发明内容
本发明的目的在于提供一种药物组合物新的治疗用途,具体涉及到一种药物组合物在制备防治过敏性哮喘中的应用。
本发明的药物组合物原料由黄芪等16味药材组成,其中黄芪66份、赤芍27份、丹参27份、当归27份、川芎27份、桃仁27份、红花13份、制乳香13份、制没药13份、鸡血藤20份、牛膝27份、桂枝20份、桑枝27份、地龙27份、全蝎13份、水蛭27份。本发明药物组合物具有益气活血、化瘀通络的作用,目前临床常用于气虚血滞、脉络瘀阻所致中风中经络,半身不遂、肢体麻木、口眼歪斜、舌强语謇及胸痹心痛、胸闷、心悸、气短;脑梗塞、冠心病心绞痛属上述症候者。
本发明药物组合物的制备辅料可以是药剂学上可接受的任意赋形剂或载体。
本发明药物组合物的应用可以是药剂学上可接受的剂型,包括丸剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、滴丸剂、口服液体制剂等。
我们将本发明的胶囊剂型大量应用于临床治疗心脑血管疾病时,偶然发现其还具有治疗过敏性哮喘作用的现象,为了进一步开发其治疗用途,我们进行一系列的药效学研究,现将主要的药效实验详述如下:
实验1:I型变态反应-肥大细胞脱颗粒的影响作用
1.试验材料
1.1受试药物:
取地龙、全蝎超微粉碎备用;其余黄芪等十四味药材超微粉碎成细粉,与上述粉末配研,过筛,混匀,用蒸馏水配制成适量浓度备用。
1.2受试动物:SD大鼠,雌雄各半,西安医科大学实验动物部提供。
2.试验方法与结果
2.1方法
40只大鼠按体重随机分为4组,分别为空白对照组、色甘酸钠组、本发明低剂量组、本发明高剂量组,每天灌胃给药1次,连续给药14天。将大鼠头部皮下注射1∶5稀释的抗卵白蛋白血清0.1-0.2ml,48h后,尾静脉注射1ml卵白蛋白伊文思兰溶液进行攻击。攻击后30min将动物处死,剥去头部皮肤,取下颅骨,放入95%乙醇处理1h,放入无水甲醇过夜。肥大细胞用0.18%中性红处理后,流水冲洗,用打头针将颅骨的一侧固定在小木板上,用镊子小心剥离骨膜,展开于载玻片上,干燥,封固。在目镜中装有标尺显微镜下直接观察,选择肥大细胞密度较高的2-3个区域,计算每mm2的肥大细胞数。并在高倍镜下,对肥大细胞进行观察,并把其分成脱颗粒和未脱颗粒两类,算出细胞脱颗粒的百分率。
2.2观察指标
肥大细胞脱颗粒(%)=(脱颗粒肥大细胞/肥大细胞)×100%
2.2试验结果
结果见表1。
表1 本发明对大鼠肥大细胞脱颗粒的影响作用
**与空白对照组比较,P<0.01;*与空白对照组比较,P<0.05。#与阳性对照组比较,P<0.05。
试验结果表明,各给药组与空白组比较,具有显著的疗效(P<0.01或P<0.05),其中本发明高剂量组疗效最佳,与阳性对照组色甘酸钠组比较,具有明显优势(P<0.05),即本发明对肥大细胞脱颗粒具有显著的抑制作用,能抑制此类I型变态反应。
实验2:卵白蛋白气雾吸入引喘抑制实验
1.试验材料
1.1 受试药物:同实验1。
1.2 受试动物:豚鼠,雌雄各半,西安医科大学实验动物部提供。
2.试验方法与结果
2.1 方法
取200-250g豚鼠40只,雌雄各半,先于右后退外侧肌肉注射4%卵白蛋白生理盐水溶液0.2ml/只,同时腹腔注射4%氢氧化铝凝胶0.2ml致敏。从致敏第二天起,动物随机分为4组,分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组。给药组灌胃给药,共14天,末次给药后,将动物放于密闭的玻璃钟罩内,待安静后,启动空气压缩机,以53kpa(400mmHg)的恒压喷入3.5%卵白蛋白生理盐水30秒钟,观察6分钟内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期与发生抽搐的动物数。
2.2 试验结果
结果见表2中。
表2 本发明对药物引起的豚鼠喘息作用的影响(x±SD)
**与空白对照组比较,P<0.01;***与空白对照组比较,P<0.001。
试验结果表明,各给药组与空白组比较,具有及其显著的疗效(P<0.01或P<0.001),并且疗效成量效关系,由此可见,本发明能非常显著地延长卵白蛋白生理盐水溶液引喘豚鼠的潜伏期,能减少抽搐动物只数,提示本发明具有良好的平喘作用。
实验3:对豚鼠枸橼酸引咳作用的影响实验
1.试验材料
1.1 受试药物:同实验1。
1.2 受试动物:豚鼠,雌雄各半,西安医科大学实验动物部提供。
2.试验方法与结果
2.1 方法
将350g-450g的豚鼠40只,按体重随机分为5组,分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组、复方甘草片组,连续灌胃给药7天,每天一次,末次给药后1h,将豚鼠逐一放入玻璃钟罩内,用喷雾器喷17.5%枸橼酸溶液20s引咳,观察并记录豚鼠咳嗽潜伏期(从喷雾开始到出现第一次咳嗽的时间)和5min内咳嗽的次数。
2.2 试验结果
结果见表3中。
表3 本发明对豚鼠枸橼酸引咳的影响作用(x±SD)
与空白对照组比较,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。与模型对照组比较,#与模型对照组比较,P<0.05;##P<0.01。
实验结果表明,各给药组与空白组比较,具有显著的疗效(P<0.05、P<0.01或P<0.001),其中本发明疗效呈明显的量效关系,本发明高剂量组疗效最佳,与阳性对照组复方甘草片组比较,在延长咳嗽潜伏期方面具有明显优势(P<0.01),在抑制5min内咳嗽次数方面具有优势(P<0.05)。
实验4:对小鼠气管酚红排泌量的影响作用
1.试验材料
1.1受试药物:同实验1。
1.2受试动物:ICR小鼠,雌雄各半,西安医科大学实验动物部提供。
2.试验方法与结果
2.1方法
将18-22g小鼠50只,按体重随机分为5组,分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组、氯化铵组,连续灌胃给药7天,每天一次,末次给药0.5h后腹腔注射0.5%酚红生理盐水溶液10mL.kg-1,再0.5h后脱颈椎处死小鼠,剥离气管,插入灌洗器,吸取5%NaHCO3溶液0.5ml来回灌洗呼吸道3次,将灌洗液注入离心管中,重复3次,共用洗液1.5ml灌洗9次,合并灌洗液,离心(2000rpm,5min),每管取上清0.2ml置于96孔板中,用酶标仪于546nm处测光密度OD值。
2.2试验结果
结果见表4中。
表4 本发明对小鼠气管酚红排泌量的影响(x±SD)
与空白对照组比较,**P<0.01;*P<0.05。
试验结果表明,与空白对照组比较,本发明中、高剂量组与阳性对照组均能显著促进小鼠呼吸道酚红的排泌量(P<0.01或P<0.05)。
实验5:对小鼠二甲苯致炎的影响作用
1.试验材料
1.1受试药物:同实验1。
1.2受试动物:ICR小鼠,雄性,西安医科大学实验动物部提供。
2.试验方法与结果
2.1方法
将18-22g雄性小鼠50只按体重随机分为5组,分别为模型组、本发明低、中、高剂量组、地塞米松组,连续灌胃给药7天,每天一次,末次给药1h后,每只小鼠右耳前后两面涂30μl二甲苯致炎,左耳不涂以作对照,1h后处死小鼠,剪下左、右耳,用8mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片称重,以左右耳差值作为肿胀度。
2.2试验结果:见表5。
表5 本发明对小鼠二甲苯致炎的影响作用(x±SD)
与空白对照组比较,**P<0.01;*P<0.05。
实验结果表明,与模型组比较,本发明各剂量组与阳性对照组均能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀(P<0.01或P<0.05),其中本发明高剂量组与阳性对照组疗效相当。
实验6:本发明对小鼠棉球肉芽肿的影响作用
1.试验材料
1.1受试药物:同实验1。
1.2受试动物:ICR小鼠,雄性,西安医科大学实验动物部提供。
2.试验方法与结果
2.1方法
将18-22g小鼠50只,腹腔注射3.5%水合氯醛10ml/kg麻醉,在无菌操作下将15mg灭菌棉球1只植入小鼠右蹊部(每只棉球高压灭菌后滴150μl 25%青霉素钠和链霉素混合液预处理)。术后按体重随机分为5组,于术后第二天开始灌胃给药,连续7天,每天一次,于第8天脱颈椎处死小鼠,剥离棉球肉芽肿,于80℃烘箱中干燥3h后称重,减去原棉球重量即为肉芽肿净重。
2.2试验结果
结果见表6中。
表6 本发明对小鼠棉球肉芽肿的影响作用(x±SD)
与模型组比较,**P<0.01;*P<0.05。
试验结果表明,与模型组比较,本发明各剂量组与阳性对照组均能显著抑制小鼠棉球肉芽肿的增生(P<0.01或P<0.05),其中本发明高剂量组与阳性对照组比较,疗效接近。
实验7:本发明对正常小鼠碳粒廓清的影响作用
1.试验材料
1.1受试药物:同实验1。
1.2受试动物:ICR小鼠,雌雄各半,西安医科大学实验动物部提供。
2.试验方法与结果
2.1方法
将18-22g小鼠50只,随机分为5组,连续给药7天,末次给药后1h,小鼠尾静脉注射印度墨汁稀释液(使用前以生理盐水稀释4倍),注射后分别于2、12min用定量玻璃毛细管从眼眶内静脉丛取血20μl,溶于1ml0.1%的Na2CO3溶液,在波长675nm条件下测定光密度值(OD)。最后将小鼠脱颈椎处死,分别取肝、脾重量,依照下式计算廓清指数κ和校正廓清指数α。
κ=(LogOD2-LogOD1)/(t2-t1)
α=κ1/3(体重/肝脾合重)
2.2试验结果
结果见表7中。
表7 本发明对正常小鼠弹力廓清的影响作用(x±SD)
与正常组比较,**P<0.01;*P<0.05。
由表7结果显示,与正常对照组比较,本发明各剂量组与阳性对照组均能显著提高正常小鼠碳粒吞噬指数(P<0.01或P<0.05),其中本发明中、高剂量组疗效与阳性对照组相当,说明了本发明与玉屏风颗粒均可明显增强小鼠非特异性免疫功能。
实验8:本发明的被动皮肤过敏试验(PCA)
1.试验材料
1.1受试药物:同实验1。
1.2受试动物:SD大鼠,雌雄各半,西安医科大学实验动物部提供。
2.试验方法与结果
2.1方法
将大鼠按体重随机分为4组,每组10只,分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组,在抗原攻击前连续灌胃给药14天。抗血清制备:将上述动物用天花粉氢氧化铝混悬液四只脚掌注射,每只脚掌注射0.1ml,共0.4ml。10-15天成熟,眼球放血约10ml,以3000转/min离心15min,取上层血清即得抗血清。被动皮肤致敏:将试验各组大鼠背部脱毛,脊柱两侧距中线1.5cm,各取两点,每点间隔2cm,面积约1×1cm2,共4点。分别在背部皮肤内注射抗血清的不同稀释度(1:30、1:40)。48h后进行定量的相应抗原攻击。尾静脉注射天花粉加伊文思蓝溶液1mg/kg,30min后断头处死。观察指标:皮内注射抗血清的局部皮肤反应,并测量伊文思蓝渗出的蓝斑直径大小。计算PCA抑制百分率(%)。PCA抑制百分率=(空白对照组蓝斑直径-用药组蓝斑直径)/空白对照组蓝斑直径×100%。
2.2试验结果
结果见表8中。
表8 本发明对大鼠被动皮肤过敏反应的影响作用(x±SD)
与空白对照组比较,**P<0.01;*P<0.05。
由表8结果显示,本发明各剂量组均能显著减少抗血清稀释度在1∶30、1∶40时蓝斑直径,且有良好的量效关系,表明本发明对被动皮肤过敏反应有明显的抑制作用。
实验9:本发明对小鼠迟发性足垫反应试验
1.试验材料
1.1受试药物:同实验1。
1.2受试动物:NIH小鼠,雌雄各半,西安医科大学实验动物部提供。
2.试验方法与结果
2.1方法
将小鼠按体重随机分组,每组10只,分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组,致敏前灌胃给药5天,致敏后继续灌胃给药5天,共给药10天。致敏5天后NIH小鼠颈部皮下注射5%绵羊红细胞(SRBC)0.05ml/只致敏。6天后右足垫皮下注射5%绵羊红细胞0.02ml进行攻击。左足注射等量生理盐水作对照。24h后,末次给药50min后处死动物。从踝关节部位剪下两足称重。求出两足的重量差,计算足肿胀抑制率。
足肿胀抑制率=(空白对照组足肿胀程度-用药组足肿胀程度)/空白对照组足肿胀程度×100%。
2.2试验结果
结果见表9中。
表9 本发明对绵羊红细胞引起小鼠迟发性足垫反应的影响情况(x±SD)
与空白对照组比较,*P<0.05。
由表9结果显示,本发明能显著抑制足垫肿胀程度(P<0.05),中、高剂量组抑制率达到35%以上,表明本发明对抑制绵羊红细胞引发的小鼠迟发性免疫反应效果良好。
综上所述,本发明在抑制I型变态反应、迟发性变态反应、止咳平喘、抗炎、增强非特异性免疫功能、抗皮肤过敏等方面均具有良好疗效,其抗变态反应性疾病的防治作用不但是多靶点起效,而且是多部位多器官有效,这样一种作用广泛有效的药物很值得进一步研究、开发和利用。