CN101376022A - 含聚乙二醇降纤酶的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种供注射用的含有聚乙二醇降纤酶的药物组合物及其制备方法，该组合物采用羟乙基淀粉作为保护剂和赋形剂，具体地采用平均分子量为80～160kDa的羟乙基淀粉。该组合物中聚乙二醇降纤酶的含量为5～10单位/支。聚乙二醇降纤酶和非活性成分羟乙基淀粉的重量比在1∶500～25000范围，优选为1∶2000～8000。本发明所提供的聚乙二醇降纤酶药物组合物不但在制备过程中能最大程度地保留聚乙二醇降纤酶的活性，而且能够满足长期储存的需要，能够满足临床需求。

Description

含聚乙二醇降纤酶的药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地涉及含有聚乙二醇降纤酶的药物组合物及其制备方法。

背景技术

聚乙二醇降纤酶为来源于蛇毒的天然丝氨酸蛋白酶——降纤酶的聚乙二醇修饰物，其药理作用及作用特点与降纤酶相同。中国专利ZL 200410017779.4对聚乙二醇降纤酶及其制备方法作了详细介绍。其具体作用为抑制血栓的形成、抑制血小板的聚集、降低全血及血浆的粘度、改善脑缺血模型的行为学缺陷评分、降低脑坏死百分率并具有神经保护等作用。在保留了降纤酶的生物活性的同时，聚乙二醇降纤酶还能够有效降低降纤酶的免疫原性，延长降纤酶的体内半衰期，并增加了降纤酶在体内的稳定性。因此，聚乙二醇降纤酶的出现为临床上治疗血栓栓塞性疾病提供了一种更好的选择。为满足临床上的需要，提供一种稳定的聚乙二醇降纤酶药物组合物是必须的。

与降纤酶类似，聚乙二醇降纤酶在药物组合物中的含量也非常少，每支注射剂约含5～10单位(相当于5～10微克)，因此，也面临着降纤酶制剂所面临的问题：高度稀释后，在制剂的制备及储存过程中，效价会明显下降。实际使用中，考虑到效价的下降，在制备降纤酶制剂时往往都按照标示量的130～200％投料，但这一方面带来实际生产成本的增加，另一方面因效价下降的幅度不确定而使实际效价难以确定，影响产品合格率，给生产带来很大的麻烦，更重要的是大量异源蛋白的引进使免疫源性及过敏性反应发生的几率大大增加，从而影响临床用药的安全性。为了克服这一缺陷，人们进行了大量的实验摸索，提出了一些较好的方法。

中国专利ZL 01108025.6的实施例中公开了一种以右旋糖酐或甘露醇为赋形剂的降纤酶冻干粉针剂，但该专利中并没有公开此种降纤酶制剂的效价保留情况和长期稳定性等数据。本发明人试图按照该专利公开的方法，采用右旋糖酐做为赋形剂，制备聚乙二醇降纤酶冻干粉针剂，经测定，该冻干粉针剂的效价仅为聚乙二醇降纤酶原料效价的80％。另外，近年来不断有文献报道右旋糖酐能引起过敏反应，因此，右旋糖酐不适合用作注射用聚乙二醇降纤酶组合物的赋形剂。

此外，发明人还尝试采用甘露醇或与其类似的小分子糖类如蔗糖、葡萄糖等作为赋形剂，来制备聚乙二醇降纤酶冻干粉针剂，结果显示以甘露醇为赋形剂和以蔗糖为赋形剂的冻干制剂的效价分别为聚乙二醇降纤酶原料效价的12％和16％，制备过程中效价降低现象非常严重。因此，小分子糖类也不适合作为聚乙二醇降纤酶药物组合物的赋形剂。

专利申请CN 03131652.2中公开了以人血白蛋白作为保护剂的降纤酶组合物，其中不同处方组成的组合物在40℃条件下保留5天后的效价数据显示：处方中加入人血白蛋白作为保护剂的药物组合物的稳定性明显增加。但是，当制剂中包含人血白蛋白时，制剂被感染性病原体如免疫缺陷病毒(HIV)和乙型肝炎病毒(HBV)潜在污染的可能性较高，而且人血白蛋白也可能诱发某些人的免疫反应，因此，近年来已不推荐在制剂中使用人血白蛋白。

专利申请CN 200410021558.4中公开了以氯化钠为稳定剂的降纤酶水针制剂，发明人试图采用同样的方法制备聚乙二醇降纤酶注射剂，结果显示以氯化钠为保护剂的聚乙二醇降纤酶水针剂，一旦放置超过24小时，效价即明显降低；而制备得到的冻干粉针剂，制剂的效价仅为聚乙二醇降纤酶原料效价的50％左右。因此，采用氯化钠作为辅料也不能够得到长期稳定的聚乙二醇降纤酶药物组合物。

此外，发明人还尝试采用降纤酶制剂中常用的保护剂——小分子氨基酸作为辅料，如甘氨酸和丙氨酸等，同样不能得到稳定的聚乙二醇降纤酶组合物。

综上所述，由于聚乙二醇降纤酶与降纤酶在结构上的差异，以及现有技术中降纤酶的处方组成及制备工艺所存在的不足，有必要继续研究，发明一种稳定的聚乙二醇降纤酶组合物，该组合物不但在制备过程中能最大程度地保留聚乙二醇降纤酶的活性，而且能够满足长期储存的需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种稳定的聚乙二醇降纤酶药物组合物，该组合物不但在制备过程中能最大程度地保留聚乙二醇降纤酶的活性，而且能够满足长期储存的需要。

为解决上述技术问题，本发明一方面提供一种供注射用的聚乙二醇降纤酶药物组合物，其中非活性成分为羟乙基淀粉；所使用的羟乙基淀粉的平均分子量为80～160kDa；优选为130kDa。

本发明所提供的注射用聚乙二醇降纤酶药物组合物，其中聚乙二醇降纤酶的含量为5～10单位/支，折合成重量相当于5～10μg/支。

本发明所提供的注射用聚乙二醇降纤酶药物组合物为冻干粉针制剂，其中活性成分聚乙二醇降纤酶与非活性成分羟乙基淀粉的重量比为1:500～25000；优选为1：2000～8000；最优选为1：3000。

本发明另一方面提供所述聚乙二醇降纤酶冻干粉针剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将羟乙基淀粉溶于水配制成合适浓度的水溶液，加热，活性炭吸附后脱炭，放冷，再加入聚乙二醇降纤酶配制成均匀药液；

(2)将上述药液过滤、分装；

(3)冷冻干燥阶段预冻温度为—50～—10℃，再干燥温度不超过15～30℃。

其中，步骤(1)所述的合适的羟乙基淀粉浓度为0.5～6％。

本发明再一方面提供羟乙基淀粉作为聚乙二醇降纤酶的保护剂和赋形剂的用途。由于聚乙二醇降纤酶是在降纤酶分子中引入聚乙二醇进行修饰的产物，其理化性质相比降纤酶发生了很大变化，因此，通常适合于降纤酶的保护剂和赋形剂并不适合聚乙二醇降纤酶，而本发明人经过长期大量的实验摸索，发现采用羟乙基淀粉作为聚乙二醇降纤酶的保护剂和赋形剂效果要明显优于其它常用于降纤酶及其它蛋白质药物的各种保护剂和赋形剂。

本发明所提供的注射用聚乙二醇降纤酶药物组合物可用作治疗和/或预防血栓栓塞性疾病的药物和神经保护药物。所述的血栓栓塞性疾病包括：急性脑梗死、脑血栓、脑栓塞，短暂性脑缺血发作(TIA)、以及脑梗死再复发；心肌梗死、不稳定性心绞痛以及心肌梗死再复发；四肢血管病，如股动脉栓塞、血栓闭塞性脉管炎、雷诺氏病和肺栓塞等。

本发明采用羟乙基淀粉作为保护剂和赋形剂来制备供注射用的稳定的聚乙二醇降纤酶药物组合物。现有技术中没有公开过羟乙基淀粉可以用作聚乙二醇降纤酶的保护剂和赋形剂，也没有公开过羟乙基淀粉可用作降纤酶的保护剂和赋形剂的情况。本发明所提供的聚乙二醇降纤酶药物组合物最大程度地保留了聚乙二醇降纤酶原料的活性。下面通过将本发明提供的聚乙二醇降纤酶药物组合物与采用本领域中常用于降纤酶的其它辅料制备得到的聚乙二醇降纤酶冻干粉针剂的效价保留情况进行比较，来说明本发明的有益效果。

表1 采用不同辅料制得的聚乙二醇降纤酶冻干粉针剂的效价保留情况

 

处方组成	冻干前效价	冻干后效价	效价保留率
				聚乙二醇降纤酶蔗糖	5.0单位/支	0.8单位/支	16％
聚乙二醇降纤酶甘露醇	5.0单位/支	0.6单位/支	12％
				聚乙二醇降纤酶氯化钠	5.0单位/支	2.7单位/支	54％
聚乙二醇降纤酶甘氨酸	5.0单位/支	1.4单位/支	28％
				聚乙二醇降纤酶丙氨酸	5.0单位/支	1.6单位/支	32％
聚乙二醇降纤酶右旋糖酐	5.0单位/支	4.0单位/支	80％
				聚乙二醇降纤酶羟乙基淀粉	5.0单位/支	4.9单位/支	98％

注：效价保留率＝(冻干后效价/冻干前效价)×100％

具体实施方式

下面以具体实施例来详细说明本发明所提供的一种供注射用的聚乙二醇降纤酶药物组合物及其制备方法，以下非限制性实施例的目的是为了更好地说明本发明的内容，并不意味着对本发明的任何限制。

本发明中使用的聚乙二醇降纤酶采用中国专利ZL 200410017779.4中公开的方法制备；使用的羟乙基淀粉130/0.4(平均分子量为130kDa，取代级为0.4)为市售产品；本发明中所提到的水，是指注射用水。评价聚乙二醇降纤酶药物组合物的效价采用国家食品药品监督管理局颁布的国家药品标准中注射用降纤酶的生物效价测定方法；聚乙二醇降纤酶的重量测定方法采用中国药典2005年版三部附录附录VIB第二法，本发明中使用的聚乙二醇降纤酶1mg相当于1000单位左右；评价该组合物的长期稳定性的方法为：取3批样品，分别于6℃±2℃条件下放置，在放置前和放置期间的第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月和24个月末取样，检查3批样品的外观、pH值、溶液的澄清度与颜色、无菌和效价等各项参数。外观、pH值、溶液的澄清度与颜色、无菌的检测方法均按照中国药典规定的方法进行。

实施例1

处方组成             每1000支用量

聚乙二醇降纤酶       5000单位(体积约5ml，聚乙二醇降纤酶重量约5mg)

羟乙基淀粉130/0.4    15g

制备方法：

配制与分装：称取处方量的羟乙基淀粉，加水溶解并配制成浓度为1.5％的羟乙基淀粉溶液，加热煮沸后加入适量活性炭，保温吸附30分钟，脱炭，放冷，加入5ml聚乙二醇降纤酶，混合均匀后，将溶液过滤除菌，按每支5单位分装半压塞，进箱。

冷冻干燥：预冻温度—30℃，升华阶段控制产品温度不超过共晶点，真空度控制在15±5Pa左右，再干燥温度不超过25℃，制品温度至20±5℃以后停止真空控制，直至干燥结束。压塞，出箱，轧盖。

实施例2 不同分子量的羟乙基淀粉作为辅料时制得的聚乙二醇降纤酶药物组合物的比较

分别用羟乙基淀粉40(平均分子量为40kDa)和羟乙基淀粉200/0.5(平均分子量为200kDa，取代级为0.5)代替实施例1中的羟乙基淀粉130/0.4，按照实施例1所述的制备方法，制备聚乙二醇降纤酶冻干粉针剂，分别得到样品1和样品2，与实施例1的冻干粉针剂(作为样品3)进行比较，评价三种冻干制剂的效价保留率、用1ml水复溶时的复溶时间等参数，结果如下表2所示。

表2 不同分子量的羟乙基淀粉作为辅料的比较

 

	样品1	样品2	样品3
				冻干前效价	5.0单位	5.0单位	5.0单位
冻干后效价	3.9单位	4.8单位	4.9单位
				效价保留率	78％	96％	98％
复溶时间(s)	30	140	42

实验结果表明：作为本发明的供注射用的聚乙二醇降纤酶组合物的保护剂型和赋形剂，羟乙基淀粉的分子量过低或者过高都不合适，其分子量过低，得到的冻干制剂的效价保留率较低(只有78％)；其分子量过高，则冻干制剂的复溶时间比较长；平均分子量为130kDa的羟乙基淀粉是比较理想的选择。

实施例3 不同浓度的羟乙基淀粉作为辅料时制得的聚乙二醇降纤酶组合物的比较

 

样品处方组成	样品1	样品2	样品3	样品4
					聚乙二醇降纤酶(1000支)	5000单位	5000单位	5000单位	5000单位
羟乙基淀粉130/0.4(1000支)	7.5g	15g	30g	60g

制备方法同实施例1，具体为：

配制与分装：分别称取上述处方量的羟乙基淀粉，分别加水溶解配制成浓度为0.75％、1.5％、3％和6％的羟乙基淀粉溶液，加热煮沸后加入适量活性炭，保温吸附30分钟，脱炭，放冷，加入处方量的聚乙二醇降纤酶，混合均匀后，将溶液分别过滤除菌，按每支5单位分装，半压塞，进箱。

冷冻干燥：预冻温度—30℃。升华阶段控制产品温度不超过共晶点，真空度控制在15±5Pa左右。再干燥温度上限25℃，制品温度至20±5℃以后停止真空控制，直至干燥结束。压塞，出箱，轧盖。

分别测定四种样品冻干前后的效价情况，以及冻干后的外观和加入1ml水复溶时的复溶时间，结果如下表3所示。

表3 不同浓度羟乙基淀粉作辅料的比较

 

	样品1	样品2	样品3	样品4
					羟乙基淀粉浓度	0.75％	1.5％	3.0％	6.0％
药液过滤速度	快	快	稍慢	慢，难以滤过
					冻干前效价	5.0单位	5.0单位	5.0单位	5.0单位
冻干后效价	4.9单位	4.9单位	4.8单位	5.1单位
					效价保留率	98％	98％	96％	102％
样品外观	块状物中间呈网状	白色均一块状物	白色均一块状物	白色块状物中间有萎缩
					复溶时间(s)	35	42	120	320
聚乙二醇降纤酶与羟乙基淀粉重量比	1:1500	1:3000	1:6000	1:12000

实验结果表明：各组冻干样品的效价保留率没有明显的差异，均在95％以上，但是样品制备过程中，药液过滤速度明显不同，当羟乙基淀粉的浓度达到6％时过滤速度已经非常缓慢，因此，从制备工艺的可操作性来看，羟乙基淀粉的浓度不能超过6％；同时，不同浓度羟乙基淀粉作为辅料时，制得的冻干制剂的外观差异较大，且向冻干制剂中加入1.0ml水复溶时，溶解速度有较大的差异，0.75％和1.5％组样品在1分钟内全部溶解，3.0％组样品需2分钟才能溶解，6.0％组的样品需5分钟才能完全溶解。因此，从制备和使用的角度考虑，在本冻干制剂的配制过程中，维持羟乙基淀粉的浓度为1.5％左右是最佳的选择。

实施例4 长期稳定性实验

按照实施例1制备3批样品A、B、C，分别于6℃±2℃条件下放置，在放置前，放置3个月、6个月、9个月、12个月、18个月和24个月末取样，检查3批样品的外观以及用1ml水复溶后溶液的pH值、澄清度、颜色、可见异物、无菌和效价等各项指标。实验数据显示，本品稳定性良好可控，在6℃±2℃条件下放置两年后仍然稳定。

表4 注射用聚乙二醇降纤酶冻干粉针剂长期稳定性实验结果

Claims (10)

1、一种供注射用的药物组合物，包含活性成分聚乙二醇降纤酶和非活性成分羟乙基淀粉。

2、权利要求1所述的供注射用的药物组合物，其中羟乙基淀粉的平均分子量为80～160kDa。

3、权利要求2所述的供注射用的药物组合物，其中羟乙基淀粉的平均分子量为130kDa。

4、权利要求1、2或3所述的供注射用的药物组合物，其中聚乙二醇降纤酶的含量为5～10单位/支。

5、权利要求4所述的供注射用的药物组合物，其为冻干粉针剂，其中聚乙二醇降纤酶与羟乙基淀粉的重量比为1:500～25000。

6、权利要求5所述的供注射用的药物组合物，其中聚乙二醇降纤酶与羟乙基淀粉的重量比为1：2000～8000。

7、一种权利要求5或6所述的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将羟乙基淀粉溶于水配制成合适浓度的水溶液，加热，活性炭吸附后脱炭，放冷，再加入聚乙二醇降纤酶配制成均匀药液；

(2)将上述药液过滤、分装；

(3)冷冻干燥阶段预冻温度为—50～—10℃，再干燥温度不超过15～30℃。

8、权利要求7所述的制备方法，其中步骤(1)所述的羟乙基淀粉的合适浓度为0.5～6％。

9、羟乙基淀粉作为聚乙二醇降纤酶的保护剂和赋形剂的用途。

10、权利要求1所述的注射用药物组合物在制备治疗和/或预防血栓栓塞性疾病的药物以及神经保护药物中的用途。