CN101396334B - 姜黄素脂质载体及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种姜黄素脂质载体及其可供工业化的制备方法。该姜黄素脂质载体包含治疗有效剂量的姜黄素；脂质；适量的表面活性剂和助表面活性剂及附加剂。本发明制备的姜黄素脂质载体粒径较小，药物包封率较高，能提高药物的稳定性，提高药物的生物利用度。对于实验动物脑缺血再灌注后的神经元保护，维持血脑屏障的完整性，预防和治疗卒中后脑水肿有较好效果。

Description

姜黄素脂质载体及其制备方法

技术领域

本发明属于生物医药材料领域，具体涉及姜黄素脂质载体及其制备方法

背景技术

姜黄素(Curcumin)[1，7-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1，6-heptadiene-3，5-dione]是从姜科姜黄属(Curcuma L)植物姜黄、莪术、郁金的根茎中提取的一种天然有效成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗HIV、抗菌、抗氧化等多种药理作用，而且毒性低，具有临床应用潜力。因为姜黄素及其衍生物能够阻止NF-кB的激活，阻止细胞中诱导型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase，iNOS)的表达，明显清除由其产生的NO，减少由NO与一些含铁的酶形成复合物、减少生成过氧化亚硝酸盐，而发挥神经元保护作用。所以姜黄素是一个有巨大潜力的抗脑缺血的药物。

但是姜黄素在进入临床应用的过程中存在一些问题。该药水溶性差，口服时约89％的药物以原形药物形式从肠道排出。它对光不稳定，在中性和碱性的溶液中不稳定：于37℃、pH为7.2的条件下，30分钟内有超过90％的药物降解，会转化为阿魏酸和香草醛等物质。所以该药生物利用度太低，口服基本无效，影响了临床应用。目前有专利报道将姜黄素制成微乳、共聚物纳米粒和脂质体制剂，以提高药物溶解度和生物利用度。但是这些制剂对药物的稳定性难以保证，而且包封率较低。例如微乳制剂光照下10天降解60％，脂质体的包封率为50-80％之间，共聚物纳米粒包封率为18-50％。

脂质载体，是将物态相异的液态脂质混合到固体脂质中包裹药物得的新型纳米或者微米载药系统。因为载体脂质最终是固态，药物包埋其中，避免了光照和溶液酸碱降解作用，在药物稳定性方面明显优于传统脂肪乳、微乳和脂质体。而且载体脂质是固态和液态油混合的非晶型结构对于载体容纳药物分子，提高包封率，防止在储存过程中药物分子从载体中外排，具有明显优势。传统的固体脂质纳米粒包封率只有70％左右，而且储存中药物被外排出载体降解。我们发明的脂质载体包封率在90％以上，已经稳定放置一年以上。而且一定粒径的脂质微粒可以通过小肠淋巴和peyer’s结吸收提高姜黄素口服生物利用度。我们发明的姜黄素脂质载体，对脑缺血模型大鼠的脑组织起到保护作用。

微乳法制备脂质载体是在高温下，把固态和液态油熔化，加入合适的表面活性剂和水形成热力学稳定的热微乳。然后将热微乳冷却，形成脂质载体。因为微乳是一种热力学稳定体系，粒径较小为10～100nm，而且大小均一。如果在高温下利用微乳作为模板，低温下固化油相，形成脂质载体，则粒子也会具有模板的特征，例如粒径较小，分散均一。

发明内容

本发明的目的是提供一种姜黄素的脂质载体及其制备方法。制得的脂质载体能装载难溶性、不稳定的姜黄素，以提高治疗效果。这是因为具有较高包封率的脂质微粒载体将药物以固态形式包埋其中有效避免了光降解和酸碱的破坏，而且一定粒径的脂质微粒可以通过小肠淋巴和peyer’s结吸收提高口服生物利用度，并且脂质微粒载体有缓释作用。

在本发明中，一种姜黄素的脂质载体，包含姜黄素；脂质；表面活性剂和助表面活性剂，脂质为药学上可接受的固态油和液态油按一定比例混合的非晶型固态混合物，粒径为20～1000nm，各组分比例如下：姜黄素1份，脂质1～100份，表面活性剂和助表面活性剂20～1000份。。

这种脂质载体的固态油为脂肪酸碳链长度在C14～C30的脂肪酸和脂肪酸酯，例如硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、鲸蜡醇、蜂蜡、compritol888、鲸蜡醇棕榈酸酯、三肉豆蔻酸甘油酯、石蜡中的一种或几种。

这种脂质载体的液态油为中链脂肪酸酯或植物油，例如Miglyol、油酸、大豆油、玉米油、芝麻油、红花籽油、葵花籽油、月见草油

姜黄素和脂质的比例按质量计为1：100～1：1，优选为1：30～1：5。

固态油和液态油的比例按质量计为1：9～9：1，优选为3：1～6：1。

脂质载体的水溶液中的表面活性剂包括吐温、司盘、卖泽、苄泽、泊洛沙姆、磷脂、聚氧乙烯蓖麻油、十二烷基硫酸钠中的一种或者几种的组合，水溶液中的助表面活性剂包括乙醇、PEG-400、异丙醇和1，2-丙二醇中的一种或者几种的组合。

一种制备姜黄素脂质载体的方法，包括：

步骤一、将固态油、液态油的混合物和姜黄素在70℃左右融化溶解；

步骤二、加入相同温度下的表面活性剂与助表面活性剂的混合物，表面活性剂和助表面活性剂的质量比为1：1～1：10，优选为1：2～1：7；

步骤三、滴加同温度下的适量水，形成热微乳；

步骤四、搅拌下，将热微乳滴加到0.5～30℃的水中，优选温度为2～4℃，形成姜黄素脂质载体。

一种制备姜黄素脂质载体的方法，包括：

步骤一、将姜黄素和混合油脂溶解在乙醇、甲醇、丙酮、二氯甲烷、甲苯等一种或几种有机溶剂中；

步骤二、搅拌下，将步骤一中的溶液缓慢滴加到70℃含有0.1～5％的表面活性剂水溶液中，形成初乳，将初乳超声或者乳匀均质，得到乳液；

步骤三、将乳液搅拌4～6小时，或者用去离子水稀释，除去溶剂，冷却乳液，得到姜黄素纳米结构或者微米结构的脂质载体。

把姜黄素脂质载体冷冻干燥，得到冻干粉针，由姜黄素纳米结构或者微米结构的脂质载体和冻干保护剂组成；冻干保护剂单糖、双糖和多糖的一种或多种组成；冻干保护剂和脂质的比例为0.5～4.0：1。

姜黄素脂质载体，用于脑缺血再灌注后的神经元保护，预防和治疗中风后脑水肿。

附图说明

图1.按实施例1制备的姜黄素脂质载体的粒径分布图

图2.按实施例1制备的姜黄素脂质载体的透射电镜图

图3.按实施例5制备大鼠大脑切片染色图

具体实施方式

本发明所用药用辅料为市售符合药典标准，如硬脂酸(上海试四赫维化工有限公司)；吐温-60(中国医药集团化学试剂有限公司)；聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor RH40，德国BASF公司)；大豆磷脂(德国Degussa公司)；泊洛沙姆188(南京威尔化工有限公司)。

实施例1

称取80mg硬脂酸、20mgMiglyol和5mg的姜黄素在70℃水浴上熔化溶解，加入相同温度下0.4g吐温60和1.6g乙醇混合溶液及适量蒸馏水，于涡旋混合仪上涡旋1min后，即可形成O/W型透明微乳。离冷却水表面高度约6cm处，在电磁搅拌下(1000r/min)将保温的热微乳以5s一滴的速度滴入4℃10倍体积的水分散介质中，冷却并且除去乙醇，当微乳全部加入后继续以4℃保温搅拌15min，即得纳米结构脂质载体。测定粒径和包封率分别为208.4nm和84.1％。

实施例2

称取80mg单硬脂酸甘油酯、20mg油酸和5mg的姜黄素在70℃水浴上熔化溶解，加入相同温度下0.4g泊洛沙姆188和1.6g1，2-丙二醇混合溶液及适量蒸馏水，于涡旋混合仪上涡旋1min后，即可形成O/W型透明微乳。离冷却水表面高度约6cm处，在电磁搅拌下(1000r/min)将保温的热微乳以5s一滴的速度滴入4℃10倍体积的水分散介质中，当微乳全部加入后继续以4℃保温搅拌15min，即得纳米结构脂质载体。测定粒径和包封率分别为179.1nm和90.1％。

实施例3

称取80mgcompritol888、20mg油酸和5mg的姜黄素在70℃水浴上熔化溶解，加入相同温度下0.4g CremophorRH40和0.8g1，2-丙二醇混合溶液及适量蒸馏水，于涡旋混合仪上涡旋1min后，即可形成O/W型透明微乳。离冷却水表面高度约6cm处，在电磁搅拌下(1000r/min)将保温的热微乳以5s一滴的速度滴入4℃10倍体积的水分散介质中，当微乳全部加入后继续以4℃保温搅拌15min，即得纳米结构脂质载体。测定粒径和包封率分别为159.2nm和92.1％。

实施例4

称取80mg单硬脂酸甘油酯、20mg油酸溶于丙酮，5mg的姜黄素溶解在少量乙醇中，两种溶液混合形成有机相，配置2％十二烷基硫酸钠溶液为水相加热到70℃，搅拌下有机相缓慢注入到水相中，恒温搅拌4～6小时，将热乳液和4℃的去离子水混合冷却，搅拌15min，即得脂质载体。测定粒径和包封率分别为1.2μm和76.4％。

实施例5

姜黄素脂质载体对脑缺血后再灌注大鼠的神经保护作用评价

A.给药方案：制备脑缺血再灌注的大鼠模型。将大鼠分为假手术组、口服姜黄素混悬剂组、口服姜黄素脂质载体组(剂量为姜黄素100mg/kg)。给药后0.5小时造模缺血再灌注，48hr后处死大鼠，制作大脑切片，染色观察。

B.染色结果见图3。假手术组没有出现白色的缺血区，梗死面积为0±0％，口服姜黄素混悬剂组出现大片白色缺血区，梗死面积为34.2±5.6％，口服姜黄素脂质载体组的白色缺血区比注射溶剂组显著缩小，梗死面积为14.9±2.3％。说明口服姜黄素脂质载体组能够显著的减小脑缺血受损组织的体积，有效保护中枢神经。

Claims (6)

1.一种含有姜黄素的脂质载体，包含姜黄素；脂质；表面活性剂和助表面活性剂，其特征在于，脂质为药学上可接受的固态油和液态油按一定比例混合的非晶型固态混合物，粒径为20～1000nm，各组分的质量份比例如下：姜黄素1份，脂质30～5份，表面活性剂和助表面活性剂20～1000份，表面活性剂和助表面活性剂的质量比为1∶1～1∶10；所述的固态油和液态油的比例按质量计为3∶1～6∶1；

其中，所述的固态油为硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯中的任意一种；所述的液态油为Miglyol、油酸中的任意一种；所述的表面活性剂为吐温、泊洛沙姆、磷脂、聚氧乙烯蓖麻油、十二烷基硫酸钠中的任一；所述的助表面活性剂为乙醇或者1，2-丙二醇。

2.一种制备权利要求1所述的含有姜黄素的脂质载体的方法，其特征在于，包括：

步骤一、将固态油、液态油的混合物和姜黄素在70℃融化溶解；

步骤二、加入相同温度下的表面活性剂与助表面活性剂的混合物；

步骤三、滴加同温度下的适量水，形成热微乳；

步骤四、搅拌下，将热微乳滴加到0.5～30℃的水中，形成含有姜黄素的脂质载体。

3.如权利要求2所述的制备含有姜黄素的脂质载体的方法，其特征在于，其中表面活性剂和助表面活性剂的质量比为1∶2～1∶7。

4.一种制备权利要求1所述的含有姜黄素的脂质载体的方法，包括：

步骤一、将姜黄素和混合油脂溶解在乙醇、甲醇、丙酮、二氯甲烷、甲苯中的任意一种或几种有机溶剂中；

步骤二、搅拌下，将步骤一中的溶液缓慢滴加到70℃含有0.1～5％的表面活性剂水溶液中，形成初乳，将初乳超声或者乳匀均质，得到乳液；

步骤三、将乳液搅拌4～6小时，或者用去离子水稀释，除去溶剂，冷却乳液，得到含有姜黄素的脂质载体。

5.权利要求1所述的含有姜黄素的脂质载体，通过冷冻干燥制得冻干粉针，其特征在于由姜黄素脂质载体和冻干保护剂组成，冻干保护剂为单糖、双糖和多糖的一种或多种组成，冻干保护剂和脂质的比例为0.5～4.0∶1。

6.权利要求1所述的含有姜黄素的脂质载体在制备预防和治疗中风后脑水肿的药物中的应用。

Images