CN101357223A - 一种渔用抗应激剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种渔用抗应激剂的制备方法,属于水产配合饲料技术领域。特征是:取谷氨酰胺二肽、大黄提取物、维生素C、维生素E、氯化钾、氯化钠、无水葡萄糖及载体;将上述各组分充分混合后粉碎,制成干粉。本发明原料来源稳定,制备简单,取材广泛,成本低廉;从鱼体应激的机理出来,抗应激剂既补充中草药,又补充西药谷氨酰胺二肽;从中西结合药物对鱼体的应激调理,并适当补充应激造成的Na+、K+流失来防治鱼体应激。使用时可在饲料中添加,也可以直接泼洒;能提高鱼体免疫与抗氧化能力,提高鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力,且可促进鱼体生长。
Description
技术领域
本发明涉及一种渔用抗应激剂的制备方法,属于水产配合饲料技术领域。
背景技术
应激是一个生理学概念。1936年,加拿大病理生理学家Hans Selye发现,动物在受到外界有害因素作用时,发生多器官功能紊乱,他认为应激是机体对各种异常刺激所产生的一种非特异性应答反应。在水产养殖中鱼类持续不断的受一些外界因素的影响,特别是环境温度、养殖密度、养殖水体化学因子、鱼体的运输、暂养等应激。像其他的脊椎动物一样,环境的应激作用对鱼类生理的动态平衡有着极大的影响,在自然环境中,这种应激反应来源于体液系统的激活作用,是一种避免或克服外界直接危害的强烈反应。如果在养殖过程中给予鱼体长久的应激,鱼类下丘脑—垂体—肾上腺皮质(HPA)轴心将受到连续刺激,从而导致体内皮质醇等激素水平发生变化,血液中乳酸、葡萄糖发生变化,与细胞反应相关的热应激蛋白也发生变化,这将导致机体能量代谢和其他生理功能发生变化,严重的可使鱼体淋巴细胞和白细胞数量减少,并影响其繁殖、生长、抗病乃至生存能力,引起鱼体发病,甚至死亡。高温是我国长江以南鱼类养殖经常遇到的养殖环境,尤其在8月份,室外养殖水温往往会超过温水性鱼类正常生长水温(25℃-28℃),此时,养殖鱼类机体会产生热应激以对抗不利的环境温度。同时在实际养殖中,为了追求高效益,高密度养殖业会对鱼体产生应激反应。目前研究了许多能增强机体免疫力、减少机体应激的物质。
中草药具有天然、高效、毒副作用少、资源丰富等优点,含有生物碱、多糖、皂甙、蒽醌类、挥发油和有机酸等,与动物的免疫功能密切相关(程志斌等,2002)。在水产上中草药能提高鱼类的特异、非特异免疫功能,防治鱼病,如:传统中草药大黄、黄芪、甘草、陈皮、鱼腥草、黄芩、当归等能提高虾、鱼血液溶菌酶活性、过样氧化氢酶、超氧化物歧化酶和白细胞吞噬作用等,降低血液皮质醇浓度,起到抗应激的作用。
谷氨酰胺是L-谷氨酸的γ-羧基酰胺化物,是体液中最丰富的氨基酸之一,可增强鱼体免疫功能、维持酸碱平衡、增加细胞的吞噬作用和淋巴细胞的增殖、增加细胞体积、增强肌肉细胞内蛋白质的合成等,是一种极有发展前景的新型药物和动物营养性饲料添加剂。
维生素C是脯氨酸羟化为羟脯氨酸中的一种辅助因子,是动物机体不可缺少的营养物质,其具有提高动物生产性能、增强机体免疫力,增强抗应激能力等作用。水产动物一般缺乏合成维生素c的能力,因此在养殖生产中,为了提高动物机体对抗应激的能力,可在饲料中添加适量的维生素C。一些研究也证实了维生素C可以提高动物受不良因素影响时的抵抗能力,如提高中国对虾的缺氧耐受力;提高凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)抗应激能力。
维生素E是水产动物养殖中一种重要的抗氧化剂、免疫增强剂,主要功能就是清除体内多余的氧自由基,已有的研究表明维生素E与水产动物的细胞免疫和体液免疫密切相关,且在抗应激方面也起着很重要的作用。研究表明维生素E可通过降低金头鲷血液中可的松的水平来缓解动物的胁迫,提高其抗应激的能力。中草药及提取物能增强动物机体对不良刺激的防御能力,使机体的生理功能得到调节并恢复正常机能。研究发现鱼虾饵料中添加适量黄芪多糖,能增强抗低氧、抗疲劳、抗应激能力,饲料添加0.1%左右的大黄蒽醌提取物可以增强建鲤的抗应激能力。有研究表明,在饲料中添加中草药制剂可以增强奶牛、产蛋鸡的抗热应激能力,提高小鼠热应激蛋白70mRNA的表达水平。现有报道表明黄芪可以提高中华鳖的抗酸应激能力,大黄蒽醌提取物可以提高建鲤血清皮质醇、溶菌酶等指标的水平。上述几个免疫增强剂存在使用成本高、单一生产使用又不稳定。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足之处,从而提供一种渔用抗应激剂的制备方法,其能耗低、工艺简单、生产成本低,能提高鱼体免疫与抗氧化能力,提高鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力,且可促进鱼体生长的抗应激添加剂。
按照本发明提供的技术方案,一种渔用抗应激剂的制备方法采用以下工艺步骤,其组分配比以重量百分数计:
取谷氨酰胺二肽为:0.25~0.75%、大黄提取物为:0.3~0.9%、维生素C为:2.0~6.0%、维生素E为:1.0%~5.0%、氯化钾为:3.0%~7.0%、氯化钠为:3.0%~7.0%、无水葡萄糖为:45.0%~70.0%、载体为:20.0%-40.0%;
将上述各组分充分混合后粉碎,粉碎粒度150~178um,制成80~110目干粉。粉碎转速为:5000~6000转/分。
所述载体选自玉米粉或麸皮或小麦粉或大豆粉或米糠或沸石粉等。
上述抗应激剂,即可单独使用,也可以作为饲料添加剂使用,在制备抗应激剂时,所述鱼用抗应激剂在饲料中的添加量为1%-5%。抗应激剂的添加量与使用的周期有关,当使用周期在30d以上,在饲料中添加量为1%-2%;当使用周期在7d以内,在饲料中添加量为3%-5%。
此抗应激剂可用于鲤鱼、鲫鱼、翘嘴红鲌、青鱼、草鱼、鳊鱼等常规鱼类养殖中,直接地清除机体内的自由基,消除自由基对机体组织器官正常功能的负面影响,加快修复被破坏的免疫系统,减缓机体对应激条件的反应,能提高鱼体的免疫与抗氧化能力、抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力,改善饲料适口性,促进鱼体生长。在饲料中的添加量为2-10%;也可以直接泼洒,使水体浓度为10-20ppm。
本发明与已有技术相比具有以下优点:
1、使用本添加剂后,葡萄糖具有抗氧化的作用,不需要添加其他的抗氧化剂,避免了使用抗氧化剂可能产生的毒副作用;
2、本发明原料来源稳定,制备简单,取材广泛,成本低廉。
3、本发明从鱼体应激的机理出来,抗应激剂既补充中草药,又补充西药谷氨酰胺二肽;从中西结合药物对鱼体的应激调理,并适当补充应激造成的Na+、K+流失来防治鱼体应激。
4、本发明即可在饲料中添加;也可以直接泼洒。
5、本发明抗应激剂通过动物试验,表明抗应激剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力,提高鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力,促进鱼体生长。
具体实施方式
下面本发明将结合实施例作进一步描述:
实施例一:本发明一种渔用抗应激剂的制备方法采用以下工艺步骤,其组分配比以重量百分数计:
取谷氨酰胺二肽为:0.75%、大黄提取物为:0.9%、维生素C为:6.0%、维生素E为:5.0%、氯化钾为:7.0%、氯化钠为:7.0%、无水葡萄糖为:45.0%、载体选玉米为:28.35%;将上述各组分充分混合后粉碎,粉碎粒度150um,制成100目干粉。粉碎转速为:6000转/分。
所述大黄提取物主要成分为45%大黄素,由巨邦植物原料有限公司提供。
所述维生素C主要为30%多聚磷酸酯粉剂,由无锡正大畜禽有限公司提供。所述维生素E选自(主要为40%维生素E醋酸酯,浙江东工制药有限公司。
生长实验:团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂,个体初均重约130g。随机分组,设有对照组与对照组,每组设3个平行试验,每平行组130尾试验鱼,共6个水泥池(规格为800cm×200cm×100cm)。团头鲂驯化30d后投喂0、1.0%等不同剂量抗应激剂56d,测定其生长的影响
应激试验:饲养试验结束后,选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/L)应激,每个剂量组分三个平行组,每个平行组均为20尾左右,放养于同样规格容积为40L塑料桶中。采用流水系统,水温25±1℃,流速为2L/min,并保证充足的氧气,减少人为干扰,保持安静,防止额外应激。每2h观察鱼体死亡情况,观察2d,统计死亡率。
攻毒实验:饲养试验结束后,每个剂量组分三个平行组,每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌,将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释,使终浓度约为1×107cells/ml。按每100g鱼重腹腔注射菌液1.0ml,后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为100cm×100cm×100cm),并保证充足的氧气,每天观察鱼体死亡情况,观察7d,统计死亡率。
结果表明:与对照组相比,1.0%抗应激剂增重率显著(P<0.05)分别提高了10.36%;病原菌感染鱼体4d,对照组死亡率为75.0%,1.0%抗应激剂鱼死亡率为20.0%;高密度应激1d试验后,与对照组相比,1.0%抗应激剂显著(P<0.05)降低血液皮质醇浓度10.58%,血糖水平5.38%及丙二醛浓度8.27%,增加了血液过氧化氢酶10.34%、超氧化物歧化酶活性9.44%以及应激蛋白HSP70浓度12.34%,因此,该抗应激剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力,提高鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力,提高鱼体抗应激能力,促进鱼体生长。
实施例二:本发明一种渔用抗应激剂的制备方法采用以下工艺步骤,其组分配比以重量百分数计:
取谷氨酰胺二肽为:0.5%、大黄提取物为:0.6%、维生素C为:4.0%、维生素E为:3.0%、氯化钾为:5.0%、氯化钠为:5.0%、无水葡萄糖为:55.0%、载体选麸皮为:26.9%;将上述各组分充分混合后粉碎,粉碎粒度160um,制成90目干粉。粉碎转速为:6000转/分。
生长实验:团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂,个体初均重约130g。随机分组,设有对照组与对照组,每组设3个平行试验,每平行组130尾试验鱼,共6个水泥池(规格为800cm×200cm×100cm)。团头鲂驯化30d后投喂0、2.0%等不同剂量抗应激剂56d,测定其生长的影响
应激试验:饲养试验结束后,选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/L)应激,每个剂量组分三个平行组,每个平行组均为20尾左右,放养于同样规格容积为40L塑料桶中。采用流水系统,水温25±1℃,流速为2L/min,并保证充足的氧气,减少人为干扰,保持安静,防止额外应激。每2h观察鱼体死亡情况,观察2d,统计死亡率。
攻毒实验:饲养试验结束后,每个剂量组分三个平行组,每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌,将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释,使终浓度约为1×107cells/ml。按每100g鱼重腹腔注射菌液1.0ml,后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为100cm×100cm×100cm),并保证充足的氧气,每天观察鱼体死亡情况,观察7d,统计死亡率。
结果表明:与对照组相比,2.0%抗应激剂增重率显著(P<0.05)分别提高了14.36%;病原菌感染鱼体4d,对照组死亡率为85.0%,1.0%抗应激剂鱼死亡率为15.0%;高密度应激1d试验后,与对照组相比,1.0%抗应激剂显著(P<0.05)降低血液皮质醇浓度12.22%,血糖水平4.37%及丙二醛浓度9.11%,增加了血液过氧化氢酶12.76%、超氧化物歧化酶活性10.46%以及应激蛋白HSP70浓度12.57%,因此,该抗应激剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力,提高鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力,提高鱼体抗应激能力,促进鱼体生长。
实施例三:本发明一种渔用抗应激剂的制备方法采用以下工艺步骤,其组分配比以重量百分数计:
取谷氨酰胺二肽为:0.25%、大黄提取物为:0.3%、维生素C为:2.0%、维生素E为:1.0%、氯化钾为:3%、氯化钠为:3.0%、无水葡萄糖为:70.0%、载体选小麦粉为:20.45%;将上述各组分充分混合后粉碎,粉碎粒度170um,制成110目干粉。粉碎转速为:6000转/分。
生长实验:团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂,个体初均重约130g。随机分组,设有对照组与对照组,每组设3个平行试验,每平行组130尾试验鱼,共6个水泥池(规格为800cm×200cm×100cm)。团头鲂驯化30d后投喂0、3.0%等不同剂量抗应激剂56d,测定其生长的影响
应激试验:饲养试验结束后,选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/L)应激,每个剂量组分三个平行组,每个平行组均为20尾左右,放养于同样规格容积为40L塑料桶中。采用流水系统,水温25±1℃,流速为2L/min,并保证充足的氧气,减少人为干扰,保持安静,防止额外应激。每6h观察鱼体死亡情况,观察7d,统计死亡率。
攻毒实验:饲养试验结束后,每个剂量组分三个平行组,每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌,将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释,使终浓度约为1×107cells/ml。按每100g鱼重腹腔注射菌液1.0ml,后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为100cm×100cm×100cm),并保证充足的氧气,每天观察鱼体死亡情况,观察7d,统计死亡率。
结果表明:与对照组相比,3.0%抗应激剂增重率显著(P<0.05)分别提高了15.29%;病原菌感染鱼体4d,对照组死亡率为86.0%,1.0%抗应激剂鱼死亡率为12.0%;高密度应激1d试验后,与对照组相比,1.0%抗应激剂显著(P<0.05)降低血液皮质醇浓度13.74%,血糖水平7.11%及丙二醛浓度6.82%,增加了血液过氧化氢酶13.45%、超氧化物歧化酶活性12.64%以及应激蛋白HSP70浓度13.73%,因此,该抗应激剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力,提高鱼体抗高温、高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌抗感染能力,提高鱼体抗应激能力,促进鱼体生长。
Claims (4)
1、一种渔用抗应激剂的制备方法,其特征是采用以下工艺步骤,其组分配比以重量百分数计:
取谷氨酰胺二肽为:0.25~0.75%、大黄提取物为:0.3~0.9%、维生素C为:2.0~6.0%、维生素E为:1.0%~5.0%、氯化钾为:3.0%~7.0%、氯化钠为:3.0%~7.0%、无水葡萄糖为:45.0%~70.0%、载体为:20.0%-40.0%;
将上述各组分充分混合后粉碎,制成80~110目干粉。
2、根据权利要求1所述的一种渔用抗应激剂的制备方法,其特征在于所述载体选用玉米粉或麸皮或小麦粉或大豆粉或米糠或沸石粉。
3、根据权利要求1所述的一种渔用抗应激剂的制备方法,其特征在于所述粉碎粒度150~178um。
4、根据权利要求1所述的一种渔用抗应激剂的制备方法,其特征在于所述粉碎转速为:5000~6000转/分。
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