CN101347624A - 一种糖尿病皮肤溃疡动物模型的构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种糖尿病皮肤溃疡动物模型的构建方法，所述方法是选用昆明小白鼠，腹腔注射四氧嘧啶试剂，脊背中下部去毛消毒后开创深至皮下，然后单笼喂养，定量饮水与喂食，禁食12小时后尾部取血，用血糖测定仪检测血糖值，当血糖值≥10.0mmol/L即可。本发明实验动物模型经过体表创面观察和组织学创面观察结果的统计学分析表明：本发明利用四氧嘧啶构建的小白鼠糖尿病皮肤溃疡模型是可行的，可作为对糖尿病皮肤溃疡的发病机制和药物作用机理的研究模型。而且，本发明构建的小白鼠糖尿病皮肤溃疡模型与现有技术相比，具有造模方法简单、成模率高、成本低、周期短及重现性好等优点。

Description

一种糖尿病皮肤溃疡动物模型的构建方法

技术领域

本发明涉及一种糖尿病皮肤溃疡动物模型的构建方法，具体说，是涉及一种小白鼠糖尿病皮肤溃疡模型的构建方法。

背景技术

糖尿病皮肤溃疡是由糖尿病引起的足部皮肤病变所致的一种较顽固的慢性溃疡，若治疗不及时即向深部发展，直至截肢。据统计，在非创伤性截肢中50％以上由糖尿病皮肤溃疡所致，每年有3％～6％糖尿病患者发生足部溃疡。多因性、不确定性制约了对其的治疗。如果我们能确实弄清糖尿病皮肤溃疡的机理，那么对于糖尿病皮肤溃疡的治疗必将有一个新的飞跃。

人类疾病的动物模型是现代医学研究中的一个极为重要的实验方法和手段，利用人类疾病的动物模型来研究人类疾病，可开展平时一些不易见到、且不便于在病人身上进行实验的各种人类疾病的研究。同时，还可克服人类疾病发生发展缓慢、潜伏期长、发病原因多样、常伴有各种其它疾病等因素的干扰。目前常用的人类疾病动物模型有实验性动物模型和自发性动物模型，自发性动物模型应用价值较高，但因价格昂贵，饲养、繁殖条件要求严格，因而不能得到广泛应用；实验性动物模型一般造模简单易行，成模率较高且费用较低，目前被国内外广泛采用。

现有糖尿病皮肤溃疡实验性动物模型有大鼠糖尿病皮肤溃疡模型和猪糖尿病皮肤溃疡模型。大鼠糖尿病皮肤溃疡模型的建立是在实验性糖尿病大鼠背部人工造成圆形无菌创面(2.54cm²)，然后观察创面愈合过程；猪糖尿病皮肤溃疡模型的建立是选用约克猪，静脉注射四氧嘧啶，待空腹血糖达到1.2g/L以上，剃毛后在背部脊柱两侧安装自行研制的压创装置，分别于安装6h、12h、24h后去除装置，根据压力和作用时间将创面分为10组，每组6个创面，不同时间点对创面进行大体观察、组织学检查以及创面面积测量。虽然上述糖尿病皮肤溃疡实验性动物模型对糖尿病皮肤溃疡的产生机理、发病原因、病后康复、完全治愈等的研究，起着指导和参考作用，但存在成模率低、造模成本较高及造模周期较长的缺陷。

发明内容

本发明的目的是针对上述现有技术所存在的缺陷，提供一种成模率高、造模成本低及造模周期短的糖尿病皮肤溃疡动物模型的构建方法。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明的糖尿病皮肤溃疡动物模型的构建方法如下：选用昆明小白鼠，清洁级，雄性，体重18.32±1.63g，随机分为2组，分别标记；腹腔注射四氧嘧啶试剂，150mg/Kg，对照组注射等量生理盐水；脊背中下部去毛，常规消毒；腹腔注射3％戊巴比妥钠，25mg/kg；开创深至皮下，直径为8～10mm；单笼喂养，定量饮水与喂食；禁食12小时后尾部取血，用血糖测定仪检测血糖值，当血糖值≥10.0mmol/L即可。

所述四氧嘧啶试剂为3％四氧嘧啶水溶液。

本发明选用小白鼠作为动物模型，是基于小白鼠在动物实验中具有如下优点：

①小白鼠的基因序列与人类相似；

②实验专用白鼠的生物学意义较大，纯系小白鼠的培育方法已经形成固定流程，培育出的小白鼠几乎完全没有生理上的个体差异；

③在人工繁殖条件下，可大量繁殖，能满足实验对实验动物数量的要求；

④来源丰富，价格经济；

⑤白色皮肤，易标记和发现异常。

本发明的糖尿病皮肤溃疡动物模型的体表创面观察结果如下：对照组开创后7天创面闭合指数为63，开创后21天创面闭合指数即达98；而造模组开创后7天创面闭合指数为27，开创后28天的创面闭合指数低于对照组开创后21天的创面闭合指数；统计分析结果表明，造模组与对照组之间具有显著性差异(P＜0.05)。

本发明的糖尿病皮肤溃疡动物模型的组织学创面观察结果如下：对照组早期，新生肉芽组织毛细血管丰富的，成纤维细胞生长活跃，晚期似有再生的上皮、胶原纤维瘢痕；而造模组早期，见大量嗜中性粒细胞的炎性细胞渗出，晚期可见有一些肉芽组织和成纤维细胞，但排列不规整，有嗜中性粒细胞核碎片。

可见，本发明利用四氧嘧啶构建的小白鼠糖尿病皮肤溃疡模型是可行的，可作为对糖尿病皮肤溃疡的发病机制和药物作用机理的研究模型。

与现有技术相比，本发明构建的小白鼠糖尿病皮肤溃疡模型，还具有造模方法简单、成模率高、成本低、周期短及重现性好等优点。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步说明，其目的仅在于更好理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围。

实施例

1、实验仪器

血糖测定仪(美国强生公司)，9cm直径培养皿，精密电子天平，10μl微量进样器；1ml注射器，0.5ml滴管；离心沉淀器；常规眼科手术器械；尼康数码相机，索氏提取器等。

2、实验动物与材料

2.1实验动物

昆明小白鼠，清洁级，雄性，体重18.32±1.63g，由上海市生物制品研究所动物实验中心提供。

2.2实验材料

分析纯无水乙醇、四氧嘧啶(Alloxan)、25％氨基甲酸乙酯、多聚甲醛、苦味酸、蒸馏水、消毒碘酒、消毒乙醇、生理盐水、无菌纱布及无菌棉签。

3、实验方法

选用24只上述昆明小白鼠，随机分为2组，每组12只，分别标记；腹腔注射3％四氧嘧啶水溶液，150mg/Kg，对照组注射等量生理盐水；脊背中下部去毛，常规消毒；腹腔注射3％戊巴比妥钠，25mg/kg；开创深至皮下，直径约9mm；单笼喂养，定量饮水与喂食；禁食12小时后尾部取血，用血糖测定仪检测血糖值，当血糖值≥10.0mmol/L即认为造模成功。

4、进行糖尿病皮肤溃疡的体表创面观察

在术后7天、14天、21天、28天测量并计算同体位创面闭合指数，创面闭合指数＝100×(1-后续创缘宽度/初始创缘宽度)；记录创口渗出、色泽、结痂状况等。

5、进行糖尿病皮肤溃疡的组织学创面观察

在术后9天、21天在体表创面观察后，2组分别处死6只，立即置3.7％多聚甲醛，石蜡切片，HE染色，镜检观察炎症细胞浸润、上皮化发生、真皮结构、胶原纤维致密度、血管分布等。

6、实验结果

6.1创面闭合指数

对照组在开创后7天的创面闭合指数为63，开创后21天的创面闭合指数达98；造模组在开创后7天的创面闭合指数为27，远低于对照组的63，开创后28天的创面闭合指数低于对照组开创后21天的创面闭合指数；统计分析结果表明，造模组与对照组之间具有显著性差异(P＜0.05)。

6.2创面病理切片

对照组早期，新生肉芽组织毛细血管丰富的，成纤维细胞生长活跃，晚期似有再生的上皮、胶原纤维瘢痕；而造模组早期，见大量嗜中性粒细胞的炎性细胞渗出，晚期可见有一些肉芽组织和成纤维细胞，但排列不规整，有嗜中性粒细胞核碎片。

可见，本发明利用四氧嘧啶构建的小白鼠糖尿病皮肤溃疡模型是可行的，可作为对糖尿病皮肤溃疡的发病机制和药物作用机理的研究模型。

Claims (2)

1.一种糖尿病皮肤溃疡动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法具体步骤如下：选用昆明小白鼠，清洁级，雄性，体重18.32±1.63g，随机分为2组，分别标记；腹腔注射四氧嘧啶试剂，150mg/Kg，对照组注射等量生理盐水；脊背中下部去毛，常规消毒；腹腔注射3％戊巴比妥钠，25mg/kg；开创深至皮下，直径为8～10mm；单笼喂养，定量饮水与喂食；禁食12小时后尾部取血，用血糖测定仪检测血糖值，当血糖值≥10.0mmol/L即可。

2.根据权利要求1所述的糖尿病皮肤溃疡动物模型的构建方法，其特征在于，所述四氧嘧啶试剂为3％四氧嘧啶水溶液。