CN101865798A - 一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法 - Google Patents

一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101865798A
CN101865798A CN 201010199444 CN201010199444A CN101865798A CN 101865798 A CN101865798 A CN 101865798A CN 201010199444 CN201010199444 CN 201010199444 CN 201010199444 A CN201010199444 A CN 201010199444A CN 101865798 A CN101865798 A CN 101865798A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polyacrylamide gel
dna
silver staining
electrophoresis
page
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN 201010199444
Other languages
English (en)
Other versions
CN101865798B (zh
Inventor
曹斌云
姬云涛
安小鹏
侯金星
王建刚
宋宇轩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northwest A&F University
Original Assignee
Northwest A&F University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northwest A&F University filed Critical Northwest A&F University
Priority to CN2010101994444A priority Critical patent/CN101865798B/zh
Publication of CN101865798A publication Critical patent/CN101865798A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101865798B publication Critical patent/CN101865798B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳中的DNA银染方法，先用0.1%AgNO3浸泡聚丙烯酰胺凝胶10–15min，用蒸馏水清洗2次，其次用0.04%的Na2CO3、2mL的37%HCOH/L、2%的NaOH混合溶液显色5–6min，蒸馏水冲洗2次即可完成全部染色过程。传统的DNA银染方法需要5-6种化学试剂，配制4中溶液，花费40-60min才能完成染色步骤，而本方法只需要4种化学试剂，配制2种溶液，花费20min就可以达到与传统染色方法相同的结果，而且在变性聚丙烯酰胺电泳(PAGE)中，本染色方法可以将DNA的量降低到0.44ng；在非变性聚丙烯酰胺电泳(PAGE)中可以将DNA的量降低到3.5ng。本方法与传统染色方法相比，不仅节约了时间，降低额成本，而且提高了检测的灵敏度。

Description

一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的DNA银染方法
技术领域
本发明属于分子遗传学领域的电泳染色方法，具体涉及一种聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中的DNA银染方法。
背景技术
聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳是分析蛋白质和核酸样品的一种常用的方法，在分子生物学及相关学科的基础和临床研究中得以广泛的应用。电泳后对样品的显示有许多的方法，银染法因具有灵敏度高、无毒无害且显色结果可以随干胶直接保存等优点而得以广泛应用，特别是近几年在SSCP、DDPCR和DNA测序等实验中更显示出其优越性。传统的银染方法主要包含下面几个步骤：（1）预处理与固定，（2）染色，（3）显色，（4）终止反应。整个过程比较繁琐，要用到蒸馏水或去离子水、乙醇、硝酸、硝酸银、碳酸钠、甲醛、硫代硫酸钠、乙酸等多种化学试剂。近年来，许多研究人员对PAGE胶中蛋白质和DNA的银染和显色的过程优化进行了探索，以求得到简便、快速、灵敏度高且消耗低的银染显色方法，但改良后的方法，染色与显色的整个过程仍然至少需要40～50min。
发明内容
针对上述现有技术存在的缺陷或不足，本发明的目的在于，提供一种快速、灵敏和有效的聚丙烯酰胺（PAGE）电泳中的DNA银染方法。
为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：
一种聚丙烯酰胺（PAGE）电泳中的DNA银染方法，其特征在于，该方法先用质量浓度0.1%的AgNO3浸泡聚丙烯酰胺凝胶10min–15min，然后对用浸泡后的聚丙烯酰胺凝胶蒸馏水清洗凝胶2次，再用质量分数0.04%的Na2CO3、每升含有质量浓度37%的HCOH，2mL、质量分数2%的NaOH的混合溶液显色5min–6min，显色后用蒸馏水冲洗聚丙烯酰胺凝胶2次。
所述的聚丙烯酰胺凝胶的质量浓度为8%或12%，交联度为29：1。
本发明与现有技术相比，具有以下有益的技术效果：
传统的DNA银染方法需要5-6种化学试剂，配制4种溶液，花费40-60min才能完成染色步骤，而本方法只需要4种化学试剂，即硝酸银（AgNO3）、氢氧化钠（NaOH）、碳酸钠（Na2CO3）和甲醛（HCOH），配制2种溶液，花费20min就可以达到与传统染色方法相同的结果，而且在变性聚丙烯酰胺电泳（PAGE）中，该方法可以将DNA的用量降低到0.44ng；在非变性聚丙烯酰胺电泳（PAGE）中可以将DNA的用量降低到3.5ng。本方法与传统染色方法相比，不仅节约了时间，降低了成本，而且提高了检测的灵敏度。
附图说明
图1是采用本发明对GDF9基因外显子1的PCR产物的变性聚丙烯酰胺凝胶（浓度12%）电泳检测对比图，图中，A表示本发明的DNA银染方法；B表示采用传统方法1；C表示采用传统方法2；D表示采用传统方法3；
图2是采用本发明对微卫星BM1329PCR产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶（浓度8%）电泳检测图，图中，1、2、3和8表示：关中奶山羊；4和5表示：济宁青山羊；6和7表示：布尔山羊；9和10表示：西农萨能奶山羊，M表示pBR322DNA/MspI；
图3是采用本发明对GDF9基因外显子2PCR产物的变性聚丙烯酰胺凝胶（浓度12%）电泳检测图，图中，1、2和3表示：关中奶山羊；4、5和7表示：济宁青山羊；6和8表示：布尔山羊；9、10和11表示：西农萨能奶山羊；
以下通过对3种传统的DNA银染方法与本发明的DNA银染方法的实施例进行比较分析，对本发明作进一步的详细说明。
具体实施方式
1、3种传统的DNA银染方法与本发明的DNA银染方法的比较
按照表1的操作步骤对3种传统的DNA银染方法（图中的方法1、方法2和方法3）与本发明的DNA银染方法进行比较，电泳检测结果如图1所示，从图1可知，本发明的染色方法明显优于3种传统的染色方法。
用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测400头山羊的微卫星BM1329，使用本发明的DNA银染方法染色，检测结果如图2所示；
用12%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测400头山羊GDF9基因外显子2的多态性，使用本发明的DNA银染方法染色，试验结果如图3所示。
从图2和图3可知，使用优化后的DNA银染方法染色能够获得良好的试验结果。
表1：3种传统的DNA银染方法与本发明的DNA银染方法操作步骤的比较
Figure 686459DEST_PATH_IMAGE001
注：表中所用试剂为质量浓度。
表2：3种传统的DNA银染方法与本发明的DNA银染方法效果的比较
Figure 197075DEST_PATH_IMAGE002

Claims (2)

1.一种聚丙烯酰胺（PAGE）电泳中的DNA银染方法，其特征在于，该方法先用质量浓度0.1%的AgNO3浸泡聚丙烯酰胺凝胶10min–15min，然后对用浸泡后的聚丙烯酰胺凝胶蒸馏水清洗凝胶2次，再用质量分数0.04%的Na2CO3、每升含有质量浓度37%的HCOH，2mL、质量分数2%的NaOH所构成的混合溶液显色5min–6min，显色后用蒸馏水冲洗聚丙烯酰胺凝胶2次。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的聚丙烯酰胺凝胶的浓度为8%或12%，交联度为29：1。
CN2010101994444A 2010-06-12 2010-06-12 一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法 Expired - Fee Related CN101865798B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010101994444A CN101865798B (zh) 2010-06-12 2010-06-12 一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010101994444A CN101865798B (zh) 2010-06-12 2010-06-12 一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101865798A true CN101865798A (zh) 2010-10-20
CN101865798B CN101865798B (zh) 2011-11-09

Family

ID=42957604

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010101994444A Expired - Fee Related CN101865798B (zh) 2010-06-12 2010-06-12 一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101865798B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102424855A (zh) * 2011-12-29 2012-04-25 云南省农业科学院经济作物研究所 一种聚丙烯酰胺凝胶中dna的银染方法
CN104101528A (zh) * 2014-06-30 2014-10-15 广西医科大学 短链寡核苷酸甲醇固定花青素染色法
CN104458388A (zh) * 2014-12-01 2015-03-25 中国农业科学院棉花研究所 一种page的高效银染方法
CN106596232A (zh) * 2016-12-13 2017-04-26 广州大学 一种检测聚丙烯酰胺凝胶中dna的银染试剂盒及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0838719A2 (en) * 1996-10-24 1998-04-29 Fuji Photo Film Co., Ltd. Silver halide photographic emulsion and silver halide photographic material containing said silver halide photographic emulsion
JP2004325864A (ja) * 2003-04-25 2004-11-18 Fuji Photo Film Co Ltd 着色剤含有硬化性組成物、カラーフィルタ及びその製造方法
CN1594594A (zh) * 2003-09-12 2005-03-16 中国农业大学 一种银染方法
CN101354348A (zh) * 2008-08-28 2009-01-28 云南省农业科学院甘蔗研究所 一种甘蔗分子标记page凝胶超快速银染检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0838719A2 (en) * 1996-10-24 1998-04-29 Fuji Photo Film Co., Ltd. Silver halide photographic emulsion and silver halide photographic material containing said silver halide photographic emulsion
JP2004325864A (ja) * 2003-04-25 2004-11-18 Fuji Photo Film Co Ltd 着色剤含有硬化性組成物、カラーフィルタ及びその製造方法
CN1594594A (zh) * 2003-09-12 2005-03-16 中国农业大学 一种银染方法
CN101354348A (zh) * 2008-08-28 2009-01-28 云南省农业科学院甘蔗研究所 一种甘蔗分子标记page凝胶超快速银染检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《江西农业学报》 20081231 张妤艳 等 两种聚丙酰胺凝胶电泳染色方法对SRAP标记的影响 43-45 1-2 第20卷, 第12期 2 *
《第一军医大学学报》 20041231 李西平 等 NDA聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法的选择 1072-1074 1-2 第24卷, 第9期 2 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102424855A (zh) * 2011-12-29 2012-04-25 云南省农业科学院经济作物研究所 一种聚丙烯酰胺凝胶中dna的银染方法
CN104101528A (zh) * 2014-06-30 2014-10-15 广西医科大学 短链寡核苷酸甲醇固定花青素染色法
CN104458388A (zh) * 2014-12-01 2015-03-25 中国农业科学院棉花研究所 一种page的高效银染方法
CN106596232A (zh) * 2016-12-13 2017-04-26 广州大学 一种检测聚丙烯酰胺凝胶中dna的银染试剂盒及其应用
CN106596232B (zh) * 2016-12-13 2019-04-30 广州大学 一种检测聚丙烯酰胺凝胶中dna的银染试剂盒及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN101865798B (zh) 2011-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101865798B (zh) 一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法
Qu et al. Efficient and sensitive method of DNA silver staining in polyacrylamide gels
Van Dyck et al. Advances in capillary electrophoretically mediated microanalysis
Kuban et al. Interfacing of flow injection pre-treatment systems with capillary electrophoresis
CN106282371A (zh) 一种利用转录组测序的ssr分子标记鉴定马尾松种质的方法
Jastrzębska et al. Simultaneous determination of selected biogenic amines in alcoholic beverage samples by isotachophoretic and chromatographic methods
Miao et al. Enantioseparation of amino acids by micellar capillary electrophoresis using binary chiral selectors and determination of D-glutamic acid and D-aspartic acid in rice wine
CN107167443A (zh) 一种利用紫外光谱仪检测pcb77的方法
CN104328170A (zh) 一种pcr反应液及试剂盒和pcr方法
CN205301178U (zh) 一种定量加样的胆固醇检测芯片
Ptolemy et al. On‐line sample preconcentration with chemical derivatization of bacterial biomarkers by capillary electrophoresis: A dual strategy for integrating sample pretreatment with chemical analysis
CN102559879A (zh) 一种定量测定rna和dna浓度及其比值的方法
Azadan et al. Capillary electrophoresis sequencing: maximum read length at minimal cost
CN107828863B (zh) 一种用于rca扩增产物的快速银染色方法
CN109385426B (zh) 识别增强型亚稳态核酸适配体探针及在目标物质计数分析中的应用
CN205333384U (zh) 一种用于切片染色的导流体结构
CN208810099U (zh) 一种用于wb实验中的微流体芯片
CN1262675C (zh) 一种银染方法
CN102226178B (zh) 一种从林木基因组中高通量开发ssr标记的方法
CN110551799A (zh) 检测食品中海狸鼠源性和狐狸源性成分的试剂盒及其应用
Gyorgypal et al. Automated Workflow for Instant Labeling and Real-Time Monitoring of Monoclonal Antibody N-Glycosylation
CN104561242B (zh) 基于常温扩增和荧光检测的结核分歧杆菌试剂盒及其使用方法
CN109234413A (zh) 一种用于猪源性成分定量检测的可视化级联放大功能核酸传感器
Guo et al. Using multiple PCR and CE with chemiluminescence detection for simultaneous qualitative and quantitative analysis of genetically modified organism
Mumbleau et al. Determination of in vitro and cellular turn-on kinetics for fluorogenic RNA aptamers

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20111109

Termination date: 20120612