CN102318755A - 一种水产动物用的中草药免疫增强剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及水产动物用的中草药免疫增强剂，它包含如下重量百分比的中草药：杜肿33-38%、当归5-10%、黄芪8-13%、枸杞15-20%、牛膝5-10%、白芍1-6%、地俞碳1-6%、藕节1-6%、石韦1-6%和山楂5-10%。该中草药免疫增强剂生产应用后，可以减少抗生素和化学药物的使用，增强水产动物的自身免疫力，提高养殖成活率，增加养殖带来的经济效益。

Description

一种水产动物用的中草药免疫增强剂

技术领域

本发明涉及一种水产动物用的保健品，尤其涉及水产动物用的中草药免疫增强剂，属于水产配合饲料添加剂技术领域。

背景技术

鱼病一直是水产养殖发展的主要制约因素之一。据测算，2002年4-10月全国水产养殖因病害造成的直接经济损失达到141亿元。为了治疗和预防鱼类的疾病，人们不得不使用各种化学药物和抗生素。然而，长期用药不仅使病原菌的抗药性越来越明显，而且药物残留的危害也日益显现。

国内外水产科技工作者通过研究证明某些物质可以提高鱼体免疫力，达到自身抗病的效果，并把这类物质统称为免疫增强剂。在饲料中添加免疫增强剂，提高饲养动物自身的抗病能力，减少病害的发生，从而大大降低用药量，是未来健康养殖的重要方式。

中草药因取自动物、植物、矿物及其产品，由组方配伍规律和配伍禁忌组成，充分利用各味中草药相互作用，提高了对疾病预防及治疗效果，对机体生理功能无明显损害，不产生抗药性和毒副作用，安全性好，无药物残留，不会造成环境污染。中草药除能提高水产动物非特异性免疫能力外，还能调整机体新陈代谢、提高抗应激能力、具有抗生素作用、营养作用、双向调节作用、诱食作用等多种功能。因此，中草药作为饲料添加剂已成为当今畜牧水产业研究的热点。

中草药用作水产动物免疫增强剂的研究，虽有一些报道，但总的说来，还处于起步阶段。目前生产应用中存在产品添加量大、有效成分不明、作用机理不清、作用效果不稳定、剂型单一等问题。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种水产动物用的中草药免疫增强剂。该中草药免疫增强剂生产应用后，可以减少抗生素和化学药物的使用，增强水产动物的自身免疫力，提高养殖成活率，增加养殖带来的经济效益。

本发明的目的是这样实现的：

一种水产动物用的中草药免疫增强剂，包含如下重量百分比的中草药：杜肿33-38%、当归5-10%、黄芪8-13%、枸杞15-20%、牛膝5-10%、白芍1-6%、地俞碳1-6%、藕节1-6%、石韦1-6%和山楂5-10%。

在本发明一个优选的实施例中，所述的中草药免疫增强剂由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿35%、当归8%、黄芪10%、枸杞17%、牛膝8%、白芍3%、地俞碳4%、藕节4%、石韦4%和山楂7%。

在本发明另一个优选的实施例中，所述的中草药免疫增强剂由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿38%、当归10%、黄芪12%、枸杞15%、牛膝6%、白芍5%、地俞碳1%、藕节2%、石韦6%和山楂5%。

在本发明另一个优选的实施例中，所述的中草药免疫增强剂由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿34%、当归5%、黄芪8%、枸杞20%、牛膝10%、白芍1%、地俞碳6%、藕节6%、石韦1%和山楂9%。

所述的中草药免疫增强剂，它是通过将所有中草药均匀粉碎后配成复方制剂制备而成。

另外，所述的中草药免疫增强剂在制备增强水产动物免疫力的复方制剂中的应用。

优选地，所述的水产动物为罗非鱼、鲫鱼、黄鳝。

与现有技术相比，本发明涉及的中草药免疫增强剂具有如下优点和显著地进步：

（1)提高了罗非鱼血清中溶菌酶的活性。溶菌酶是鱼类血清中极为重要的非特异性免疫指标之一， 其活性的高低直接反映出溶菌作用的强弱，溶菌酶活力的增大，可增加溶菌酶溶解细菌的能力。饲喂药饵11d前，溶菌酶活力增长不明显，各组间无显著差异；18d后各试验组鱼血清中溶菌酶的活力几乎成倍增长，均显著高于对照组(P<0.01)，B组、C组显著高于A组(P<0.05)，此趋势一直保持到第32天。本试验结果表明，复方中草药制剂能有效提高罗非鱼的溶菌酶活力。

（2)增强了头肾巨噬细胞的吞噬能力。头肾巨噬细胞的吞噬活力是评价鱼体免疫力的重要指标，其吞噬能力的高低可以直接反映出鱼类非特异性免疫能力的大小。第18天，B组和C组明显高于对照组(P<0.05)，A组与对照组差异不显著；第25天，C组显著高于对照组(P<0.05)；第32天，4组之间均无显著差异。可见本复方制剂对罗非鱼头肾巨噬细胞吞噬活力有明显增强作用，但见效时间较迟，与溶菌酶活力的提高时间基本一致，B组、C组效果好于A组。攻毒结果显示，C组的免疫保护率为75％，能显著增强罗非鱼对嗜水气单胞菌的抵抗力；B组、A组的抗病力也有一定提高。

 

附图说明

图1 罗非鱼血清中溶菌酶的活性。

注：图中标有不同大写字母者表示组间差异极显著(P<0.01)，标有不同小写字母者表示组间差异显著(P<0.05)，标有相同小写字母者表示组间差异不显著(P>0.05)，下同。

图2 罗非鱼头肾巨噬细胞的吞噬活性。

图3 罗非鱼血清杀菌活性。

图4 罗非鱼红细胞压积值。

 

具体实施方式

以下是本发明涉及的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

实施例1中草药免疫增强剂的制备

中草药免疫增强剂由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿35%、当归8%、黄芪10%、枸杞17%、牛膝8%、白芍3%、地俞碳4%、藕节4%、石韦4%和山楂7%。将所有中草药均匀粉碎后配成复方制剂。

实施例2中草药免疫增强剂的制备

中草药免疫增强剂由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿38%、当归10%、黄芪12%、枸杞15%、牛膝6%、白芍5%、地俞碳1%、藕节2%、石韦6%和山楂5%。将所有中草药均匀粉碎后配成复方制剂。

实施例3中草药免疫增强剂的制备

中草药免疫增强剂由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿34%、当归5%、黄芪8%、枸杞20%、牛膝10%、白芍1%、地俞碳6%、藕节6%、石韦1%和山楂9%。将所有中草药均匀粉碎后配成复方制剂。

实施例4 中草药免疫增强剂对罗非鱼非特异免疫力的影响

本试验中，发明人将实施例1制备的中草药免疫增强剂作为免疫增强剂加入饲料中饲喂罗非鱼，通过分析罗非鱼的非特异性免疫指标，研究了本发明对提高罗非鱼免疫能力的效果，旨在为鱼类的病害防治和中国绿色鱼药的开发开辟一条新途径。

1 材料与方法

1.1 材料

试验用罗非鱼Oreochromis niloticus购自湖北蒲圻温泉鱼种场，体重为(40.3±7.9)g。将罗非鱼饲养于玻璃水族箱(60cm×40cm×52cm)中，每箱随机放养l2尾鱼。试验用水为经过曝气的自来水，以充气泵增氧，每天投喂适量。驯养18 d后开始正式试验，试验期间水温为(27土1)℃。每天上午用虹吸法排污，加注新水。驯养期间投喂基础饲料。

试验用基础饲料的成分为：鱼粉20.O％ (质量分数，下同)，豆粕20.0％，菜粕12.0％，次粉40.3％，麦麸6.O％，多种维生素0.2％，复合矿物质1.5％，配制成颗粒饲料。饲料中的营养成分为：粗蛋白32％ (质量分数，下同)，粗脂3.5％，粗纤维4.1％，粗灰分6.0％，可消化能为12.142 MJ/kg。

中草药免疫增强剂按照工艺制备而成：由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿35%、当归8%、黄芪10%、枸杞17%、牛膝8%、白芍3%、地俞碳4%、藕节4%、石韦4%和山楂7%。将所有中草药均匀粉碎后配成复方制剂。

1.2 方法

1.2.1 试验设计

将试验用鱼分为4组，分别投喂4种饲料。每组设4个重复，每个重复组放养12尾鱼。在基础饲料中分别添加质量分数为0(对照组)、1％ (A组)、3％ (B组)、6％ (C组)的中草药免疫增强剂替代等量的次粉，混合后用绞肉机制成颗粒饲料，60℃下烘干，冷藏备用。试验期间，每日投喂，日投喂量均为体重的2％，分别于9：00、16：00各投喂一半。

1.2.2 测定指标和方法

分别于试验后第4、11、l8、25、32天各取样1次。每次每组随机取罗非鱼8尾(每箱2尾)，用注射器于尾静脉处采血。将每尾鱼的血液分为2份，1份加肝素抗凝，供测定红细胞比容；1份置于室温下，待凝血后分离血清，供测定血清杀菌、溶菌酶活性。同时每尾鱼取头肾。

头肾白细胞吞噬活性、溶菌酶活力、红细胞比容、血清杀菌百分率、脾脏脏器系数、攻毒保护率的测定方法按照参考文献的方法操作。参考文献：温周瑞，等：一种中草药复方制剂对罗非鱼非特异免疫力的影响，大连水产学院学报，2009年04月第24卷第2期。

2 结果

2.1 溶菌酶的活性

从图1可见：试验开始后第4天和第11天，试验组鱼血清中溶菌酶的活性均高于对照组，但无显著性差异(P>0.05)；随着时问推移(第18天)，各试验组血清中溶菌酶的活性明显提高，A组、B组、C组极显著高于对照组(P<0.01)，B组极显著高于A组(P<0.01)，但其余组间差异均不显著(P>0.05)；第25天，B组、C组与对照组差异极显著(P<0.01)，A组显著高于对照组(P<0.05)；第32天，差异显著性与第25天相同，B组与C组一直没有显著差异，第25天后，B组与C组均显著高于A组(P<0.05)。对照组的溶菌活力从第4天到第32天最高值比最低值仅提高15.8％，同期A组、B组和C组的最高值分别比最低值提高78.2％、113.0％和108.O％。

2.2 头肾吞噬细胞的活性

从图2可见：试验进行第4天和第11天，试验组鱼头肾巨噬细胞的吞噬百分率比对照组高，但没有显著性差异(P>0.05)；第l8天，B组和C组明显高于对照组(P<0.05)，A组与对照组差异不显著；第25天，仅C组显著高于对照组(P<0.05)；第32天，4组之间均无显著差异(P>0.05)。

2.3 血清的杀菌活性

从图3可见：试验开始后第4天，各组鱼血清的杀菌活性无显著差异(P>0.05)；第11-32天，各试验组均极显著高于对照组(P<0.01)，其中第ll天，各试验组之问无显著差异(P>0.05)，第18天，C组显著高于A组(P<0.05)，其余组间差异均不显著(P>0.05)，第25天和第32天，C组极显著高于B组和A组(P<0.01)，但A组和B组之间差异不显著(P>0.05)。

2.4 红细胞压积

从图4可见：罗非鱼红细胞压积值变化不明显，只在第18天，B组鱼的红细胞压积值比对照组显著提高(P<0.05)，其余时期各组间均无统计学差异。

2.5 脾脏脏器系数

于中草药饲养试验的第32 d测定对照组、A组、B组、C组罗非鱼的脾脏脏器系数(％)分别为0.25±0.16、0.18±0.09、0.17±0.06、0.14±0.04。统计结果表明，各组间体重、脾重和脾脏系数均无显著差异。

2.6 攻毒保护率

对照组、B组、C组各有5尾鱼，A组有4尾鱼做攻毒试验，每尾鱼腹腔注射嗜水气单胞菌活菌液0.4mL(1.5×10 CFU／mL)，结果见表1(此结果维持到一周后试验结束)。死鱼的鳃盖、鳍条基部、肠道等部位均表现出充血和突眼等典型出血性败血症的症状，可以判断是因攻毒致死。经计算，C组免疫保护力为75％，其他组为0。因此，添加中药能提高罗非鱼对嗜水气单胞菌的免疫保护力，随着添加量的增加，保护力增强。

表1 罗非鱼攻毒保护率

本试验中采用杜仲、黄芪、当归、枸杞、牛膝、白芍、地俞碳、藕节、石韦和山楂为主要原料进行科学配伍，利用不同中药的特性实现药效的增效作用。其主要作用为：

（1)提高了罗非鱼血清中溶菌酶的活性。溶菌酶是鱼类血清中极为重要的非特异性免疫指标之一， 其活性的高低直接反映出溶菌作用的强弱，溶菌酶活力的增大，可增加溶菌酶溶解细菌的能力。饲喂药饵11d前，溶菌酶活力增长不明显，各组间无显著差异；18d后各试验组鱼血清中溶菌酶的活力几乎成倍增长，均显著高于对照组(P<0.01)，B组、C组显著高于A组(P<0.05)，此趋势一直保持到第32天。本试验结果表明，复方中草药制剂能有效提高罗非鱼的溶菌酶活力，且添加量不同其效果也不同，添加量为3％和6％的B组和C组效果相近，好于添加量为1％的A组。

（2)增强了头肾巨噬细胞的吞噬能力。头肾巨噬细胞的吞噬活力是评价鱼体免疫力的重要指标，其吞噬能力的高低可以直接反映出鱼类非特异性免疫能力的大小。第18天，B组和C组明显高于对照组(P<0.05)，A组与对照组差异不显著；第25天，C组显著高于对照组(P<0.05)；第32天，4组之间均无显著差异。可见本复方制剂对罗非鱼头肾巨噬细胞吞噬活力有明显增强作用，但见效时间较迟，与溶菌酶活力的提高时间基本一致，B组、C组效果好于A组。攻毒结果显示，C组的免疫保护率为75％，能显著增强罗非鱼对嗜水气单胞菌的抵抗力；B组、A组的抗病力也有一定提高，但不显著。

另外，试验表明，中草药免疫增强剂的给药时间极其重要，它不同于抗生素用于疾病的发生时期或初期。免疫增强剂的主要作用在于调节或改善机体的免疫功能，即当机体的免疫功能下降或被抑制时，免疫增强剂就能提高机体的免疫能力。给药时间的长短也是免疫增强剂发挥作用的一个关键因素。本试验中用药饵饲喂罗非鱼18 d后，能明显增强溶菌酶活力和头肾巨噬细胞吞噬活力，11d后可明显提高血清杀菌活力，从而提高了罗非鱼的非特异性免疫能力，32d时的效果与18d的相似。因此，这种中草药免疫增强剂按质量分数为1.0％的量加入饲料中饲喂罗非鱼，可达到一定效果；按3.0%～6.0% 的量加入饲料中饲喂罗非鱼，能取得理想效果，且一个疗程的最佳时间为11-18 d。本研究中是采用饲喂方式给药，药物吸收慢，出现的效应时间较长，但这种给药途径在生产实践中较为实用。

Claims (7)

1.一种水产动物用的中草药免疫增强剂，其特征在于：包含如下重量百分比的中草药：杜肿33-38%、当归5-10%、黄芪8-13%、枸杞15-20%、牛膝5-10%、白芍1-6%、地俞碳1-6%、藕节1-6%、石韦1-6%和山楂5-10%。

2.如权利要求1所述的中草药免疫增强剂，其特征在于：由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿35%、当归8%、黄芪10%、枸杞17%、牛膝8%、白芍3%、地俞碳4%、藕节4%、石韦4%和山楂7%。

3.如权利要求1所述的中草药免疫增强剂，其特征在于：由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿38%、当归10%、黄芪12%、枸杞15%、牛膝6%、白芍5%、地俞碳1%、藕节2%、石韦6%和山楂5%。

4.如权利要求1所述的中草药免疫增强剂，其特征在于：由如下重量百分比的活性成分组成：杜肿34%、当归5%、黄芪8%、枸杞20%、牛膝10%、白芍1%、地俞碳6%、藕节6%、石韦1%和山楂9%。

5.如权利要求1-4任一项所述的中草药免疫增强剂，其特征在于：将所有中草药均匀粉碎后配成复方制剂。

6.权利要求1-4任一项所述的中草药免疫增强剂在制备增强水产动物免疫力的复方制剂中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的水产动物为罗非鱼、鲫鱼、黄鳝。

Images