CN103484500A - 一种细菌cd-126发酵液及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种细菌CD-126发酵液及其应用，属于应用微生物学领域。本发明的细菌CD-126发酵液，其生产菌株为变形杆菌（Proteus sp.）CD-126,菌株CD-126已于2012年7月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.6357。发明的细菌CD-126发酵液应用于真菌寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）捕食器官的诱导中。本发明的优点在于：利用细菌快速诱导捕食线虫真菌产生捕食器官，明显提高了捕食线虫真菌捕食线虫的能力。

Description

一种细菌CD-126发酵液及其应用

技术领域:

本发明涉及一种细菌CD-126发酵液及其应用，属于应用微生物学领域。

背景技术:

植物寄生线虫是植物的重要病害之一，据估计全球每年由植物寄生线虫所造成的作物损失达1570亿美元(Abad et al.2008)，线虫病害成为农业生产中重要的限制因子之一。目前对线虫病害的防治仍然以化学防治为主，但由于化学农药对生态环境的影响以及寄生线虫抗药性的增加，利用线虫天敌进行生物防治备受关注。捕食线虫真菌（Nematode-trapping fungi）是自然界中控制线虫种群数量的一类重要的真菌生物因子，它们利用营养菌丝特化形成的捕食器官，如收缩环、非收缩环、粘性菌丝、粘性分枝、及三维菌网完成对线虫的捕捉和侵染。捕食线虫真菌的捕食器官是其侵染植物寄生线虫的必要条件之一，捕食器官在营养贫瘠的培养基上能够自发产生，也能够通过环境因子（氨基酸和多肽等）的诱导产生。

经文献检索，未发现与本发明内容相同文献的公开报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种细菌CD-126发酵液及其应用。

本发明是这样实现的：

本发明使用的细菌菌株是变形杆菌（Proteus sp.）CD-126,菌株CD-126已于2012年7月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.6357。

1.细菌CD-126的保存

培养基：LB培养基为常规培养基。培养基的组成和配制方法如下:

LB培养基：称取胰蛋白胨10g，酵母粉5g和NaCl10g用去离子水溶解并定容至1L，调节PH到7.0，加入20g琼脂，121℃灭菌20分钟。

细菌CD-126保存在LB固体培养基上。

2.捕食线虫真菌寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）的培养

a.培养基：

CMA培养基：称取20g玉米颗粒,加入1000mL自来水,煮沸20分钟,用四层纱布过滤收集液体，加入20g琼脂，再定容到1L，121℃灭菌20分钟。

b.寡孢节丛孢的活化和孢子培养：在CMA固体培养基上接种寡孢节丛孢，26℃恒温培养箱内培养10天，以得到大量的孢子。用无菌水冲洗CMA平板上的寡孢节丛孢菌丝；用移液器将平板上的液体转移至装有无菌擦镜纸的漏斗内过滤，收集孢子，制备孢子悬液；用血球计数板计数孢子液内的孢子浓度。

3.细菌CD-126发酵液的制备

在装有5-10ml LB液体培养基的试管中接种细菌CD-126，25℃～38℃恒温摇床内培养24-72小时。发酵液用高速离心机在10000rpm下离心5min分离菌液和菌体，吸取上清液放在-4℃的冰箱中备用，得到本发明使用的活性发酵液

4.捕食线虫真菌寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）捕食器官的诱导

收集得到寡孢节丛孢的孢子，实验组（三维菌网诱导组）在水琼脂平板上加入CD-126上清液，将上清液和孢子悬液（1:1，v/v）混匀涂在平板上；对照组（培养基）平板上加入LB液体培养基和孢子悬液（1:1，v/v）混匀涂布；将两组平板静置于26℃恒温培养箱内培养。用光学显微镜（Olympus,Japan）观察诱导产生的捕食器官（三维菌网）的形态。

5.细菌CD-126发酵液中挥发性物质对寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）捕食器官的诱导

用酒精和紫外杀菌处理过的两格平板作为实验平台，在其中一个格里面倒入灭菌水琼脂。将寡孢节丛孢的孢子铺在水琼脂平板上，在另一个空格中加入细菌发酵液，同时做培养基对照。用光学显微镜（Olympus,Japan）观察诱导产生的捕食器官(三维菌网)的形态。

本发明的优点在于：利用细菌快速诱导捕食线虫真菌产生捕食器官，明显提高了捕食线虫真菌捕食线虫的能力。

附图说明：

附图1：捕食线虫真菌(寡孢节丛孢)的捕食器官诱导（光学显微镜照片）

具体实施方式：

以下是本发明的实施例，但本发明的内容并不局限于此。

实施例的细菌CD-126发酵液的制备过程同发明内容部分的描述。

实施例1：细菌CD-126发酵液对寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）捕食器官的诱导。

按照上述寡孢节丛孢的活化和孢子培养的方法，将寡孢节丛孢接种CMA固体培养基，26℃恒温培养箱中培养5-6天。用无菌水冲洗CMA平板上的寡孢节丛孢菌丝；用移液器将平板上的液体转移至装有无菌擦镜纸的漏斗内过滤，收集孢子，制备成孢子悬液，用于三维菌网的诱导。

实验组（三维菌网诱导组）在水琼脂平板上加入CD-126上清液，将上清液和孢子悬液（1:1，v/v）混匀涂在平板上；对照组（培养基）平板上加入LB液体培养基和孢子悬液（1:1，v/v）混匀涂布；将两组平板静置于26℃恒温培养箱内培养，在36-48h时，寡孢节丛孢产生大量的捕食器官（三维菌网）（附图1）。

实施例2：细菌CD-126发酵液中挥发性物质对寡孢节丛孢（Arthrobotrysoligospora）捕食器官的诱导。

按照上文寡孢节丛孢的活化和孢子培养的方法，寡孢节丛孢接种CMA固体培养基，26℃恒温培养箱内培养10天，以得到大量的孢子。用无菌水冲洗CMA平板上的寡孢节丛孢菌丝，用移液器将平板上的液体转移至装有无菌擦镜纸的漏斗内过滤，收集孢子，制备成孢子悬液。

将收集得到的寡孢节丛孢的孢子置于倒有水琼脂的两格平板的一个空格上，250μL/格，涂布；实验组（三维菌网诱导组）在两格平板空格中的另一个空格加入细菌发酵液500μL；同时在另一个两格平板上做培养基对照。将它们分别静置于26℃恒温培养箱内培养。在36-48h时，寡孢节丛孢产生大量的捕食器官（三维菌网）。

Claims (2)

1.一种细菌CD-126发酵液，其特征在于生产菌株为变形杆菌（Proteus sp.）CD-126,菌株CD-126已于2012年7月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏号：CGMCC No.6357。

2.权利要求1所述细菌CD-126发酵液的应用，其特征在于细菌CD-126发酵液应用于真菌寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）捕食器官的诱导中。

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