CN101416962A

CN101416962A - 细胞松弛素d在制备抗肿瘤药物中的用途

Info

Publication number: CN101416962A
Application number: CNA2008101869038A
Authority: CN
Inventors: 梅文莉; 戴好富; 陈苹; 吴娇; 黄玖利
Original assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Priority date: 2008-12-05
Filing date: 2008-12-05
Publication date: 2009-04-29

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体为细胞松弛素D(Cytochalasin D)在制备抗肿瘤药物中的用途。细胞松弛素D的结构式如下，可以从真菌中利用包括吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析，减压柱层析等多种常规分离手段获得，或者通过合成以及半合成手段获得。可单独应用或者合用，或与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型，应用于制备治疗食管癌、胃癌和肝癌的药物中。

Description

细胞松弛素D在制备抗肿瘤药物中的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体为细胞松弛素D(Cytochalasin D)在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

细胞松弛素D是一种真菌的代谢产物，王钧等曾经从竹菌(Engleromyces goetzii)中分离得到，而我们也从一株分离自海南粗榧的内生真菌S49中分离得到。前人研究认为细胞松弛素D是一种细胞微丝抑制剂，作用于食管癌细胞ECa109、乳腺癌细胞((MA782/5S-8102)、人体肝癌BEL-7402等肿瘤细胞后，可使多数肿瘤细胞产生多核和排核等现象，而正常的人胚肺细胞则不产生上述异常现象。正常细胞和肿瘤细胞对细胞松弛素D的不同反应，使得细胞松弛素D可以选择性地杀死肿瘤细胞，从而应用于肿瘤的治疗。目前细胞松弛素D仅作为一种研究生命现象的工具应用于对细胞分裂、细胞运动、细胞质与细胞核的关系等的研究中，未见将其应用于对肿瘤的治疗中。我们在研究中发现，细胞松弛素D对不同的肿瘤细胞株也具有一定的选择性，对食管癌细胞ECa109、胃癌细胞SGC-7901、肝癌细胞SMMC-7721等活性显著，但是对慢性骨髓性白血病细胞K562却并未显示出活性。因此，可以将细胞松弛素D针对性地应用于制备治疗食管癌、胃癌和肝癌的药物中。

发明内容

本发明的目的在于公开细胞松弛素D(Cytochalasin D)在制备抗肿瘤药物中的新用途。

细胞松弛素D可以从真菌中利用包括吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析，减压柱层析等多种常规分离手段获得，或者通过合成以及半合成手段获得。可单独应用或者合用，或与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型，应用于制备治疗食管癌、胃癌和肝癌的药物中。

细胞松弛素D的结构如下：

具体实施方式

下面结合具体实例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

实施例1：内生真菌S49的发酵培养及细胞松弛素D的提取分离：

发酵培养基(PD)：马铃薯200g，葡萄糖20g，定容至1L，pH自然。

内生真菌S49经PDA培养基斜面活化，接种于1L三角瓶，28℃静置培养30d，得发酵液48L。

将菌株S49的48L发酵液固液分离后，发酵上清液于50℃减压浓缩至5L。用乙酸乙酯萃取后得到乙酸乙酯浸膏(6.0g)，之后经硅胶柱柱层析、重结晶得到细胞松弛素D(1.1g)。

实施例2：细胞松弛素D的结构鉴定：

细胞松弛素D为白色针状结晶，喷上体积分数10％的硫酸显棕黄色。碘化铋钾显色剂显色呈阳性。EI/MS[M⁺]508.3，分子式为C₃₀H₃₇NO₆。根据核磁共振及高分辨质谱等谱图数据分析，鉴定了它的结构。并根据2D-NMR技术对其¹³C-NMR，¹H-NMR数据进行了归属。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ：7.33(2H，d，J＝7.12Hz，H-3′，H-5′)，7.27(1H，t，J＝7.36，10.28，17.64Hz，H-4′)，7.15(2H，d，J＝7.24Hz，H-2′，H-6′)，6.12(1H，dd，J＝2.52，15.68Hz，H-13)，5.70(1H，dd，J＝9.68，15.48，25.24Hz，H-19)，5.64(1H，d，J＝2.00Hz，H-21)，5.36(1H，m，H-14)，5.31(1H，s，H-12)，5.15(1H，dd，J＝2.2，15.76Hz，H-20)，5.10(1H，s，H-12)，3.82(1H，d，J＝10.64Hz，H-7)，3.25(1H，m，H-3)，2.86(1H，t，J＝3.48，10.16，13.64Hz，H-8)，2.82(1H，t，J＝7.40，5.00，12.40Hz，H-10)，2.76(2H，m，H-4，H-16)，2.69(1H，t，J＝4.08，9.32，13.40Hz，H-10)，2.53(1H，q，J＝11.12，23.60，34.84Hz，H-15)，2.16(1H，t，J＝4.20，8.32Hz，H-4)，2.28(3H，s，H-25)，2.01(1H，t，J＝5.76，10.04Hz，H-15)，1.52(3H，s，H-23)，1.21(3H，d，J＝6.8Hz，H-22)，0.95(3H，d，J＝6.68Hz，H-11)。¹3C-NMR(100MHz，CD₃OD)δ：173.7(C-1)，53.5(C-3)，50.0(C-4)，32.6(C-5)，147.6(C-6)，69.8(C-7)，47.0(C-8)，53.3(C-9)，45.3(C-10)，13.6(C-11)，114.3(C-12)，132.3(C-13)，134.1(C-14)，37.7(C-15)，42.3(C-16)，210.2(C-17)，77.6(C-18)，130.6(C-19)，127.6(C-20)，77.1(C-21)，19.4(C-22)，24.2(C-23)，169.6(C-24)，20.8(C-25)，137.2(C-1′)，129.1(C-2′，C-6′)，128.9(C-3′，C-5′)，127.0(C-4′)。

实施例3：细胞松弛素D的体外抑瘤实验：

采用MTT法测试了细胞松弛素D对人体的食管癌细胞ECa109、胃癌细胞SGC-7901、肝癌细胞SMMC-7721、慢性骨髓性白血病细胞K562的体外抑瘤活性(结果见表1)。活性测试方法如下：实验设阴性对照组(水)、DMSO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉素C)和8个不同浓度(0.8，1.6，3.2，6.3，12.5，25，50，100)的待测样品，每个浓度设2个平行。收集对数生长期细胞，血球计数板计数，按每孔4500个癌细胞量接种于96孔平底细胞培养板中，置于5％CO2、湿度90％以上、37℃温箱中培养。24h后取出加入一定量的待测样品，继续培养3d后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况，接着每孔加入5mg/mL的MTT溶液(溶于平衡盐溶液PBS)50μL，37℃反应4h后，将细胞培养液吸出，每孔加入100μL DMSO将Formazane充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用570nm波长测各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率。

以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50％时样品的浓度(IC₅₀)，样品活性结果即以半数抑制浓度(IC₅₀)表示。

表1、细胞松弛素D的体外抑瘤结果

实施例4：细胞松弛素D 5g与微晶纤维素40g及硬脂酸镁5g混合，混合物用单冲压片机打成直径5mm，重量200mg的片剂。本片剂中每片含细胞松弛素D 20mg。

实施例5：细胞松弛素D 20g与乳糖25g及硬脂酸镁5g混合，以每500mg填充胶囊。本胶囊剂中，每个胶囊含细胞松弛素D 200mg。

Claims

1、细胞松弛素D在制备抗肿瘤药物中的用途。细胞松弛素D的结构如图所示：

2、如权利要求1所述的细胞松弛素D在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征在于：细胞松弛素D可单独应用或者合用，或与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型用于制备抗肿瘤药物。

3、如权利要求1所述的细胞松弛素D在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征在于：细胞松弛素D的制剂，可用于制备治疗食管癌、胃癌和肝癌的抗肿瘤药物。