CN101348770B - 一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、包含该活菌或发酵菌液的微生物菌剂及其用途 - Google Patents

一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、包含该活菌或发酵菌液的微生物菌剂及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN101348770B
CN101348770B CN200710130375XA CN200710130375A CN101348770B CN 101348770 B CN101348770 B CN 101348770B CN 200710130375X A CN200710130375X A CN 200710130375XA CN 200710130375 A CN200710130375 A CN 200710130375A CN 101348770 B CN101348770 B CN 101348770B
Authority
CN
China
Prior art keywords
microbial inoculum
rhodobacter sphaeroides
microbiobacterial agent
test
red bacterium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN200710130375XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN101348770A (zh
Inventor
姜勇
王弘维
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yantai Tiantai Shengwu Gongcheng Co ltd
Original Assignee
Yantai Tiantai Shengwu Gongcheng Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yantai Tiantai Shengwu Gongcheng Co ltd filed Critical Yantai Tiantai Shengwu Gongcheng Co ltd
Priority to CN200710130375XA priority Critical patent/CN101348770B/zh
Publication of CN101348770A publication Critical patent/CN101348770A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101348770B publication Critical patent/CN101348770B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Fertilizers (AREA)

Abstract

本发明公开了一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110。包含该类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)活菌或发酵菌液的微生物菌剂及该类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)在促进植物生长及降解农药残留的作用。本发明的类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110可以广泛地应用在农林牧渔上、无污染、具有优良的综合有益效果。

Description

一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、包含该活菌或发酵菌液的微生物菌剂及其用途
技术领域
本发明属于微生物领域。更具体地，本发明涉及一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)，包含该类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)活菌或发酵菌液的微生物菌剂及该类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)的用途。
背景技术
随着化肥和农药使用量的增加，以及化肥和农药对环境污染及人类健康危害的加重，随着整个社会对环境保护的日益重视和生态农业的发展，随着微生物肥料研究开发的深入，人们越来越迫切地希望筛选出效果好、无污染、具有综合用途的微生物。以制备出包含其活菌或发酵液的菌剂，应用在农业生产中。
尽管微生物的作用机理多年来存在着争论，但是基本的共识是各种微生物的功能不是单一的，往往同时兼有改善植物营养、刺激生长和抑制病菌等多重功效。
生物素              0.01-0.02mg
维生素B12            0.05-0.1mg
对氨基苯甲酸        0.3-0.5mg
为了大力发展我国农林牧渔业，保护环境和人类的健康，本案申请人一直致力于筛选可以广泛地应用在农林牧渔上、无污染、具有优良的综合效果的微生物及包含其活菌或发酵液的菌剂。
类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)是地球上最早出现的具原始光能合成体系的原核生物，属于光合细菌，目前已被许多农业发达国家使用。它是通过活体固氮和分泌的代谢物为作物提供营养。同时，光合细菌又是一种高蛋白物质，其本身蛋白质含量高达65％以上，衰老后可以转化成氨基酸，很容易被作物吸收，因此是作物很好的食粮。
发明内容
本发明的目的在于提供一种筛选自淤泥水中的微生物，具有可以广泛地应用在农林牧渔上、无污染、具有优良的综合效果的微生物菌剂及这种微生物在农林牧渔业上的用途。
为了达到上述目的，本发明提供了一种类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)，该菌种从山东省栖霞市庵里水库的入库口淤泥水中分离而得。于2007年7月16日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏(地址：北京朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮政编码100101)，保藏编号为CGMCC No.2110。
委托中国科学院微生物研究所对该菌株进行了分类学性状鉴定、遗传稳定性评价和对药物敏感性试验，于2004年4月29日鉴定该细菌为类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)。
该类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)菌株具有表1中所描述的分类学性状和表2中所鉴定的对药物的敏感性。同时经过连续传代培养和对比试验，其分类学性状和对药物的敏感性等理化性状未发生可见变化，说明其遗传稳定。
表1 类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)的分类学性状
Figure G071D0375X20070725D000021
Figure G071D0375X20070725D000031
表2 类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)对药物的敏感性试验
Figure G071D0375X20070725D000032
其中：S表示敏感；R表示抗性。
类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)属于红细菌属(Rhodobacter)。这个属的一个特征是革兰氏染色为阴性，而我们筛选的菌株革兰氏染色却为阳性。另外类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)种能够以柠檬酸钠、酒石酸钠和甘露醇作为碳源生长，而我们筛选的菌株却不能以这三种物质作为碳源生长(参考《常见细菌系统鉴定手册》，东秀珠，蔡妙英等，科学出版社2001，页码21，25-26)。可以判断出我们所筛选的菌株是类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)新种菌株。
另外，本发明提供了一种微生物菌剂，其特征在于其含有类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110的活菌，所述活菌的数量是120-150亿个/ml。
本发明也提供了一种微生物菌剂，其特征在于其含有类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110的发酵菌液。
本发明还提供了一种生产微生物菌剂的方法，该方法包括：
A：将类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.：2110菌株接种于固体培养基中进行培养；
B：将培养面上生长的菌苔接种于装有液体培养基的种子罐中进行扩大的种子培养；
C：将种子培养物接种在装有液体培养基的发酵罐进行发酵，获得微生物菌剂。
本发明的生产微生物菌剂的方法，其特征在于：在步骤A、B和C中培养温度为30-33℃，光照强度为2500～3000Lx。优选地，在步骤B中，通气量为0.15-0.2V/Vmin；PH为7.0-7.5；通过连续补料进行扩大的种子培养。
本发明的生产微生物菌剂的方法，其特征在于：在步骤C中，通气量为0.15-0.2V/Vmin；PH为7.0-7.5；优选地，通过连续放、补料发酵。
本发明的生产微生物菌剂的方法，其特征在于：1000ml步骤A中的培养基包含下列组份：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)3-6ml
七水硫酸镁            0.1-0.3g
硫酸铵                0.9-1.1g
无水氯化钙            47-67mg
三水磷酸氢二钾        0.9-1.2g
磷酸二氢钾            0.6-0.8g
乙二胺四乙酸二钠      20-30mg
酵母膏                3-5g
蒸馏水                加至1000ml
优选地，本发明的生产微生物菌剂的方法，其特征在于：该培养基还包含：
七水硫酸亚铁        12-20mg
硼酸                2-3mg
七水硫酸锌          0.2-0.3mg
一水硫酸锰          1.4-2mg
三水硝酸铜          0.02-0.04mg
二水钼酸钠          0.6-0.8mg
烟酸                1-1.5mg
维生素B1            0.8-1.2mg
维生素B2            0.4-0.6mg
维生素B6            0.4-0.6mg
维生素B12           0.05-0.1mg
对氨基苯甲酸        0.3-0.5mg
生物素              0.01-0.02mg
生物素              0.01-0.02mg
进一步优选地，本发明的生产微生物菌剂的方法，其特征在于：该培养基包含亚硒酸钠40-50mg。
本发明的生产微生物菌剂的方法，其特征在于1000ml步骤B和C中的培养基包含下列组份：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)     3-6ml
七水硫酸镁                          0.1-0.3g
硫酸铵                              0.9-1.1g
无水氯化钙                          47-67mg
三水磷酸氢二钾                      0.9-1.2g
磷酸二氢钾                          0.6-0.8g
乙二胺四乙酸二钠                    20-30mg
自来水和/或井水                 加至1000ml
优选地，本发明的生产微生物菌剂的方法，其特征在于：该培养基包含：
七水硫酸亚铁        12-20mg
硼酸                2-3mg
七水硫酸锌          0.2-0.3mg
一水硫酸锰          1.4-2mg
三水硝酸铜          0.02-0.04mg
二水钼酸钠          0.6-0.8mg
烟酸                1-1.5mg
维生素B1            0.8-1.2mg
维生素B2            0.4-0.6mg
维生素B6            0.4-0.6mg
维生素B12           0.05-0.1mg
对氨基苯甲酸        0.3-0.5mg
生物素              0.01-0.02mg
优选地，本发明的生产微生物菌剂的方法，其特征在于：该培养基包含亚硒酸钠40-50mg。
优选地，本发明的生产微生物菌剂的方法，其特征在于：：在深色容器中密封避光贮藏该微生物菌剂，室内光照强度20-40Lx，温度2～30℃，相对湿度应小于40％。
本发明的类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110用于制备微生物菌剂，包括微生物肥料、植物营养剂及农药残留降解剂的用途。所述的农药是有机磷类和菊酯类农药。
为了更好地理解本发明，现在结合具体实施方式和试验结果对本发明进行详细说明。
具体实施方式
实施例1：
制备类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110菌剂
A：将类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110在洁净室接种于涂抹有固体培养基的试管斜面上，在30℃恒温，光照3000Lx条件下培养；根据需要的培养基量，按下列组份配制所述固体培养基：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％) 3ml
七水硫酸镁                      0.1g
硫酸铵                          0.9g
无水氯化钙                      47mg
三水磷酸氢二钾                  0.9g
磷酸二氢钾                      0.6g
乙二胺四乙酸二钠                20mg
酵母膏                          3g
蒸馏水                          加至1000ml
B：待培养基表面上长出菌苔后再在洁净室内接种于500ml装有液体培养基的一级摇瓶中，抽样检测吸光值，达到对数生长期后将一级摇瓶菌种接入二级摇瓶中，接种量1∶8(即12.5％)，一、二级摇瓶种子培养条件为，置于摇床上，室温30℃，白炽灯照度2500Lx，摇床转速50rpm，抽样检测吸光值，达到对数生长期后接入50L气升式种子罐进行生产一级种子培养，抽样检测吸光值，达到对数生长期后转入300L种子罐进行二级种子培养，一、二级种子罐接种量1∶8(即12.5％)，取样检测吸光值，达到对数生长期后再转入2t气升式种子罐进行三级种子培养，接种量1∶8(即12.5％)，种子罐预装液体培养基约700L，接种培养后进行培养基流加补料，流速1L/min，PH＝6；
C：取样检测吸光值达到对数生长期后，转入15t气升式发酵罐发酵培养，接种量1∶8(即12.5％)，预装液体培养基8000L，接种培养10小时后进行流加补料，补料的液体培养基PH＝6.0，补料流速5L/min，取样检测吸光值达到对数生长期后放出1/3，再流加补料PH＝6.0的无菌培养基，依此法连续放、补料6次，菌液经检测吸光值达到对数生长期后得到的菌液即为本发明的微生物菌剂。此时的活菌量可达120亿个/ml。
种子罐和发酵罐的光照为通过罐封头的每个视镜安装100W白炽灯，一、二级种子罐2只灯、三级种子罐4只，发酵罐8只，发酵罐由于罐体较长，在罐体周围的不同高度位置特设的视镜再安装4只100W白炽灯，以增加罐内照度，罐内压力0.015Mpa，进气压力0.15Mpa，通气量0.15/Vmin.t，罐温30℃；在种子罐和发酵罐培养时调整PH在7.0。
根据需要的培养基量，步骤B和C中液体培养基按下面组份配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  3ml
七水硫酸镁                       0.1g
硫酸铵                           0.9g
无水氯化钙                       47mg
三水磷酸氢二钾                   0.9g
磷酸二氢钾                       0.6g
乙二胺四乙酸二钠                 20mg
自来水                           加至1000ml。
在深色容器中密封避光贮藏该微生物菌剂，室内光照强度20Lx，温度2℃，相对湿度40％。
实施例2：
制备类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110菌剂
与实施例1的条件基本相同，不同的是实施例2中所用的固体培养基按照下面的比例进行配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  6ml
七水硫酸镁                       0.3g
硫酸铵                           1.1g
无水氯化钙                       67mg
三水磷酸氢二钾                   1.2g
磷酸二氢钾                       0.8g
乙二胺四乙酸二钠                 30mg
酵母膏                           5g
蒸馏水                           加至1000ml
步骤B和C中所用的液体培养基按照下面的比例进行配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  6ml
七水硫酸镁                       0.3g
硫酸铵                           1.1g
无水氯化钙                       67mg
三水磷酸氢二钾                   1.2g
磷酸二氢钾                       0.8g
乙二胺四乙酸二钠                 30mg
自来水                           加至1000ml
此时得到的菌剂中活菌量可达120亿个/ml。
在深色容器中密封避光贮藏该微生物菌剂，室内光照强度40Lx，温度30℃，相对湿度应20％。
实施例3：
制备类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110菌剂
与实施例1的条件基本相同，不同的是实施例3中所用的固体培养基按照下面的比例进行配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  4ml
七水硫酸镁                       0.2g
硫酸铵                           1g
无水氯化钙                       57mg
三水磷酸氢二钾                   1.1g
磷酸二氢钾                       0.7g
乙二胺四乙酸二钠                 25mg
酵母膏                           4g
蒸馏水                           加至1000ml
步骤B和C中所用的液体培养基按照下面的比例进行配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  4ml
七水硫酸镁                       0.2g
硫酸铵                           1g
无水氯化钙                       57mg
三水磷酸氢二钾                   1.1g
磷酸二氢钾                       0.7g
乙二胺四乙酸二钠                 25mg
井水                             加至1000ml
此时得到的菌剂中活菌量可达123亿个/ml。
在深色容器中密封避光贮藏该微生物菌剂，室内光照强度30Lx，温度15℃，相对湿度15％。
实施例4：
制备类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110菌剂
A：将类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110在洁净室接种于涂抹有固体培养基的试管斜面上，在33℃恒温，光照2500Lx条件下培养；根据需要的培养基量，按下列组份配制所述固体培养基：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  3ml
七水硫酸镁                       0.1g
硫酸铵                           0.9g
无水氯化钙                       47mg
三水磷酸氢二钾                   0.9g
磷酸二氢钾                       0.6g
乙二胺四乙酸二钠                 20mg
七水硫酸亚铁                     12mg
硼酸                             2mg
七水硫酸锌                       0.2mg
一水硫酸锰                       1.4mg
三水硝酸铜                       0.02mg
二水钼酸钠                       0.6mg
烟酸                             1mg
维生素B1                         0.8mg
维生素B2                         0.4mg
维生素B6                         0.4mg
维生素B12                        0.05mg
对氨基苯甲酸                     0.3mg
生物素                           0.01mg
亚硒酸钠                         40mg
酵母膏                           3g
蒸馏水                           加至1000ml
B：待培养基表面上长出菌苔后再在洁净室内接种于500ml装有液体培养基的一级摇瓶中，抽样检测吸光值，达到对数生长期后将一级摇瓶菌种接入二级摇瓶中，接种量1∶10(即10％)，一、二级摇瓶种子培养条件为，置于摇床上，室温33℃，白炽灯照度3000Lx，摇床转速60rpm，抽样检测吸光值，达到对数生长期后接入50L气升式种子罐进行生产一级种子培养，抽样检测吸光值，达到对数生长期后转入300L种子罐进行二级种子培养，一、二级种子罐接种量1∶10(即10％)，取样检测吸光值，达到对数生长期后再转入2t气升式种子罐进行三级种子培养；
C：取样检测吸光值达到对数生长期后，转入15t气升式发酵罐发酵培养，接种量1∶10(即10％)，取样检测吸光值达到对数生长期后放出1/3，再流加补料PH＝6.0的无菌培养基，依此法连续放、补料8次，菌液经检测吸光值达到对数生长期后得到的菌液即为本发明的微生物菌剂。此时的活菌量可达130亿个/ml。
种子罐和发酵罐的光照为通过罐封头的每个视镜安装100W白炽灯，一、二级种子罐2只灯、三级种子罐4只，发酵罐8只，发酵罐由于罐体较长，在罐体周围的不同高度位置特设的视镜再安装4只100W白炽灯，以增加罐内照度，罐内压力0.06Mpa，进气压力0.2Mpa，通气量0.2/Vmin.t，罐温33℃；在种子罐和发酵罐培养时调整PH在7.5。
根据需要的培养基量，步骤B和C中液体培养基按下面组份配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  3ml
七水硫酸镁                       0.1g
硫酸铵                           0.9g
无水氯化钙                       47mg
三水磷酸氢二钾                   0.9g
磷酸二氢钾                       0.6g
乙二胺四乙酸二钠                 20mg
七水硫酸亚铁                     12mg
硼酸                             2mg
七水硫酸锌                       0.2mg
一水硫酸锰                       1.4mg
三水硝酸铜                       0.02mg
二水钼酸钠                       0.6mg
烟酸                             1mg
维生素B1                         0.8mg
维生素B2                         0.4mg
维生素B6                         0.4mg
维生素B12                        0.05mg
对氨基苯甲酸                     0.3mg
生物素                           0.01mg
亚硒酸钠                         40mg
井水                             加至1000ml。
在深色容器中密封避光贮藏该微生物菌剂，室内光照强度28Lx，温度25℃，相对湿度10％。
实施例5：
制备类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110菌剂
与实施例4的条件基本相同，不同的是实施例5中所用的固体培养基按照下面的比例进行配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  6ml
七水硫酸镁                       0.3g
硫酸铵                           1.1g
无水氯化钙                       67mg
三水磷酸氢二钾                   1.2g
磷酸二氢钾                       0.8g
乙二胺四乙酸二钠                 30mg
七水硫酸亚铁                     20mg
硼酸                             3mg
七水硫酸锌                       0.3mg
一水硫酸锰                       2mg
三水硝酸铜                       0.04mg
二水钼酸钠                       0.8mg
烟酸                             1.5mg
维生素B1                         1.2mg
维生素B2                         0.6mg
维生素B6                         0.6mg
维生素B12                        0.1mg
对氨基苯甲酸                     0.5mg
生物素                           0.02mg
亚硒酸钠                         50mg
酵母膏                           5g
蒸馏水                           加至1000ml
步骤B和C中所用的液体培养基按照下面的比例进行配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  6ml
七水硫酸镁                       0.3g
硫酸铵                           1.1g
无水氯化钙                       67mg
三水磷酸氢二钾                   1.2g
磷酸二氢钾                       0.8g
乙二胺四乙酸二钠                 30mg
七水硫酸亚铁                     20mg
硼酸                             3mg
七水硫酸锌                       0.3mg
一水硫酸锰                       2mg
三水硝酸铜                       0.04mg
二水钼酸钠                       0.8mg
烟酸                             1.5mg
维生素B1                         1.2mg
维生素B2                         0.6mg
维生素B6                         0.6mg
维生素B12                        0.1mg
对氨基苯甲酸                     0.5mg
生物素                           0.02mg
亚硒酸钠                         40mg
自来水                           加至1000ml
此时得到的菌剂中活菌量可达140亿个/ml。
在深色容器中密封避光贮藏该微生物菌剂，室内光照强度23Lx，温度7℃，相对湿度5％。
实施例6：
制备类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)CGMCC No.2110菌剂
与实施例4的条件基本相同，不同的是实施例6中所用的固体培养基按照下面的比例进行配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  4ml
七水硫酸镁                       0.2g
硫酸铵                           1.0g
无水氯化钙                       50mg
三水磷酸氢二钾                   1.0g
磷酸二氢钾                       0.7g
乙二胺四乙酸二钠                 25mg
七水硫酸亚铁                     15mg
硼酸                             2.5mg
七水硫酸锌                       0.25mg
一水硫酸锰                       1.7mg
三水硝酸铜                       0.03mg
二水钼酸钠                       0.7mg
烟酸                             1.3mg
维生素B1                         1.0mg
维生素B2                         0.5mg
维生素B6                         0.5mg
维生素B12                        0.07mg
对氨基苯甲酸                     0.4mg
生物素                           0.015mg
亚硒酸钠                         45mg
酵母膏                           4g
蒸馏水                           加至1000ml
步骤B和C中所用的液体培养基按照下面的比例进行配制：
乳酸钠(折纯，即乳酸钠浓度100％)  4ml
七水硫酸镁                       0.2g
硫酸铵                           1.0g
无水氯化钙                       50mg
三水磷酸氢二钾                   1.0g
磷酸二氢钾                       0.7g
乙二胺四乙酸二钠                 25mg
七水硫酸亚铁                     16mg
硼酸                             2.5mg
七水硫酸锌                       0.25mg
一水硫酸锰                       1.7mg
三水硝酸铜                       0.03mg
二水钼酸钠                       0.7mg
烟酸                             1.3mg
维生素B1                         1.0mg
维生素B2                         0.5mg
维生素B6                         0.5mg
维生素B12                        0.07mg
对氨基苯甲酸                     0.4mg
生物素                           0.015mg
亚硒酸钠                         45mg
井水                             加至1000ml
此时得到的菌剂中活菌量可达150亿个/ml。在种子罐和发酵罐培养时调整PH在7.2。
在深色容器中密封避光贮藏该微生物菌剂，室内光照强度35Lx，温度8℃，相对湿度28％。
试验数据：
试验1：菌剂在蔬菜中作为农药降解剂的应用
1、田间试验
1.1 试验药剂：
48％毒死蜱乳油(美国陶氏益农公司生产的48％乐斯本乳油)；
50％甲胺磷乳油(广东省江门农药厂)；
实施例1和4所制得的类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)CGMCC No.2110菌剂。
1.2 试验作物：
小白菜、小油菜。
1.3 田间试验概况：
试验在蔬菜田进行，小白菜品种为津绿75，小油菜品种为4月曼，试验田田间管理较好，土壤为壤土，PH值为7.1-7.2，有机质含量0.9-1.0％。首先在小白菜上喷毒死蜱，24小时后喷实施例1所制得的菌剂，试验期间气温7-24℃，无降雨。同样首先在小油菜上喷甲胺磷，24小时后喷实施例4所制得的菌剂，试验期间气温6-20℃，无降雨。
2、试验处理及方法：
2.1 施药剂量：48％毒死蜱乳油250倍稀释，实施例1菌剂50倍稀释、100倍稀释；50％甲胺磷乳油250倍稀释，实施例4菌剂50倍稀释。试验设计如表1所示。
              表1：实施例1菌剂在小白菜上降解毒死蜱试验设计
  处  理   药剂  施药 浓度   施药后  1天喷   采样距喷菌剂后间隔(天)   测定  项目
  1   48％毒死蜱  乳油  250倍 稀释   菌剂  50倍稀  释   0.042、0.25、1、2、3、5、7   小白菜
  2   48％毒死蜱  乳油  250倍 稀释   菌剂  100倍  稀释   0.042、0.25、1、2、3、5、7   小白菜
  3   48％毒死蜱  乳油  250倍 稀释   清水   0.042、0.25、1、2、3、5、7   小白菜
  4   48％毒死蜱  乳油  250倍 稀释   -   0.042、0.25、1、2、3、5、7   小白菜
  5  -   -   0.042、0.25、1、2、3、5、7   小白菜
2.2 利用气相色谱分析小白菜中毒死蜱的残留量，试验结果如表2所示。
表2：实施例1菌剂在小白菜上降解毒死蜱残留的试验结果
Figure G071D0375X20070725D000161
从表2可以看出，喷洒菌剂后1小时至1天，对毒死蜱的降解作用明显，50倍和100倍稀释菌剂对毒死蜱的消解率分别为44.2％-60％和35.6-54.1％，喷清水对毒死蜱的消解率为26.8％-50.3％，毒死蜱自然消解率仅为4.8-7.7％。喷菌剂2-7天，对毒死蜱残留有一定的降解作用。
2.3 施药剂量：50％甲胺磷乳油250倍稀释，实施例4菌剂50倍稀释。试验设计如表3所示。
            表3：实施例4菌剂在小油菜上降解甲胺磷试验设计
  处  理   药剂  施药 浓度   施药后  1天喷   采样距喷菌剂后间隔(天)   测定  项目
  1   50％甲胺磷  乳油  250倍 稀释   菌剂  50倍稀  释   0.042、1、2、3、5、7   小油菜
  2   50％甲胺磷  乳油  250倍 稀释   清水   0.042、1、2、3、5、7   小油菜
  3   50％甲胺磷  乳油  250倍 稀释   -   0.042、1、2、3、5、7   小油菜
  4   -  -   -   0.042、1、2、3、5、7   小油菜
2.4 利用气相色谱分析小油菜中甲胺磷的残留量，试验结果如表4所示。
    表4：实施例4菌剂在小油菜上降解甲胺磷残留的试验结果
Figure G071D0375X20070725D000171
从表4可以看出，菌剂对甲胺磷残留降解作用明显，降解速度较快，在喷菌剂50倍稀释液后2天，甲胺磷残留消解率达90.7％，喷清水甲胺磷残留消解率为73.2％，甲胺磷残留自然消解率仅为46.2％。喷后3天，甲胺磷残留消解率达95.9％，喷清水甲胺磷残留消解率为80.4％，甲胺磷残留自然消解率仅为79.8％。喷菌剂5-7天后，对甲胺磷仍有一定的降解作用。
同时也按照上述方法对实施例2、3、5、6的菌剂也分别地进行了上述降解毒死蜱和甲胺磷农药残留的试验，试验结果与实施例1和4相似。
试验2：菌剂在辣椒中作为肥料的应用
1、试验材料和方法
1.1 试验地点：地块地势平坦，肥力均匀，具有较强的代表性的辣椒棚内，试验土壤为中壤质潮土，小区面积6.5m×3.5m＝22.75m2，试验前取土化验土壤理化性状，见表5。
                表5：土壤理化性状
  碱解氮  (mg/kg)   速效磷  (mg/kg)   速效钾  (mg/kg)   有机质  (％)   PH
  163   278   158   1.32   7.6
1.2 试验肥料：实施例1所制得的菌剂。
1.3 试验作物：赤丰1号辣椒，育苗后2个月移载至大棚，行距69cm，株距40cm。
1.4 试验方案和方法，试验设：
I 常规施肥(CK)；
II 常规施肥+每小区冲施菌剂341.94ml，间隔10天一次，冲2次，(按1∶100倍稀释)；
III 常规施肥+每小区冲施菌剂341.94ml+每小区喷施17.1m各一次，间隔10天(按1∶100倍稀释)；
IV 常规施肥+每小区喷施17.1m，间隔10天一次，连喷3次(按1∶100倍稀释)；
4个处理，重复3次，随机排列。
2、辣椒生物学性状及果实外观性状的调查，见表6。
    表6：辣椒生物学性状及果实外观性状的调查
Figure G071D0375X20070725D000191
由表6的调查结果可以看出，处理二、三、四不论在长势、还是果实外观性状上均好于对照，尤其是处理二表现明显的优势。
3、菌剂对辣椒产量的影响，见表7。
辣椒为多次采收作物，收获时各处理单独采收，单独计产，结果见表7。
                    表7：各小区产量结果
  重复  处理   I   II   III   平均
  处理一(CK)   123.85   122.32   122.46   122.88
  处理二   130.1   136.36   141.78   136.08
  重复  处理   I   II   III   平均
  处理三   126.91   130.38   130.24   129.13
  处理四   128.30   136.36   130.41   131.69
对以上数据进行方差分析得出：
方差分析表：
Figure G071D0375X20070725D000201
各处理间多重比较结果：
从上述的统计分析可以看出菌剂比对照增产效果明显，各处理增产率均达到5％以上。
实施例2-6的菌剂也按照上述方法进行了相应的试验，所得结果相似，无明显差异。
试验3：菌剂在黄瓜中作为肥料的应用
1、试验材料和方法
1.1 试验地点：地块地势平坦，肥力均匀，具有较强的代表性的黄瓜棚内，试验土壤为中壤质潮土，小区面积6.0m×3.5m＝21m2，试验前取土化验土壤理化性状，见表8。
                    表8：土壤理化性状
  碱解氮  (mg/kg)   速效磷  (mg/kg)   速效钾  (mg/kg)   有机质  (％)   PH
  186   327   163   1.26   7.7
1.2 试验肥料：实施例4所制得的菌剂。
1.3 试验作物：津春2号黄瓜，大行距120cm，小行距55cm，株距40cm。
1.4 试验方案与方法：
I：习惯施肥(CK)；
II：习惯施肥+每小区冲施315ml菌剂，冲施2次，间隔10天(按1∶100倍稀释)；
III：习惯施肥+每小区冲施315ml菌剂+每小区喷施16ml菌剂各1次，冲施2次，间隔10天(按1∶100倍稀释)；
IV：习惯施肥+每小区喷施16ml菌剂，喷施3次，间隔10天(按1∶100倍稀释)；
4个处理，重复3次，随机排列。
2、菌剂对黄瓜生物性状的调查结果，见表9。
        表9：菌剂对黄瓜生物性状的调查结果
Figure G071D0375X20070725D000211
从表9可以看出，用菌剂的处理，叶色深绿，生长整齐，茎较粗，开花早且花多，节间短，节位均匀，具有生长旺盛的优势，而没有使用菌剂的处理，叶色浅，茎较细，节间长，生长高度不整齐。
3、菌剂对黄瓜产量的影响。
黄瓜是多次采收的蔬菜，摘瓜时采取每小区单摘单收称重，收获结束后进行数理统计，每处理小区产量见表10。
                    表10：黄瓜各处理小区产量
                                                                     单位：千克
  项目   重复1   重复2   重复3   平均产量   比对照增产(％)   折亩产
  I   167.6   166.1   159.2   164.3   5216.1
  II   176.5   186.4   180.2   181.0   10.16   5746.3
  III   188.1   178.7   190.3   185.7   13.02   5895.5
  IV   178.3   186.8   188.4   184.5   12.29   5857.4
从表10可以看出，用菌剂的处理，均比对照增产10％以上。对以上数据进行方差分析得出：
方差分析表：
各处理间多重比较结果：
Figure G071D0375X20070725D000222
经方差分析得出，处理间差异达到极显著水平，从多重比较也可以看出，不同施用的处理方法与对照相比较均达到极显著水平，说明增产效果明显。
实施例1-3和5-6的菌剂也按照上述方法进行了相应的试验，所得结果相似，无明显差异。
试验4：菌剂在苹果上作为肥料的应用
1、试验材料和方法：
1.1 试验土地：丘陵地，棕壤土，土壤有机质为0.88％，速效氮、磷和钾分别为83mg/kg，222.46mg/kg，146mg/kg，pH值为5.55。
1.2 试验树木：苹果，品种为红富士，树龄8年生。
1.3 试验处理：设3个处理，分别为
(1)土壤施用实施例6的菌剂(每亩20kg)；
(2)叶面喷施300倍稀释实施例6的菌剂；
(3)常规管理(CK)。采用单株处理，重复5次。叶面喷施间隔5次，1-3次和4-5次间隔15天。第3次和第4次间隔2个月。
1.4 调查方法：选取各个处理外围新梢30个，测量新梢长度，每株树摘取外围新梢中部叶50片，测量叶片厚度，并任意选取20片测量单叶面积，然后将全部叶片进行烘干称重。果实可溶性固形物采用糖度计测量，果实硬度采用GY-1型果实硬度计测量，总糖、可滴定酸、Vc含量均按国际常规化学分析法测定。
2、试验结果
2.1 菌剂对苹果叶生长、新梢发育的影响，见表11。
                    表11：菌剂对苹果营养生长的影响
  处理   叶片厚度  (mm)   单叶面积  (cm<sup>2</sup>)   百叶鲜重  (g)   新梢长度  (cm)   新梢基部粗  (cm)
  土壤追肥   0.57   26.61   69.3   38.1   0.58
  叶面喷施   0.55   28.97   79.6   36.6   0.60
  对照(CK)   0.47   21.89   56.3   33.3   0.54
由表11可以看出，菌剂对苹果叶片及新梢发育均有良好的促进作用。
2.2 菌剂对苹果株产量及果实外观的影响，见表12。
        表12：菌剂对苹果产量及外观品质的影响
Figure G071D0375X20070725D000231
由表12可以看出，菌剂对苹果产量增加有良好的促进作用。2.3，菌剂对苹果果实内在品质的影响，见表13。
                    表13：菌剂对苹果果实内在品质的影响
  处理   硬度  (kg/cm<sup>2</sup>)   固形物  (％)   可溶性糖  (％)   可滴定酸  (％)   Vc  (mg/100g)
  土壤追肥   5.51   14.7   12.20   0.258   7.3
  叶面喷施   5.32   15.2   11.90   0.274   6.7
  对照(CK)   5.15   14.5   11.21   0.262   7.3
由表13可以看出，菌剂可以明显地改善苹果果实的内在品质。
实施例1-5的菌剂也进行了相应的试验，结果与上述试验相似。
试验5：菌剂在花卉上作为营养剂的应用
1、材料与方法
1.1 材料：菌剂为实施例3所制得的菌剂。花卉是月季、康乃馨和蝴蝶兰。
1.2 方法：
1.2.1 月季试验：试验设4个处理，分别是1)每株土施菌剂50ml；2)每株土施菌剂100ml；3)每株土施菌剂200ml；4)使用相同数量的清水(CK)，重复3次，共12株。观察月季花朵开放情况以及叶片生长情况。叶片取刚凋谢花朵剪口下2片复叶，厚度采用游标卡尺测量，面积采用打孔称重法测量。
1.2.2 切花保险试验：将康乃馨切花插入500ml棕色酒精瓶内，设4个处理，1)100倍稀释菌剂液体，2)50倍稀释菌剂液体，3)25倍稀释菌剂液体，4)清水(CK)，重复4次，共16瓶。观察鲜花开放程度及鲜艳度等。
1.2.3 蝴蝶兰试验：将蝴蝶兰栽种在直径10cm的花盆中，浇灌菌液1次，分别为1)2.5ml菌剂+97.5ml雨水，2)5.0ml菌剂+95ml雨水，3)10ml菌剂+90ml雨水，4)100ml雨水(CK)。分别观察叶片生长情况及根系发育情况。
2、试验结果：
2.1 根据试验结果，月季处理1、2、3和4可以维持第一朵花7.5天、10.5天、10.5天和6.5天；可以维持第二朵花8天、11.5天、13天和7.5天。说明施用菌剂可以延长开放花朵的寿命。
2.2 菌剂对月季生长发育的影响，见表14。
      表14：菌剂对月季生长发育的影响
 项目   1   2   3   4(CK)
 百叶鲜重(g)   80.77<sup>*</sup>   78.93<sup>*</sup>   82.87<sup>*</sup>   62.23
 项目   1   2   3   4(CK)
 叶片厚度 (mm)   4.96   5.40   5.90   4.52
 单叶面积 (cm<sup>2</sup>)   9.41   9.37   9.24   8.05
*表示3个处理与CK之间均达到显著差异。
由表14可以看出，说明菌剂对月季叶片生长具有显著促进作用。
2.3 菌剂对切花保鲜的影响
据观察，花朵开放度和鲜艳程度依次为处理3＞处理2＞处理1＞CK。高浓度(25倍稀释)处理，可促进鲜花迅速开放，用低浓度(100倍稀释)处理，可以延长鲜花开放时间，本试验达5天以上，所有处理的花朵开放程度和鲜艳程度都明显高于CK。说明本发明所制得的菌剂对切花花朵的开放程度、鲜艳度和鲜花开放时间均有良好的作用。
2.4 菌剂对蝴蝶兰叶片及根系发育的影响，见表15。
    表15：菌剂对蝴蝶兰叶片及根系发育的影响
Figure G071D0375X20070725D000251
由表15可以看出，实施后18天(第一次取样)，处理比CK均有不同程度的增长，其中以中、高浓度的处理增长比较明显，新生叶片总长度比CK分别增长0.58cm和1.53cm，增长了28.4％和75％。随着时间的推移，高浓度菌剂对新生叶片生长促进增加的幅度有所降低，由75％逐步降到32.5-51.9％。低浓度菌剂对新生叶片生长促进增加的幅度有所增加，由1.5％增加到10.1-27.5％。但始终小于高浓度菌剂的增幅。中浓度菌剂对新生叶片生长的促进作用始终处于二者之间，说明菌剂对蝴蝶兰叶片生长具有明显促进作用，并且使用浓度高其促进效果就大，但是随着时间的推移，这种差距在逐步缩小。
并且，可以看出，菌剂对蝴蝶兰根系发育具有良好的促进作用。其中，以低浓度的促进效果好，比CK增加了125.4％、50.6％和67.0％。高浓度效果相对较差，比CK增加了仅37.7％、22.1％和33.0％。中浓度基本处于二者之间。说明菌剂对蝴蝶兰根系发育有良好的促进作用，尤其以低浓度对新生根的发育较为明显。
实施例1、2，4-6的菌剂也进行了相应的试验，结果与上述试验相似。
试验6：菌剂在养殖业中的应用
实施例1-6菌剂在养殖业上可作为添加剂和净水剂使用。
a、养鸡、养鸭在鸡、鸭饮用水中每升水加入3～5ml类球红细菌菌液，可提高饲料的转换吸收率，提高饲料换肉率、换蛋率和免疫力，提高肉蛋质量。
b、淡水养殖清池后泼洒类球红细菌菌液100～200PPm，以后每隔2～3天泼洒10～30PPm。饲料每100kg加类球红细菌菌液1.5～1.8L。可净化养殖水质，预防养殖物疾病发生，促进生长发育。
c、养猪在饲料每100kg加类球红细菌菌液菌液1～1.2L，在猪饮用水中每升水加入3～5ml类球红细菌菌液。可提高猪的食欲，促进生长发育，增加饲料换肉率。
试验7：实施例1-6的菌剂对敌敌畏残留的降解作用
为了检验实施例1-6所制得的菌剂降解有机磷农药残留的作用，我们对该菌剂降解韭菜上的敌敌畏残留进行了试验，试验方法基本同于试验1。结果表明：在喷洒敌敌畏后，没有喷菌剂的样品在第1天，三个样品的敌敌畏的残留量分别是4.12mg/L，4.02mg/L和4.06mg/L。而喷洒菌剂的三个样品在第1天，均没有检测出敌敌畏的残留。在喷洒敌敌畏后，没有喷菌剂的样品在第2天，三个样品的敌敌畏的残留量分别是2.09mg/L，3.05mg/L和2..95mg/L。而喷洒菌剂的三个样品在第2天，均没有检测出敌敌畏的残留。说明本发明菌剂对敌敌畏残留具有优良的降解作用。

Claims (12)

1.一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)，CGMCC No.2110。
2.一种微生物菌剂，其特征在于其含有权利要求1所述的类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)的活菌。
3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于所述活菌的数量是120-150亿个/ml。
4.一种微生物菌剂，其特征在于其含有权利要求1所述的类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)的发酵菌液。
5.一种生产微生物菌剂的方法，该方法包括：
A：将权利要求1所述的类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)菌株接种于固体培养基中进行培养；
B：将培养面上生长的菌苔接种于装有液体培养基的种子罐中进行扩大的种子培养；
C：将种子培养物接种在装有液体培养基的发酵罐进行发酵，获得微生物菌剂。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：在步骤A、B和C中培养温度为30-33℃，光照强度为2500～3000Lx。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：在步骤B中种子罐通气量为0.15-0.2V/Vmin；pH为7.0-7.5；通过连续补料进行扩大的种子培养。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：在步骤C中通气量为0.15-0.2V/Vmin；pH为7.0-7.5；通过连续放料、补料发酵。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：在深色容器中密封避光贮藏该微生物菌剂，室内光照强度20-40Lx，温度2～30℃，相对湿度应小于40％。
10.权利要求1所述的类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)用于制备微生物菌剂的用途。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于所述微生物菌剂是微生物肥料。
12.根据权利要求10所述的用途，其特征在于所述微生物菌剂是降解毒死蜱、敌敌畏和甲胺磷的农药残留降解剂。
CN200710130375XA 2007-07-18 2007-07-18 一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、包含该活菌或发酵菌液的微生物菌剂及其用途 Active CN101348770B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200710130375XA CN101348770B (zh) 2007-07-18 2007-07-18 一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、包含该活菌或发酵菌液的微生物菌剂及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200710130375XA CN101348770B (zh) 2007-07-18 2007-07-18 一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、包含该活菌或发酵菌液的微生物菌剂及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101348770A CN101348770A (zh) 2009-01-21
CN101348770B true CN101348770B (zh) 2010-10-06

Family

ID=40267748

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200710130375XA Active CN101348770B (zh) 2007-07-18 2007-07-18 一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、包含该活菌或发酵菌液的微生物菌剂及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101348770B (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120045481A1 (en) * 2010-02-16 2012-02-23 Tfk Co., Ltd. Preventive and/or ameliorative agent for diseases, stamina enhancement agent, anti-fatigue agent, and pharmaceutical and food and drink using them
CN103740615B (zh) * 2013-12-26 2016-08-17 莱州市顺昌水产有限公司 光合细菌sc01及其快速培养方法和应用
CN106074613A (zh) * 2016-06-06 2016-11-09 赵越 光合细菌在斑蝥抗癌功效中的减毒增效的应用
CN105861393A (zh) * 2016-06-15 2016-08-17 李可俊 类球红细菌k73菌株及其在地表水体生态净化中的应用
CN107400644B (zh) * 2017-07-26 2020-12-22 宓岚(上海)国际贸易有限公司 一种培养基及其在类球红细菌发酵中的应用与一种山梨酸的制备方法
CN109182222A (zh) * 2018-10-25 2019-01-11 山西龙盘微生物科技有限公司 富硒菌剂制备及其降解土壤和农作物中重金属镉的方法
CN109678614B (zh) * 2019-02-28 2021-04-27 广西地源之本生物科技有限公司 一种生物-有机-无机复合营养液及其制备方法
CN114317357B (zh) * 2021-12-31 2023-12-29 绿奥环保科技（上海）有限公司 一种类球红细菌及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1923006A (zh) * 2005-09-02 2007-03-07 崔建斌 类球红细菌发酵液在防治植物根系常见病中的应用
CN1986774A (zh) * 2005-12-23 2007-06-27 王栋 类球红细菌工业化规模制备方法及其发酵液与用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1923006A (zh) * 2005-09-02 2007-03-07 崔建斌 类球红细菌发酵液在防治植物根系常见病中的应用
CN1986774A (zh) * 2005-12-23 2007-06-27 王栋 类球红细菌工业化规模制备方法及其发酵液与用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN101348770A (zh) 2009-01-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101348770B (zh) 一种类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、包含该活菌或发酵菌液的微生物菌剂及其用途
CN106479902B (zh) 一种灵芝的栽培方法
EP2514815B1 (en) Biocontrol strain for cucumber and watermelon continuous cropping wilt diseases and microbial organic fertilizer thereof
CN106591193B (zh) 一株具有广谱促生抗逆作用的解淀粉芽孢杆菌
CN101891548B (zh) 一种三株地衣芽孢杆菌制作的多效微生物菌肥
CN101270012B (zh) 新型微生物药肥及其制备方法
CN100424164C (zh) 改善农业生产环境、提高农产品质量及产量的菌剂
CN104447001A (zh) 一种水稻专用复合微生物肥料
KR100679665B1 (ko) 셀레늄을 함유하는 과수 재배용 양액 조성물 및 셀레늄을함유하는 과수의 재배방법
CN103820348A (zh) 一株植物促生菌及其菌剂的生产方法和应用
CN106187515B (zh) 利用食用菌菌渣制作的羊肚菌营养袋及其制备方法
CN107502572A (zh) 地衣芽孢杆菌在秸秆降解中的应用、包含该菌的微生物菌剂及其应用
CN110106126A (zh) 一株胶质芽孢杆菌及其在制备盐碱土壤改良剂中的应用
CN102888356B (zh) 一种枯草芽孢杆菌、利用此菌制备的微生物肥料及其制备方法
CN102911881B (zh) 拟除虫菊酯类农药残留降解菌及降解菌剂和应用
CN113862189A (zh) 玉米促生、益生、生防菌肥一体化制剂及其制备方法
CN105439725A (zh) 一种用于农场现场发酵的多粘类芽孢杆菌药肥及其应用
CN101974454B (zh) 一种拟除虫菊酯类农药降解菌及其菌剂
CN104480097A (zh) 一种绿藻糖基微胶囊生物菌剂及其制备方法和应用
CN101928689A (zh) 类球红细菌工业化规模制备方法及其发酵液与用途
CN103255064B (zh) 一种防治西瓜枯萎病的真菌菌剂及其制备方法
CN111011139A (zh) 一种富硒无公害土豆的种植方法
CN101935627A (zh) 一种辛酰溴苯腈降解菌及其生产的菌剂
CN103274837A (zh) 一种腊梅多元有机复合肥
CN116396869A (zh) 一株羊肚菌的驯化菌株及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant