CN101353622A - 用于全自动血液培养系统的血液增菌培养瓶及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于全自动血液培养系统的血液增菌培养瓶，包括：密封的培养瓶瓶体、设置在瓶体底部的传感层，在传感层上放置有用于吸附抗生素的吸附树脂和培养基，所述的培养基包括TSB5－75g/L、酵母提取物0.5－30g/L、葡萄糖0.1－20g/L、蔗糖0.01－20g/L、氯高铁血红素0.001－0.5g/L、维生素K3 0.0001－0.05g/L、维生素B6 0.001－5g/L、SPS 0.1－30g/L、抗生素中和剂1－75g/L，余量为蒸馏水或去离子水；所述的传感层中含有1－100g/L的指示剂。本发明的培养瓶，可以消除血液中残存抗生素对微生物生长的抑制作用，并简化了生产操作。

Description

用于全自动血液培养系统的血液增菌培养瓶及其制备方法

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，特别是涉及一种用于全自动血液培养系统的血液增菌培养瓶及其制备方法。

背景技术

快速、准确地检测血液中的病原微生物一直是体外检测技术领域研究的目标，在经历了手工和半自动化过程后，90年代由计算机控制的全自动血培养系统全面发展起来，代表产品如美国BD公司和法国梅里埃公司的全自动血培养系统。随着我国经济的发展，这种先进的系统逐渐进入到国内各医院的检测部门，提高了血液中病原微生物的检出率。然而，与进口仪器配套的血液培养瓶带来的高昂检测费用给国民的医疗费支出带来了沉重的负担。而且，两大品牌血培养系统的培养瓶增菌原理相同，检测原理不同，通用性较差。

另外，根据我国国情，大部分菌血症患者在血液培养前都曾使用过抗生素，因此给普通的血培养带来了困难。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种生产过程简单、消除抗生素对细菌的抑制作用且生产成本较低的，用于全自动血液培养系统的血液增菌培养瓶及其制备方法。针对上述两种血液培养系统，本发明的培养瓶的制备方法相同，只是针对不同的血液系统加入的指示剂不同。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种用于全自动血液培养系统的血液增菌培养瓶，包括：密封的培养瓶瓶体、设置在瓶体底部的CO₂传感层，在传感层上放置有用于吸附抗生素的吸附树脂和培养基，所述的培养基包括TSB 5-75g/L、酵母提取物0.5-30g/L、葡萄糖0.1-20g/L、蔗糖0.01-20g/L、氯高铁血红素0.001-0.5g/L、维生素K3 0.0001-0.05g/L、维生素B6 0.001-5g/L、SPS 0.1-30g/L、抗生素中和剂1-75g/L，余量为蒸馏水或去离子水；所述的传感层中含有1-100g/L的指示剂。

优选的培养基的组成为：TSB 10-50g/L、酵母提取物1-20g/L、葡萄糖0.1-10g/L、蔗糖0.01-10g/L、氯高铁血红素0.001-0.1g/L、维生素K30.0001-0.01g/L、维生素B6 0.001-1g/L、SPS 0.1-10g/L、抗生素中和剂1-50g/L，余量为蒸馏水或去离子水。

上述的吸附树脂大孔树脂或离子交换树脂中的一种或几种，大孔树脂为DA201×B、SAD-2、SAD-4、LS-33、LS-41或LS-600，加入量为10-300g/L；离子交换树脂为001×4、001×7或201×7，加入量为1-200g/L。。

优选的大孔树脂的加入量为50-250g/L，离子交换树脂的加入量为10-200g/L。

上述的传感器的基质为硅橡胶，传感层厚度为2～5mm。

上述的传感器为颜色传感器或荧光传感器，所述的指示剂为酸碱指示剂或酸碱指示剂和荧光指示剂。

上述的酸碱指示剂为溴甲酚紫、溴甲酚绿、麝香草酚蓝、二甲苯酚蓝、间甲酚紫、甲酚红或石蕊；所述的荧光指示剂为副玫瑰红、荧光素、磺基罗丹明B、罗丹明B、酸性品红、赤藓红、香豆素或茜素红，指示剂的加入量为1-100g/L。

上述的抗生素中和剂为对氨基苯甲酸、MgSO₄或吐温80，加入量为1-100g/L。

本发明的另一方面提供一种血液增菌培养瓶的制备方法，包括以下步骤：

1)培养基的制备：将培养基的各组分按照配比加入到适当容器中，然后加入定量的去离子水或蒸馏水，煮沸，定容至所需体积，调节pH至7.2±0.2；

2)吸附树脂的预处理：新购进的大孔树脂用自来水反复冲洗后装入树脂柱，用乙醇浸泡过夜后用去离子水清洗至流出液无白色混浊，酸洗-碱洗至pH中性，阳离子交换树脂经酸-碱-酸，阴离子交换树脂经碱-酸-碱的顺序进行预处理；

3)传感层的制备：硅橡胶按照厂家指定比例混合后加入相应的指示剂溶液，用电子搅拌器搅拌均匀后分装至培养瓶中，形成传感层，按规定的时间静置脱泡，并在规定的温度和时间进行固化。

4)向培养瓶中加入经过预处理的吸附树脂和培养基，密封，灭菌。

所形成的传感层的厚度为2～5mm，所述的静置脱泡时间为30min，并在60℃下固化1h。

本发明的全自动血液培养系统的血液增菌培养瓶，由于加入了抗生素中和剂和吸附树脂，从而可以消除血液中残存抗生素对微生物生长的抑制作用，在病人不停止服药的条件下完成检测，在满足其配套培养基性能的基础上降低检测成本。另外，在相同的传感器基质中加入适合不同检测原理加入不同的指示剂，从而简化了生产操作。

具体实施方式

全自动血液培养系统的两大厂家为法国梅里埃公司和BD公司，前者是检测可视颜色的变化，后者是检测荧光强度的变化，本发明采用相同的传感器基质-硅橡胶，适用于梅里埃的培养瓶加入酸碱指示剂；适用于BD的培养瓶加入荧光指示剂。

下面结合具体实施方式对本发明的用于全自动血液培养系统的培养基进行详细说明。

实施例1

称取TSB 20.75g，酵母提取物10g，葡萄糖0.5g，蔗糖0.56g，氯高铁血红素0.005g，维生素K3 0.00025g，维生素B6 0.01g，SPS 5g，抗生素中和剂对氨基苯甲酸10g，加蒸馏水1L煮沸溶解，冷却后倒入1000mL量筒中补充蒸发掉的水分，调节pH值至7.2。

硅橡胶JG-T17按照10∶1的比例混合，加入pH＝8的1％溴甲酚紫指示剂，用电子搅拌器搅拌均匀后注入玻璃瓶中，形成5mm厚的传感层，静置脱泡30min，60℃固化1h。

向瓶中加入经过预处理的树脂SAD-2 3g，LS-33 1g，培养基25mL，密封，灭菌。

实施例2

称取TSB 20g，酵母提取物2.5g，葡萄糖1g，蔗糖3g，氯高铁血红素0.0025g，维生素K3 0.00025g，维生素B6 0.1g，SPS 0.25g，抗生素中和剂吐温80 2g，加蒸馏水或去离子水500mL煮沸溶解，冷却后倒入500mL量筒中补充蒸发掉的水分，调节pH值至7.2。

硅橡胶Sylgard184按照10∶1比例混合，加入pH＝9的1％甲酚红和1％副玫瑰红，用电子搅拌器搅拌均匀后注入玻璃瓶中形成5mm厚的传感层，静置脱泡30min，60℃固化1h。

向瓶中加入经过预处理的树脂SAD-2 3g，001×4 1g，培养基25mL，密封，灭菌。

试验结果：

1.加入吸附树脂及抗生素中和剂的培养瓶与未加入吸附树脂及抗生素中和剂的培养瓶(空白瓶)对不同抗生素的吸附效果对照结果见下表：

注：每瓶中加菌浓度为6CFU/mL，35℃培养。

由上表可见，加入抗生素中和剂的培养瓶对抗生素有良好的吸附作用，可大大缩短细菌的检出时间，提高阳性率，从而为临床及时实施有效的治疗手段赢得了时间。

2.仪器的连续检测

将血液样本注入到实施例1制备的培养瓶中，加载到BacT/ALERT 3D全自动血液培养仪上，35℃下培养，仪器每隔15min检测一次培养瓶底部的传感器，当有细菌生长产生的CO₂改变传感器的pH值，酸碱指示剂发生颜色的改变，检测器通过检测反射光的改变进行报警，检测人员便可将此瓶取出，进行下一步的细菌鉴定。

将血液样本注入到实施例2制备的培养瓶中，加载到BD9050全自动血液培养仪上，35℃下培养，仪器每隔10min检测一次培养瓶底部的传感器，当有细菌生长产生CO₂激发瓶底的荧光物质时，检测器收到信号并发出警报，检测人员便可将此瓶取出，进行下一步的细菌鉴定。

Claims (10)

1.一种用于全自动血液培养系统的血液增菌培养瓶，包括：密封的培养瓶瓶体、设置在瓶体底部的CO₂传感层，在传感层上放置有用于吸附抗生素的吸附树脂和培养基，其特征在于：所述的培养基包括TSB 5-75g/L、酵母提取物0.5-30g/L、葡萄糖0.1-20g/L、蔗糖0.01-20g/L、氯高铁血红素0.001-0.5g/L、维生素K3 0.0001-0.05g/L、维生素B6 0.001-5g/L、SPS 0.1-30g/L、抗生素中和剂1-75g/L，余量为蒸馏水或去离子水；所述的传感层中含有1-100g/L的指示剂。

2.根据权利要求1所述的血液增菌培养瓶，其特征在于：所述的培养基包括TSB 10-50g/L、酵母提取物1-20g/L、葡萄糖0.1-10g/L、蔗糖0.01-10g/L、氯高铁血红素0.001-0.1g/L、维生素K3 0.0001-0.01g/L、维生素B60.001-1g/L、SPS 0.1-10g/L、抗生素中和剂1-50g/L，余量为蒸馏水或去离子水。

3.根据权利要求1或2所述的血液增菌培养瓶，其特征在于：所述的吸附树脂为大孔树脂或离子交换树脂中的一种或几种，所述的大孔树脂为DA201×B、SAD-2、SAD-4、LS-33、LS-41或LS-600，加入量为10-300g/L；所述的离子交换树脂为001×4、001×7或201×7，加入量为1-200g/L。。

4.根据权利要求3所述的血液增菌培养瓶，其特征在于：所述的大孔树脂的加入量为50-250g/L，所述的离子交换树脂的加入量为10-200g/L。

5.根据权利要求1或2所述的血液增菌培养瓶，其特征在于：所述的传感器的基质为硅橡胶，传感层厚度为2～5mm。

6.根据权利要求5所述的血液增菌培养瓶，其特征在于：所述的传感器为颜色传感器或荧光传感器，所述的指示剂为酸碱指示剂或酸碱指示剂和荧光指示剂。

7.根据权利要求6所述的血液增菌培养瓶，其特征在于：所述的酸碱指示剂为溴甲酚紫、溴甲酚绿、麝香草酚蓝、二甲苯酚蓝、间甲酚紫、甲酚红或石蕊；所述的荧光指示剂为副玫瑰红、荧光素、磺基罗丹明B、罗丹明B、酸性品红、赤藓红、香豆素或茜素红，指示剂的加入量为1-100g/L。

8.根据权利要求1或2所述的血液增菌培养瓶，其特征在于：所述的抗生素中和剂为对氨基苯甲酸、MgSO₄或吐温80，加入量为1-100g/L。

9.根据权利要求1所述的血液增菌培养瓶的制备方法，包括以下步骤：

1)培养基的制备：将培养基的各组分按照配比加入到适当容器中，然后加入定量的去离子水或蒸馏水，煮沸，定容至所需体积，调节pH至7.2±0.2；

2)吸附树脂的预处理：新购进的大孔树脂用自来水反复冲洗后装入树脂柱，用乙醇浸泡过夜后用去离子水清洗至流出液无白色混浊，酸洗-碱洗至pH中性，阳离子交换树脂经酸-碱-酸，阴离子交换树脂经碱-酸-碱的顺序进行预处理；

3)传感层的制备：硅橡胶按照厂家指定比例混合后加入相应的指示剂溶液，用电子搅拌器搅拌均匀后分装至培养瓶中，形成传感层，按规定的时间静置脱泡，并在规定的温度和时间进行固化。

4)向培养瓶中加入经过预处理的吸附树脂和培养基，密封，灭菌。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所形成的传感层的厚度为2～5mm，所述的静置脱泡时间为30min，并在60℃下固化1h。