CN101433706A - 一种归脾汤制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种归脾汤制剂的制备方法。该药物是由主要以芍药、桂枝、生姜、大枣、黄芪和甘草的活性成分以及其他辅料制成的口服制剂。本发明在传统中医药学的经典理论指导下，运用了现代归脾汤制剂工艺，最大限度地保留了传统医药的经验积累，而又能适应现代社会快节奏的，如散剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂和胶囊等制剂形式。

Description

一种归脾汤制剂的制备方法

【技术领域】

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种归脾汤制剂及其制备方法。

【背景技术】

归脾汤益气补血，健脾养心，其主治包括：心脾气血两虚证。心悸怔忡，健忘失眠，盗汗，体倦食少，面色萎黄，舌淡，苔薄白，脉细弱。脾不统血证。便血，皮下紫癜，妇女崩漏，月经超前，量多色淡，或淋漓不止，舌淡，脉细弱。(本方常用于胃及十二指肠溃疡出血、功能性子宫出血、再生障碍性贫血、血小板减少性紫癜、神经衰弱、心脏病等属心脾气血两虚及脾不统血者。)

归脾汤证因思虑过度，劳伤心脾，气血亏虚所致。心藏神而主血，脾主思而统血，思虑过度，心脾气血暗耗，脾气亏虚则体倦、食少；心血不足则见惊悸、怔忡、健忘、不寐、盗汗；面色萎黄，舌质淡，苔薄白，脉细缓均属气血不足之象。上述诸症虽属心脾两虚，却是以脾虚为核心，气血亏虚为基础。脾为营卫气血生化之源，《灵枢·决气》曰：“中焦受气取汁，变化而赤是为血”，故方中以参、芪、术、草大队甘温之品补脾益气以生血，使气旺而血生；当归、龙眼肉甘温补血养心；茯苓(多用茯神)、酸枣仁、远志宁心安神；木香辛香而散，理气醒脾，与大量益气健脾药配伍，复中焦运化之功，又能防大量益气补血药滋腻碍胃，使补而不滞，滋而不腻；用法中姜、枣调和脾胃，以资化源。全方共奏益气补血，健脾养心之功，为治疗思虑过度，劳伤心脾，气血两虚之良方。

归脾汤的配伍特点是：一是心脾同治，重点在脾，使脾旺则气血生化有源，方名归脾，意在于此；二是气血并补，但重在补气，意即气为血之帅，气旺血自生，血足则心有所养；三是补气养血药中佐以木香理气醒脾，补而不滞。故张璐说：“此方滋养心脾，鼓动少火，妙以木香调畅诸气。世以木香性燥不用，服之多致痞闷，或泄泻，减食者，以其纯阴无阳，不能输化药力故耳。”(《古今名医方论》)

归脾汤原载宋·严用和《济生方》，但方中无当归、远志，至明·薛已补此二味，使养血宁神之效尤彰。本方的适应范围，随着后世医家的临床实践，不断有所扩充，原治思虑过度、劳伤心脾之健忘、怔忡。元·危亦林在《世医得效方》中增加治疗脾不统血之吐血、下血。明·薛已《内科摘要》增补了治疗惊悸、盗汗、嗜卧少食、月经不调、赤白带下等症。

归脾汤与补中益气汤同用参、芪、术、草以益气补脾。前者以补气药配伍养心安神药，意在心脾双补，复二脏生血、统血之职，主治心脾气血两虚之心悸怔忡、健忘失眠、体倦食少，以及脾不统血之便血、崩漏等。后者是补气药配伍升阳举陷药，意在补气升提，复脾胃升清降浊之能，主治脾胃气虚、气陷之少气懒言、发热及脏器下垂等。

归脾汤的化裁包括：崩漏下血偏寒者，可加艾叶炭、炮姜炭，以温经止血；偏热者，加生地炭、阿胶珠、棕榈炭，以清热止血。

本方是治疗心脾气血两虚证的常用方。临床应用以心悸失眠，体倦食少，便血或崩漏，舌淡，脉细弱为辨证要点。汪昂《医方集解·补养之剂》：“此手少阴、足太阴药也。血不归脾则妄行，参、术、黄芪、甘草之甘温，所以补脾；茯神、远志、枣仁、龙眼之甘温酸苦，所以补心，心者，脾之母也。当归滋阴而养血，木香行气而舒脾，既以行血中之滞，又以助参、芪而补气。气壮则能摄血，血自归经，而诸症悉除矣。”《正体类要》卷下：“跌仆等症，气血损伤；或思虑伤脾，血虚火动，寤而不寐；或心脾作痛，怠情嗜卧，怔忡惊悸，自汗，大便不调；或血上下妄行。”

近几十年来，中草药的生产实现了一定程度的机械化和半机械化。传统中药往往被认为有效成分含量低、杂质多、质量不稳定，因此用药多建立在经验的基础上，不能与现代医学接轨。为解决这个问题，中药必须走提取和纯化的道路。中药的提取包括浸出、澄清、过滤和蒸发等许多的单元操作。

作为甘草中最重要的活性成分，甘草甜素具有解毒、抗龋齿、抗炎症等功能。甘草甜素无溶血作用，因为它可以通过红细胞表面吸收溶血素从而阻止溶血素向红细胞靠近。甘草次酸则有溶血作用，同时也具有抗炎症、抗过敏、抗消化道溃疡等功能。

【发明内容】

本发明的目的是提供一种新的归脾汤制剂的制备方法。

本发明的归脾汤制剂，其处方组成为：人参、白术、茯苓、黄芪、当归各2重量份，远志、甘草、生姜、大枣、木香各1重量份，其制备方法为：将人参、白术、茯苓、黄芪、当归、远志、甘草、生姜、大枣和木香加水煎煮2-4次，每次0.5-3小时，合并水煎液，过滤后浓缩得流浸膏，加入辅料后用流化床制粒后，制备药物制剂。

上述流浸膏的比重为1.15-1.35，优选1.20-1.30。

上述水煎液可以先进行离心沉淀，得澄清的水煎液，离心的转速为1500-20000转/分钟，优选1500-10000转/分钟，更优选2000-8000转/分钟，最优选3000-5000转/分钟。

上述水煎液可以采用膜过滤的方法过滤。

上述膜过滤包括采用超滤和纳滤的过滤方法之一或将超滤和纳滤结合使用。

上述超滤膜选自二醋酸纤维素膜、三醋酸纤维素膜、氰乙基醋酸纤维素膜、聚砜膜、磺化聚砜膜、聚醚砜膜、磺化聚醚砜膜、聚砜酰胺膜、酚酞侧基聚芳砜膜、聚偏氟乙烯膜、聚丙烯腈膜、聚酰亚胺膜、纤维素膜、甲基丙烯酸甲酯-丙烯腈共聚物膜、聚丙烯腈-二醋酸纤维素共混膜，动态形成的超滤膜，以及上述膜的改性膜之一，其分子截留量为6000-10000以下。

上述超滤的滤膜孔径为：0.22-0.45微米。

上述超滤所采用的膜超滤器可以是商用的中空纤维或平板型超滤膜分离器。

上述纳滤膜分子截留量为500-2000，优选500-1000，更优选700-1000。

上述膜过滤的过程优选将水煎液先经过超滤，再进行纳滤。

上述辅料选自微晶纤维素、粉末状纤维素、甘露糖醇、淀粉、乳糖、明胶、甲基纤维素、糊精、预胶化淀粉、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、聚乙二醇、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、酒石酸，二氧化硅，硬脂酸钙和硬脂酸镁中的一种或多种。

上述药物制剂包括颗粒剂、片剂、胶囊、散剂、滴丸剂。

目前所用的中药提取工艺多采用一定浓度的乙醇提取中药的复方，这样有利于回收溶剂和减少杂质，但是采用醇提的方法背离了中国传统医学3000年以来的治疗疾病的经验积累，在“中药现代化”的指导思想下为了能够较为简单地到达“质量可控”的目的而忽略了“有效性”甚至“安全性”。

综上所述，中药提取分离工艺发展的滞后成为传统中医药发展和生存的瓶颈，必须对原有工艺进行优化、革新和强化。化工分离和传质的强化技术将为此提供有力的保证，实现中医药学科与化学工程的交叉，将有利于实现中药生产装备的现代化。将化学工程的概念、理论引人中药提取分离过程。利用已有的研究成果，结合中药生产的具体情况，从基本影响因素的研究人手，对工艺流程、生产设备、操作条件作全面改造和细致摸索，给出了可行的方案。

为了回归传统医药治疗疾病的精髓，本发明提出了将归脾汤制剂经典方按照“遵古”的指导思想，用水提取药物，结合现代的浓缩、制粒工艺，总结出了与归脾汤制剂最为匹配的制剂工艺参数和适用辅料。最大限度地保留了传统医药的经验积累，而又能适应现代社会快节奏的如片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、滴丸剂等制剂形式。

本发明中确保了甘草甜素的含量稳定，为制剂的规范化生产奠定了基础。通过本发明的实现，可以在将归脾汤制剂中的有效成分最大限度地提取的前提下，降低提取物中杂质如鞣质、多酚、树脂、蛋白质、粘液质等大分子物质和固体微粒有效去除，保留本发明归脾汤制剂中的药效成分，为口服药物制剂的制备提供了便利。

【具体实施方式】

下面实施例进一步描述本发明，但所述实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明。以下实施例中处方为人参、白术、茯苓、黄芪、当归各200克，远志、甘草、生姜、大枣、木香各100克。

实施例1

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次2小时，加水量为药材的12倍，合并水提液，滤过，减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.13-1.18)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，即得本发明的颗粒制剂。

实施例2

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮3次，每次2小时，加水量为药材的8倍，合并水提液，滤过，减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.15-1.29)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，装胶囊，即得到本发明的胶囊制剂。

实施例3

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮3次，每次2小时，加水量为药材的10倍，合并水提液，滤过，减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.15-1.31)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，加入辅料压片，即得到本发明的片剂。

实施例4

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次3小时，加水量为药材的10倍，合并水提液，滤过，减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.20-1.26)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，加入植物油基质，制丸，即得到本发明的滴丸剂。

实施例5

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次2.5小时，加水量为药材的10倍，合并水提液，滤过，减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.19-1.25)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，加入800克植物油，混合均匀，用胶体磨研磨后压制成软胶囊即得到本发明的软胶囊。

实施例6

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮3次，每次1.5小时，加水量为药材的10倍，合并水提液，滤过，减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.20-1.24)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，粉碎，即得到本发明的散剂。

实施例7

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次2小时，加水量为药材的6倍，合并水提液，滤过，滤液用截留分子量为8000的三醋酸纤维素膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液经过系统选用截留分子量为500的卷式纳滤器中处理，其中纳滤加水量可控制在原超滤液的0.85倍左右，得流浸膏(比重为1.18-1.25)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，即得本发明的颗粒制剂。

实施例8

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮3次，每次2小时，加水量为药材的8倍，合并水提液，滤过，滤液用截留分子量为6000的氰乙基醋酸纤维素膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液经过系统选用截留分子量为500的卷式纳滤器中处理，其中纳滤加水量可控制在原超滤液的0.8倍左右，得流浸膏(比重为1.25-1.34)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，装胶囊，即得到本发明的胶囊制剂。

实施例9

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮3次，每次2小时，加水量为药材的6倍，合并水提液，滤过，滤液用截留分子量为10000的聚砜膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液经过系统选用截留分子量为500的卷式纳滤器中处理，其中纳滤加水量可控制在原超滤液的0.75倍左右，得流浸膏(比重为1.28-1.35)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，加入辅料压片，即得到本发明的片剂。

实施例10

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次3小时，加水量为药材的10倍，合并水提液，滤过，滤液用截留分子量为6000的磺化聚砜膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液经过系统选用截留分子量为1000的卷式纳滤器中处理，其中纳滤加水量可控制在原超滤液的0.7倍左右，得流浸膏(比重为1.26-1.30)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，加入植物油基质，制丸，即得到本发明的滴丸剂。

实施例11

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次2.5小时，加水量为药材的10倍，合并水提液，滤过，滤液用截留分子量为8000的聚醚砜膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液经过系统选用截留分子量为2000的卷式纳滤器中处理，其中纳滤加水量可控制在原超滤液的0.75倍左右，得流浸膏(比重为1.21-1.32)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，加入200克植物油，混合均匀，用胶体磨研磨后压制成软胶囊即得到本发明的软胶囊。

实施例12

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮3次，每次1.5小时，加水量为药材的10倍，合并水提液，滤过，滤液用截留分子量为6000的磺化聚醚砜膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液经过系统选用截留分子量为500的卷式纳滤器中处理，其中纳滤加水量可控制在原超滤液的0.65倍左右，得流浸膏(比重为1.20-1.30)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，粉碎，即得到本发明的散剂。

实施例13

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次2小时，加水量为药材的8倍，合并水提液，离心(转速为2000转/分钟)，滤过，滤液用截留分子量为6000的三醋酸纤维素膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.15-1.27)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，即得本发明的颗粒制剂。

实施例14

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮3次，每次2小时，加水量为药材的8倍，合并水提液，离心(转速为2500转/分钟)，滤过，滤液用截留分子量为8000的氰乙基醋酸纤维素膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.20-1.24)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，装胶囊，即得到本发明的胶囊制剂。

实施例15

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次2小时，加水量为药材的8倍，合并水提液，离心(转速为5000转/分钟)，滤过，滤液用截留分子量为6000的聚砜膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.10-1.25)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，加入辅料压片，即得到本发明的片剂。

实施例16

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次3小时，加水量为药材的8倍，合并水提液，离心(转速为3000转/分钟)，滤过，滤液用截留分子量为6000的磺化聚砜膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.24-1.35)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，加入植物油基质，制丸，即得到本发明的滴丸剂。

实施例17

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮2次，每次2.5小时，加水量为药材的8倍，合并水提液，离心(转速为8000转/分钟)，滤过，滤液用截留分子量为6000的聚醚砜膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.21-1.29)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，加入200克植物油，混合均匀，用胶体磨研磨后压制成软胶囊即得到本发明的软胶囊。

实施例18

称取处方量的药材粉碎，用水提取煎煮3次，每次1.5小时，加水量为药材的8倍，合并水提液，离心(转速为10000转/分钟)，滤过，滤液用截留分子量为6000的磺化聚醚砜膜超滤，过滤方式采用错流过滤。超滤工艺的操作条件为：超滤的进液口压力为0.1兆帕，超滤的出液口压力比进液口压力低0.5千帕，超滤时逐步升压。在超滤过程中，采用周期性压力波动，压力波动差为0.1兆帕。超滤所得滤液减压回收溶剂，得流浸膏(比重为1.15-1.30)，加入辅料在流化床内沸腾制粒，粉碎，即得到本发明的散剂。

实验例1-本发明干浸膏的量的确定

将本发明中的实施例1-18流浸膏，不加辅料，直接冷冻干燥得到干浸膏，数据如下表1：

表1 本发明干浸膏的量的数据

通过本发明的实现，可以在将本发明归脾汤制剂中的有效成分最大限度地提取的前提下，降低提取物中杂质如鞣质、多酚、树脂、蛋白质、粘液质等大分子物质和固体微粒有效去除，保留药物的药效成分，为口服药物制剂的制备提供了便利。

实验例2-以高效液相色谱仪进行归脾汤制剂的液相分析研究

一、材料与方法

(一)、实验药品

本研究使用的标准品甘草甜素购自中国药品生物制品检定所。

(二)、仪器设备及实验条件

1.仪器设备

液相泵：Applied Biosystems(ABI)400×2

进样阀：Rheodyne Type 7125(10μL loop)

流动相控制器：ABI自动梯度控制器

检测器：ABI 1000s光二极管阵列检测器

2.分析条件

预柱：μ-Bondapak TMC18(Millipore，Milford，MA，USA)

色谱柱：Cosmosil 5C18-MS，5μm，25cm×4.6mm(Nacalai Tesque，Kyoto，Japan)

流动相：(A)0-50毫摩尔/升KH2PO4，以5％ H3PO4调整至pH 2.5-6.5

        (B)H2O/CH3CN：30/70-10/90(V/V)

流速：1.0毫升/分钟

检测波长：230nm

梯度洗脱程序：如表1

(三)、实验方法

1.不同盐类浓度的流动相的探讨

以最适当的色谱柱，在流动相(A)中，分别使用0、10、20、30、40及50毫摩尔/升的磷酸二氢钾溶液，以表1的梯度洗脱程序进行分析，各组重复二次注射。

表1 分析归脾汤制剂的梯度洗脱程序

2.不同酸碱值的流动相的探讨

以最适化的磷酸二氢钾浓度，在流动相(A)中加入不同量5％的磷酸或氨水，配制不同酸碱度的缓冲溶液，pH值分别为2.5、3.5、4.5、5.5及6.5，各组重复操作两次。

3.不同乙腈比例的流动相的探讨

由于盐类的加入，流动相(B)必须含适量的水，以防止盐类析出，并获得较平整的基线，因此配制不同水/乙腈比例的流动相，分别为30/70、25/75、20/80、15/85及10/90。选择上述最适化的缓冲溶液条件进行分析，每组重复操作两次。

4.配制标准品溶液及制作标准曲线

(1)取10.0毫克的BPB(n-butyl p-hydroxy benzoate)溶于10毫升的70％甲醇水溶液，做为内标准品(IS)溶液。分别称取10.0毫克的甘草甜素，以70％甲醇水溶液配成20毫升标准品母液。然后每种标准品母液再各取5、2、1、0.5、0.1及0.05毫升置于量瓶中，各自加入1毫升内标准品溶液，最后以70％甲醇水溶液配成10毫升标准品溶液。以上述的最适化条件，各浓度重复两次注射，每次注入10微升，取其平均值制作标准曲线。

(2)精密称取1.0克的归脾汤制剂粉末，以70％甲醇水溶液20毫升作为萃取溶剂，超音波震荡30分钟，离心过滤，重复三次，合并萃取液，浓缩至10毫升。取5毫升浓缩液至10毫升量瓶中，加入1毫升内标准品溶液，以70％甲醇水溶液稀释至10毫升。使用0.45μm过滤器过滤，作为定量的检液，重复两次注射，每次注入10微升，取平均值做为分析结果。

(四)、分析条件的适宜性评估

1.重现性

取2.0毫升标准品母液至量瓶中，加入1.0毫升内标准品溶液，以70％甲醇水溶液稀释至10.0毫升，作为检液。同一天内重复六次注射，不同天总计重复六次注射，每次注入10微升。

2.回收率

精密称取1.0克归脾汤制剂粉末，以70％甲醇水溶液20毫升，作为萃取溶剂，超音波震荡30分钟，离心过滤，重复三次，合并萃取液，浓缩至10毫升。取5.0毫升浓缩液至10毫升量瓶，加入1.0毫升标准品母液，再加入1.0毫升内标准品溶液，以70％甲醇水溶液稀释至10.0毫升，经0.45μm过滤器过滤后作为定量的检液。重复两次注射，每次注入10微升，取两次注射的平均结果。

3.检测限

逐步稀释标准品溶液，注入色谱柱中检测，直到S/N比(信噪比)小于3，计算注入量及其浓度。

4.制剂成分的定量分析

精密称取1.0克归脾汤制剂颗粒剂(实施例13)，以70％甲醇水溶液20毫升作为萃取溶剂，超音波震荡30分钟，离心过滤，重复三次，合并萃取液，浓缩至10毫升。取5毫升浓缩液至10毫升量瓶中，加入1毫升内标准品溶液，以70％甲醇水溶液稀释至10毫升，经0.45μm过滤器过滤，作为定量的检液。重复两次注射，每次注入10微升，取其平均值。

二、结果与讨论

(一)分析条件的探讨

为探讨磷酸盐对分辨率的影响，在流动相(A)中加入不同浓度的磷酸盐。由于较高的盐类浓度会降低色谱柱寿命与增加泵的损耗，故选择30mM磷酸盐作为流动相(A)的浓度。

接下来将溶液的pH值分别调整至2.5、3.5、4.5、5.5及6.5。当pH值为2.5至4.5时，对指标成分的滞留时间并无明显的差异。pH值为2.5时，化合物4和5的理论板数较pH 3.5及pH 4.5高(分别为2.5×10⁴与2.82×10⁴)。当pH高于5.5时，基线会发生漂移的现象。故选择以30毫摩尔/升KH₂PO₄水溶液，以5％H₃PO₄调整pH值至2.5作为流动相(A)的组成。

由于流动相(A)中含有盐类，当与完全为有机溶剂的流动相(B)混合时，很容易析出盐类。且考虑当二流动相混合时会有温度的变化，可能导致基线的不稳，故主体为有机溶剂的流动相(B)应包含适量的水，以防止盐类析出并能维持平整的基线。本实验将水/乙腈的体积比例分别设定为30/70、25/75、20/80、15/85及10/90，来探讨流动相(B)的比例对滞留时间的影响。当乙腈的比例低于80％时，液相时间超过90分钟，乙腈比例愈高，各成分的滞留时间愈短。当乙腈的比例在85％以上时，皆有不错的分辨率，但是当比例太高时，较容易造成盐类析出。故选择水：乙腈的体积比例为15：85作为流动相(B)的组成。

分析条件的适宜性评估

1.标准曲线的制作

以层峰面积与内标准品面积的比值(y)与成分浓度(x，微克/毫升)的关系，作图可得到标准曲线(见表2)。除了化合物4以外，其余化合物的相关系数都大于0.999，显示在此实验范围有非常好的线性关系，更增加对此定量法的可信度。化合物4可能是因为流动相(A)及(B)的梯度变化在该时间内较大，导致基线稍微位移，仅管如此，其相关系数仍接近0.999。

表2 指标成分的标准曲线

2.重现性

以最适化分析条件对各化合物进行定量，为探讨本实验的重现性，同一天内重复注射六次，不同天也重复注射总计六次，分别以层峰面积和滞留时间计算各成分的相对标准差(RSD)。结果如表3所示，同一天的层峰面积比的相对标准差在0.76-2.26％之间，滞留时间的相对标准差在0.45-1.33％之间；不同天的层峰面积比的相对标准差在0.84-2.94％之间，滞留时间的相对标准差在0.53-1.88％之间。大致上来说，不同天的实验结果与同一天并没有多大的差异，这表示分析的重现性较好。

表3 分析条件的重现性评估

实验例3-本发明制剂指标物质含量测定

将实施例1-18流浸膏，不加辅料，直接冷冻干燥得到干浸膏按照以上测试条件检测含量，所得甘草甜素含量如下：

表1 样品中有效成分甘草甜素考察

结论：本发明中确保了甘草甜素的含量稳定，为制剂的规范化生产奠定了基础。通过本发明的实现，可以在将归脾汤制剂中的有效成分最大限度地提取的前提下，降低提取物中杂质如鞣质、多酚、树脂、蛋白质、粘液质等大分子物质和固体微粒有效去除，保留本发明归脾汤制剂中的药效成分，为口服药物制剂的制备提供了便利。

本实验的目的拟开发归脾汤制剂的分析方法。利用反相HPLC分析方法，液相系统的流动相(A)为30毫摩尔/升KH2PO4及5％ H3PO4(pH 2.5)，流动相(B)为H2O/CH3CN＝15/85(V/V)，流动相(A)的比率自100％至35％梯度洗脱。色谱柱为COSMOSIL 5C₁₈-MS，检测波长为230nm。结果可在90分钟内，成功地分离甘草甜素指标成分，并于方剂萃取液中进行各成分的定量。

目前对中药的分析是以高效液相色谱为主，要建立完善的药物质控制度，做好中药的质量评估及把关，必须开发出稳定的分析方法，并将其标准化及简易化。考虑目前业界实施中药复方质控的可行性，开发的简便分析方法，同时定量了归脾汤制剂中的甘草甜素化学指针成分。

本发明在传统中医药学的经典理论指导下，运用了现代归脾汤制剂工艺，最大限度地保留了传统医药的经验积累，而又能适应现代社会快节奏的，如散剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂和胶囊等制剂形式。

Claims (8)

1.一种归脾汤制剂的制备方法，其处方组成为：人参、白术、茯苓、黄芪、当归各2重量份，远志、甘草、生姜、大枣、木香各1重量份，其特征在于将人参、白术、茯苓、黄芪、当归、远志、甘草、生姜、大枣和木香加水煎煮2-4次，每次0.5-3小时，合并水煎液，过滤后浓缩得流浸膏，加入辅料后用流化床制粒后，制备药物制剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述流浸膏的比重为1.15-1.35。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述流浸膏的比重为1.20-1.30。

4..根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述水煎液可以先进行离心沉淀，得澄清的水煎液，离心的转速为1500-20000转/分钟。

5.根据权利要求1-4任一所述的制备方法，其特征在于所述水煎液可以采用膜过滤的方法过滤。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述膜过滤包括超滤和纳滤。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述膜过滤的过程为将水煎液先经过超滤，再进行纳滤。

8.根据权利要求1-7任一所述的制备方法，其特征在于所述辅料选自微晶纤维素、粉末状纤维素、甘露糖醇、淀粉、乳糖、明胶、甲基纤维素、糊精、预胶化淀粉、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、聚乙二醇、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、酒石酸，二氧化硅，硬脂酸钙和硬脂酸镁中的一种或多种。