CN101354348A - 一种甘蔗分子标记page凝胶超快速银染检测方法 - Google Patents
一种甘蔗分子标记page凝胶超快速银染检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种甘蔗分子标记PAGE凝胶超快速银染检测方法，该方法包括以下步骤：用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR标记和AFLP标记的PCR扩增物；将电泳好的凝胶放入染色液染色；将凝胶从染色液中取出，快速冲洗，放入显影液里显影；显影好的凝胶用蒸馏水清洗两次，晾干读带；本发明将传统的固定、染色、显影和定影四个步骤合成两个最简单的步骤，同时减少了洗涤次数和时间，减少了固定液、定影液及乙酸、无水乙醇、碳酸钠、硫代硫酸钠的使用，不仅大大减少了银染时间、试剂成本，同时也保证了高质量的银染效果，相比较其他传统或改良银染和同位素方法具有较大的时间成本优势。
Description
技术领域：
本发明涉及一种甘蔗分子标记PAGE凝胶的超快速银染检测方法。
背景技术：
甘蔗的分子标记技术近年来得到快速发展，目前针对甘蔗种质资源研究最有效的分子标记技术为AFLP和SSR标记，对两种标记的扩增片段多用聚丙烯酰胺凝胶，凝胶的显影有两种方式：银染显影和放射性显影，放射性显影虽能较清晰的显示扩增片段，但由于其实验成本过高及对从业人员身体危害比较大，因此较少采用；银染方法通过甲醛将银离子还原出来，银离子与核酸结合从而显出扩增带，达到显影的目的，其分辨率能够满足检测要求。
目前，所报道的银染方法多为常规银染方法和经过改良的方法，但依然存在步骤多，所用试剂强碱强酸有毒，不仅耗时耗力，对人体也有一定的伤害，而且显影的质量也有好有坏。
发明内容：
本发明的目的是提出一种甘蔗分子标记PAGE凝胶的超快速银染检测方法，该方法能有效提高银染的速度，同时减少一些有害试剂的使用。
本发明的目的通过以下步骤实现：
1、用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR标记和AFLP标记的PCR扩增物。
2、将电泳好的凝胶放入染色液染色。
3、将凝胶从染色液中取出，快速冲洗，放入显影液里显影。
4、显影好的凝胶用蒸馏水清洗两次，晾干读带。
本发明将传统的固定、染色、显影和定影四个步骤合成两个最简单的步骤，同时减少了洗涤次数和时间，减少了固定液、定影液及乙酸、无水乙醇、碳酸钠、硫代硫酸钠的使用，不仅大大减少了银染时间、试剂成本，同时也保证了高质量的银染效果，相比较其他传统或改良银染和同位素方法具有较大的时间成本优势。整个过程只需要10分钟时间，在保证快速少害的同时，又能进一步提高银染显影质量，提高分子标记扩增带的检出率。
具体实施方式：
本发明的方法步骤是：
a、用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR标记和AFLP标记的PCR扩增物。
1、采用常规SSR标记和AFLP标记方法对甘蔗基因组DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；
2、取3.8ul产物进行凝胶电泳检测。
b、将电泳好的凝胶放入染色液染色。
1、染色液的配置：称2g硝酸银加入2L去离子水中配成0.1％的染色液；
2、将电泳好的凝胶放入染色液中染色5分钟。
c、将凝胶从染色液中取出，快速冲洗，放入显影液里显影。
1、显影液的配置：30gNaOH，15ml 37％甲醛加入到2L去离子水中；
2、将染色好的凝胶用去离子水清洗5秒，放入显影液里显影4分钟左右。
D、显影好的凝胶用蒸馏水清洗两次，晾干读带。
1、显影完全后用清水清洗两次，晾干；
2、胶片晾干后即可读带。
Claims (3)
1、一种甘蔗分子标记PAGE凝胶超快速银染检测方法，步骤如下：
1)、用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR标记和AFLP标记的PCR扩增产物；
2)、将电泳好的凝胶放入染色液染色5分钟；
3)、将凝胶从染色液中取出，用去离子水快速冲洗5秒，放入显影液里显影4分钟；
4)、显影好的凝胶用蒸馏水清洗两次，晾干读带。
2、根据权利要求1所述的一种甘蔗分子标记PAGE凝胶超快速银染检测方法，其特征是：染色液为0.1％的硝酸银溶液。
3、根据权利要求1所述的一种甘蔗分子标记PAGE凝胶超快速银染检测方法，其特征是：显影液为含有1.5％的氢氧化钠和0.5％甲醛的溶液。
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101849972A (zh) * | 2010-05-07 | 2010-10-06 | 中国人民解放军海军医学研究所 | 一种冬虫夏草dna指纹高分辨率的显带检测方法 |
| CN101865798A (zh) * | 2010-06-12 | 2010-10-20 | 西北农林科技大学 | 一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法 |
| CN102424855A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-04-25 | 云南省农业科学院经济作物研究所 | 一种聚丙烯酰胺凝胶中dna的银染方法 |
| CN102471802A (zh) * | 2009-07-07 | 2012-05-23 | 丰田自动车株式会社 | 用于鉴定甘蔗属植物品种/品系的标记物及其用途 |
| CN105018481A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-11-04 | 广西大学 | 河八王的一种dna指纹图谱及其获取方法与专用引物 |
| CN107345934A (zh) * | 2016-05-07 | 2017-11-14 | 中国海洋大学 | 一种长牡蛎微卫星聚丙烯酰氨凝胶电泳的快速银染方法 |
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2008
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Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102471802A (zh) * | 2009-07-07 | 2012-05-23 | 丰田自动车株式会社 | 用于鉴定甘蔗属植物品种/品系的标记物及其用途 |
| CN102471802B (zh) * | 2009-07-07 | 2014-10-29 | 丰田自动车株式会社 | 用于鉴定甘蔗属植物品种/品系的标记物及其用途 |
| CN101849972A (zh) * | 2010-05-07 | 2010-10-06 | 中国人民解放军海军医学研究所 | 一种冬虫夏草dna指纹高分辨率的显带检测方法 |
| CN101849972B (zh) * | 2010-05-07 | 2012-05-30 | 中国人民解放军海军医学研究所 | 一种冬虫夏草dna指纹高分辨率的显带检测方法 |
| CN101865798A (zh) * | 2010-06-12 | 2010-10-20 | 西北农林科技大学 | 一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法 |
| CN102424855A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-04-25 | 云南省农业科学院经济作物研究所 | 一种聚丙烯酰胺凝胶中dna的银染方法 |
| CN105018481A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-11-04 | 广西大学 | 河八王的一种dna指纹图谱及其获取方法与专用引物 |
| CN105018481B (zh) * | 2015-07-15 | 2018-06-26 | 广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所 | 河八王的一种dna指纹图谱及其获取方法与专用引物 |
| CN107345934A (zh) * | 2016-05-07 | 2017-11-14 | 中国海洋大学 | 一种长牡蛎微卫星聚丙烯酰氨凝胶电泳的快速银染方法 |
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