CN101379401A - 利尿钠肽和胎盘生长因子水平对被选择参与心脏负荷测试的个体进行风险分级的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于确定个体是否将遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险的方法，包括步骤：(a)测量，优选地体外测量，胎盘生长因子的水平，其中(b)若胎盘生长因子的水平至少是增加的，则该个体至少具有遭遇因心脏负荷测试所致有害事件的风险。在另一个实施方案中，额外地测量另一种标记，具体地是利尿钠肽，最具体是NT－proBNP。本发明允许根据应当在其下进行心脏负荷测试的环境和条件而对患者分级。

Description

利尿钠肽和胎盘生长因子水平对被选择参与心脏负荷测试的个体进行风险分级的用途
本发明涉及对被选择参与(elected for)心脏负荷测试的个体进行风险分级(stratification)的方法和用途。
心脏负荷测试是重要和使用广泛的用于诊断心血管机能障碍、尤其冠心病的试验。开展心脏负荷测试以研究心血管系统尤其心脏在运动期间如何表现。在常见的实例中，要求个体在平板(treadmill)上行走或骑固定式自行车，同时记录诊断参数如心电图或超声心动图。运动也可以通过施用药物如多巴酚丁胺或腺苷而刺激。该试验由全科医生和当地心血管病医生例行实施。
大部分个体接受心脏负荷测试而未遭遇任何问题。然而，很多个体因该测试而发生严重的心血管有害事件如心肌梗塞(见Pina，I.L.，Balady，G.J.，Hanson，P.等(1995)临床运动测试实验室指南。Circulation，第91卷，912-921(Pina，I.L.，Balady，G.J.，Hanson，P.，et al.(1995)Guidelines for Clinical Exercise Testing Laboratories.Circulation，vol.91，912-921))。这些有害事件甚至可能是致命或几乎致命的。即便非致命性有害事件如非致命性心肌梗塞可以产生严重后果，原因在于因梗死而破坏的肌肉组织不可能再生。因此，可能存留严重的心脏功能损害及进一步梗塞或有害事件的倾向并且负荷测试对于该个体具有巨大风险。
一种使负荷测试更安全的方法是仅在临床环境(clinical setting)下进行该测试并且在高级心脏生命支持方面受过训练的医生做好介入准备。实际上，已经提出了这类建议(见Pina，I.L.，Balady，G.J.，Hanson，P.等(1995)，Circulation，第91卷，上文所引用)。然而，这种环境并非各地均可获得并且此类预防措施不仅增加测试所需要的资源，还可能引起不想要的漫长等待名单和延误负荷测试约定的安排。此类延误本身可能具有风险，因为延误了重要的诊断。
目前，仅推荐(referred)具有已知相关心脏病史的个体至临床环境，因为此类个体似乎具有在试验期间使已经严重受损的器官过度劳损(overstraining)的风险。因此，仍存在不安全环境中接受负荷测试的经历有害事件的个体。
在一些情况下，在测试进行前测量心脏功能的参数例如超声心动图以检测相关的心功能障碍。然而此类测量似乎是不充分的，因为众多心功能障碍仍无法通过超声心动图检测到。
在一些情况下，测定肌钙蛋白T、肌酸激酶(CK)或肌红蛋白的水平以排除在测试时心肌坏死的存在。然而，这些测试仅检测严重心脏病。
Foote等在接受运动负荷测试的患者中测量在运动负荷测试之前和之后的利尿钠肽BNP和NT-proBNP(NT-proBNP)的水平(Foote，R.S.，Pearlman，J.D.，Siegel，A.H.，Yeo，K-T.J.(2004)。通过B型利尿钠肽的改变而检测运动诱导的局部缺血。Journal of the American College ofCardiology，第44卷，第10期，第1980-1987页(Foote，R.S.，Pearlman，J.D.，Siegel，A.H.，Yeo，K-T.J.(2004).Detection of Exercise-InducedIschemia by Changes in B-Type Natriuretic Peptides.Journal of theAmerican College of Cardiology，vol.44，no.10.，pp.1980-1987))。Foote等将测试之前和之后的水平与负荷测试期间心肌缺血的存在或不存在建立关联。然而，仅已知已患有冠状动脉疾病的患者被选择参与该研究。此外，仅具有在正常范围内的NT-proBNP和BNP的静息水平(restinglevels)的患者报名。因此，该研究没有得出结论，即NT-proBNP和BNP是否允许对个体根据其在负荷测试期间遭受有害事件的风险而分级。
Weber等分析了在运动负荷测试之前和之后NT-proBNP在稳定心绞痛患者中的水平(Weber，M.，Dill，T.，Arnold，R.，Rau，M.等(2004)。氨基端B型利尿钠肽预测了稳定型心绞痛患者中冠状动脉疾病和局部缺血的程度.Am Heart J，第148卷，第612-20页(Weber，M.，Dill，T.，Arnold，R.，Rau，M.，et al.(2004).N-terminal B-type natriuretic peptidepredicts extent of coronary artery disease and ischemia in patients withstable angina pectoris.Am Heart J，vol.148，pp.612-20))。他们发现在他们的患者样品中，在负荷测试期间，与无可诱导的缺血的患者相比，NT-proBNP的水平在那些具有可诱导的缺血的患者中升高(396pg/ml对160pg/ml)。
Sabatine等检查了在运动负荷测试之前和之后循环BNP、NT-proBNP和NT-proANP(NT-proANP)的水平(Sabatine，M.S.，Morrow，D.A.，de Lemos，J.A.，Omland，T.，Desai，M.Y.等(2004)。循环性利尿钠肽水平的急促改变与心肌局部缺血有关。Journal of the AmericanCollege of Cardiology，第44卷，第10期，第1988-95页(Sabatine，M.S.，Morrow，D.A.，de Lemos，J.A.，Omland，T.，Desai，M.Y.，et al.(2004).Acute Changes in Circulating Natriuretic Peptide Levels in Relationto Myocardial Ischemia.Journal of the American College of Cardiology，vol.44，no.10，pp.1988-95))。他们发现在他们的患者样品中，NT-proBNP的水平与没有缺血、轻微至中度缺血及严重缺血相关。对BNP和NT-proANP得出类似的结果。
提及的研究集中在负荷测试期间特定的利尿钠肽和缺血的存在或不存在。然而，在这些研究中发现的水平显著不同，因而怀疑单独的利尿钠肽是否允许足够可靠地预测负荷测试期间缺血的出现。
因而，在现有技术中，似乎没有特别适于确定个体是否会遭遇因心脏负荷测试所致的心血管有害事件的风险的方法。此外，需要对个体根据其遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险而分级的方法和用途。
本发明的目的通过用于确定个体是否将遭遇因心脏负荷测试(cardiac stress testing)所致心血管有害事件(cardiovascular adverse event)的风险的方法而实现，所述方法包括步骤:
a)测量，优选地体外测量，胎盘生长因子或其变体的水平，其中
b)若胎盘生长因子或其变体的水平至少是增加的，则该个体至少具有遭遇因心脏负荷测试所致有害事件的风险。
此外，本发明的目的通过用于确定个体是否将遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险的方法而实现，所述方法包括步骤:
a)测量，优选地体外测量，胎盘生长因子或其变体的水平，
aa)测量，优选地体外测量，利尿钠肽或其变体的水平，其中
ba)若胎盘生长因子和利尿钠肽或其相应变体的水平是至少增加的，则该个体至少具有遭遇因心脏负荷测试所致有害事件的风险。
根据本发明的方法还可以包括取得个体的体液或组织样品的步骤。
根据本发明，在个体中测得的胎盘生长因子(PlGF)的水平允许确定个体是否可能遭遇因心脏负荷测试所致有害事件的风险。更具体地，PlGF的增加的水平表示相应个体具有遭受因负荷测试所致有害事件的风险。
因此，通过测量PlGF的水平，可以将被选择参与负荷测试的个体分配至给定风险的组，例如具有遭遇因心脏负荷测试所致有害事件的风险(增加或高度增加的)的那些个体和没有增加的遭受有害事件风险的那些个体。
在本发明的上下文中，已经认识到PlGF的水平提供了指示遭遇因心脏负荷测试所致有害事件的风险的信息。已经认识到与利尿钠肽的水平相反，PlGF的水平较少受高血压和短期变化如身体运动的影响。此外，PlGF的水平似乎指示个体中是否存在更慢性的心脏病症和/或更严重的心脏病症。本发明已经认识到有可能在风险预测的情境中利用由PlGF水平提供的信息。
相反，利尿钠肽如BNP、NT-proBNP和NT-proANP的水平似乎更容易受个体的年龄和性别影响。这些肽的水平还可以在高血压的情况下增加。所述水平还可以在除灌注缺损以外的心肌病情况下(例如心肌炎或瓣膜问题的情况下)增加。还已知例如BNP水平可以在运动后在运动员和无心肌缺血的正常受试者中增加。因此，BNP水平可以仅仅由于在该水平被测量前不久的身体运动而增加。
还应当注意到存在患有已知冠状动脉疾病的如此患者，在其中NT-proBNP和BNP的水平在静息时(at rest)处于正常范围内(Foote等(2004)，上文所引用)。在这个研究中，显然存在负荷测试期间表现出心肌缺血的众多患者，虽然根据在其它研究中发现的相关的水平，他们的NT-proBNP和BNP的水平可能与可诱导的心肌缺血不相关(Weber等，(2004).Am Heart J，第14卷8，第612-20页和Sabatine等(2004).Journalof the American College of Cardiology，第44卷，第1988-95页)(Weberet al.，(2004).Am Heart J，vol.148，pp.612-20和Sabatine，et al.(2004).Journal of the American College of Cardiology，vol.44，pp.1988-95))，上文均已引用)。
因此，仅测量BNP、NT-proBNP和NT-proANP水平可能导致关于可诱导的心肌缺血的众多假阳性和/或假阴性结果。
然而，在本发明的上下文中，已经认识到可以同时或非同时地组合测量PlGF和利尿钠肽的水平，以便确定个体是否会遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险。已经认识到由PlGF和利尿钠肽提供的信息可以有利地彼此相互补充并且因此可以提供改良的风险确定。
有利地，本发明将允许分配个体至负荷测试的不同环境。例如，本发明显示具有增加的风险或高度增加的风险的个体将优选地在这样的环境中进行测试，其中所述环境在有害事件出现时提供改良的介入预防措施。在此类个体中，还可以降低过劳(strain)的水平以减少遭受有害事件的风险。
相反，根据本发明的方法显示其没有增加的遭受有害事件的风险的个体可以如计划那样接受测试，可能在此个体的当地全科医生处进行。这可以允许避免在医院不必要的漫长等待名单并且允许尽快地进行该测试。当然，是否在本地开业医生处测试个体的决定将由基于其它信息如一般健康状况、心脏病史等做决定的医生判断。
本发明利用某些生物标记，尤其＂生物化学标记”和“分子标记”。生物标记是本领域技术人员已知的。该术语涉及在个体中取决于某种状况、疾病或并发症的存在或不存在而差异性存在(即以增加或减少的水平存在)的分子。术语“生物化学标记”和“分子标记”是本领域技术人员已知的。尤其，生物化学标记或分子标记是在某种状况、疾病或并发症存在或不存在时差异性存在(例如通过增加或减少的表达或周转水平)的基因表达产物。通常，将分子标记定义为核酸(如mRNA)，而生物化学标记是蛋白质或肽。合适的生物标记的水平可以指示特定状况、疾病或风险的存在或不存在，并且因此允许诊断或确定该状况、疾病或风险。
本发明具体地利用PlGF和利尿钠肽作为生物化学标记。
胎盘生长因子(PlGF，又称作PGF)是本领域技术人员众所周知的。它是与血管透性因子(VPF或VEGF)有关的蛋白质。该蛋白质长149个氨基酸并且与VPF的血小板衍生性生长因子样区域共有53％的同一性。PlGF似乎参与发育期间的血管发生、成年生活的某些时期和肿瘤发生。
根据本发明的利尿钠肽包含ANP型和BNP-型肽及其变体(见例如Bonow，R.O.(1996).对心利尿钠肽的新理解。Circulation 93:1946-1950(Bonow，R.O.(1996).New insights into the cardiac natriuretic peptides.Circulation 93:1946-1950))。
ANP-型肽包含pre-proANP、proANP、NT-proANP和ANP。
BNP-型肽包含pre-proBNP、proBNP、NT-proBNP和BNP。
pre-pro肽(在pre-proBNP的情况下134个氨基酸)包含被酶切以释放原肽(pro peptide)(在proBNP的情况下108个氨基酸)的短信号肽。所述原肽被进一步切成N-末端原肽(NT-原肽，在NT-proBNP的情况下76个氨基酸)和活性激素(在BNP的情况下32个氨基酸、在ANP的情况下28个氨基酸)。
根据本发明的优选的利尿钠肽是NT-proANP、ANP、NT-proBNP、BNP及其变体。ANP和BNP是活性激素并且比他们各自的非活性对应物NT-proANP和NT-proBNP具有更短的半寿期。因此，取决于目的时间过程，测量活性形式或非活性形式可能是有利的。根据本发明的最优选的利尿钠肽是NT-proBNP及其变体。
术语＂变体＂在本上下文中涉及基本上与所述蛋白质或肽相似的蛋白质或肽。本领域技术人员充分理解术语“基本上相似”。尤其，变体可以是与人群体中最普遍的肽同种型的氨基酸序列相比显示氨基酸交换的同种型或等位基因(等位片段，allele)。优选地，这种基本上相似的肽具有与蛋白质或肽的最普遍的同种型至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、最优选至少95％的序列相似性。降解产物也是基本上相似的，例如蛋白水解降解产物，其仍被诊断方法或被针对相应全长蛋白质或肽的配体所识别。术语＂变体＂还意味着涉及剪接变体。
术语＂变体＂也涉及翻译后修饰的肽如糖基化肽。例如，已经对PlGF描述了N-糖基化。“变体”也是这样的肽，其在样品收集后已经例如通过将标记物、尤其放射性标记物或荧光标记物与肽共价或非共价连接而加以修饰。
具体变体的实例和用于测量它们的方法是已知的(见例如Ala-Kopsala，M.，Magga，J.，PeuhkUrinen，K.等(2004):分子异质性对测量A型和B型利尿钠肽的循环性氨基端片段的测量影响巨大。ClinicalChemistry，第50卷(9)，1576-1588(Ala-Kopsala，M.，Magga，J.，Peuhkurinen，K.et al.(2004):Molecular heterogeneity has a major impacton the measurement of circulating N-terminal fragments of A-type andB-type natriuretic peptides.Clinical Chemistry，vol.50(9)，1576-1588))。
存在PlGF的四种同种型，名为PlGF-1(PGF1)、PlGF-2(PGF2)、PlGF-3(PGF3)和PlGF-4(PGF4)。在本发明上下文中优选的同种型是血液中存在的PlGF-1。
本发明还包括同时或非同时地测量组合的不同的标记。尤其，本发明涉及测量与利尿钠肽、尤其与NT-proBNP组合的PlGF。根据本发明，任何其它标记可以与PlGF组合测量。此类标记的实例包括心脏肌钙蛋白T和/或IMA(缺血修饰的白蛋白)。
术语＂心脏负荷测试＂(在本发明的上下文中，其也简单地称作＂负荷测试＂)是本领域技术人员已知的。进行心脏负荷测试以研究心血管系统尤其心脏在运动期间的表现。在心脏负荷测试，个体接受心脏过劳，同时记录心血管功能的一种或多种诊断参数。
过劳可以是身体的，尤其它可以是身体运动(称作＂运动负荷测试＂或＂运动耐量试验＂)，例如过劳可以是在平板上行走或跑步，骑行固定式自行车(称作＂自行车测力学(bicycle ergometry)＂)，或手臂运动测试(用手臂测力计)。过劳还通过给予个体的某些药物(例如双嘧达莫、多巴酚丁胺或腺苷)而刺激。通常，此类药物诱导心跳频率增加并且因此过劳增加。优选地，此类药物也没有心毒性。药物诱导的过劳可以例如用于残障个体。优选地，过劳是天然的(of a nature)，在有害事件的情况中可以迅速被消除。因此，例如血量的增加是优选性更低的身体过劳类型。作为另一个实例，施用的药物应当在体内具有短半寿期。
通常，过劳水平在试验期间增加，即，同时记录一种或多种诊断参数。例如平板的陡度和速度增加，自行车驱动的阻力增加，或药物剂量增加。
在心脏负荷测试期间记录的心血管功能的诊断参数可以是任何类型的。它可以包括任何下列参数或其组合:(a)心电图记录(尤其用于分析ST-节段改变(ST-segment change)，尤其升高或降低)，(b)超声心动图记录，(c)放射性同位素分布记录，例如铊闪烁图，(d)血压记录，(e)呼吸率和/或心率的记录，(f)通气气体交换分析。
在ST-节段改变尤其升高或降低、伴随心肌缺血征兆的胸痛和/或血压异常增加的情况下，应当中断试验。
负荷测试的常见实例是运动EKG，其包括运动测试(在此时通常是骑固定自行车或在平板上行走)，同时记录心电图。
负荷测试的其它细节在以上提及的文章中由Pina等(1995)阐明，该文献在本文中通过援引完整地并入。尤其见标题为＂设备(Equipment)＂和＂设备校准(Equipment calibration)＂的部分。
本发明允许确定(或预测)个体是否会遭遇因心脏负荷测试所致任何严重程度的心血管有害事件的风险。术语＂心血管有害事件＂(或简单地是＂有害事件＂)是本领域技术人员已知的。在本发明的上下文中，术语＂心血管有害事件＂(或简单地是＂有害事件＂)涉及任何类型的心脏或心血管系统功能障碍。尤其，该术语涉及任何类型的可逆或不可逆性心肌灌注缺损、可逆或不可逆性心肌缺血、ST-节段改变(尤其升高或降低)、心绞痛、心肌坏死、心肌梗塞(MI，包括ST-升高的MI或非-ST-升高的MI)和中风。严重有害事件的实例包括不可逆性心肌灌注缺损或不可逆性心肌缺血、心肌坏死、心肌梗塞(MI，包括ST-升高的MI或非-ST-升高的MI)和中风。极严重的有害事件的实例包括心肌梗塞(MI，包括ST-升高的MI或非-ST-升高的MI)和中风。
具体地，本发明涉及因心脏负荷测试而出现的有害事件。本领域技术人员已知在何种情况下有害事件可以视为“因”负荷测试而发生。这种有害事件是可视为由负荷测试造成、引起或促成的有害事件。有害事件已经因负荷测试而出现的常见指示物是负荷测试与有害事件间的密切时间联系。因此，若有害事件在负荷测试期间或紧接在负荷测试后(尤其在几小时或(一)日范围内)出现，则该有害事件可以具体地视为因负荷测试而发生。这可以由出现稍后诊断出的功能障碍的最初症状指示，例如若麻木或瘫痪的最初征兆在试验期间或紧邻试验之后出现，则中风应当视为因负荷测试而发生。
还已经发现除负荷测试之外，本发明也提供诊断性信息。例如，若根据本发明的方法指示增加或高度增加的风险，则该个体可以接受进一步的心脏检查，即便负荷测试本身没有揭示心血管机能障碍。
根据本发明的个体可以是被选择参与心脏负荷测试的任何外观健康个体或患者。外观健康的个体可以是没有经历过心血管机能障碍症状的任何个体。这种个体可以例如是接受常规健康检查(如众多公司或政府为其雇员建议的)的人。其它实例包括接受健康测试的运动员或飞行员。
相反，患者是已经经历过(或正在经历)心血管机能障碍症状(例如胸痛、呼吸短促(呼吸困难)、心悸)的个体。具体地，患者是显示根据NYHA分类而将其划分为患有心血管机能障碍的症状的个体。
NYHA分类是根据纽约心脏病学会(New York Heart Association)(NYHA)对心血管机能障碍的功能性分类系统。I类患者没有明显的心血管机能障碍症状。身体活动不受限制，并且普通身体活动不引起过度疲惫，心悸或呼吸困难(呼吸短促)。II类患者具有轻微的身体活动限制。他们在休息时感到舒服，不过普通身体活动导致疲惫，心悸或呼吸困难。III类患者显示明显的身体活动限制。他们在休息时感到舒服，不过低于普通活动的身体活动导致疲惫、心悸或呼吸困难。IV类患者不能在无不适情况下进行任何身体活动。他们在休息时显示心机能不全症状。若进行任何身体活动，则不适感增加。
本发明对于将划分到NYHA的I或II类中的患者是特别有利的。根据现有技术，划分到NYHA的I或II类中的患者可以接受负荷测试，而无预期的风险。有利地，本发明允许在这些患者群体中检测出有风险的患者。此类患者应当优选地仅在如本说明书中所述的条件下进行负荷测试。同样也适用于不显示症状的个体，即外观健康个体。
可以用来确定相应肽的方法和诊断手段是本领域技术人员已知的。这些方法包括基于微板ELISA的方法、全自动或机器人免疫测定法(可例如在ElecsysTM分析仪上使用)、CBA(酶的钴结合测定(enzymaticCobalt Binding Assay)，可例如在Roche-HitachiTM分析仪上使用)和胶乳凝集测定(可例如在Roche-Hitachi TM分析仪上使用)。
此外，本领域技术人员熟知测量肽或多肽水平的不同方法。术语“水平”涉及肽或多肽在个体或采自个体的样品中的量或浓度。
根据本发明的术语＂测量＂涉及确定、优选地半定量或定量地确定蛋白质、肽、多肽或其它目的物质的量或浓度。具体的目的蛋白质或肽在本发明上下文中是利尿钠肽和PlGF。测量可以直接或间接地进行。间接测量包括测量细胞应答、结合的配体、标记物或酶反应产物。
在本发明的上下文中，量也涉及浓度。显然从已知大小的样品中的目的物质的总量中，可以计算该物质的浓度，反之亦然。
测量可以根据本领域已知的任何方法进行。优选的方法描述如下。
在优选的实施方案中，用于测量目的蛋白质、肽或多肽的水平的方法包括步骤(a)使能够对所述蛋白质、肽或多肽发生细胞应答的细胞与该蛋白质、肽或多肽接触，持续足够长的时间段，(b)测量细胞应答。
在另一个优选的实施方案中，用于测量目的蛋白质、肽或多肽的水平的方法包括步骤(a)使蛋白质、肽或多肽与合适的底物接触，持续足够长的时间段，(b)测量产物的量。
在另一个优选的实施方案中，用于测量目的肽或多肽的水平的方法包括步骤(a)使蛋白质、肽或多肽与特异结合的配体接触，(b)(任选地)除去未结合的配体，(c)测量结合配体的量。
优选地，所述蛋白质、肽或多肽在样品、尤其体液或组织样品中包含，并且测量了样品中蛋白质、肽或多肽的量。
可以在组织、细胞和体液样品中即优选地在体外测量蛋白质、肽和多肽。优选地，目的蛋白质、肽或多肽在体液样品中测量。
根据本发明的组织样品指从死亡或活着的人体或动物体中获得的任何类型的组织。组织样品可以通过本领域技术人员已知的任何方法(如通过活组织检查法或刮除术)获得。
根据本发明的体液可以包括血液，血清、血浆、淋巴液、脑液、唾液和尿。尤其，体液包括血液、血清、血浆和尿。一个重要实例是在血浆或血清中测量。体液的样品可以通过本领域已知的任何方法获得。
获得细胞样品的方法包括直接制备单个细胞或小细胞群、解离(dissociating)组织(例如使用胰蛋白酶)和从体液中例如通过过滤或离心而分离细胞。根据本发明的细胞还包含血小板和其它无核细胞，例如红细胞。
根据需要，样品可以进一步经过加工。尤其，蛋白质、肽或多肽可以根据本领域已知的方法(包括过滤、离心或提取方法如氯仿/酚提取法)从样品中纯化。
为测量细胞应答，将样品或加工的样品添加到细胞培养物中并且测量内部或外部细胞应答。细胞应答可以包括报道基因的表达或物质例如蛋白质、肽、多肽或小分子的分泌。
用于测量的其它优选方法可以包括测量与目的蛋白质、肽或多肽特异性结合的配体的量。根据本发明的结合包括共价及非共价性结合。
根据本发明的配体可以是与目的蛋白质、肽或多肽结合的任何蛋白质、肽、多肽、核酸或其它物质。众所周知蛋白质、肽或多肽若从人体或动物体中获得或纯化，可以例如通过糖基化而修饰。根据本发明的合适配体可以通过此类位点排他性地或额外地结合蛋白质、肽或多肽。
优选地，配体应当与要测量的蛋白质、肽或多肽特异性结合。“特异性结合”根据本发明意指配体不应当与所研究样品中存在的其它蛋白质、肽、多肽或物质大量地(substantially)结合(“交叉反应”)。优选地，特异性结合的蛋白质或同种型应当是比任何其它相关蛋白质、肽或多肽以至少3倍高、更优选至少10倍高并且甚至更优选至少50倍高的亲和力而结合。
非特异性结合是可以容忍的，尤其当研究的蛋白质、肽或多肽仍可以例如根据其大小(如在Western印迹上)或因其在样品中的相对较高丰度而区分并明确地测量。
配体的结合可以通过本领域已知的任何方法测量。优选地，所述方法是半定量或定量的。合适的方法描述如下。
首先，可以直接测量配体的结合，例如通过NMR或表面等离子体共振术。
其次，若配体还充当目的肽或多肽的酶活性的底物，则可以测量酶反应产物(例如蛋白酶的量可以通过测量切割底物的量例如在Western印迹上进行测量)。
为测量酶反应产物，底物的量优选地是饱和的。底物还可以在反应前用可检测标记物进行标记。优选地，样品与底物接触足够长的时间。足够长的时间指为产生可检测、优选可测量的产物量而必需的时间。作为测量产物量的替代，可以测量对于给定(例如，可检测的)量的产物出现所必需的时间。
第三，配体可以共价或非共价地与允许检测和测量配体的标记物偶联。
标记可以通过直接方法或间接方法进行。直接标记包括将标记物直接(共价或非共价地)偶联至配体。间接表记包括使第二配体与第一配体(共价或非共价地)结合。第二配体应当特异性地与第一配体结合。所述的第二配体可以与合适的标记物偶联和/或可以是与第二配体结合的第三配体的靶(受体)。经常使用第二、第三或更高阶的配体来增加信号。合适的第二和更高阶配体可以包括抗体、第二抗体和众知的链霉抗生物素-生物素系统(Vector Laboratories，Inc.)。
配体或底物还可以用本领域已知的一种或多种标签＂加标签＂。此类标签可以随后成为更高阶配体的靶。合适的标签包括生物素、洋地黄毒苷(digoxygenin)、His-标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、GFP、myc-标签、流感病毒A血凝素(HA)、麦芽糖结合蛋白等。在肽或多肽的情况下，标签优选地位于N-末端和/或C-末端。
合适的标记物是通过适宜检测方法可检测的任何标记物。常见的标记物包括金粒子、胶乳珠、二氢化吖啶酯(acridan ester)、鲁米诺、钌、酶活性标记物、放射性标记物、磁性标记物(＂例如磁珠＂，包括顺磁性和超顺磁性标记物)和荧光标记物。
酶活性标记物包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶及其衍生物。用于检测的合适底物包括二氨基联苯胺(DAB)、3，3′-5，5′-四甲基联苯胺、NBT-BCIP(氯化4-硝基四氮唑兰(4-nitroblue tetrazolium chloride)和5-溴-4-氯-3-吲哚(indolyl)-磷酸盐(phosphate)，作为即用型贮存液可从Roche Diagnostics获得)、CDP-StarTM(AmershamBiosciences)、ECFTM(Amersham Biosciences)。合适的酶-底物组合可以产生可根据本领域已知方法(例如使用感光薄膜或合适的摄像系统)测量的有色反应产物、荧光或化学发光。就测量酶反应而言，上文给出的标准类似地适用。
常见荧光标记物包括荧光蛋白(如GFP及其衍生物)、Cy3、Cy5、得克萨斯红(Texas Red)、荧光素和Alexa染料(例如Alexa568)。其它荧光标记物例如从Molcular Probes(Oregon)获得。还构思使用量子点作为荧光标记物。
常见的放射性标记物包括35S、125I、32P、33P等。放射性标记物可以通过任何已知且合适的方法检测、例如感光薄膜或磷光体成像仪。
根据本发明的合适测量方法还包括沉淀法(尤其免疫沉淀法)、电化学发光法(电产生的化学发光法)、RIA(放射免疫测定)、ELISA(酶联免疫吸附测定)、夹心酶免疫试验、电化学发光夹心免疫测定法(ECLIA)、解离强化的镧系元素荧光免疫测定(dissociation-enchanced lanthanidefluoro immune assay)(DELFIA)、闪烁迫近分析法(scintillation proximityassay)(SPA)、散射测浑法(trubidimetry)、浊度测定法、胶乳增强的散射测浑法或浊度测定法、固相免疫试验和质谱法如SELDI-TOF、MALDI-TOF或毛细管电泳-质谱法(CE-MS)。本领域已知的其它方法(如凝胶电泳、2D凝胶电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹法)可以单独地或与如上所述的标记法或其它检测方法组合地使用。
优选的配体包括抗体、核酸、蛋白质、肽或多肽以及适体例如核酸或肽适体。针对此类配体的方法是本领域众所周知的。例如，鉴定和产生合适的抗体或适体也由商业供应商提供。本领域技术人员熟知开发具有更高亲和力和特异性的此类配体的衍生物的方法。例如，可以向核酸、蛋白质、肽或多肽导入随机突变。这些衍生物随后可以根据本领域已知的筛选方法例如噬菌体展示法对结合加以测试。
如本文中所用的术语“抗体“包括多克隆抗体和单克隆抗体，以及其任何修饰或其片段，如能够结合抗原或半抗原的Fv、Fab和F(ab)2片段。
在另一个优选的实施方案中，配体，优选地选自由核酸、蛋白质、肽、多肽组成的组、更优选选自由核酸、抗体或适体组成的组的配体，存在于阵列上。
所述阵列含有至少一种额外的配体，所述配体可以针对目的蛋白质、肽或多肽。所述的额外配体还可以针对本发明上下文中非特定的目的蛋白质、肽或多肽。优选地，在阵列上含有针对本发明上下文中的至少3种、优选至少5种、更优选至少8种目的蛋白质、肽或多肽的配体。
根据本发明，术语“阵列”指固相或凝胶样载体，在所述载体上至少两种化合物以一维、二维或三维排列方式连接或结合。此类阵列(包括＂基因芯片＂、＂蛋白质芯片＂、抗体阵列等)通常是本领域技术人员已知的并且一般在显微镜载玻片、尤其涂层载玻片如聚阳离子、硝酸纤维素-或生物素-涂覆的载玻片、盖片和膜例如基于硝酸纤维素或尼龙的膜上产生。
所述阵列可以包括结合的配体或至少两种分别表达至少一种配体的细胞。
还构思使用“悬浮阵列”作为根据本发明的阵列(Nolan JP，SklarLA.(2002)。悬浮阵列技术:扁平阵列范例的演化。Trends Biotechnol.20(1):9-12(Nolan JP，Sklar LA.(2002).Suspension arraytechnology:evolution of the flat-array paradigm.Trends Biotechnol.20(1):9-12))。在此类悬浮阵列中，载体例如微珠或微球在悬浮液中存在。该阵列由携带不同配体的(可能标记的)微珠或微球组成。
本发明还涉及产生如上所定义阵列的方法，其中至少一种配体与除其它配体之外的载体材料结合。
产生此类阵列(例如基于固相化学和光不稳定保护基团)的方法通常是已知的(US 5,744,305)。还可以使此类阵列与物质或物质文库接触并且检验相互作用例如结合或构象改变。因此，包含如上所定义的肽或多肽的阵列可以用于鉴定与所述肽或多肽特异性结合的配体。
本发明也涉及包含用于测量PlGF的工具和试剂的试剂盒。任选地，该试剂盒也可以包含用于测量利尿钠肽或在本说明书中提及的任何其它生物标记(例如肌钙蛋白T、IMA、肌酸激酶、肌红蛋白等)的工具或试剂。此类工具或试剂可以是本领域技术人员已知的任何合适工具或试剂。此类工具或试剂的实例以及使用它们的方法已经在本说明书中给出。例如，合适的试剂可以是分别对测量PlGF、利尿钠肽或其它生物标记呈特异性的任何类型的配体或抗体。该试剂盒也可以包含认为在在测量相应生物标记的水平的环境中适合的任何其它成分，如合适的缓冲剂、滤器等。
任选地，该试剂盒可以额外地包含用户手册，用于在确定个体遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险方面解释任何测量结果。尤其，该手册可以包括有关何种测量的水平对应于何种类型风险组的信息。这在本说明书的其它地方详细阐述。此外，这样的用户手册可以提供有关正确使用试剂盒的成分以测量相应生物标记的水平的说明。
本发明也涉及所述试剂盒用于确定个体是否会遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险的用途。本发明也涉及所述试剂盒在根据本发明的任何方法中的用途，用于确定个体是否会遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险。
根据本发明，测量的PlGF水平指示个体是否会遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件。若组合地测量PlGF与利尿钠肽的水平，则这类似地适用。在本上下文中使用的术语即＂非增加的水平＂、＂增加的水平＂和＂高度增加的的水平＂是本领域技术人员已知的。本领域技术人员能够确定与这些水平对应的相关生物化学标记的实际值。
例如，水平可以根据在年龄小于50岁的外观健康个体的代表性样品(优选地，该样品包含至少100、更优选至少500、最优选至少1000名个体)中所观察到该水平的百分位数进行分配。例如，非增加的水平可以对应于在97.5％百分位数中所观察到的最大水平。
可选地，可以确定所述水平为如现有技术中已知的＂正常范围＂。水平还可以通过在接受负荷测试的个体上开展的研究并使任何有害事件与个体中观察到的水平关联而确定或进一步修订。此类研究还可以允许根据某些患者亚组而调整该水平，例如患有已知冠状动脉疾病的患者、老龄患者或外观健康个体。关于此类研究如何可以进行的指导也可以从本说明书内包含的实施例中获得。
视作＂增加＂或＂高度增加的＂水平的值还可以根据所需的排除的敏感度或特异性(严格性)而选择。所需的敏感度越高，排除的特异性越低，反之亦然。在以上实例中，为测定各水平所选择的百分位数越高，排除标准越严格，即，将更少个体视为＂风险个体＂或从负荷测试中排除。
下文对PlGF和NT-proBNP提供实际水平的实例。显然下文给出的水平可以仅起到对个体风险进行首次分类的作用。例如，风险还可以取决于特定个体心脏的备用泵送血能力(spare pumping capacity)或取决于该个体的一般健康状态。
在该实例中，就PlGF而言，将小于10pg/ml的血浆水平视为非增加的水平。此外，将10-20pg/ml血浆水平视为增加的水平。另外，将超过20pg/ml的血浆水平视为高度增加的水平。
在该实例中，就NT-proBNP而言，将小于125pg/ml的血浆水平视为非增加的水平。此外，将125-300pg/ml血浆水平视为增加的水平。另外，将超过300pg/ml的血浆水平视为高度增加的水平。
对于PlGF和NT-proBNP而言，血清水平与血浆水平可比较。相应水平(例如在全血或其它样品中)可以由本领域技术人员测定。
根据本发明的方法还允许确定个体在负荷测试期间遭受有害事件的风险。根据本发明，术语“风险”涉及特定事件、更具体地是有害事件发生的概率。风险的等级可以是非增加的、增加的或高度增加的。“非增加的风险”意指显然不存在遭受因负荷测试所致心血管有害事件的风险。
风险的程度与PlGF(或PlGF和利尿钠肽)的水平有关。非增加的水平的PlGF表示没有增加的风险，增加的PlGF水平表示增加的风险并且高度增加的PlGF水平表示高度增加的风险。在PlGF和利尿钠肽的联合测量中，类似地计算风险。然而若仅一种标记即PlGF或利尿钠肽高度地增加，而相应另一种标记的水平仅是增加的，则可以视为足够指示高度增加的风险。
若PlGF的水平是非增加的，则负荷测试可以如计划那样进行，例如在当地心血管病医生的诊所处，优选地采取通常推荐的预防措施。在这种情况下，也可以接受不立即安排该测试。在联合测量的情况下若PlGF和利尿钠肽的水平均是非增加的，这同样适用。
如已经提及的，若根据本发明的方法指示增加或高度增加的风险，则优选地具有用于负荷测试的以下结论。
在第一方面，若风险增加或高度增加，负荷测试应当毫不拖延地(without undue delay)进行。尤其在风险高度增加的情况下，则测试应当立即进行以获得必需的诊断性信息。
在第二方面，若风险增加或高度增加，负荷测试应当在安全的医院环境中进行，例如受过急救训练的医疗人员立即可用和/或使用自动心律失常(arrythmia)检测仪。尤其在风险高度增加的情况下，则测试应当在具有提高的介入可能性(如经皮冠脉介入(PCI)和手术介入可能性)的医院单位中进行。
在第三方面，若风险增加或高度增加，负荷测试应当在有限的过劳水平处进行，尤其在风险高度增加的情况下。
以下实施例说明本发明。
实施例1
NT-proBNP的测量:
NT-proBNP通过在Elecsys 2010上的电化学发光免疫测定法(Elecsys proBNP夹心免疫测定；Roche Diagnostics，Mannheim，Germany)测定。该测定法根据电化学发光夹心免疫测定原理工作。在第一步骤中，生物素标记的IgG(1-21)捕获到抗体，钌-标记的F(ab’)2(39-50)信号抗体和20微升样品在37℃孵育9分钟。此后，添加链霉抗生物素包被的磁性微粒并且将混合物孵育额外的9分钟。在第二次孵育后，将反应混合物转移至系统的测量细胞上，其中磁珠在电极表面上被磁性地捕获。未结合的标记物通过用缓冲剂洗涤测量细胞而除去。
在最后步骤中，将电压在含三丙胺的缓冲剂存在下施加到电极上并且产生的电化学发光信号由光电倍增管记录。全部试剂和样品由
Figure A200780004718D00191
仪器完全自动化地处置。结果通过校正曲线和经由试剂条码提供的总曲线(master curve)而确定，其中所述的校正曲线仪器特异性地由2点校正生成。根据制造商的说明书进行试验。
实施例2
分析:
用于激素分析的血液在含5000U抑酶肽(特斯乐(Trasylol)，Beyer，Germany)的EDTA-管和根据需要的锂-肝素-管(用于临床化学)中取样。血液和尿样品立即在4℃在3400转/分钟(rpm)上离心(spun)10分钟。上清液贮存在-80℃直至分析。
PlGF的测定:
胎盘生长因子(PlGF)由酶联免疫吸附微滴定板测定法(R&DSystems，Wiesbaden，Germany)测量。总体不精确性(表述为变异系数)对于PlGF是7.3％。PlGF试验识别了同种型PlGF-1但是对PlGF-2具有至少50％交叉反应性。
NT-proBNP的测定:
NT-proBNP通过在Elecsys 2010上的电化学发光免疫测定法(ElecsysproBNP夹心免疫测定法；Roche Diagnostics，Basel，Switzerland)测定(Mueller，T.，Gegenhuber，A.(2003).生物医学NT-proBNP酶免疫测定法与Roche NT-proBNP化学发光免疫测定法的比较:对预测有症状以及无症状器质性心脏病的意义。Clin.Chem.49:976-9(Mueller，T.，Gegenhuber，A.(2003).Comparison of the Biomedica NT-proBNP enzymeimmuno assay and the Roche NT-proBNP chemiluminescence immunoassay:implications for the prediction of symptomatic and asymptomaticstructural heart disease.Clin.Chem.49:976-9))，还见实施例1。测定法内平均变异是4.3％(范围:对于浓度在7.6-2732pmol*l-1之间的血浆样品是2.7-5.9％)，测定法间变异是3.2％。检测下限是0.6pmol*l-1。
NT-proANP的测定:
使用兔抗大鼠proANP多克隆血清、来自Peninsula Lab(Bachem Ltd，St.Helene，UK)的人proANP(1-30)和由HPLC纯化用于放射标记的碘化proANP(1-30)，使用竞争性结合放射免疫测定法以磁性固相技术测量NT-proANP。为了实现高敏感度和优异精确性，使用具有绵羊抗兔IgG的Dyna珠M280(Dynal Biotech，Oslo，Norway)作为固相和第二抗体。最小可检测浓度是105pg/ml，变异系数分别为:在1490pg/ml上是7.5％、在4077pg/ml上是3.7％并且在8730pg/ml上是3.4％。
IMA的测定:
缺血修饰的白蛋白用白蛋白钴结合(Albumin Cobalt Binding)(
Figure A200780004718D00211
)试验测量。设置ACB试验(ISCHEMIA Technologies，inc，Colorado，USA)以在ROCHE/HITACHI MODULAR P仪器上运行。测定法内和测定法间的精确性分别确定在CV 2.2-4.1％之间和CV 4.3-7.1％之间。
心脏肌钙蛋白T(cTnT)的测定:
使用基于电化学发光技术(第三代cTnT，Elecsys 2010，Roche，Mannheim，Germany)的一步法EIA定量地测量cTnT。该测定法的检测下限是0.01μg/l，推荐的诊断阈值0.03μg/l。在不同浓度上的测定法间的变异系数(在至少11轮的日不精确性数据组之间)对0.015μg/L是20％，对0.03μg/L是10％并且对0.08μg/L是5％。
实施例3
研究了总共195名因可疑的明显冠状动脉疾病而接受铊闪烁法的持续参与性患者。
患者接受使用标准运动方案的自行车运动测试或使用标准方案，接受剂量为42.72mg(±7.61)的双嘧达莫的药理学试验。由核心脏病学家判定分配至动态或药理学运动测试。方案由海德堡大学(University ofHeidelberg)的当地伦理委员会批准，并且全部患者在参与前表示知情同意。
如下进行单光子发射计算的体层摄影心肌灌注(SPECT)成像:铊在峰值应激(负荷)时施与，并且此后立即进行成像。4小时之后，开展重复成像。17节段心肌模型用于半定量性分析。不清楚生物标记结果的两位核心脏病学家将图像分类为无灌注缺损、仅有可逆性灌注缺损和固定性灌注缺损。从初步分析中排除并单独评估具有可逆性、部分可逆性和固定性灌注缺损组合的患者。
紧邻负荷测试之前、负荷测试之后立即以及4小时后获得血液样品。在次日在接受第三次扫描(再分布扫描)的全部患者中收集极晚期的血液样品(n＝20)。血液样品置于冰上并在30分钟内处理。血浆等分试样贮藏在-80℃并在分析前融化。
统计分析如下进行:cTnT、N-末端心房利尿钠肽(NT-proANP)、N-末端B型利尿钠肽(NT-proBNP)、胎盘生长因子(PlGF)、缺血修饰的白蛋白(IMA)的血浆浓度描述为具有相应四分位数间距的中位数值，或具有相应标准误差的平均值。患者组的基线特征使用针对连续变量的Mann-Whitney U检验或Student′s t检验和针对分类变量的卡方检验进行比较。使用Kolmogorov-Smirnov检验来检验正态分布。对于全部分析，值P＜0.05视为统计显著。全部统计分析使用SPSS软件包版本12.01(SPSS Inc，Chicago，Ill，USA)进行。
基线特征:在195名研究参与者的完整群体中，24(12％)名患者具有可逆性灌注缺损并且62(32％)名患者无灌注缺损。109(56％)名患者具有固定性灌注缺损或固定性和可逆性灌注缺损的组合。有关在下文所呈现的生物标记的全部数据和分析限于24名具有可逆性灌注缺损的患者和62名没有固定性或可逆性灌注缺损的患者。具有可逆性灌注缺损的患者更经常具有冠状动脉疾病史、既往MI(心肌梗塞)、先前PCI(经皮冠脉介入)或CABG(冠状动脉旁路搭桥术)(83.3与56.5％，p＝0.02)并且在铊闪烁法后更经常接受经皮冠脉介入法(12.5％与1.6％，p＝0.04)。双嘧达莫的总剂量在可诱导的心肌缺血患者中显著较高(48.5与38.8mg，p＝0.002)。全部其它参数在这两个组中是可比较的。全部195名研究参与者以及具有可逆性灌注缺损的那些参与者(缺血组)和无可逆性灌注缺损的那些参与者(非缺血组)的详细基线特征在表1中详细显示。
在最终研究组中，52名患者接受自行车运动测试和34名患者接受双嘧达莫负荷测试.在接受动态运动测试的患者中，与无灌注缺损的患者相比，平均运动持续期(8.75±3.32分钟与7.74±0.42分钟，p＝0.23)或峰值工作负载(125±9瓦特与109±5瓦特，p＝0.15)在具有可逆性灌注缺损的患者中是不是不同的。双嘧达莫输注的总持续时间在两个组中是可比较的(5.0±0.0分钟与5.21±0.21分钟，p＝0.85)。药理测试或动态负荷测试间差异的详细信息在表2中显示。在可逆性缺血组中24名患者有4名患者(16.7％)经历心绞痛并且在无灌注缺损组中62名患者有8名患者(12.9％)经历心绞痛。
生物标记的血浆水平在平均数17.85±11.14分钟之前、之后以及在平均数4.05±0.64小时后测量。第四血液样品在铊闪烁法后当日收集(平均24.12±1.51小时)。少数患者(n＝19)不允许对第四样品开展统计支持(statistically powered)的分析。
胎盘生长因子:
与无可逆性灌注缺损的患者中的11.35pg/ml相比，发现PlGF的基线水平在发生可逆性灌注缺损的患者中是15.15pg/ml(详见表3)。
心脏肌钙蛋白T:
cTnT在基线上的血浆浓度在除7名之外的全部患者中低于检测下限(0.01μg/L)并且在负荷测试后不显著增加。在这7名患者中的cTnT增加的血浆水平与负荷测试前14日内的先前急性心肌梗塞有关。心脏肌钙蛋白浓度在运动测试后18分钟或4小时上不增加并且在全部时间点上在无灌注缺损的患者和在具有可逆性灌注缺损的患者中是可比较的。在表3中显示心脏生物标记在运动诱导的缺血之前和之后的相对改变。
NT-proBNP、NT-proANP
NT-proBNP和NT-proANP的基线水平在稍后发生可逆性灌注缺损的患者中显著较高。然而，NT-proBNP和NT-proANP的血液水平在具有或没有灌注缺损的患者中在18分钟或在4小时处未显著上升。
缺血修饰的白蛋白
IMA的血浆浓度在无灌注缺损的患者和在具有可逆性灌注缺损的患者中在基线上是可比的。在18分钟处短暂下降后，IMA在4小时处显著升高(对于无灌注缺损的患者，p＝0.001；对于具有可逆性灌注缺损的患者，p＝0.013)。然而，IMA水平的增加在具有或没有可逆性灌注缺损的患者中出现并且与药理学负荷测试相比，排他性地与接受运动负荷测试的患者相关。
根据运动测试类型的生物标记水平的改变:全部生物标记的基线浓度在接受动态负荷的患者和接受药理负荷的那些患者中是可比较的(表4)。浓度在紧邻负荷后或在4小时处没有显著改变，IMA除外。
表1:研究群体的临床特征
 
总数n＝195 非缺血n＝62(32％) 可逆性缺血n＝24(12％) P
男性n(％) 137(70％) 31(50％) 16(67％) 0.16
年龄(岁) 67.65(±9.78) 67.48(±2.08) 70.21(±1.41) 0.26
BMI 28 27 30 0.12
目前吸烟者 54(28％) 17(27％) 7(29％) 0.87
高血压症 166(85％) 49(79％) 18(75％) 0.69
高胆固醇血症 146(75％) 43(69％) 15(63％) 0.92
糖尿病 63(32％) 15(24％) 6(25％) 0.92
CAD史 155(79％) 35(56％) 20(83％) 0.02
MI史 52(27％) 5(8％) 5(21％) 0.10
CABG史 34(17％) 7(11％) 4(17％) 0.50
缩写:BMI:体重指数；MI:心肌梗塞；CAD:冠状动脉疾病；CABG:冠状动脉旁路搭桥术；
表2:负荷测试方法
 
总数n＝195 非缺血n＝62 可逆缺血n＝24 P
负荷测试的征候:-仅有症状-已知CAD发展-在检查前血管造影 105(54％)85(44％)146(75％) 8(13％)3(37％)38(61％) 4(17％)1(5％)18(75％) 0.180.460.23
负荷测试的类型:-自行车运动-双嘧达莫 116(59％)79(41％) 38(61％)24(39％) 14(58％)10(42％) 0.080.08
测试参数:持续期(分钟):-自行车运动-双嘧达莫工作负载:-峰值瓦特(自行车)-总剂量(mg双嘧达莫) 8.37(±2.89)5.13(±0.79)117(±32)42.72(±7.61) 7.74(±0.42)5.21(±0.21)109(±5)38.79(±1.38) 8.75(±3.32)5.00(±0.00)125(±9)48.50(±7.03) 0.230.850.150.002
临床结果:-可诱导的心绞痛-ST-压低>0，15 30(15％)35(18％) 8(13％)10(16％) 4(17％)5(21％) 0.650.61
缩写:CAD:冠状动脉疾病；CABG:冠状动脉旁路搭桥术；PCI:经皮冠脉介入；
表3:心脏生物标记在运动诱导的缺血之前或之后的相对改变
 
基线 在18分钟 在4小时
cTnT(μg/l)无灌注缺损可逆性灌注缺损 0.01(0.01/0.01)0.01(0.01/0.01) 0.01(0.01/0.01)0.01(0.01/0.01) 0.01(0.01/0.01)0.01(0.01/0.01)
NT-proBNP(pg/ml)无灌注缺损可逆性灌注缺损 139.00(58.25/367.01)327.45*(120.50/972.85) 161.00(70.78/417.99)311.86(126.66/816.41) 168.95(70.99/447.74)318.54(142.58/1027.50)
NT-proANP(pg/ml)无灌注缺损可逆性灌注缺损 732.5(470.0/1220.0)1470.0*(694.0/1910.0) 810.5(522.0/1295.0)1410.0(782.0/2040.0) 768.0(490.3/1137.5)1345.0(924.0/1770.0)
IMA(U/ml)无灌注缺损可逆性灌注缺损 84.0#1(80.0/93.0)82.5#3(78.0/90.0) 81.5#2(69.0/91.0)71.0#4(67.5/89.0) 93.5(84.0/106.0)96.5(88.5/100.5)
PlGF(ng/L)无灌注缺损可逆性灌注缺损 11.35(5.98/20.25)15.15(9.78/24.26) 12.50(6.77/23.50)16.08(10.66/24.65) 14.90(6.40/23.40)17.99(11.18/23.39)
缩写:cTNT:心脏肌钙蛋白T；NT-proBNP:N-末端原-B型利尿钠肽；NT-proANP:N-末端心房利尿钠肽；IMA:缺血修饰的白蛋白；PlGF:胎盘生长因子.
*p<0.05用于可逆性灌注缺损与无灌注缺损之间的比较。全部数据作为具有相应的第25和第75百分位数(Q1/Q3)的中位数给出。
#1p＝0.0070从基线至4小时，#2p<0.0001从18分钟至4小时
#3p＝0.0351从基线至4小时，#4p＝0.0130从18分钟至4小时
表4:根据负荷类型的缺血标记
 
基线 在18分钟后 在4小时后
cTnT(μg/l)药理学动态性 0.01(0.01/0.01)0.01(0.01/0.01) 0.01(0.01/0.01)0.01(0.01/0.01) 0.01(0.01/0.01)0.01(0.01/0.01)
NT-proBNP(pg/ml)药理学动态性 162.3(70.2/784.5)148.9(106.4/355.0) 200.1(74.8/766.5)161.0(115.1/366.8) 245.3(97.0/813.2)169.0(116.8/422.1)
NT-proANP(pg/ml)药理学动态性 731.0(562.3/1422.5)923.0(609.3/1672.5) 810.5(525.0/1400.0)900.0(681.5/1455.0) 797.0(557.0/1425.0)908.5(611.5/1345.0)
IMA(U/ml)药理学动态性 89.0#1(83.0/97.0)83.0#3(78.5/90.0) 97.0#2(89.0/106.0)75.0#4(66.0/82.5) 99.0(85.0/108.0)93.0(86.0/100.5)
PlGF(ng/L)药理学动态性 11.35(8.55/21.25)13.54(7.00/22.57) 16.30(8.23/25.62)13.25(8.35/23.48) 16.80(7.47/23.35)14.60(6.72/22.96)
缩写:cTNT:心脏肌钙蛋白T；NT-proBNP:N-末端原-B型利尿钠肽；NT-proANP:N-末端心房利尿钠肽；IMA:缺血修饰的白蛋白；PlGF:胎盘生长因子。全部数据作为具有相应的第25和第75百分位数(Q1/Q3)的中位数给出。
#1p＝0.2507从基线至4小时，#2p＝0.7304从18分钟至4小时
#3p＝0.0008从基线至4小时，#4p<0.0001从18分钟至4小时
实施例4
一名45岁每日有规律吸40只香烟的男子因负荷测试而前去见其医生。在血液分析中，血液化学处于包括CK和CKMB的正常范围内。然而，发现PlGF是16pg/ml并且NT-proBNP是260pg/ml。该患者无不适，血压是140-98mm/hg。按照要求，该患者报告他不进行体育运动。基于PlGF和NT-proBNP的结果，负荷测试没有在其医生的诊所进行，而推荐该患者去心血管病医生处。ECG不是异常的并且超声心动图没有显示任何异常。在心血管病医生诊所，该患者接受负荷测试，在200W处产生胸痛。这与血压的显著增加有关。此外出现心律失常。因为相对安全的环境和心血管病医生诊所处有经验的工作人员，有害事件仍在控制之下并且将该患者送医院进一步评估，在医院中冠状动脉造影术显示左冠状动脉狭窄。
实施例5
一名62岁有规律进行体育运动的老年女性因为有时候与运动相关而有时与运动不相关的胸痛而前去见其医生。该女性不吸烟。她的血液化学水平处于正常范围内。发现PlGF是8pg/ml。为证实，额外地测量NT-proBNP并且发现NT-proBNP是59pg/ml。血压是140-70mm/hg。ECG显示无异常。考虑到PlGF和NT-proBNP的低水平，认为心脏负荷测试在医生诊所中进行是安全的。负荷测试显示无异常。因为没有冠状动脉疾病的证据，故推荐该患者至肺病学家处以便进一步评估该患者反复出现的胸痛。

Claims (16)

1.用于确定个体是否将遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险的方法，包括步骤:
a)测量，优选地体外测量，胎盘生长因子(PlGF)或其变体的水平，其中
b)若胎盘生长因子或其变体的水平至少是增加的，则该个体至少具有遭遇因心脏负荷测试所致有害事件的风险。
2.根据权利要求1所述的方法，该方法包括进一步的步骤:
aa)测量，优选地体外测量，利尿钠肽或其变体的水平，
和改良步骤
ba)若利尿钠肽和PlGF两者或其相应变体的水平至少是增加的，则该个体至少具有遭遇因心脏负荷测试所致有害事件的风险。
3.根据权利要求1或2任一项中所述的方法，包括额外步骤
d)若测量的水平高度增加，则该个体具有在心脏负荷测试期间遭受有害事件的高风险。
4.根据权利要求1至3任一项中所述的方法，其中PlGF的增加的水平对应于10-20pg/ml的血浆水平并且其中PlGF的高度增加的水平对应于大于20pg/ml的血浆水平。
5.根据权利要求2至4任一项中所述的方法，其中该利尿钠肽是ANP-型肽或其变体。
6.根据权利要求2至5任一项中所述的方法，其中该利尿钠肽是BNP-型肽或其变体。
7.根据权利要求2至6任一项中所述的方法，其中该BNP-型肽是NT-proBNP或其变体。
8.根据权利要求7所述的方法，其中NT-proBNP的增加的水平对应于125-300pg/ml的血浆水平并且其中NT-proBNP的高度增加的水平对应于大于300pg/ml的血浆水平。
9.根据权利要求1至8任一项中所述的方法，其中该有害事件属于由可逆或不可逆性心肌灌注缺损、可逆或不可逆性心肌缺血、ST-节段改变(尤其升高或降低)、心绞痛、心肌坏死、心肌梗塞(MI，包括ST-升高的MI或非-ST-升高的MI)和中风组成的组。
10.根据权利要求9所述的方法，其中该有害事件选自由可逆或不可逆性心肌灌注缺损，和可逆或不可逆性心肌缺血组成的组。
11.根据权利要求9所述的方法，其中该有害事件选自由心肌梗塞(MI，包括ST-升高的MI或非-ST-升高的MI)和中风组成的组。
12.根据权利要求1至9任一项中所述的方法，其中额外地测量一种或更多种下列生物标记的水平:
a)肌钙蛋白T，
b)IMA，
c)肌酸激酶，
d)肌红蛋白。
13.包含用于测量PlGF和/或利尿钠肽的工具或试剂的试剂盒，该试剂盒任选地还包含用于测量利尿钠肽或根据权利要求12的任何生物标记的工具或试剂，其中该试剂盒包含用户手册，用于在确定个体遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险方面解释任何测量的结果。
14.包含用于测量PlGF和/或利尿钠肽的工具或试剂的试剂盒的用途，用于确定个体遭遇因心脏负荷测试所致心血管有害事件的风险。
15.包含用于测量PlGF和/或利尿钠肽的工具或试剂的试剂盒在根据权利要求1-12任一项中所述方法中的用途。
16.根据权利要求1至12任一项中所述的方法，其中若该方法表明所述风险至少是增加的，则表明该负荷测试应当毫不拖延地和/或在医院环境中和/或在有限的过劳水平下进行。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103998938A (zh) * 2011-10-17 2014-08-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 风险患者和中风原因的基于肌钙蛋白和bnp的诊断
CN105451758A (zh) * 2013-05-31 2016-03-30 科比欧尔斯公司 用于心力衰竭的预防或治疗的人plgf-2

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2007004079A (es) * 2004-10-06 2007-06-15 Wellstat Biologics Corp Detecci??n de niveles elevados de prote??na her-2/neu en celulas cancerosas circulantes y tratamiento.
US8557531B2 (en) * 2006-04-18 2013-10-15 Wellstat Biologics Corporation Detection of circulating endothelial cells
EP2008107A4 (en) * 2006-04-18 2009-12-23 Wellstat Biologics Corp DETECTION OF STEROID RECEPTORS IN CIRCULATIVE CANCER CELLS AND TREATMENT
EP1936380A1 (en) * 2006-12-21 2008-06-25 F. Hoffmann-Roche AG Placental growth factor, soluble FLT1 and endoglin are predictors of the angiogenic status of a subject
JP2010525326A (ja) * 2007-04-19 2010-07-22 ウェルスタット バイオロジックス コーポレイション 分離されていない循環癌細胞由来のＨｅｒ−２／ｎｅｕタンパク質の上昇したレベルの検出および治療
JP5415520B2 (ja) * 2008-04-09 2014-02-12 ベー．エル．アー．ハー．エム．エス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 最大酸素消費量低下の予測のためのプロ−エンドセリン−１
EP2294423A1 (en) * 2008-05-15 2011-03-16 F. Hoffmann-La Roche AG Multimarker panel for the differentiation of dilated cardiomyopathy and as basis for a differential therapy and its result
EP2294426A1 (en) * 2008-05-27 2011-03-16 F. Hoffmann-La Roche AG Method for risk reduction in glycemic control
CN102812359A (zh) * 2009-11-13 2012-12-05 Bg医药公司 心肌梗死的风险因子和预测
US11521736B1 (en) * 2016-06-13 2022-12-06 DynamiCare Health, Inc. System and method for encouraging therapeutic psychosocial activity

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA03004105A (es) * 2002-05-14 2004-10-15 Hoffmann La Roche Elaboracion de una prognosis en casos de enfermedad cardiaca usando una combinacion de marcadores.
ATE394679T1 (de) * 2002-11-16 2008-05-15 Dade Behring Marburg Gmbh Scd40l, papp-a und plazentaler-wachstumsfaktor (pigf) als biochemische markerkombinationen bei kardiovaskulären erkrankungen
US20040243010A1 (en) * 2003-03-19 2004-12-02 Zoghbi William A. Use of BNP during stress testing for the detection and risk stratification of individuals with suspected coronary artery disease
EP1577673B1 (en) * 2004-03-15 2008-07-30 F. Hoffmann-La Roche Ag The use of BNP-type peptides and ANP-type peptides for assessing the risk of suffering from a cardiovascular complication as a consequence of volume overload
DE602006015964D1 (de) * 2006-09-20 2010-09-16 Roche Diagnostics Gmbh Natriurethische Peptide und Plazenta-Wachstumfaktor/löslicher VEGF-Rezeptor unterscheiden zwischen mit der Plazenta verbundener Herzdysfunktion und mit Herzerkrankung verbundener Herzdysfunktion

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103998938A (zh) * 2011-10-17 2014-08-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 风险患者和中风原因的基于肌钙蛋白和bnp的诊断
CN103998938B (zh) * 2011-10-17 2016-06-15 霍夫曼-拉罗奇有限公司 风险患者和中风原因的基于肌钙蛋白和bnp的诊断
CN105785053A (zh) * 2011-10-17 2016-07-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 风险患者和中风原因的基于肌钙蛋白和bnp的诊断
CN105785053B (zh) * 2011-10-17 2018-09-21 霍夫曼-拉罗奇有限公司 风险患者和中风原因的基于肌钙蛋白和bnp的诊断
US11047865B2 (en) 2011-10-17 2021-06-29 Roche Diagnostics Operations, Inc. Troponin and BNP based diagnosis of risk patients and cause of stroke
CN105451758A (zh) * 2013-05-31 2016-03-30 科比欧尔斯公司 用于心力衰竭的预防或治疗的人plgf-2

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