CN101433609B

CN101433609B - 一种药物组合物在制备防治i型变态反应性疾病药物中的应用

Info

Publication number: CN101433609B
Application number: CN2008102325394A
Authority: CN
Inventors: 赵涛
Original assignee: SHAANXI BUCHANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: Shaanxi Buchang Pharmaceutical Co.,Ltd.
Priority date: 2008-12-03
Filing date: 2008-12-03
Publication date: 2011-01-26
Anticipated expiration: 2028-12-03
Also published as: CN101433609A

Abstract

本发明涉及一种药物组合物在制备防治I型变态反应性疾病药物中的新用途，处方由黄芪66份、赤芍27份、丹参27份、当归27份、川芎27份、桃仁27份、红花13份、制乳香13份、制没药13份、鸡血藤20份、牛膝27份、桂枝20份、桑枝27份、地龙27份、全蝎13份、水蛭27份组成，剂型包括丸剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、滴丸剂或口服液体制剂。本发明目的在于提供一种药物组合物新的治疗用途，扩大该发明的临床应用范围，避免良好药物资源的浪费。

Description

一种药物组合物在制备防治I型变态反应性疾病药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种药物组合物在制备防治I型变态反应性疾病药物中的应用。

背景技术

变态反应又称过敏反应，超敏反应，是指已被某种抗原致敏的机体再次受到相同抗原刺激时发生的超常的或病理性免疫应答，其表现为生理功能紊乱或组织细胞损伤。根据变态反应的发生机制，通常分为IV型，前三型由抗体介导，第IV型为细胞免疫介导，临床上发生的变态反应常见两型或三型并存，以一种为主，而一种抗原在不同条件下可引起不同类型的变态反应。在所有型变态反应中发生率最高的为I型，包括过敏性哮喘、过敏性皮肤病、过敏性鼻炎、过敏性眼病、特应性皮炎、急慢性荨麻疹、过敏性休克等多种类型，在上述诸多类型中，过敏性哮喘因其多发常见，且危害性大而引起人们的高度重视。

近三十年来，全世界对防治哮喘病的药物进行了大量的研究开发，目前已用于临床的药物大致有β₂-肾上腺素能受体激动剂类、α-肾上腺素能受体拮抗剂类、氨茶碱类、胆碱能受体拮抗剂类、钙离子拮抗剂类、钾离子通道激动剂、糖皮质激素、细胞膜稳定剂(如色甘酸钠、尼多考米钠)、抗组胺类、白三烯受体拮抗剂、血小板活化因子(PAF)拮抗剂、特异性免疫治疗剂、非特异性免疫治疗剂等。由于哮喘的发病机理非常复杂，是多因素引起、多细胞介质参与的炎性疾病，上述这些作用机理单一的药物难以满足临床治疗的需要，使得哮喘病症的长期治疗存在着易复发、高耐受、强依赖、毒副作用大等问题。

传统的中医药由于其科学的整体治病理论，在治疗变态反应性疾病中具有巨大的优势，同时由于其毒副作用小，对于需长期服药预防治疗的变态性疾病如过敏性哮喘、过敏性鼻炎等的治疗上是很理想的手段。

脑心通胶囊上市十多年来，一直在心脑血管疾病治疗中起着重要作用，该药物成分全面，脑心及标本同治，制备方法简单先进，临床疗效显著，起效迅速，深受广大患者的青睐，市场销售额达到数十亿元。为此，本产品的发明者申请了一系列的相关专利，其中03114481.0和01128760.8公开了产品处方比例；200510041654.X公开了产品的制备工艺；200610042977.5等5项申请分别公开了口服液、口腔崩解片、微丸、软胶囊、滴丸、颗粒剂等剂型的制备方法，由此可见该产品的开发应用，对于拥有该产品的生产企业来说具有非常重要的意义。我们在进一步大量的临床使用中，发现脑心通胶囊除了主治功能外，还具有防治过敏性哮喘的良好疗效，并且起效迅速，不良反应少等优点。因此，为了进一步开发脑心通处方新的治疗用途，减少药物的资源浪费，在前人研究的基础上结合我们的临床发现，本发明将对脑心通处方进行了一系列药效研究，为更广泛的临床应用打下坚实基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药物组合物新的治疗用途，具体涉及到一种药物组合物在制备防治I型变态反应性疾病中的应用。

本发明的药物组合物原料由黄芪等16味药材组成，其中黄芪66份、赤芍27份、丹参27份、当归27份、川芎27份、桃仁27份、红花13份、制乳香13份、制没药13份、鸡血藤20份、牛膝27份、桂枝20份、桑枝27份、地龙27份、全蝎13份、水蛭27份。本发明药物组合物具有益气活血、化瘀通络的作用，目前临床常用于气虚血滞、脉络瘀阻所致中风中经络，半身不遂、肢体麻木、口眼歪斜、舌强语謇及胸痹心痛、胸闷、心悸、气短；脑梗塞、冠心病心绞痛属上述症候者。

本发明药物组合物的制备辅料可以是药剂学上可接受的任意赋形剂或载体。

本发明药物组合物的应用可以是药剂学上可接受的剂型，包括丸剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、滴丸剂、口服液体制剂等。

我们将本发明的胶囊剂型大量应用于临床治疗心脑血管疾病时，偶然发现其还具有治疗过敏性哮喘作用的现象，为了进一步开发其治疗用途，我们进行一系列的药效学研究，现将主要的药效实验详述如下：

实验1：I型变态反应-肥大细胞脱颗粒的影响作用

1.试验材料

1.1受试药物：

取地龙、全蝎超微粉碎备用；其余黄芪等十四味药材超微粉碎成细粉，与上述粉末配研，过筛，混匀，用蒸馏水配制成适量浓度备用。

1.2受试动物：SD大鼠，雌雄各半，西安医科大学实验动物部提供。

2.试验方法与结果

2.1 方法

40只大鼠按体重随机分为4组，分别为空白对照组、色甘酸钠组、本发明低剂量组、本发明高剂量组，每天灌胃给药1次，连续给药14天。将大鼠头部皮下注射1：5稀释的抗卵白蛋白血清0.1-0.2ml，48h后，尾静脉注射1ml卵白蛋白伊文思兰溶液进行攻击。攻击后30min将动物处死，剥去头部皮肤，取下颅骨，放入95％乙醇处理1h，放入无水甲醇过夜。肥大细胞用0.18％中性红处理后，流水冲洗，用打头针将颅骨的一侧固定在小木板上，用镊子小心剥离骨膜，展开于载玻片上，干燥，封固。在目镜中装有标尺显微镜下直接观察，选择肥大细胞密度较高的2-3个区域，计算每mm²的肥大细胞数。并在高倍镜下，对肥大细胞进行观察，并把其分成脱颗粒和未脱颗粒两类，算出细胞脱颗粒的百分率。

2.2 观察指标

肥大细胞脱颗粒(％)＝(脱颗粒肥大细胞/肥大细胞)×100％

2.2 试验结果

结果见表1。

表1 本发明对大鼠肥大细胞脱颗粒的影响作用

**与空白对照组比较，P<0.01；*与空白对照组比较，P<0.05。#与阳性对照组比较，P<0.05。

试验结果表明，各给药组与空白组比较，具有显著的疗效(P<0.01或P<0.05)，其中本发明高剂量组疗效最佳，与阳性对照组色甘酸钠组比较，具有明显优势(P<0.05)，即本发明对肥大细胞脱颗粒具有显著的抑制作用，能抑制此类I型变态反应。

实验2：卵白蛋白气雾吸入引喘抑制实验

1.试验材料

1.1 受试药物：同实验1。

1.2 受试动物：豚鼠，雌雄各半，西安医科大学实验动物部提供。

2.试验方法与结果

2.1 方法

取200-250g豚鼠40只，雌雄各半，先于右后退外侧肌肉注射4％卵白蛋白生理盐水溶液0.2ml/只，同时腹腔注射4％氢氧化铝凝胶0.2ml致敏。从致敏第二天起，动物随机分为4组，分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组。给药组灌胃给药，共14天，末次给药后，将动物放于密闭的玻璃钟罩内，待安静后，启动空气压缩机，以53kpa(400mmHg)的恒压喷入3.5％卵白蛋白生理盐水30秒钟，观察6分钟内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期与发生抽搐的动物数。

2.2 试验结果

结果见表2中。

表2 本发明对药物引起的豚鼠喘息作用的影响(x±SD)

**与空白对照组比较，P<0.01；***与空白对照组比较，P<0.001。

试验结果表明，各给药组与空白组比较，具有及其显著的疗效(P<0.01或P<0.001)，并且疗效成量效关系，由此可见，本发明能非常显著地延长卵白蛋白生理盐水溶液引喘豚鼠的潜伏期，能减少抽搐动物只数，提示本发明具有良好的平喘作用。

实验3：对豚鼠枸橼酸引咳作用的影响实验

1.试验材料

1.1 受试药物：同实验1。

2.试验方法与结果

2.1 方法

将350g-450g的豚鼠40只，按体重随机分为5组，分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组、复方甘草片组，连续灌胃给药7天，每天一次，末次给药后1h，将豚鼠逐一放入玻璃钟罩内，用喷雾器喷17.5％枸橼酸溶液20s引咳，观察并记录豚鼠咳嗽潜伏期(从喷雾开始到出现第一次咳嗽的时间)和5min内咳嗽的次数。

2.2 试验结果

结果见表3中。

表3 本发明对豚鼠枸橼酸引咳的影响作用(x±SD)

与空白对照组比较，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。与模型对照组比较，#与模型对照组比较，P<0.05；##P<0.01。

实验结果表明，各给药组与空白组比较，具有显著的疗效(P<0.05、P<0.01或P<0.001)，其中本发明疗效呈明显的量效关系，本发明高剂量组疗效最佳，与阳性对照组复方甘草片组比较，在延长咳嗽潜伏期方面具有明显优势(P<0.01)，在抑制5min内咳嗽次数方面具有优势(P<0.05)。

实验4：对小鼠气管酚红排泌量的影响作用

1.试验材料

1.1 受试药物：同实验1。

1.2 受试动物：ICR小鼠，雌雄各半，西安医科大学实验动物部提供。

2.试验方法与结果

2.1 方法

将18-22g小鼠50只，按体重随机分为5组，分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组、氯化铵组，连续灌胃给药7天，每天一次，末次给药0.5h后腹腔注射0.5％酚红生理盐水溶液10mL.kg^-1，再0.5h后脱颈椎处死小鼠，剥离气管，插入灌洗器，吸取5％NaHCO₃溶液0.5ml来回灌洗呼吸道3次，将灌洗液注入离心管中，重复3次，共用洗液1.5ml灌洗9次，合并灌洗液，离心(2000rpm，5min)，每管取上清0.2ml置于96孔板中，用酶标仪于546nm处测光密度OD值。

2.2 试验结果

结果见表4中。

表4 本发明对小鼠气管酚红排泌量的影响(x±SD)

与空白对照组比较，**P<0.01；*P<0.05。

试验结果表明，与空白对照组比较，本发明中、高剂量组与阳性对照组均能显著促进小鼠呼吸道酚红的排泌量(P<0.01或P<0.05)。

实验5：对小鼠二甲苯致炎的影响作用

1.试验材料

1.1 受试药物：同实验1。

1.2 受试动物：ICR小鼠，雄性，西安医科大学实验动物部提供。

2.试验方法与结果

2.1 方法

将18-22g雄性小鼠50只按体重随机分为5组，分别为模型组、本发明低、中、高剂量组、地塞米松组，连续灌胃给药7天，每天一次，末次给药1h后，每只小鼠右耳前后两面涂30μl二甲苯致炎，左耳不涂以作对照，1h后处死小鼠，剪下左、右耳，用8mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片称重，以左右耳差值作为肿胀度。

2.2 试验结果：见表5。

表5 本发明对小鼠二甲苯致炎的影响作用(x±SD)

与空白对照组比较，**P<0.01；*P<0.05。

实验结果表明，与模型组比较，本发明各剂量组与阳性对照组均能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀(P<0.01或P<0.05)，其中本发明高剂量组与阳性对照组疗效相当。

实验6：本发明对小鼠棉球肉芽肿的影响作用

1.试验材料

1.1 受试药物：同实验1。

2.试验方法与结果

2.1 方法

将18-22g小鼠50只，腹腔注射3.5％水合氯醛10ml/kg麻醉，在无菌操作下将15mg灭菌棉球1只植入小鼠右蹊部(每只棉球高压灭菌后滴150μl25％青霉素钠和链霉素混合液预处理)。术后按体重随机分为5组，于术后第二天开始灌胃给药，连续7天，每天一次，于第8天脱颈椎处死小鼠，剥离棉球肉芽肿，于80℃烘箱中干燥3h后称重，减去原棉球重量即为肉芽肿净重。

2.2 试验结果

结果见表6中。

表6 本发明对小鼠棉球肉芽肿的影响作用(x±SD)

与模型组比较，**P<0.01；*P<0.05。

试验结果表明，与模型组比较，本发明各剂量组与阳性对照组均能显著抑制小鼠棉球肉芽肿的增生(P<0.01或P<0.05)，其中本发明高剂量组与阳性对照组比较，疗效接近。

实验7：本发明对正常小鼠碳粒廓清的影响作用

1.试验材料

1.1 受试药物：同实验1。

2.试验方法与结果

2.1 方法

将18-22g小鼠50只，随机分为5组，连续给药7天，末次给药后1h，小鼠尾静脉注射印度墨汁稀释液(使用前以生理盐水稀释4倍)，注射后分别于2、12min用定量玻璃毛细管从眼眶内静脉丛取血20μl，溶于1ml0.1％的Na₂CO₃溶液，在波长675nm条件下测定光密度值(OD)。最后将小鼠脱颈椎处死，分别取肝、脾重量，依照下式计算廓清指数K和校正廓清指数α。

κ＝(LogOD₂-LogOD₁)/(t₂-t₁)

α＝κ^1/3(体重/肝脾合重)

2.2 试验结果

结果见表7中。

表7 本发明对正常小鼠弹力廓清的影响作用(x±SD)

与正常组比较，**P<0.01；*P<0.05。

由表7结果显示，与正常对照组比较，本发明各剂量组与阳性对照组均能显著提高正常小鼠碳粒吞噬指数(P<0.01或P<0.05)，其中本发明中、高剂量组疗效与阳性对照组相当，说明了本发明与玉屏风颗粒均可明显增强小鼠非特异性免疫功能。

实验8：本发明的被动皮肤过敏试验(PCA)

1.试验材料

1.1 受试药物：同实验1。

1.2 受试动物：SD大鼠，雌雄各半，西安医科大学实验动物部提供。

2.试验方法与结果

2.1 方法

将大鼠按体重随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组，在抗原攻击前连续灌胃给药14天。抗血清制备：将上述动物用天花粉氢氧化铝混悬液四只脚掌注射，每只脚掌注射0.1ml，共0.4ml。10-15天成熟，眼球放血约10ml，以3000转/min离心15min，取上层血清即得抗血清。被动皮肤致敏：将试验各组大鼠背部脱毛，脊柱两侧距中线1.5cm，各取两点，每点间隔2cm，面积约1×1cm²，共4点。分别在背部皮肤内注射抗血清的不同稀释度(1：30、1：40)。48h后进行定量的相应抗原攻击。尾静脉注射天花粉加伊文思蓝溶液1mg/kg，30min后断头处死。观察指标：皮内注射抗血清的局部皮肤反应，并测量伊文思蓝渗出的蓝斑直径大小。计算PCA抑制百分率(％)。PCA抑制百分率＝(空白对照组蓝斑直径-用药组蓝斑直径)/空白对照组蓝斑直径×100％。

2.2 试验结果

结果见表8中。

表8 本发明对大鼠被动皮肤过敏反应的影响作用(x±SD)

与空白对照组比较，**P<0.01；*P<0.05。

由表8结果显示，本发明各剂量组均能显著减少抗血清稀释度在1：30、1：40时蓝斑直径，且有良好的量效关系，表明本发明对被动皮肤过敏反应有明显的抑制作用。

实验9：本发明对小鼠迟发性足垫反应试验

1.试验材料

1.1 受试药物：同实验1。

1.2 受试动物：NIH小鼠，雌雄各半，西安医科大学实验动物部提供。

2.试验方法与结果

2.1 方法

将小鼠按体重随机分组，每组10只，分别为空白对照组、本发明低、中、高剂量组，致敏前灌胃给药5天，致敏后继续灌胃给药5天，共给药10天。致敏5天后 NIH小鼠颈部皮下注射5％绵羊红细胞(SRBC)0.05ml/只致敏。6天后右足垫皮下注射5％绵羊红细胞0.02ml进行攻击。左足注射等量生理盐水作对照。24h后，末次给药50min后处死动物。从踝关节部位剪下两足称重。求出两足的重量差，计算足肿胀抑制率。

足肿胀抑制率＝(空白对照组足肿胀程度-用药组足肿胀程度)/空白对照组足肿胀程度×100％。

2.2 试验结果

结果见表9中。

表9 本发明对绵羊红细胞引起小鼠迟发性足垫反应的影响情况(x±SD)

与空白对照组比较，*P<0.05。

由表9结果显示，本发明能显著抑制足垫肿胀程度(P<0.05)，中、高剂量组抑制率达到35％以上，表明本发明对抑制绵羊红细胞引发的小鼠迟发性免疫反应效果良好。

综上所述，本发明在抑制I型变态反应、迟发性变态反应、止咳平喘、抗炎、增强非特异性免疫功能、抗皮肤过敏等方面均具有良好疗效，其抗变态反应性疾病的防治作用不但是多靶点起效，而且是多部位多器官有效，这样一种作用广泛有效的药物很值得进一步研究、开发和利用。

具体实施方式

实施例1

取地龙27g、全蝎13g超微粉碎备用；其余黄芪66g、赤芍27g、丹参27g、当归27g、川芎27g、桃仁27g、红花13g、制乳香13g、制没药13g、鸡血藤20g、牛膝27g、桂枝20g、桑枝27g、水蛭27g等十四味药材超微粉碎成细粉，与上述粉末配研，过筛，混匀，加入适量淀粉、羧甲基纤维素钠、甜菊甙，混匀过80目筛，加适量水制粒，60℃减压干燥，整粒，分装，制成1000g颗粒剂。用法用量：一次服用0.8-1.9g，一日3次。

实施例2

取地龙27g、全蝎13g超微粉碎备用；其余黄芪66g、赤芍27g、丹参27g、当归27g、川芎27g、桃仁27g、红花13g、制乳香13g、制没药13g、鸡血藤20g、牛膝27g、桂枝20g、桑枝27g、水蛭27g等十四味药材超微粉碎成细粉，与上述粉末配研，过筛，混匀加入淀粉，混匀，经制粒后装入胶囊，制成1000g硬胶囊剂。用法用量：一次服用0.8-1.6g，一日3次。

实施例3

取地龙27g、全蝎13g超微粉碎备用；其余黄芪66g、赤芍27g、丹参27g、当归27g、川芎27g、桃仁27g、红花13g、制乳香13g、制没药13g、鸡血藤20g、牛膝27g、桂枝20g、桑枝27g、水蛭27g等十四味药材超微粉碎成细粉，与上述粉末配研，过筛，混匀。将明胶、水及甘油(1:1:0.3-0.45)融胶后保温待用，药粉加适量植物油(大豆油或色拉油)搅匀，胶体磨研磨成均匀粘稠的糊状物，减压除气，压制，制成1000g软胶囊剂。用法用量：一次服用0.8-1.6g，一日3次。

实施例4

取地龙27g、全蝎13g超微粉碎备用；其余黄芪66g、赤芍27g、丹参27g、当归27g、川芎27g、桃仁27g、红花13g、制乳香13g、制没药13g、鸡血藤20g、牛膝27g、桂枝20g、桑枝27g、水蛭27g等十四味药材超微粉碎成细粉，与上述粉末配研，过筛，混匀，加入适量淀粉、微粉硅胶及硬脂酸镁，制粒，压制成片，包衣，制成1000g片剂。用法用量：一次服用0.8-1.6g，一日3次。

实施例5

取地龙27g、全蝎13g超微粉碎备用；其余黄芪66g、赤芍27g、丹参27g、当归27g、川芎27g、桃仁27g、红花13g、制乳香13g、制没药13g、鸡血藤20g、牛膝27g、桂枝20g、桑枝27g、水蛭27g等十四味药材超微粉碎成细粉，与上述粉末配研，过筛，混匀，加入到4倍量3：1的熔融聚乙二醇4000-聚乙二醇6000中，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴制成丸，除去表面的二甲基硅油，包装，制成1000g滴丸剂。用法用量：一次服用0.8-1.6g，一日3次。

实施例6

当归27g、川芎27g、桂枝20g加12倍量的水，浸泡4小时，蒸馏4小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；药渣与黄芪66g、赤芍27g、丹参27g、桃仁27g、红花13g、制乳香13g、制没药13g、鸡血藤20g、牛膝27g、地龙27g、全蝎13g、桑枝27g、水蛭27g等十三味加7倍量的水煎煮3次，每次2小时，合并煎液与上述蒸馏后的水溶液，浓缩至相对密度为1.05～1.10(60℃)的清膏，加乙醇使含醇量达55％，搅拌，静置48小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至至相对密度为1.10～1.15(60℃)的清膏，备用；另取2.5g苯甲酸钠、80g蔗糖加水150ml，煮沸，加入上述浓缩清膏中，搅匀，备用；挥发油中加入5ml聚山梨酯80，搅匀，与上述溶液混合，搅匀，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌装，灭菌，制成1000ml，即得。用法用量：一次服用0.8-1.6ml，一日3次。

Claims

1.一种药物组合物在用于制备治疗和/或预防I型变态反应性疾病药物中的应用，其特征在于按照重量份计，制成该药物组合物有效组分的原料为：黄芪66份、赤芍27份、丹参27份、当归27份、川芎27份、桃仁27份、红花13份、制乳香13份、制没药13份、鸡血藤20份、牛膝27份、桂枝20份、桑枝27份、地龙27份、全蝎13份、水蛭27份。

2.如权利要求1所述的药物组合物在用于制备治疗和/或预防I型变态反应性疾病药物中的应用，其特征在于所述药物组合物为丸剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、滴丸剂或口服液体制剂。

3.如权利要求2所述的药物组合物在用于制备治疗和/或预防I型变态反应性疾病药物中的应用，其特征在于所述药物组合物为硬胶囊剂。

4.如权利要求1、2或3所述的药物组合物在用于制备治疗和/或预防I型变态反应性疾病药物中的应用，其特征在于所述的I型变态反应性疾病包括过敏性哮喘、过敏性皮肤病、过敏性鼻炎和/或过敏性眼病。

5.如权利要求4所述的药物组合物在用于制备治疗和/或预防I型变态反应性疾病药物中的应用，其特征在于所述的I型变态反应性疾病为过敏性哮喘。