的作用更强，且更加专一。常用的BRM有INF和IL-2等。

(5)抗体导向酶解前药。将抗体与药物专一性活化酶的偶联物注入体内，间隔一定时间后注入前药，使其在肿瘤部位转化成高浓度抗癌活性药以杀伤肿瘤细胞。目前，可作为前药的有苯甲酸氢芥的谷氨酰胺衍生物、磷酸鬼臼乙叉戒、磷酸丝裂霉素、葡糖苷酸柔红霉素、阿霉素、5-氟胞嘧啶和头孢菌素氮芥等。活化酶有羧肽酶G₂、碱性磷酸酶、青霉素酰胺酶、β-内酰胺酶、胞嘧啶脱氨酶、β-葡糖苷酶和氨基肽酶等。

(6)免疫脂质体。将MAb偶联到脂质体的表面能充分将MAb与抗原特异性结合的导向性及脂质体能包裹大量药物的特性融为一体，再包埋上有关药物，则可提高药物靶向性和疗效。

Claims

1.一种抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻、重链可变区基因，其特征在于，所述的抗人CD98单克隆抗体98-3H3重链可变区基因如SEQ ID NO：1所示；所述的抗人CD98单克隆抗体98-3H3轻链可变区基因如SEQ ID NO：2所示。

2.一种抗人CD98单克隆抗体，包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

3.权利要求2所述的抗人CD98单克隆抗体在制备治疗肺癌药物中的应用。

4.一种杂交瘤细胞株CD98-3H3，其特征在于，所述的杂交瘤细胞株CD98-3H3的保藏编号为CCTCC C2015117。