CN101423799B - 中国被毛孢菌粉生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种微生物的生产方法，特别涉及一种冬虫夏草中国被毛孢菌粉的生产方法。本发明包括如下步骤：将谷类10～50％、豆类0～10％、水50～70％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5～4/5，接入占培养基重量1％～4％的中国被毛孢菌种在0～14℃条件下培养2～5天培养基表面长满菌丝；在培养容器中补加占上述培养基重量20～40％的液体培养基，该培养基按重量百分比计蛋91～100％、奶0～0.9％、马铃薯0～0.9％、胡萝卜汁0～1.9％在0～14℃条件下培养3～8天；最后，将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。本发明的效果是：发酵周期短，工艺简单、无化学残留、污染几率小、设备投资小、成本低、无风险、得率高达40～50％。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物的生产方法，特别涉及一种冬虫夏草中国被毛孢菌粉的生产方法。
背景技术
冬虫夏草是鳞翅目蝙蝠蛾属的虫草蝙蝠蛾(Hepialus armoricamus Oberthur)幼虫感染中国被毛孢真菌后，在体内大量繁殖后形成的虫菌复合体。中国专利CN97110448.4公开的中国冬虫夏草真菌的发酵生产方法，CN200410101728.X公开的冬虫夏草大规模发酵生产及菌粉加工工艺。上述两件专利均利用中国被毛孢菌种利用大型工业发酵罐逐级扩大繁殖的四级深层发酵方法生产出菌粉，其缺点是沿用了抗生素发酵模式，菌粉中培养基的化学物质易残留，环节复杂，污染机率大，设备投资大，风险大，生产周期长，得率低。一直以来，本领域技术人员从未考虑过不采用四级液体深层发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，比如固体培养、液体静止培养或固液联合静止培养以缩短生产周期、降低投资风险、提高生产得率，而且技术人员对此种思路认为完全否定。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足和上述技术偏见，提供一种完全不同于以往生产冬虫夏草中国被毛孢生产菌粉的新方法。
本发明所需的菌种为：中国被毛孢(Hirsutella sinensis Liu，Guo，Yu et Zeng)。现保存在中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号：CGMCCNo.2126，包藏日期：2007年8月6日。
本发明的技术解决方案是通过以下方法来实现的：一种中国被毛孢菌粉的生产方法包括如下步骤：
首先，将谷类10～50％、豆类0～10％、水50～70％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5～4/5，在120～130℃、0.15Mpa条件下灭菌20～40分钟，接入占培养基重量1％～4％的中国被毛孢菌种在0～14℃条件下培养2～5天培养基表面长满菌丝；
其次，在培养容器中补加占上述培养基重量20～40％的液体培养基，该培养基按重量百分比计蛋91～100％、奶0～0.9％、马铃薯0～0.9％、胡萝卜汁0～1.9％在0～14℃条件下培养3～8天；
最后，将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
优选步骤是：步骤一：将谷类20～40％、豆类0～6％、水55～65％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的2/5～4/5，在122～128℃、0.15Mpa条件下灭菌25～35分钟，接入占培养基重量2％～4％的中国被毛孢菌种在3～10℃条件下培养3～4天培养基表面长满菌丝；
步骤二：在培养容器中补加占上述培养基重量25～35％的液体培养基，该培养基按重量百分比计蛋93～98％、奶0.3～0.6％、马铃薯0.3～0.6％、胡萝卜汁0.5～1.5％在5～10℃条件下培养4～7天；
步骤三：将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
最好采用的步骤是：步骤一：将谷类30％、豆类5％、水65％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的3/5，在125℃、0.15Mpa条件下灭菌27分钟，接入占培养基重量3％的中国被毛孢菌种在6℃条件下培养3天培养基表面长满菌丝；
步骤二：在培养容器中补加占上述培养基重量30％的液体培养基，该培养基按重量百分比计蛋98％、奶0.5％、马铃薯0.5％、胡萝卜汁1％在8℃条件下培养5天；
步骤三：将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
还可直接将谷类20～50％、豆类0～20％、水50～70％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5～4/5，在120～130℃、0.15Mpa条件下灭菌20～40分钟，接入占培养基重量1％～4％的中国被毛孢菌种在0～14℃条件下培养10～20天后取出培养物干燥、粉碎可得中国被毛孢菌粉。
也可将培养基按重量百分比计蛋91～100％、奶0～0.9％、马铃薯0～0.9％、胡萝卜汁0～1.9％、蛋白胨0～9％在120～130℃、0.15Mpa条件下灭菌20～40分钟，接入占培养基重量1％～4％的0～14℃条件下培养7～10天；
上述步骤一培养基中的水可用液体奶或含糖、蛋白质的液体代替，其中糖占液体总重量的1～10％，蛋白质占1～20％。
上述中国被毛孢菌粉的专用培养容器，最好采用食用级耐高温材质的容器(包括瓶塞)，瓶底直径最好大于等于瓶口直径。
上述方法及培养容器还可用于冬虫夏草拟青霉、头孢菌及其他伴生菌粉的生产。
本发明的效果是：发酵周期短，工艺简单、无化学残留、污染机率小、设备投资小、成本低、无风险、得率高达40～50％。
具体实施方式
实施例1
将10g小麦、10g大豆分别破碎过10目筛并与80g水按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5，在120℃、0.15Mpa条件下灭菌40分钟，接入4g中国被毛孢菌种在0℃条件下培养3天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长满白色菌丝的培养容器中补加40g的液体培养基，该培养基按重量百分比计鸡蛋(全蛋)40g在14℃条件下培养3天；取出培养物干燥、粉碎即得70g中国被毛孢菌粉。
实施例2
将50g稻谷破碎过20目筛并与50g牛奶按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的2/5，在122℃、0.15Mpa条件下灭菌25分钟，接入1g中国被毛孢菌种在3℃条件下培养2天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长满白色菌丝的培养容器中补加占20g的液体培养基，该培养基按重量百分比计鸭蛋(全蛋)18.2g、蛋白胨1.8g混合配制，在0℃条件下培养4天；取出培养物干燥、粉碎即得48g中国被毛孢菌粉。
实施例3
将20g玉米、6g蚕豆分别破碎过10目筛并与74g的蛋白质+糖的水溶液(1％的糖和10％的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占培养容器体积的3/5，在128℃、0.15Mpa条件下灭菌27分钟，接入3g中国被毛孢菌种在6℃条件下培养3天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长满白色菌丝的培养容器中补加30g的液体培养基，该培养基按重量百分比将鸡蛋(全蛋)27.3g、奶0.27g，马铃薯0.27g，胡萝卜汁0.57g，蛋白胨1.59g混合配制，在5℃条件下培养4天；取出培养物干燥、粉碎即得55g中国被毛孢菌粉。
实施例4
将40g小米、5g绿豆分别破碎过10目筛并与55g蛋白质+糖的水溶液(20％的糖和1％的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占培养容器体积的4/5，在125℃、0.15Mpa条件下灭菌35分钟，接入2g中国被毛孢菌种在10℃条件下培养2天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长满白色菌丝的培养容器中补加35g的液体培养基，该培养基按重量百分比将鸡蛋(全蛋)33g、奶0.105g，马铃薯0.105g，胡萝卜汁0.14g，蛋白胨2.1g混合配制，在10℃条件下培养3天；取出培养物干燥、粉碎即得60g中国被毛孢菌粉。
实施例5
将30g高粱、5g豌豆分别破碎过10目筛并与65g蛋白质+糖的水溶液(10％的糖和5％的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5，在130℃、0.15Mpa条件下灭菌20分钟，接入4g中国被毛孢菌种在14℃条件下培养2天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长满白色菌丝的培养容器中补加25g的液体培养基，该培养基按重量百分比将鸡蛋(全蛋)24g、奶0.15g，马铃薯0.15g，胡萝卜汁0.375g，蛋白胨0.325g混合配制，在8℃条件下培养4天；取出培养物干燥、粉碎即得51g中国被毛孢菌粉。
实施例6
将32g小麦、8g赤豆分别破碎过10目筛并与60g蛋白质+糖的水溶液(5％的糖和3％的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占培养容器体积的3/5，在125℃、0.15Mpa条件下灭菌27分钟，接入3g中国被毛孢菌种在6℃条件下培养3天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长满白色菌丝的培养容器中补加38g的液体培养基，该培养基按重量百分比将鸡蛋(全蛋)36.86g、奶0.152g，马铃薯0.152g，胡萝卜汁0.456g，蛋白胨0.38g混合配制，在8℃条件下培养4天；取出培养物干燥、粉碎即得66g中国被毛孢菌粉。
实施例7
将27g稻谷、3g蚕豆分别破碎过10目筛并与70g蛋白质+糖的水溶液(15％的糖和7％的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占培养容器体积的2/5，在127℃、0.15Mpa条件下灭菌26分钟，接入2.5g中国被毛孢菌种在13℃条件下培养2天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长满白色菌丝的培养容器中补加28g的液体培养基，该培养基按重量百分比将鸡蛋(全蛋)27.44g、奶0.084g，马铃薯0.084g，胡萝卜汁0.112g，蛋白胨0.28g混合配制，在13℃条件下培养3天；取出培养物干燥、粉碎即得62g中国被毛孢菌粉。
实施例8
将谷类10g、豆类20g、水70g按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5，在120℃、0.15Mpa条件下灭菌40分钟，接入1g中国被毛孢菌种在0℃条件下培养20天后取出培养物干燥、粉碎可得41g中国被毛孢菌粉。
实施例9
将谷类30g、豆类10g、15％的糖和7％的蛋白质水溶液60g按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的3/5，在125℃、0.15Mpa条件下灭菌30分钟，接入3g中国被毛孢菌种在8℃条件下培养15天后取出培养物干燥、粉碎可得45g中国被毛孢菌粉。
实施例10
将谷类50g、5％的糖和3％的蛋白质水溶液50g按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的4/5，在130℃、0.15Mpa条件下灭菌20分钟，接入4g中国被毛孢菌种在14℃条件下培养10天后取出培养物干燥、粉碎可得50g中国被毛孢菌粉。
实施例11
将按重量百分比计100g全蛋搅拌均匀后装入玻璃容器中用滤纸封口，在130℃、0.15Mpa条件下灭菌20分钟，接入4g中国被毛孢菌种0℃条件下培养7天后取出培养物干燥、粉碎可得50g中国被毛孢菌粉。
实施例12
将按重量百分比计91g全蛋搅拌均匀后装入玻璃容器中，再加入9g蛋白胨用滤纸封口，在120℃、0.15Mpa条件下灭菌40分钟，接入1g中国被毛孢菌种14℃条件下培养9天后取出培养物干燥、粉碎可得45g中国被毛孢菌粉。
实施例13
将按重量百分比计97.7g全蛋搅拌均匀后装入玻璃容器中，再加入0.9g牛奶、0.9g马铃薯、1.9g蛋白胨用滤纸封口，在130℃、0.15Mpa条件下灭菌30分钟，接入3g中国被毛孢菌种9℃条件下培养10天后取出培养物干燥、粉碎可得40g中国被毛孢菌粉。
Claims (6)
1.一种中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤一：将谷类10～50％、豆类0～10％、水50～80％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5～4/5，在120～130℃、0.15Mpa条件下灭菌20～40分钟，接入占培养基重量1～4％的中国被毛孢菌种在0～14℃条件下培养2～3天培养基表面长满菌丝；
步骤二：在培养容器中补加占上述培养基重量20～40％的液体培养基，该培养基按重量百分比计蛋91～100％、奶0～0.9％、马铃薯0～0.9％、胡萝卜汁0～1.9％、蛋白胨0～9％在0～14℃条件下培养3～4天；
步骤三：将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
2.根据权利要求1所述中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤一：将谷类20～40％、豆类0～6％、水55～74％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的2/5～4/5，在122～128℃、0.15Mpa条件下灭菌25～35分钟，接入占培养基重量2％～4％的中国被毛孢菌种在3～10℃条件下培养2～3天培养基表面长满菌丝；
步骤二：在培养容器中补加占上述培养基重量25～35％的液体培养基，该培养基按重量百分比计蛋93～98％、奶0.3～0.6％、马铃薯0.3～0.6％、胡萝卜汁0.4～1.5％、蛋白胨1～6％在5～10℃条件下培养3～4天；
步骤三：将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
3.根据权利要求1所述中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤一：将谷类30％、豆类5％、水65％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的3/5，在125℃、0.15Mpa条件下灭菌27分钟，接入占培养基重量3％的中国被毛孢菌种在6℃条件下培养3天培养基表面长满菌丝；
步骤二：在培养容器中补加占上述培养基重量30％的液体培养基，该培养基按重量百分比计蛋97％、奶0.4％、马铃薯0.4％、胡萝卜汁1.2％、蛋白胨1％在8℃条件下培养3天；
步骤三：将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
4.根据权利要求1所述中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于所述中国被毛菌种经步骤一培养后取出、干燥、粉碎即可得中国被毛孢菌粉，也可直接用步骤二培养后取出、干燥、粉碎即可得中国被毛孢菌粉。
5.根据权利要求1所述中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于所述步骤一中的水可用液体奶代替。
6.根据权利要求1-4任一项所述的中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于：上述方法还可用于冬虫夏草拟青霉、头孢菌及其他伴生菌粉的生产。
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