CN101386835A - 花叶花杆绿竹芽体组织培养基及组培快繁方法 - Google Patents
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
一种花叶花杆绿竹芽体组织培养基主要由MS基本培养基、MS盐类、BA 1.0－5.0mg/L和IBA 20－100ppm、White's维生素、100mg/L的肌醇组成，能有效地诱导增殖丛生芽和生根，快速培育、繁殖出再生苗。用本组织培养基组培快繁花叶花杆绿竹经过下列四个步骤：一是外植体的采集与消毒，二是丛生芽的诱导，三是丛生芽的增殖与快繁，四是诱导生根与移栽。采用本培养基与组培快繁方法，两个月能使增殖系数达3.0－5.0，试管生根率高达40％，试管苗的移栽成活率达95％。本发明突破了竹类外植体组织培养出再生植株的难题，节省了用地、母株、时间与成本，繁殖不受季节制约，为大量盆景培植、大面积绿化用竹，奠定了快速和充足的竹苗生产基础。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种中径丛生竹的芽体组织培养基及组培快繁方法。
【背景技术】
花叶花杆绿竹(Bambusa Oldhamii vsl)，是禾本科竹亚科绿竹属，丛生竹种，杆与叶片现白绿条纹，具有独特的观赏价值。它是我国南方优良的笋材两用竹种之一，是制作家具、乐器和工艺品的优良材料。笋产于春末秋初(5～10月)，笋期长达5个月，笋质脆嫩，鲜甜可口，营养丰富，含有17种人体必需的氨基酸和磷、铁、钙等矿物元素及维生素。竹材纤维长，易分解，是优良的造纸原料。花叶花杆绿竹根系发达，在美化环境，防浪护岸，防止水土流失方面起着重要作用。一直以来靠移栽母竹或竹鞭来繁殖，速度慢、用地多、运输不便、成本高和受季节制约。近年，探索竹类组织培养和快繁技术的有志者日益增多。综合竹类组织培养研究现状，本申请人有志于利用植株的顶芽和侧芽为外植体诱导出花叶花杆绿竹再生植株，大量而迅速的获得性状不变异竹苗，无疑具有一定的研究价值和现实意义，现已初见成效。经检索和市场调查，至今未见用花叶花杆绿竹的芽体为外植体组织诱导出再生植株的资料报道和相关实物问世。
【发明内容】
本发明要解决的技术问题是用花叶花杆绿竹的芽体为外植体，配制一种有效的组织培养基，用于花叶花杆绿竹的芽体组织培养并诱导其试管苗生根，提供一套完整的组培快繁方法。具体说本发明的任务有四：一是提供一种诱导丛生芽的培养基，二是提供一种丛生芽增殖培养基，三是提供前期和后期生根培养基，四是提供整套花叶花杆绿竹芽体组织培养快速繁殖方法。
上述任务通过如下措施实现：
本花叶花杆绿竹芽体组织培养基，含有MS基本培养基、MS盐类，还含有0.3-3mg/L或1-5mg/L的BA即苄氨基腺嘌呤或50ppm的IBA即吲哚丁酸和100mg/L的肌醇、White’s维生素，附加各占培养基总重量0.2-0.4％的水晶洋菜和1.5-4.5％的蔗糖，配制成三个阶段分别应用的诱导丛生芽培养基、丛生芽增殖培养基、前期和后期生根培养基，各培养基的pH值5.2-6.0。
由MS盐类、White’s维生素、100mg/L的肌醇、0.3-3.0mg/L的BA、占培养基总重量0.2-0.4％的水晶洋菜和1.5-4.5％的蔗糖，配制成诱导丛生芽培养基，pH值5.2-6.0。
由MS盐类、White’s维生素、100mg/L的肌醇、1-5.0mg/L的BA、占培养基总重量0.2-0.4％的水晶洋菜和1.5-4.5％的蔗糖，配制成丛生芽增殖培养基，pH值5.2-6.0。
由100mg/L的肌醇、White’s维生素、50ppm的IBA、占培养基总重量2.5％的水晶洋菜和3％的蔗糖，配制成前期生根培养基，由MS基本培养基作后期生根培养基。
用本花叶花杆绿竹芽体组织培养基进行组培快繁方法经过下列步骤：
(1)外植体的采集与消毒：采集春天萌发枝条，带回实验室，剥去杆箨，自来水冲洗2h，在稀释至0.5％NaCI0溶液中，真空条件下浸泡10min，用无菌水冲洗五次后，显微镜下切取长约0.2-1mm顶芽和侧芽芽体组织；
(2)丛生芽的诱导：将切得的芽体组织接种到如权利要求2所述的诱导丛生芽的培养基中，光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照16h/d条件下，7-10d后芽始萌，15-20d后基部生出新的丛生芽；
(3)丛生芽增殖与快繁：将上述丛生芽切下，接种于如权利要求3所述的丛生芽增殖培养基中，光照强度2500Lux，光照16h/d，25±2℃条件下，10-15d后伸长，两个月后增殖系数达3-5倍；
(4)诱导生根与移栽：将伸长后的丛生芽3-4个为一丛，接种到如权利要求4所述的前期生根培养基中培养1-3天，再接种到后期生根培养基即MS基本培养基中，光照强度3700Lux，光照16h/d，25±2℃条件下，15-20d后开始生根，培养50-60d后，生根率达40％，取生长良好的再生植株置于驯化室，强光20000Lux下驯化2周移栽，先用清水洗去根部的培养基，种植于蛭石:珍珠岩:泥炭＝1:1:1的混合基质中，单个花盆套透明塑料袋，该袋每二天剪一小口，一周后弃袋移入温室栽种即成。
本发明的有益效果是突破了中径丛生竹，尤其是用花叶花杆绿竹的芽体组织为外植体，诱导出再生植株的难题，一改传统的母竹移栽、竹鞭移栽的方法，节省了母竹、用地面积、培植时间和运输成本，且不受季节的制约，为景点用竹、笋用竹、大面积绿化用竹提供了快速而充足地繁殖竹苗的有效途径。
【具体实施方式】
本发明下面结合实施例作进一步详述：我国的竹类组织培养出再生植株，尚处于起步阶段。有所成就的是以芽繁芽，未经过脱分化的方式实现，而且选用的是幼年植株、胚等组织，未见有用成年植株顶芽和侧芽的芽体为外植体，组培成再生植株的报导，众多竹类组培实践者公认竹类组培苗生根困难。因此，本发明的主攻方向是创造优良的人工环境，从改善丛生竹的组织细胞增殖、生根条件着手，来攻克丛生竹组培难点。为此，对培养基原料的选用、选配，浓度、pH值、光照、温度做了一系列对比试验，如丛生芽增殖培养时，采用不同的芽丛数进行对比试验，筛选出增殖系数高达3-5倍的培养基，从而为最佳芽丛数增殖提供了培育的基础条件。针对丛生竹种组培苗生根困难的问题，先用50ppmIBA溶液中培养不同天数，筛选出最佳处理天数，再用不同的IBA浓度处理，从而筛选最佳浓度，接种到MS基本培养基，60天的生根率可达40％。总之，花叶花杆绿竹芽体组培出再生植株，是对外植体的处理条件、培养基、基质等进行严格筛选的结果。
花叶花杆绿竹芽体培养基中MS基本培养基、MS盐类、White’s维生素可市售获得，为行业中通用，按商品说明书配用。另需加入BA、IBA生长促进剂、凝固剂和营养剂，凝固剂及其添加量选定为0.25％的水晶洋菜，3％的蔗糖营养剂，这是一种优选方案，培养基的pH值5.2-6.0，最佳值为5.7，按生长促进剂的成分与添加量的不同，配制成不同诱导阶段应用的培养基：一是诱导丛生芽的培养基，二是丛生芽增殖培养基，三是前期和后期生根培养基。
现将二种丛生芽培养基的四个实施例的原料与配比列表如下：
两种丛芽培养基中因肌醇为100mg/L的单一定值，White’s维生素为通用商品，加入量按商品说明书办，故未在表中列入。还有一种前期和后期生根培养基，因给出的各原料都是最佳的单一配比数值，因此不列入表内，只在步骤(4)中插入介绍。
用花叶花杆绿竹的顶芽和侧芽的芽体做外植体，进行组培快繁方法最佳方案的实施例1介绍如下(参阅表中实施例1)，步骤是：
(1)外植体的采集与消毒：采集带有萌发顶芽和侧芽的枝条，带回实验室，剥去杆箨，自来水冲洗2h，在稀释至0.5％NaCIO溶液中，真空条件下浸泡10min，用无菌水冲洗五次，显微镜下切取长约0.2-1mm的芽体组织；
(2)丛生芽的诱导：将切得的芽体组织接种到权利要求2所述的MS盐类、White’s维生素、100mg/L的肌醇、1.0mg/L的BA、0.25水晶洋菜、3％蔗糖，配制成的诱导丛生芽的培养基中，光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照16h/d条件下，7-10d后芽始萌，15-20d后基部生出新的丛生芽；
(3)丛生芽增殖与快繁：将上述丛生芽切下，接种到权利要求3所述的由MS盐类、White’s维生素、100mg/L的肌醇、3.0mg/L的BA、0.25％水晶洋菜、3％蔗糖，配制成的诱导丛生芽增殖培养基中，光照强度2500Lux，光照16h/d，25±2℃条件下，10-15d后伸长，两个月后增殖系数达3-5倍；
(4)诱导生根与移栽：将伸长后的丛生芽3-4个为一丛，接种到权利要4所述的100mg/L的肌醇、White’s维生素、50ppm的IBA、0.25％的水晶洋菜、3％的蔗糖配制成的前期生根培养基培养1-3天，再接种到后期生根培养基即MS基本培养基中，光照强度3700Lux，光照16h/d，25±2℃条件下，15-20d后开始生根，培养60d后，生根率达40％，取生长良好的再生植株置于驯化室，强光20000Lux下驯化2周移栽，先用清水洗去根部的培养基，种植于三者体积比为蛭石:珍珠岩:泥炭＝1:1:1的混合而成的基质中，单个花盆套透明塑料袋，该袋每二天剪一小口，一周后弃袋移入温室栽种即成。
其余实施例2-4参照表中对应的原料及配比值，按实施例1相同方法，均能分化、诱导和快繁出花叶花杆绿竹苗，只是分化率、丛芽数、生根率、健壮程度有差异，总的说所取值越接近最佳方案值的越理想，如有需要，本申请人将随时提供各阶段实物苗的照片，以供审核。
Claims (5)
1、一种花叶花杆绿竹芽体组织培养基，含有MS基本培养基、MS盐类，其特征是还含有0.3-3mg/L或1-5mg/L的BA即苄氨基腺嘌呤或50ppm的IBA即吲哚丁酸、White’s维生素、100mg/L的肌醇，附加占各自培养基总重量0.2-0.4％的水晶洋菜和1.5-4.5％的蔗糖，配成三个阶段分别应用的诱导丛生芽培养基、丛生芽增殖培养基和生根培养基，各培养基的pH值5.2-6.0。
2、如权利要求1所述的花叶花杆绿竹芽体组织培养基，其特征是是由MS盐类、White’s维生素、100mg/L的肌醇、0.3-3.0mg/L的BA、占培养基总重量0.2-0.4％的水晶洋菜和1.5-4.5％的蔗糖，配制成诱导丛生芽培养基，pH值5.2-6.0。
3、如权利要求1所述的花叶花杆绿竹芽体组织培养基，其特征是由MS盐类、White’s维生素、100mg/L的肌醇、1-5.0mg/L的BA、占培养基总重量0.2-0.4％的水晶洋菜和1.5-4.5％的蔗糖，配制成丛生芽增殖培养基，pH值5.2-6.0。
4、如权利要求1所述的花叶花杆绿竹芽体组织培养基，其特征是由100mg/L的肌醇、White’s维生素、50ppm的IBA、占培养基总重量0.25％的水晶洋菜和3％的蔗糖，配制成前期生根培养基，由MS基本培养基作后期生根培养基。
5、一种用如权利要求1-4任一项所述的花叶花杆绿竹芽体组织培养基进行组培快繁方法经过下列步骤：
(1)外植体的采集与消毒：采集春天萌发枝条，带回实验室，剥去杆箨，自来水冲洗2h，在稀释至0.5％NaCIO溶液中，真空条件下浸泡10min，用无菌水冲洗五次后，显微镜下切取长约0.2-1mm芽体的组织；
(2)丛生芽的诱导：将切得的芽体组织接种如权利要求2所述的诱导丛生芽的培养基中，光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照16h/d条件下，7-10d后芽始萌，15-20d后基部生出新的丛生芽；
(3)丛生芽增殖与快繁：将上述丛生芽切下，接种到如权利要求3所述的丛生芽增殖培养基中，光照强度2500Lux，光照16h/d，25±2℃条件下，10-15d后伸长，两个月后增殖系数达3-5倍；
(4)诱导生根与移栽：将伸长后的丛生芽3-4个为一丛，接种到如权利要求4所述的前期生根培养基中培养1-3天，再接种到后期生根培养基即MS基本培养基中，光照强度3700Lux，光照16h/d，25±2℃条件下，15-20d后开始生根，培养50-60d后，生根率达40％，取生长良好的再生植株置于驯化室，强光20000Lux下驯化2周移栽，先用清水洗去根部的培养基，种植于蛭石:珍珠岩:泥炭＝1:1:1的基质中，单个花盆套透明塑料袋，该袋每二天剪一小口，一周后弃袋移入温室栽种即成。
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2008
- 2008-10-14 CN CNA2008101216135A patent/CN101386835A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
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Open date: 20090318 |