CN101406451A - 一种冬凌草甲素静脉乳及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种冬凌草甲素静脉乳及其制备方法，该乳剂属于水包油包固(S/O/W)型复乳，由冬凌草甲素和药学上可接受载体组成。所述药学可接受的载体选自注射用溶剂、注射用油、乳化剂、等渗调节剂、抗氧化剂、pH调节剂。

Description

一种冬凌草甲素静脉乳及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种冬凌草甲素静脉乳及其制备方法。

背景技术

冬凌草甲素(Oridonin)是从唇形科(Labtea)香茶属(Rabdosia)植物中分离出的一种以贝壳杉烯为骨架的四环二萜类化合物。该成分具有较强的抗肿瘤活性，对多种肿瘤均具有明显的抑制作用。体外试验表明，冬凌草甲素对多种肿瘤细胞如：人体肝癌BEL7402、艾氏腹水癌ECA、肉瘤S180、白血病L₁₂₁₀、人白血病HL-60、K562、NB4、人体食道鳞癌细胞株CAES-17、胃腺癌MG_C80-3、鼻咽癌CNE、肺腺癌SPC-A-1、肺鳞癌LTEP-78、人子宫颈癌HeLa细胞、人黑色素瘤A375-S2细胞等都有不同程度的抗肿瘤作用。临床上用于实体瘤如食道癌、胃癌、原发性肝癌的治疗。此外，临床研究证明冬凌草甲素对胰腺癌、贲门癌、大肠癌、膀胱癌、乳腺癌也都有明显疗效。

冬凌草甲素为白色棱柱状结晶，不溶于水，油溶性差，可溶于乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂。由于其水不溶、油不溶的特点，限制了制剂的开发的脚步。

冬凌草甲素注射液的抗癌临床疗效虽然高于口服制剂，但安全问题限制了其应用。为增加冬凌草甲素的溶解能力，通常向注射液中添加非水性溶剂(如丙二醇)和表面活性剂(如吐温80)。长期静脉滴注可引起血管发炎、疼痛等不良反应。临床上为减小给药时造成的刺激性，给药前需将注射液用5～10％葡萄糖溶液500ml进行稀释。并缓慢滴注，延长了给药时间，降低了顺应性。

纳米混悬液是一种解决难溶性药物给药困难、提高其生物利用度的新型制剂。将药物通过沉淀或物理粉碎的方法制成纳米级粒子，可加快药物在胃肠道的溶解速度，促进吸收；控制粒径大小则可以达到直接静脉给药的目的。由于纳米混悬液粒子是单纯的药物粒，避免了载体给药系统载药量不高或载体本身引起的毒副作用等问题。但目前纳米混悬液技术仍不成熟，通常粒径大小在200nm～2μm之间，添加的抑晶剂不被静脉注射接受，高温灭菌后存在粒长大的现象。以上这些缺点均限制了纳米混悬液在静脉给药途径中的应用。

发明内容

本发明主要的目的在于克服现有技术的不足，提供一种载药量大、副作用小、给药方便、适于工业生产的冬凌草甲素静脉乳制剂。

本发明的另一目的是提供该上述冬凌草甲素静脉乳的制备方法。

本发明提供一种冬凌草甲素静脉乳注射剂，该乳剂属于水包油包固(S/O/W)型复乳，由冬凌草甲素和药学上可接受载体组成。所述药学可接受的载体选自注射用溶剂、注射用油、乳化剂、等渗调节剂、抗氧化剂、pH调节剂。

本发明所述冬陵草甲素静脉乳注射剂，由下列重量/体积百分比(w/v)的组分制成：

冬凌草甲素                   0.01-5％

注射用油                     5-40％

乳化剂                       0.1-20％

助乳化剂                     0.1-2％

等渗调节剂                   0.01-15％

抗氧化剂                     0.005-0.5％

非水性溶剂                   0.1-20％

注射用溶剂和pH调节剂余量加至100ml。

需要说明的是：上述各组分除注射用溶剂和pH调节剂外，其余均为重量单位，如克(g)或千克(kg)等；制备得到的乳剂为体积单位，如ml或L等。所述重量/体积百分比(w/v)的具体计算方式为：将加入组分的重量除以成品乳剂的体积即得到相应组分的重量/体积百分比(w/v)。例如，上述处方中，0.01-5g冬凌草甲素除以100ml为0.01-5％(w/v)。其中重量/体积百分比的单位为ml/g或L/kg等。可以看出，前者分子和分母同时扩大1000倍即为后者，其比例值不会发生变化。

所述乳剂中，注射用油选自辛癸酸甘油酯、大豆油、红花籽油、玉米油、橄榄油、注射用薏苡仁油的一种或几种；所述乳化剂选自注射用大豆磷脂、蛋黄磷脂中的一种或几种；所述的等渗调节剂选自甘油、山梨醇、木糖醇、葡萄糖、氯化钠中的一种或几种；所述抗氧化剂选自乙二胺四乙酸二钠、巯基乙酸、生育酚中的一种；所述的pH调节剂选自氢氧化钠溶液、盐酸、醋酸及其盐中的一种，优选浓度为0.001-5M的氢氧化钠溶液或者浓度为0.001-5M的盐酸溶液，调节pH值为4.5-9.5；所述注射用溶剂为水。所述辅助乳化剂是指乳化能力一般很弱或无乳化能力，但与乳化剂混合使用可以增加乳化剂的粘度，并能增强乳化膜的强度，防止乳滴合并，从而增加乳剂稳定性的物质。本发明乳剂采用的辅助乳化剂为泊洛沙姆188(F68)、甘油单油酸酯、油酸；所述非水性溶剂为乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯等低沸点、冬凌草甲素溶解度高的有机溶剂，优选为乙醇，根据对注射用有机溶剂的限量要求，除去有机溶剂。

优选地，本发明所述冬凌草甲素静脉乳注射剂，由下列重量/体积百分比(w/v)的组分制成：

冬凌草甲素                  0.01-2％

注射用油                    5-20％

乳化剂                      0.5-10％

助乳化剂                    0.1-2％

等渗调节剂                  0.1-15％

抗氧化剂                    0.005-0.5％

非水性溶剂                  0.5-10％

注射用溶剂和pH调节剂余量加至100ml。

需要说明的是：上述各组分除注射用溶剂和pH调节剂外，其余均为重量单位，如克(g)或千克(kg)等；制备得到的乳剂为体积单位，如ml或L等。所述重量/体积百分比(w/v)的具体计算方式为：将加入组分的重量除以成品乳剂的体积即得到相应组分的重量/体积百分比(w/v)。例如，上述处方中，0.01-2g冬凌草甲素除以100ml为0.01-2％(w/v)。其中重量/体积百分比的单位为ml/g或L/kg等。可以看出，前者分子和分母同时扩大1000倍即为后者，其比例值不会发生变化。

所述乳剂中，注射用油选自辛癸酸甘油酯、大豆油、红花籽油、玉米油、橄榄油、注射用薏苡仁油的一种或几种；所述乳化剂选自注射用大豆磷脂、蛋黄磷脂中的一种或几种；所述的等渗调节剂选自甘油、山梨醇、木糖醇、葡萄糖、氯化钠中的一种或几种；所述抗氧化剂选自乙二胺四乙酸二钠、巯基乙酸、生育酚中的一种；所述的pH调节剂选自氢氧化钠溶液、盐酸、醋酸及其盐中的一种，优选浓度为0.001-5M的氢氧化钠溶液或者浓度为0.001-5M的盐酸溶液，调节pH值为4.5-9.5；所述注射用溶剂为水。所述辅助乳化剂是指乳化能力一般很弱或无乳化能力，但与乳化剂混合使用可以增加乳化剂的粘度，并能增强乳化膜的强度，防止乳滴合并，从而增加乳剂稳定性的物质。本发明乳剂采用的辅助乳化剂为泊洛沙姆188(F68)、甘油单油酸酯、油酸；所述非水性溶剂为乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯等低沸点、冬凌草甲素溶解度高的有机溶剂，优选为乙醇，根据对注射用有机溶剂的限量要求，除去有机溶剂。

本发明所述冬凌草甲素可以通过现有技术制备也可以市售获得。

本发明的注射剂为白色或类白色乳状液体，有乳光，载药量为0.01-5％，平均粒径为100～500nm，pH为6.0～9.0。

本发明提供了一种冬凌草甲素静脉乳注射剂的制备方法。

方法一，包括如下步骤：

1.按照下述重量/体积百分比取组分：冬凌草甲素0.01-5％、注射用油5-40％、乳化剂0.1-20％、助乳化剂0.1-2％、等渗调节剂0.01-15％、抗氧化剂0.005-0.5％、非水性溶剂0.1-20％；

2.将冬凌草甲素与乳化剂及抗氧化剂用非水性溶剂充分溶解，将上述有机相加入注射用油中，形成油相；向稍少于处方量的注射用水中加入处方量等渗调节剂，搅拌混匀，得水相；

3.油相、水相加热混合，搅拌乳化或剪切乳化2-300分钟，得初乳；

4.将初乳进一步乳化，加入pH调节剂调pH，注射用水加至100％，分装，充氮，消毒，得冬凌草甲素静脉乳注射液。

其中，步骤2、4中除去有机溶剂可以在油相制备完成后或乳剂进一步乳化完成后进行，方法包括但不限于搅拌挥干、减压挥干、加热挥干等。

步骤4中选用微射流高压均质机均化乳化时压力为500-25000psi；消毒的方法为常规方法，包括但不限于高压蒸汽消毒、流通蒸汽、过滤除菌等方法。

方法二，也可将药物添加到水相中，包括如下步骤：

1.按照下述重量/体积百分比取组分：冬凌草甲素0.01-5％、注射用油5-40％、乳化剂0.1-20％、助乳化剂0.1-2％、等渗调节剂0.01-15％、抗氧化剂0.005-0.5％、非水性溶剂0.1-20％；

2.用非水性溶剂将冬凌草甲素及乳化剂充分溶解，在搅拌条件下将述有机相加入溶解有处方量等渗调节剂的稍少于处方量的注射用水中，构成水相，向处方量的注射用油中加入抗氧化剂，构成油相；

3.油相、水相加热混合，搅拌乳化或剪切乳化2-300分钟，得初乳；

4.将初乳进一步乳化，加入pH调节剂调pH，注射用水加至100％，分装，充氮，消毒，得冬凌草甲素静脉乳注射液。

其中，除去有机溶剂可以在水相制备完成后或乳剂进一步乳化完成后进行，方法包括但不限于搅拌挥干、减压挥干、加热挥干。

本发明采用注射用溶剂、注射用油、乳化剂等药用辅料，采用亚微乳制备技术，制备成冬凌草甲素水包油包固(S/O/W)型静脉乳注射液。本发明的冬凌草甲素水包油包固型静脉乳注射液为白色或类白色乳状液体，有乳光，载药量为0.01-5％，平均粒径为100-500nm，pH为6.0-9.0。注射液经高压蒸汽灭菌后无药物粒析出，乳剂分层、乳滴合并现象出现，粒径大小及分布无显著改变。

冬凌草甲素的水溶性较差，25℃在水中的平衡溶解度为0.75g/.L。为了克服上述缺陷，现技术中通常将其制备成乳剂，但是冬凌草甲素在大豆油等乳剂常规的油相中的溶解度很低，平衡溶解度为0.23g./L，因此不能满足直接做成注射液的要求，按照常规方法难以制备成注射用乳剂(徐文，孙进，张婷婷，马博，陈大为，何仲贵.HPLC法测定冬凌草甲素的平衡溶解度和表观油水分配系数。沈阳药科大学学报2007，24(4)220)。

本发明乳剂采用纳米混悬技术，将冬凌草甲素制成S/O/W型复乳。与现有技术相比，该乳剂具有下述优势：

1.载药量高，粒径分布均匀，平均粒径仅为100～500nm(见图1)；

2.质量稳定，100℃灭菌30分钟粒径无明显变化，室温放置1年后粒径和药物含量无明显变化。

本发明乳剂为新型的水包油包固(S/O/W)型乳剂，静脉给药系统中药物纳米粒存在于亚微乳油滴内或油/水界面上，与普通静脉制剂相比可大幅提高冬凌草甲素给药浓度，减小给药体积。所有辅料、溶剂均符合静脉给药要求，降低了原有注射剂由于增溶剂所致的毒副作用，极大地减少了病人注射时的痛苦，提高了用药的顺应性。冬凌草甲素在水包油包固型体系中的分散度大，静脉给药后分布较快、药效高、有靶向性，容易被淋巴系统摄取，在体内可以被网状内皮系统吞噬(如肝、脾、肾)。该乳剂稳定，制备工艺方法简单易行，与普通静脉乳剂生产制备过程相似，没有特殊设备要求，可适用于大量制备和工业化生产。

附图说明

图1、冬凌草甲素乳剂的冷冻蚀刻电镜照片。用于说明本发明的水包油包固(S/O/W)型乳剂实现了包裹目的。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步说明，但不构成对本发明的限制。

实施例1

处方：

冬凌草甲素          2g

大豆油              100g

大豆磷脂            12g

泊洛沙姆188(F68)    12g

甘油             22.5g

乙醇             60ml

生育酚           0.05g

氢氧化钠/盐酸    适量

注射用水         至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、大豆磷脂、生育酚以乙醇溶解，向大豆油中加入乙醇溶液，加热至70℃得油相。另取注射用水860ml，加入甘油、泊洛沙姆188，搅拌使溶解，加热至70℃得水相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次。室温搅拌乳剂4h。用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为8.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.47min；样品冬凌草甲素含量为4.87％。

实施例2

处方

冬凌草甲素       2.5g

大豆油           100g

卵磷脂           12g

甘油             22.5g

乙醇             80ml

生育酚           0.05g

氢氧化钠/盐酸    适量

注射用水         至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、卵磷脂、生育酚以乙醇溶解，向大豆油中加入乙醇溶液，混匀后，减压旋转蒸发挥干乙醇，得油相，加热至70℃备用。另取注射用水860ml，加入甘油，搅拌使溶解，加热至70℃得水相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为8.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.47min；样品冬凌草甲素含量为4.65％。

实施例3

处方

冬凌草甲素       5g

大豆油           100g

大豆磷脂         12g

甘油             22.5g

乙醇             160ml

生育酚           0.05g

氢氧化钠/盐酸    适量

注射用水         至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、大豆磷脂以乙醇溶解，搅拌情况下加入溶解有处方量甘油的注射用水860ml中，减压旋转蒸发除去乙醇，加热至70℃得水相。另取处方量生育酚于大豆油中，加热70℃溶解得油相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为8.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.42min；样品冬凌草甲素含量为4.99％。

实施例4

处方

冬凌草甲素            5g

大豆油                200g

大豆磷脂              15g

泊洛沙姆188(F68)      12g

甘油                  22.5g

乙醇                  160ml

生育酚                0.05g

氢氧化钠/盐酸         适量

注射用水              至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、大豆磷脂以乙醇溶解，搅拌情况下加入溶解有处方量甘油、泊洛沙姆188的注射用水860ml中，加热至70℃得水相。另取处方量生育酚于大豆油中，加热70℃溶解得油相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次，加热40℃减压旋转蒸发30分钟，挥干乙醇。用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为8.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.47min；样品冬凌草甲素含量为4.96％。

实施例5

处方

冬凌草甲素          2g

大豆油              100g

大豆磷脂            12g

泊洛沙姆188(F68)    12g

甘油                23g

乙醚                60ml

生育酚              0.05g

氢氧化钠/盐酸       适量

注射用水           至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、大豆磷脂、生育酚以乙醚溶解，向大豆油中加入乙醚溶液，加热至70℃得油相。另取注射用水860ml，加入甘油、泊洛沙姆188，搅拌使溶解，加热至70℃得水相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次。室温搅拌乳剂4h。用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为8.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.47min；样品冬凌草甲素含量为4.87％。

实施例6

处方

冬凌草甲素        2.5g

大豆油            100g

卵磷脂            12g

山梨醇            22.5g

乙醇              80ml

乙二胺四乙酸二钠  0.05g

氢氧化钠/盐酸     适量

注射用水          至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、卵磷脂、乙二胺四乙酸二钠以乙醇溶解，向大豆油中加入乙醇溶液，混匀后，减压旋转蒸发挥干乙醇，得油相，加热至70℃备用。另取注射用水860ml，加入山梨醇，搅拌使溶解，加热至70℃得水相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为9.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.47min；样品冬凌草甲素含量为4.78％。

实施例7

处方

冬凌草甲素       5g

红花籽油         100g

蛋黄磷脂         12g

甘油             22.5g

乙醇             160ml

生育酚           0.05g

氢氧化钠/盐酸    适量

注射用水         至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、蛋黄磷脂以乙醇溶解，搅拌情况下加入溶解有处方量甘油的注射用水860ml中，减压旋转蒸发除去乙醇，加热至70℃得水相。另取处方量生育酚于红花籽油中，加热70℃溶解得油相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为5.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.40min；样品冬凌草甲素含量为4.88％。

实施例8

处方

冬凌草甲素      5g

大豆油          200g

大豆磷脂        15g

甘油单油酸酯    12g

甘油             22.5g

乙醇             160ml

巯基乙酸         0.05g

氢氧化钠/盐酸    适量

注射用水         至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、大豆磷脂以乙醇溶解，搅拌情况下加入溶解有处方量甘油、甘油单油酸酯的注射用水860ml中，加热至70℃得水相。另取处方量巯基乙酸于大豆油中，加热70℃溶解得油相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次，加热40℃减压旋转蒸发30分钟，挥干乙醇。用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为4.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.47min；样品冬凌草甲素含量为4.90％。

实施例9

处方

冬凌草甲素          2g

玉米油              100g

大豆磷脂            12g

泊洛沙姆188(F68)    12g

甘油                23g

乙醚                60ml

生育酚              0.05g

氢氧化钠/盐酸       适量

注射用水            至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、大豆磷脂、生育酚以乙醚溶解，向玉米油中加入乙醚溶液，加热至70℃得油相。另取注射用水860ml，加入甘油、泊洛沙姆188，搅拌使溶解，加热至70℃得水相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次。室温搅拌乳剂4h。用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为6.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.47min；样品冬凌草甲素含量为4.96％。

实施例10

处方

冬凌草甲素       5g

红花籽油         100g

蛋黄磷脂         12g

葡萄糖           22.5g

甲醇             160ml

生育酚           0.05g

氢氧化钠/盐酸    适量

注射用水         至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、蛋黄磷脂以甲醇溶解，搅拌情况下加入溶解有处方量葡萄糖的注射用水860ml中，减压旋转蒸发除去甲醇，加热至70℃得水相。另取处方量生育酚于红花籽油中，加热70℃溶解得油相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为8.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.40min；样品冬凌草甲素含量为4.88％。

实施例11

处方：

冬凌草甲素              2g

注射用薏苡仁油          100g

大豆磷脂                12g

泊洛沙姆188(F68)        12g

甘油                    22.5g

乙醇                    60ml

生育酚                  0.05g

氢氧化钠/盐酸           适量

注射用水                至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、大豆磷脂、生育酚以乙醇溶解，向注射用薏苡仁油中加入乙醇溶液，加热至70℃得油相。另取注射用水860ml，加入甘油、泊洛沙姆188，搅拌使溶解，加热至70℃得水相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次。室温搅拌乳剂4h。用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为8.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.47min；样品冬凌草甲素含量为4.87％。

实施例12

处方

冬凌草甲素               2.5g

注射用薏苡仁油           100g

卵磷脂                   12g

甘油                     22.5g

乙醇                     80ml

生育酚                   0.05g

氢氧化钠/盐酸            适量

注射用水           至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、卵磷脂、生育酚以乙醇溶解，向注射用薏苡仁油中加入乙醇溶液，混匀后，减压旋转蒸发挥干乙醇，得油相，加热至70℃备用。另取注射用水860ml，加入甘油，搅拌使溶解，加热至70℃得水相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为8.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.47min；样品冬凌草甲素含量为4.65％。

实施例13

处方

冬凌草甲素              5g

注射用薏苡仁油          100g

大豆磷脂                12g

甘油                    22.5g

乙醇                    160ml

生育酚                  0.05g

氢氧化钠/盐酸           适量

注射用水                至1000ml

制备工艺：将处方量冬凌草甲素、大豆磷脂以乙醇溶解，搅拌情况下加入溶解有处方量甘油的注射用水860ml中，减压旋转蒸发除去乙醇，加热至70℃得水相。另取处方量生育酚于注射用薏苡仁油中，加热70℃溶解得油相。将油相和水相在70℃温度下混合，用组织捣碎机高速搅拌5分钟(转速8000转/分钟)，得初乳。将初乳用微射流高压均质机均化(压力5000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸调节其pH为8.5，注射用水定量，分装，充氮，115℃灭菌30分钟，冷却，取出。

含量测定：

采用外标法测定上述乳剂中冬凌草甲素的含量，HPLC色谱条件：色谱柱：Diamonsil-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝55∶45；检测波长：238nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min。样品0.2ml，用乙醇配制成25ml，进样20μl；主峰保留时间为6.42min；样品冬凌草甲素含量为4.99％。

Claims (8)

1.一种冬陵草甲素静脉乳注射剂，含有下列重量/体积百分比的组分：

冬凌草甲素                   0.01-5％

注射用油                     5-40％

乳化剂                       0.1-20％

助乳化剂                     0.1-2％

等渗调节剂                   0.01-15％

抗氧化剂                     0.005-0.5％

非水性溶剂                   0.1-20％

注射用溶剂和pH调节剂余量加至100ml。

2.根据权利要求1所述的静脉乳注射剂，含有下列重量/体积百分比的组分：

冬凌草甲素                   0.01-2％

注射用油                     5-20％

乳化剂                       0.5-10％

助乳化剂                     0.1-2％

等渗调节剂                   0.1-15％

抗氧化剂                     0.005-0.5％

非水性溶剂                   0.5-10％

注射用溶剂和pH调节剂余量加至100ml。

3.根据权利要求2所述的静脉乳注射剂，其中所述的助乳化剂为泊洛沙姆188(F68)、甘油单油酸酯、油酸；所述非水性溶剂为乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯的一种或几种。

4.根据权利要求2所述的静脉乳注射剂，其中所述的助乳化剂为乙醇。

5.根据权利要求1或2所述的静脉乳注射剂，其中所述乳化剂选自注射用大豆磷脂、蛋黄磷脂中的一种或几种；其中注射用油选自辛癸酸甘油酯、大豆油、红花籽油、玉米油、橄榄油的一种或几种；所述乳化剂选自注射用大豆磷脂、蛋黄磷脂中的一种或几种；所述的等渗调节剂选自甘油、山梨醇、木糖醇、葡萄糖、氯化钠中的一种或几种；所述抗氧化剂选自乙二胺四乙酸二钠、巯基乙酸、生育酚中的一种；所述的pH调节剂选自氢氧化钠溶液、盐酸、醋酸及其盐中的一种；所述注射用溶剂为水。

6.根据权利要求1或2所述的静脉乳注射剂，其中所述的pH调节剂为0.001-5M的氢氧化钠溶液或者0.001-5M的盐酸溶液，调节pH值为4.5-9.5。

7.权利要求1所述的静脉乳注射剂的制备方法，由下述步骤组成：

a.按照下述重量/体积百分比取组分：冬凌草甲素0.01-5％、注射用油5-40％、乳化剂0.1-20％、助乳化剂0.1-2％、等渗调节剂0.01-15％、抗氧化剂0.005-0.5％、非水性溶剂0.1-20％；

b.将冬凌草甲素与乳化剂及抗氧化剂用非水性溶剂充分溶解，将上述有机相加入注射用油中，形成油相；向稍少于处方量的注射用水中加入处方量等渗调节剂，搅拌混匀，得水相；

c.油相、水相加热混合，搅拌乳化或剪切乳化2-300分钟，得初乳；

d.将初乳进一步乳化，加入pH调节剂调pH，注射用水加至100％，分装，充氮，消毒，得冬凌草甲素静脉乳注射液。

8.权利要求1所述的静脉乳注射剂的制备方法，由下述步骤组成：

a.按照下述重量/体积百分比取组分：冬凌草甲素0.01-5％、注射用油5-40％、乳化剂0.1-20％、等渗调节剂0.01-15％、抗氧化剂0.005-0.5％、非水性溶剂0.1-20％；

b.用非水性溶剂将冬凌草甲素及乳化剂充分溶解，在搅拌条件下将述有机相加入溶解有处方量等渗调节剂的稍少于处方量的注射用水中，构成水相，向处方量的注射用油中加入抗氧化剂，构成油相；

c.油相、水相加热混合，搅拌乳化或剪切乳化2-300分钟，得初乳；

d.将初乳进一步乳化，加入pH调节剂调pH，注射用水加至100％，分装，充氮，消毒，得冬凌草甲素静脉乳注射液。

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