CN101326441B - 用于快速诊断的试验装置 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及检测生物样品中分析物或其类似物的装置，包括：固体支持体，其上设置数个并列的区，由此样品能够从样品接收区向样品检测区移动，由此检测可能存在的所述分析物，由此两个区包括允许所述样品的毛细管流通过所述区的材料，其特征在于，在所述区之间提供输送样品的中间区，所述中间区不含任何毛细管材料，允许所述样品通过重力移动到处于竖直位置的所述支持体上。本发明还涉及用于检测生物样品中的分析物或其类似物的方法。

Description

用于快速诊断的试验装置
技术领域
本发明涉及检测生物样品中分析物或其类似物的方法和装置。本发明涉及改进的快速试验，例如“试纸”装置。具体而言，本发明涉及由一个或更多个活性侧构成的试验装置，允许进行单路或多路检测、定量或半定量检测。本发明中所述的装置允许利用一次操作来检测或识别各种生物制品或化学制品。
背景技术
已经开发了用于检测生物样品中的分析物的若干种方法，例如在诊断实验室中通过免疫色谱法进行的常规诊断。
EP 0 088 636、EP 0 186 799、EP 0 284 232和WO 88/08534公开了薄板状色谱装置，其至少包括第一和第二区域。这些文献中公开的现有技术装置包括：
-第一区，其包含多孔活性材料以允许液体移动到涂有特异性试剂的敏化区。该第一区包括在其上干燥的或浸入其中的检测试剂。它还可以包括应用(分)区和/或吸收(分)区。该第一区一般称为施加区；
-第二区，也称为检测区，由吸附有特异性试剂的多孔活性材料制成。布置在该装置第二区的分区(例如线)的这些试剂中的一些对待检测分析物是特异的，并且应当与标记样品分析物的试剂复合物反应，而最终布置在第二区的另外分区(例如另外的线)上的其它非特异性试剂则用于与过量的检测试剂反应。优选用硝化纤维素制成的该第二区还可以包含对照分区，优选位于检测区的后面；和
-第三区，由多孔材料制成，用于吸收穿过第一区和第二区的过量液体。该区一般称为吸收区。
现有技术的(免疫)色谱装置可以具有塑料或其它的背衬支持体和/或可以容纳在不透水的外壳中。
上述三个区以毛细管形式相互接触以允许液体从施加区移动到第三区。
尽管目前的使用测试条的色谱装置可以使用，它们仍具有许多缺点。许多样品(例如粪便样品)含有可能堵塞色谱介质孔的颗粒物质，极大地阻碍免疫色谱过程。此外，现有的色谱试验装置经常难以将样品施加到色谱介质以便使样品前沿均匀地穿过色谱介质以确保样品以均匀、直线方式到达进行结合的区域。
制备样品和产生废物是目前可用的免疫色谱装置和技术的其它问题。几乎不可能将样品(例如粪便)或取样器(例如喉拭子)直接施加到色谱介质。通常在将样品施加到色谱介质前，需要若干次提取和预处理反应。这些反应通常由医生或技术员在例如试管或微量离心管等若干小容器中进行，需要使用诸如移液管等转移装置。这些被污染的装置均必须用专门的预防措施处置，以便使可能无意中接触废物的工作人员或人不被污染。
因此，期望拥有能够直接接收可能是污染的样品或样品制备装置的色谱检测装置，以消除对提取容器和转移装置的需要。优选呈测试条形式的这种装置还应该能够对含有颗粒物的样品进行化验，而没有堵塞或干扰，并且应该能够将样品均匀地递送到色谱介质，以提高试验的准确度和精度。改进化验装置的该方面对避免假阴性和假阳性尤为重要。
发明目的
本发明的目的在于提供高度柔性的薄板状装置，其适于检测溶液或生物样品中的多种分析物或其类似物，这些检测在同一装置中进行。该薄板状装置设计为使液体通过重力和毛细管作用来运动。
发明内容
在第一方面，本发明提供一种(重力驱动的)由一个或更多活性侧面构成的试验装置，其允许通过重力驱动过程进行单路或多路检测、定量或半定量检测，该重力驱动过程会使液体样品接触该装置的不同反应区域。
具体而言，本发明提供检测样品中至少一种分析物的试验装置，其包括：固体支持体，其上提供若干并列的区，由此样品能够从样品接收区向样品检测区迁移，由此检测至少一种分析物(如果存在的话)，由此两个区都包括使样品的毛细管流通过所述区的材料，其特征在于在所述区之间设置有输送样品的中间区，该中间区不含任何毛细管材料，以允许样品通过重力迁移到处于竖直位置的支持体上。
在本发明的具体实施方案中，本发明的重力驱动的试验装置尤其适用于免疫检测，并且包括免疫试剂作为捕获试剂(capturereagent)。
在第二方面，本发明提供一种分析物检测方法，用于检测样品中的至少一种分析物，其包括以下步骤：使根据本发明的试验装置与样品接触，并使所述样品在重力作用下从该装置的顶部向该装置的底部移动穿过非毛细管区，以及检测所述至少一种分析物。
具体而言，该分析物检测方法包括使装置上的样品接收区接触样品，使样品通过毛细管作用迁移通过样品接收区到达非毛细管区，使样品在重力作用下迁移通过非毛细管区到达检测区，和使样品在毛细管作用下迁移通过检测区并检测分析物。
在一个具体实施方案中，所述试验装置(1)包括在固体支持体(18)的一个或更多侧面上的从该装置的一端向该装置的另一端布置的：
●第一毛细管区，其包括样品施加区(2)；
●第二毛细管区，其包括检测区(4)、紧靠所述检测区(4)布置的任选的中间区(6)、和紧靠所述检测区(4)布置的任选的吸收区(5)，所述检测区(4)任选包括对照分区；和
●非毛细管区(14)，其将样品施加区(2)与检测区(4)或任选的中间区(6)隔开，
其中检测区(4)包括特异性识别至少一种分析物或其类似物的至少一种捕获试剂；并且
其中样品施加区(2)包括至少一种分析物特异性缀合物，其具有用于检测至少一种分析物或其类似物的直接或间接标记。该装置上可以存在或不存在中间区(6)，并且中间区(6)可以任选包括至少一种分析物特异性缀合物，其具有用于检测至少一种分析物或其类似物的直接或间接标记。
在本发明的一个具体实施方案中，分析物检测方法包括以下步骤：竖直放置试验装置，将样品施加到装置顶部，使样品迁移通过样品施加区(2)并使至少一种分析物特异性缀合物水合，使所述样品中的至少一种分析物与至少一种分析物特异性缀合物反应，由此形成至少一种复合物，使至少一种复合物到达非毛细管区(14)，在重力作用下通过非毛细管区(14)以接触和迁移通过任选的中间区(6)并通过检测区(4)，由此与至少一种捕获试剂反应并产生检测信号，从而检测所述至少一种分析物。
在另一方面，本发明提供用于检测样品中的至少一种分析物的分析物检测方法，其包括以下步骤：使样品接触化验装置，使样品在重力作用下从所述装置的顶部移动到底部，并且检测至少一种分析物或其类似物，其中所述化验装置选自根据本发明的(重力驱动的)试验装置、测试条、试纸条、诊断条(diagnostic strip)、流式装置和侧流式装置。
本发明的重力驱动试验装置和方法尤其适合于但不限于检测样品中的分析物，具体而言，适用于检测来自(有害)微生物的一种或更多种分析物或类似物，所述微生物包括小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、鼠弓形体(Toxoplasma gondii)、兰伯贾第虫(Giardia lamblia)、艰难梭菌(C.difficile)、大肠杆菌(E.coli)、痢疾阿米巴(E.histolytica)、A型和B型流感病毒、轮状病毒、RSV(呼吸道合胞病毒)、40 & 41型腺病毒或其它腺病毒组、嗜肺性军团菌(Legionellapneumophila)尿抗原、人和动物源性的冠状病毒和人偏肺病毒。
本发明的重力驱动试验装置和方法可适用于多种类型的分析，尤其可有利地用于免疫测定或寡核苷酸色谱快速检验(oligochromatographic rapid assays)以改善常规的固相免疫测定。此外，与现有技术中的化验相比，根据本发明生产的装置相对容易使用，需要较少的操作步骤和较不复杂的化验技术，并且还为未知样品的检验提供快速的定量、半定量或定性结果的额外优点。该装置还有利地适合用作对照，例如用于评估这类化验的准确性和可靠性。而且，本发明装置在制造过程中可以相对容易地制造。已经发现利用本发明的这种装置的化验对各种水平的分析物高度敏感。从在此对本发明的详细描述、附图和说明本发明的实施例中，前述优点以及其它优点会变得显而易见。
附图说明
图1、2和3代表根据本发明实施方案的重力驱动试验装置的截面侧视图。
图4代表根据本发明实施方案的重力驱动试验装置的截面侧视图(4a、4a1、4a2、4a3)和正视图(4b、4c、4d和4e)。
图5代表根据本发明实施方案的包装的透视图(5a)和分解图(5b)。
图6代表根据本发明实施方案的包装的截面图(6a)和半分解正视图(6b)。
图7代表根据本发明实施方案的包装的截面图(7a)和后视图(7b)。
具体实施方式
在一个实施方案中，本发明提供一种试验装置(1)，也称为“薄板状重力驱动试验装置”，用于检测样品中的至少一种分析物，该装置包括：固体支持体(18)，其包括从支持体的一端向另一端并列布置的(i)作为样品接收区(2)的第一毛细管区、(ii)非毛细管区(14)和(iii)作为样品检测区(4)的第二毛细管区。根据本发明，该装置包括布置在支持体纵轴两端的两个毛细管区，其通过非毛细管区相互流动连通，其中待试验样品可以在重力作用下流动。所述固体支持体可以是任意合适的形状，包括但不限于矩形、正方形、三角形或任意其它形状。优选地，所述固体支持体(18)为基本矩形的形状。
根据本发明的一个实施方案，该试验装置的样品接收区包括样品施加区(2)，样品检测区包括检测区(4)和任选的紧靠所述检测区(4)布置的中间区(6)，其中所述检测区(4)任选包括对照分区。优选地，所述中间区(6)和所述检测区(4)相互接触。
在另一个实施方案中，所述检测区包括紧靠检测区(4)布置并与其彼此毛细管流连通的吸收区(5)。
根据本发明的一个具体实施方案，用于检测样品中至少一种分析物的试验装置(1)包括：在固体支持体(18)的一个或更多侧面上从该装置的一端向另一端布置的：
(a)第一毛细管区，其包括样品施加区(2)，
(b)第二毛细管区，其包括检测区(4)、紧靠所述检测区(4)布置的任选的中间区(6)和紧靠所述检测区(4)布置的任选的吸收区(5)，其中所述检测区(4)任选地包括对照分区；和
(c)非毛细管区(14)，其将第一毛细管区的样品施加区(2)与第二毛细管区的检测区(4)或任选的中间区(6)隔开，
其中所述样品施加区(2)、所述非毛细管区(14)和所述检测区(4)或所述任选的中间区(6)经布置使得当使用该装置时样品可以在重力作用下从样品施加区(2)流到检测区(4)或流到任选的中间区(6)。
根据一个具体实施方案，检测区(4)包括特异性识别至少一种分析物或其类似物的至少一种捕获试剂；并且样品施加区(2)包括至少一种分析物特异性缀合物，其具有用于检测至少一种分析物或其类似物的直接或间接标记。根据另一个具体实施方案，中间区(6)可以包括至少一种分析物特异性缀合物，其具有用于检测至少一种分析物或其类似物的直接或间接标记。
根据另一个具体实施方案，检测区(4)包括特异性识别至少两种分析物或其类似物的至少两种捕获试剂；并且样品施加区(2)包括至少两种分析物特异性缀合物，其具有用于检测至少两种分析物或其类似物的直接或间接标记。
根据又一个具体实施方案，检测区(4)包括特异性识别至少三种分析物或其类似物的至少三种捕获试剂；并且样品施加区(2)包括至少三种分析物特异性缀合物，其具有用于检测所述至少三种分析物或其类似物的直接或间接标记。
本发明尤其适用于进行多路检测，其中检测多于一种的分析物。
本文使用的术语“试验装置”和“重力驱动试验(GDT)装置”可以互换使用，指的是一种试验装置，其中该装置的不同区经布置使得当使用该装置时样品可以在重力作用下从样品施加区(2)通过非毛细管区(14)而流到检测区(4)。根据本发明装置的非毛细管区(14)提供混合区，由此允许正确和快速地混合试剂，从而提高化验的准确性和一致性。即使样品是粘性的，采用本发明装置的试验也可快速进行。这与需要耗费长得多的时间进行的常规试验不同。由于所述非毛细管区(14)，所述装置仅能在竖直位置上使用。
参照附图的图1、2、3和4，本发明重力驱动试验装置的具体实施方案一般显示于(1)。根据本发明的装置(1)是例如基本矩形的薄板状装置，特别是测试条，其包括基本平面的柔性、刚性或半刚性支持体(18)，所述支持体(18)包括在其一个或更多侧面上的样品施加区(2)、任选的中间区(6)、检测区(4)和任选的吸收区(5)，其中所述中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)相互接触。根据本发明的一个实施方案，非毛细管区(14)将中间区(6)与样品施加区(2)隔开。区(2)由非毛细管区(14)与区(6)、(4)和(5)隔开。固体支持体上的各区沿测试条的纵轴设置，相互紧靠。图4a示出根据本发明一个具体实施方案的没有中间区(6)的装置。在图4a中，该装置包括在刚性或半刚性支持体(18)的一个或更多侧面上的样品施加区(2)、检测区(4)和任选的吸收区(5)，其中所述检测区(4)和吸收区(5)相互毛细管流连通。样品施加区(2)设置在固体支持体的一端，并通过不含任何毛细管材料的区(14)与检测区(4)(图4a)或任选的中间区(6)(图4a1)隔开。
在一个实施方案中，样品施加区(2)包括反应区(3)。在一个具体实施方案中，样品施加区(2)包括一个或几个在本文中称为“第一吸收膜(12)”的吸收膜(12)和在反应区(3)中的缀合物区或垫(13)。本文使用的“缀合物区(13)”或“缀合物垫(13)”可以互换使用。样品施加区(2)可以包括处于包括缀合物区或垫(13)的第一反应区(3)中的数种分析物特异性缀合物，所述缀合物具有检测所述分析物或其类似物的直接或间接标记。样品施加区(2)包括至少一种分析物特异性缀合物。
在一个替代实施方案中，样品施加区(2)包括吸收膜(12)，中间区(6)可以包括具有缀合物区或垫的反应区。中间区(6)可以包括处于包括缀合物区或垫的反应区中的数种分析物特异性缀合物，所述缀合物具有检测所述分析物或其类似物的直接或间接标记。
在另一个替代实施方案中，所述样品施加区(2)和/或中间区(6)都包括反应区，所述反应区包括含有一种或更多种分析物特异性缀合物的缀合物区或垫，所述缀合物具有检测所述分析物或其类似物的直接或间接标记。
在一个实施方案中，所述样品施加区(2)还可以包括至少一种对照缀合物，也称为“迁移对照缀合物”。特异性缀合物和/或迁移对照缀合物包括选自下组的标记物，该组包括但不限于缀合的金属胶体、缀合的聚苯乙烯微球、碳纳米管和具有特定颜色的微米或纳米颗粒、荧光碳纳米管和荧光微米或纳米颗粒。在一个实施方案中，特异性缀合物和/或迁移对照缀合物包括金颗粒和/或聚苯乙烯微球和/或碳纳米管作为直接标记物，并且导致对照和试验信号的出现。
在一个实施方案中，中间区(6)包括一种或几种在本文中称为“第二吸收膜(15)”的吸收膜(15)，并且可以含有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。
在一个实施方案中，检测区(4)包括由硝化纤维素或其它基质制成的活性膜(16)，所述活性膜可以涂有与位于施加区中或存在于待试验样品中的其它试剂相互作用的试剂。优选地，检测区(4)包括例如硝化纤维素作为活性膜(16)。在一个实施方案中，所述检测区(4)可以具有对照分区。检测区可以包括几种特异性识别试验样品中待检测的分析物或其类似物或只位于缀合物区或垫(13)中的对照缀合物的捕获试剂(7、7’)。捕获试剂(7、7’)可以涂在检测区(4)的不同水平处。捕获试剂可以是分析物特异性捕获试剂(7)或对照(参照)捕获试剂(7’)。在本发明的一个实施方案中，检测区(4)包括至少一条对照试验线，其具有至少一种特异性识别在施加区(2)或中间区(6)中的对照缀合物的对照捕获试剂(7’)。
在本发明的一个实施方案中，分析物特异性缀合物和/或对照缀合物包括选自下组的标记物，该组包括但不限于缀合的金属胶体、缀合的聚苯乙烯微球、碳纳米管、具有特定颜色的微粒和荧光微粒，优选为选自金颗粒和聚苯乙烯微球的直接或间接标记物。
在一个实施方案中，吸收区(5)包括吸收膜(17)，其在本文中称为“第三吸收膜(17)”。
根据本发明，非毛细管区(14)使样品施加区(2)与检测区(4)或与如果存在的中间区(6)的第二吸收膜(15)隔开。所述非毛细管区用作混合区，其导致在使用该装置时提高化验准确性和一致性。此外，由于没有对所述样品迁移的毛细管约束，所以非毛细管区允许样品快速迁移通过该装置。还避免了堵塞。
任选地，本发明的装置可以容纳在外壳中，所述外壳允许样品施加区的至少部分能够与所述外壳的外部连通，使得样品可以被施加到所述装置，所述外壳还包括并置在所述装置的至少部分上方的窗，位于所述部分的样品检测区与外壳的外部视觉连通。
任选地，本发明装置可以嵌入在由特定聚合物制成的外壳状系统中，使得样品可以被施加到所述装置。窗可以并置在所述装置的至少部分上方，即位于所述部分的样品检测区与聚合物嵌入件的外部视觉连通。
图1、4a3和2a具体显示不同的实施方案，其中装置(1)包括中空或热模制的外壳或壳体(11)。典型地，所述外壳(11)包括中空壳构造，并且由不透水的固体材料例如合适的塑料材料制成。外壳(11)允许样品施加区(2)的至少部分与所述外壳(11)的外部直接连通，使得所述样品可以通过外壳接收区(10)施加到所述装置(1)。
外壳(11)还包括并置在装置(1)的至少部分上方的窗，使得包括所述在装置(1)中的至少检测区(4)与外壳(11)的外部视觉连通。所述窗可以是任意合适的形状，以允许清楚地看见至少检测区(4)。在一个实施方案中，所述窗可以是矩形形式，优选其宽度比装置(1)的宽度稍窄。
图2b、4a、4a1、4a2和3显示本发明的不同实施方案，其中装置(1)没有中空外壳(11)。图2b、4a2和3示出根据本发明实施方案的装置(1)，其中粘附物(20)可以覆盖样品施加区(2)、非毛细管区(14)(如此形成空间，样品可以在其中通过重力自由移动)和中间区(6)并部分地与检测区(4)重叠。第二粘附物(21)还可以覆盖吸收区(5)。粘附物(20、21)可以用于使液体流入不同的膜(12、13、15、16、17)中，而不会从测试条表面逸出。在一个替代实施方案中，图2b和3中描述的装置(1)可以用粘附物覆盖或包裹在热模制的塑料管中或嵌入在特定聚合物中以避免在测试条侧面上的任何液体泄漏。图4a和图4a1显示根据本发明实施方案的没有中空外壳和粘附物的装置(1)。
参照图1，其示出根据本发明一个实施方案的装置(1)，包括：支持体(18)，在其一个侧面上包括样品施加区(2)、非毛细管区(14)、中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)，其中中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)相互接触。样品施加区(2)与中间区(6)由非毛细管区(14)隔开。固体支持体上的各区沿测试条的纵轴设置，相互紧靠。样品施加区(2)包括位于所述样品施加区(2)一端的反应区(3)。具体而言，样品施加区(2)包括第一吸收膜(12)和处于所述样品施加区(2)的反应区(3)中的缀合物区或垫(13)。中间区(6)包括第二吸收膜(15)。在一个实施方案中，所述缀合物区或垫(13)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在另一个实施方案中，所述第二吸收膜(15)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在第三实施方案中，所述缀合物垫(13)和所述第二吸收膜(15)都带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。检测区(4)包括含有分析物特异性捕获试剂(7)和对照(参照)捕获试剂(7’)的活性膜(16)。吸收区(5)包括吸收膜(17)。装置(1)容纳在外壳(11)中，所述外壳(11)允许第一吸收膜(12)的至少部分与所述外壳(11)的外部直接连通，使得可以通过外壳接收区(10)将样品施加到所述装置(1)。
参照图2a，其示出根据本发明另一实施方案的装置(1)，包括：支持体(18)，在其一侧上从装置的一端到装置的另一端包括设置在缀合物区或垫(13)两侧面上的第一吸收膜(12)、非毛细管区(14)、第二吸收膜(15)、含有分析物特异性捕获试剂(7)和对照(参照)捕获试剂(7’)的活性膜(16)和第三吸收膜(17)。第二吸收膜(15)、活性膜(16)和第三吸收膜(17)相互接触。第一吸收膜(12)由非毛细管区(14)与第二吸收膜(15)隔开。固体支持体上的膜和垫沿测试条的纵轴设置，相互紧靠。在一个实施方案中，所述缀合物区或垫(13)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在另一个实施方案中，所述第二吸收膜(15)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在第三实施方案中，所述缀合物区或垫(13)和所述第二吸收膜(15)都带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。装置(1)容纳在外壳(11)中，所述外壳(11)允许第一吸收膜(12)的至少部分能够与所述外壳(11)的外部直接连通，使得可以通过外壳接收区(10)将样品施加到所述装置(1)。
参照图2b，其示出根据本发明又一实施方案的装置(1)，包括：支持体(18)，在其一个侧面上包括反应区(3)、非毛细管区(14)、中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)，其中中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)相互接触。反应区(3)由非毛细管区(14)与中间区(6)隔开。固体支持体上的各区沿测试条的纵轴设置，相互紧靠。反应区(3)包括缀合物区或垫(13)。中间区(6)包括第二吸收膜(15)。在一个实施方案中，所述缀合物区或垫(13)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在另一个实施方案中，所述第二吸收膜(15)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在第三实施方案中，所述缀合物区或垫(13)和所述第二吸收膜(15)都带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。检测区(4)包括含有分析物特异性捕获试剂(7)和对照(参照)捕获试剂(7’)的活性膜(16)。吸收区(5)包括吸收膜(17)。粘附物(20)覆盖反应区(3)、非毛细管区(14)和中间区(6)，并且部分地与检测区(4)重叠。第二粘附物(21)覆盖吸收区(5)。
参照图3，其示出根据本发明另一实施方案的装置(1)。所述装置(1)包括支持体(18)，在其一个侧面上包括样品施加区(2)、非毛细管区(14)、中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)，其中中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)相互接触。样品施加区(2)由非毛细管区(14)与中间区(6)隔开。固体支持体上的各区沿测试条的纵轴设置，相互紧靠。样品施加区(2)包括位于所述样品施加区(2)一端的反应区(3)。具体而言，样品施加区(2)包括第一吸收膜(12)和处于所述样品施加区(2)的反应区(3)中的缀合物区或垫(13)。中间区(6)包括第二吸收膜(15)。在一个实施方案中，所述缀合物区或垫(13)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在另一个实施方案中，所述第二吸收膜(15)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在第三实施方案中，所述缀合物区或垫(13)和所述第二吸收膜(15)都含有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。检测区(4)包括含有分析物特异性捕获试剂(7)和对照(参照)捕获试剂(7’)的活性膜(16)。吸收区(5)包括吸收膜(17)。粘附物(20)覆盖反应区(3)、非毛细管区(14)和中间区(6)，并且部分地与检测区(4)重叠。第二粘附物(21)覆盖吸收区(5)。
图4a示出根据本发明一个具体实施方案的没有中间区(6)和中空外壳及粘附物的装置(1)。在图4a中，装置(1)包括支持体(18)，其上设置有样品施加区(2)、非毛细管区(14)、检测区(4)和吸收区(5)，其中检测区(4)和吸收区(5)相互接触。样品施加区(2)由非毛细管区(14)与检测区(4)隔开。固体支持体上的各区沿测试条的纵轴设置，相互紧靠。样品施加区(2)包括位于所述样品施加区(2)一端的反应区(3)。具体而言，样品施加区(2)包括第一吸收膜(12)和处于所述样品施加区(2)的反应区(3)中的缀合物区或垫(13)。所述缀合物区或垫(13)含有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。检测区(4)包括含有分析物特异性捕获试剂(7)和对照(参照)捕获试剂(7’)的活性膜(16)。吸收区(5)包括吸收膜(17)。
图4a1示出根据本发明一个具体实施方案的没有中空外壳及粘附物的装置(1)。在图4a1中，装置(1)包括支持体(18)，其上设置有样品施加区(2)、非毛细管区(14)、中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)，其中中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)相互接触。样品施加区(2)由非毛细管区(14)与中间区(6)隔开。固体支持体上的各区沿测试条的纵轴设置，相互紧靠。样品施加区(2)包括位于所述样品施加区(2)一端的反应区(3)。具体而言，样品施加区(2)包括第一吸收膜(12)和处于所述样品施加区(2)的反应区(3)中的缀合物区或垫(13)。中间区(6)包括第二吸收膜(15)。在一个实施方案中，所述缀合物区或垫(13)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在另一个实施方案中，所述第二吸收膜(15)带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在第三实施方案中，所述缀合物垫(13)和所述第二吸收膜(15)都带有一种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。检测区(4)包括含有分析物特异性捕获试剂(7)和对照(参照)捕获试剂(7’)的活性膜(16)。吸收区(5)包括吸收膜(17)。
图4a2示出根据本发明一个具体实施方案的用于进行多路化验的装置(1)。装置(1)包括支持体(18)，其上设置有样品施加区(2)、非毛细管区(14)、中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)，其中中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)相互接触。样品施加区(2)通过非毛细管区(14)与中间区(6)隔开。固体支持体上的各区沿测试条的纵轴设置，相互紧靠。样品施加区(2)包括位于所述样品施加区(2)一端的反应区(3)。具体而言，样品施加区(2)包括第一吸收膜(12)和处于所述样品施加区(2)的反应区(3)中的缀合物区或垫(13)。中间区(6)包括第二吸收膜(15)。在一个实施方案中，所述缀合物区或垫(13)带有两种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在另一个实施方案中，所述第二吸收膜(15)带有两种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在第三实施方案中，所述缀合物区或垫(13)和所述第二吸收膜(15)都带有两种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。检测区(4)包括含有至少两种分析物特异性捕获试剂(71、72)和对照(参照)捕获试剂(7’)的活性膜(16)。吸收区(5)包括吸收膜(17)。粘附物(20)覆盖反应区(3)、非毛细管区(14)和中间区(6)，并且部分地与检测区(4)重叠。第二粘附物(21)覆盖吸收区(5)。
图4a3示出根据本发明一个具体实施方案的用于进行多路化验的装置(1)。装置(1)包括支持体(18)，其上设置有样品施加区(2)、非毛细管区(14)、中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)，其中中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)相互接触。样品施加区(2)由非毛细管区(14)与中间区(6)隔开。固体支持体上的各区沿测试条的纵轴设置，相互紧靠。样品施加区(2)包括位于所述样品施加区(2)一端的反应区(3)。具体而言，样品施加区(2)包括第一吸收膜(12)和所述处于样品施加区(2)的反应区(3)中的缀合物区或垫(13)。中间区(6)包括第二吸收膜(15)。在一个实施方案中，所述缀合物区或垫(13)带有三种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在另一个实施方案中，所述第二吸收膜(15)带有三种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。在第三实施方案中，所述缀合物区或垫(13)和所述第二吸收膜(15)都带有三种或更多种特异性缀合物和/或对照缀合物。检测区(4)包括含有三种分析物特异性捕获试剂(71、72、73)和对照(参照)捕获试剂(7’)的活性膜(16)。吸收区(5)包括吸收膜(17)。装置(1)容纳在外壳(11)中，所述外壳(11)使第一吸收膜(12)的至少部分能够与所述外壳(11)的外部直接连通，使得样品可以通过外壳接收区(10)施加到所述装置(1)。
本发明的装置优选是免疫重力驱动试验装置。在本发明的一个实施方案中，图4b到4e示意性地示出可以在装置(1)上表示结果的方式，即：图4b显示试验之前的装置(1)，其中样品检测区包括一种分析物特异性捕获试剂(7)和对照(参照)捕获试剂(7’)。图4c显示阳性结果，其中在分析物特异性缀合物和所检测的分析物之间形成复合物，并且由此在捕获试剂(7)特异性识别出复合物的样品检测区处产生有色线(8)。对照捕获试剂(7’)和参照缀合物之间的反应产生对照线(9)。图4d显示阴性结果，其中没有检测的分析物，因此也没有有色线(8)，并且对照捕获试剂(7’)和参照缀合物之间的反应产生对照线(9)。图4e显示无效结果，其中对照捕获试剂(7’)和参照缀合物之间没有反应，因此也没有对照线(9)。
在一个优选实施方案中，在使用该装置时，在阳性反应的情况下，即在分析物特异性缀合物和待检测分析物之间形成一种或更多种复合物的情况下，在沉积捕获试剂(7)的检测区(4)处产生特定信号。捕获试剂(7)特异性识别复合物以产生有色线(8)。在一个优选的实施方案中，对照捕获试剂(7’)与参照缀合物之间的反应产生检测区(4)中可见的对照线(9)。
如上所述，根据本发明的实施方案，装置(1)的检测区(4)可以用一种或更多种试剂(分析物特异性捕获试剂)(7)和迁移对照捕获试剂(对照捕获试剂)(7’)来敏化。试剂(7)的目的是直接或间接检测样品中的待检测分析物，而迁移对照捕获试剂(7’)或者针对偶联至直接标记物的抗分析物抗体，或者针对与待检测的分析物无关的特异性缀合物。
捕获试剂(7、7’)和缀合物试剂优选为免疫试剂、寡核苷酸、配体或受体分子或其类似物。捕获试剂(7、7’)和缀合物试剂可以选自下组：寡核苷酸或其类似物、多克隆或单克隆抗体或超变抗体片段、或通过血清化合物如IgG、IgA、IgE和IgM识别的抗原、或像生物素-抗生物素蛋白链菌素那样的配偶对中之一的特异性试剂。
检测标记物优选为直接颗粒标记物，尤其是选自包括缀合的金属胶体、缀合的聚苯乙烯微球、微米或纳米颗粒或具有特定颜色的纳米管和荧光微米或纳米颗粒或荧光纳米管的组的直接标记物。
具体而言，本发明涉及一种由聚合物质构成的重力驱动试验装置(1)，所述聚合物质层叠在由聚合物制成的刚性或半刚性支持体(18)上。在一个具体的实施方案中，刚性固体支持体(18)是塑料背衬，例如塑料。本发明的装置有利地允许检测能够以不同方式在活性膜(16)上反应的不同分析物或其类似物。
在一个具体的实施方案中，样品施加区(2)的膜由玻璃纤维制成，其具有由聚酯或其它基质制成的第一反应区(3)。在一个具体实施方案中，检测区(4)的膜由硝化纤维素制成，中间区(6)的膜由玻璃纤维、聚酯或纤维素制成，而吸收区(5)的膜由纤维素制成。样品施加区(2)和第一反应区(3)可以由相同的材料制成。作为替代方案，可以将缀合物直接浸渍到样品施加区(2)上。
本发明的装置(1)非常适用于检测诸如溶液或生物样品的试验样品中可能存在的几种分析物或其类似物。该分析物或其类似物可以从(有害的)微生物获得或产生，所述(有害的)微生物例如为但不限于小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、鼠弓形体(Toxoplasma gondii)、兰伯贾第虫(Giardia lamblia)、艰难梭菌(C.difficile)、艰难梭菌毒素(C.difficile toxins)、大肠杆菌(E.coli)、痢疾阿米巴(E.histolytica)、RSV(呼吸道合胞病毒)、A型和B型流感病毒、轮状病毒、40 & 41型腺病毒或其它腺病毒组、嗜肺性军团菌(Legionella pneumophila)尿抗原、人和动物源性的冠状病毒和人偏肺病毒。
在本发明的一个优选实施方案中，利用根据本发明的一个装置来检测多于一种的分析物或其类似物。本发明的重力驱动试验装置(1)非常适用于多路检测。例如，可以在同一装置中检测A型流感和B型流感或腺病毒和RSV的存在。其它的例子是轮状病毒和肠腺病毒的检测或小球隐孢子虫、艰难梭菌毒素、兰伯贾第虫和痢疾阿米巴的检测。
本发明的一个具体实施方案涉及一种薄板状免疫重力驱动试验装置(1)，其包括在刚性或半刚性固体支持体(18)上的：任选具有缀合物区或垫(13)的样品施加区(2)、非毛细管区(14)、任选的中间区(6)和可能具有对照分区的检测区(4)，以及任选的吸收区(5)。装置(1)的检测区(4)利用试验试剂(7)来敏化。其还用对照抗体(7’)来敏化。非毛细管区(14)避免了样品施加区和样品检测区之间的任何直接和毛细管接触，而现有技术装置中通常观察到毛细管接触并有记载。
优选地，在样品施加区下部中的第一反应区(3)上干燥缀合物。
在一个具体实施方案中，在检测区(4)中使用抗体。优选地，将对照抗体，尤其是迁移对照抗体(7’)涂覆在检测区(4)的对照区中，所述对照区位于试验区下方，该试验区涂覆有试验抗体、尤其是分析物特异性抗体。如上所述，试验和对照缀合物可以是以下试剂，例如寡核苷酸或其类似物、多克隆或单克隆抗体或例如超变抗体片段、或例如通过血清化合物如IgG、IgA、IgE和IgM识别的抗原、或像生物素-抗生物素蛋白链菌素那样的配偶对中之一的特异性试剂。试验或特异性缀合物的标记物和对照缀合物的标记物可以是直接标记物，尤其是选自缀合的金属胶体、缀合的聚苯乙烯颗粒和具有特异性特定颜色或荧光的微米或纳米颗粒或纳米管的直接标记物。
有利地，本发明装置(1)中存在的对照缀合物不干扰可能存在的分析物或其类似物的检测。有利地，该对照产生与特定信号无关的强度恒定的信号。所述对照可以允许对所检测的分析物或其类似物进行定量或半定量。
根据本发明的薄板状重力驱动试验装置(1)易于使用和操纵，并且在使用中柔性非常好。本发明的重力驱动试验装置(1)允许例如在相同的装置(1)上使用不同种类的颗粒和/或不同种类的样品和/或缀合物垫。因此，本发明提供易于操纵的装置(1)，并且该装置(1)允许对试验样品中的多种分析物进行快速而准确的检测和/或诊断(多路检测)。
本发明的一个具体实施方案涉及一种根据本发明的重力驱动试验装置(1)，其中可以选择孔隙度为8、10、12、15μm等的活性膜(16)。
本发明的另一个实施方案涉及一种重力驱动试验装置(1)，其中活性膜(16)是由具有相似或不同孔隙度的不同材料制成的。例如，活性膜可由纤维素或PredatorTM(Pall)或Porex膜组成。本领域的技术人员知道其它的可能性。用于检测区(4)中的可能的活性膜(16)包括但不限于：纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、玻璃纤维、尼龙、丙烯酸共聚物/尼龙、聚醚砜、聚乙烯和聚酯。
本发明还涉及使用上述重力驱动试验装置之一的检测方法，其可以用来检测分析物或其类似物的存在。可以经过肉眼进行检测和/或在读片器(stripreader)和用于检测和/或量化分析物或其类似物的特定软件程序的帮助下自动进行检测。
本发明的一个具体实施方案涉及一种如上所述的方法，其中在固定试验或分析物特异性捕获试剂(7)(例如试验或分析物特异性抗体)的位置处信号(例如有色信号)的产生或未产生表示存在或不存在分析物或其类似物。
有利地，在固定对照捕获试剂(7’)(例如迁移对照抗体)的位置处产生信号(例如有色信号)表示样品已经移动到根据本发明的(免疫)重力驱动试验装置(1)的活性膜上。
有利地，在固定对照试剂(例如对照抗体)的位置处产生信号(例如有色信号)表示根据本发明的薄板状(免疫)重力驱动试验装置(1)的正确使用和良好状态、干燥缀合物的品质以及捕获反应(例如免疫反应)的完成。
有利地，在对照捕获试剂(迁移和可能的参比对照试剂)(例如对照抗体)的固定位置的信号(例如有色信号)产生与样品中待检测的分析物或其类似物的存在与否无关。
因此，本发明提供用于快速检测分析物或其类似物的新型装置，以及它们在检测试验样品(例如生物样品)中可能存在的(多种)分析物或其类似物中的用途。根据本发明的装置显示出比现有技术装置更好的反应性。具有非毛细管区和重力驱动迁移允许处理各种样品包括培养物上清液、生物流体如鼻咽分泌物、血液、血清、尿、精液、唾液或排泄物。具体而言，本发明的装置允许试验各种类型的样品(例如粪便试样、浆料、胶体等)而不会堵塞。在使用中，本发明装置允许样品快速迁移通过装置，而与样品粘度或复杂性无关。优选的装置包括在支撑聚合物(18)的一个或更多侧面上的样品施加区(2)、非毛细管区(14)、中间区(6)、检测区(4)和吸收区(5)。检测区(4)可以包含几个限定的分区(优选为线)，每个分区专门用于检测一种或更多种特定的分析物、一组分析物或一组特定的分析物产物。其可以包括至少一个对照区。本发明的装置可以是一体式薄板状装置，或者可以由相互接触的几个部件组成。
对于(免疫)色谱装置的原理和不同化合物(例如分析物、缀合物和诸如免疫试剂的捕获试剂)之间的反应，可参照现有技术文献，例如EP 0 088 636、EP 0 186 799、EP 0 284 232和WO88/08534。这些文献的公开内容通过引用全部并入本文。
根据本发明的装置(1)是由多孔聚合物质构成的，该多孔聚合物质优选层叠在刚性或半刚性聚合物(18)的一个或更多个侧面上以提供机械强度，使得本发明的装置(1)易于操纵。聚合物质的孔隙度应该使得流体和其成分能够因重力沿再水合的缀合物从测试条的顶部向底部运动，而不受任何阻碍。这些聚合物的亲水性能也允许这些特性。合适聚合物的例子为纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、玻璃纤维、尼龙、丙烯酸共聚物/尼龙、聚醚砜、聚乙烯和聚酯。
术语“分析物或其类似物”或“分析物”可以互换使用，并涉及生物样品中的待检测分子和其类似物和衍生物(当这些类似物和衍生物以与该分析物自身基本等同的方式结合化验中所用的另一种分子时)。这些分子的非限制性实例包括蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、肽、糖肽、半抗原、多糖、脂多糖、核酸、病毒颗粒、微生物例如细菌、病毒、原生动物和寄生生物的部分、或者任意来源的化合物。
根据本发明的装置(1)尤其可用于检测生物样品中的有害微生物或其化合物，包括但不限于检测小球隐孢子虫的卵囊、兰伯贾第虫胞囊、RSV(呼吸道合胞病毒)、大肠杆菌、艰难梭菌、艰难梭菌毒素、痢疾阿米巴、A型和B型流感病毒、轮状病毒、40 & 41型腺病毒、腺病毒组、嗜肺性军团菌尿抗原、人和动物源性冠状病毒和人偏肺病毒。有利地，该装置可以设计为允许经过单次试验(1)来检测几种这样的分析物或其类似物，和/或允许检测由给定的分析物所产生的超过一种的有害化合物(例如大肠杆菌志贺样毒素I和II)和/或允许检测多种血清化合物，例如病原体感染后产生的IgG、IgA和IgM。
怀疑含有分析物或其类似物的试验样品(优选液体试验样品)可以源自任何生物样品，包括但不限于培养物上清液、鼻咽分泌物、粪便试样、血清等。在施加样品之前，优选将诸如粪便试样的样品悬浮在溶液中，该溶液允许液体迁移通过装置(1)。可以用本发明系统试验的样品包括生物样品例如血液、尿、精液、唾液或排泄物，优选源自人类主体。也可以对源自动物、植物、食品、水、污水和土壤的样品进行试验。
对分析物或其类似物特异的特异性标记试剂用于对样品中可能存在的分析物或其类似物进行检测和/或量化。特异性标记试剂(缀合物)会与各个分析物或其类似物分别形成复合物，然后通过分析物特异性试剂(7)捕获这些复合物。标记试剂可用于与优选吸附到第二多孔区上的对照试剂最后反应。捕获试剂(7、7’)可以是寡核苷酸或其类似物、或多克隆或单克隆抗体、或本领域已知的超变抗体片段、或通过血清化合物如IgG、IgA、IgE和IgM识别的抗原、或像生物素-抗生物素蛋白链菌素那样的配偶对中之一的特异性试剂。优选使用单克隆抗体或其超变片段。一些捕获试剂(7、7’)可以通过基因工程来生产。
标记试剂或检测试剂固定(浸渍)在惰性材料上，该惰性材料可以是玻璃纤维或聚酯或任何其它在物理和化学上惰性的材料，并且具有足够的孔隙度和润湿性以在液体样品到达时允许颗粒运动并允许标记试剂容易且充分地再水合。当液体样品接触这些再水合的检测试剂时，各个分析物会与它们的特异性标记试剂形成复合物，并且这些复合物会与吸附在样品检测区上的特异性试剂反应，同时标记的对照试剂会自由运动到达吸附在对照区上的对照试剂以与其反应。
各种检测系统是本领域中已知的。本领域已知的有色或可见(直接)颗粒标记物包括但不限于由聚苯乙烯(胶乳)聚合物制成的颗粒、金属胶体例如金、碳、脂质体、银、铜等，其可以缀合到通常与待检测分析物反应的结合试剂上。还可以使用荧光检测系统。定量和/或半定量是可能的。
本发明涉及一种利用根据本发明的薄板状重力驱动试验装置(1)来快速并特异性鉴定几种源自生物样品或实验室样品的病原体的方法。
在本发明的一个优选实施方案中，特异性缀合物和对照缀合物包括可见(直接)标记物，该缀合物与对分析物或其类似物特异性的试剂或对照试剂结合(与其缀合)。分析物或其类似物或对照试剂和它们的缀合物之间形成的复合物在重力作用下会移动到中间区(6)，然后遇到检测区(4)的膜(优选为硝化纤维素)并到达涂覆在其上的特异于分析物或其类似物的试剂或对照试剂(7、7’)。由于颗粒会积累并产生可见信号(8、9)，所以将使复合物和分析物或其类似物的试剂或对照试剂(7、7’)之间的反应可见。该信号允许用户特异性识别分析的样品中存在何种分析物或其类似物，并且优选对其在试验样品中存在的量进行定量或半定量(可以通过对照线(9)进行)。
下面，将提供有关根据本发明特定重力驱动试验装置的一般方面和优选组合物以及构造的更多细节。
为了进行重力驱动试验测试，根据本发明一个实施方案的装置(1)优选分成沿纵向并列(并置)的5个区，包括位于装置(1)的一个或更多侧面上的样品施加区(2)、非毛细管区(14)、可能的中间区(6)、检测区(4)和可能的吸收区(5)。
在一个优选的实施方案中，样品施加区(2)的膜是由玻璃纤维或纤维素制成的，并具有由聚酯制成的缀合物垫(13)，中间区(6)的膜是由玻璃纤维或纤维素制成的，检测区(4)的膜是由硝化纤维素制成的，吸收区(5)的膜是由纤维素制成的。在具体的实施方案中，样品施加区(2)和缀合物垫(13)可以由相同的物质或材料制成。然而，还可以将缀合物直接浸渍到样品施加区(2)上。
第一反应区(3)可以被第一吸收膜(12)全部或部分覆盖。吸收膜和缀合物垫可以由相同的物质或材料制成。在该情况下，可以将缀合物直接喷涂到在第一吸收膜(12)中也用来吸收样品液体的聚合物上。
缀合物垫浸渍有涂覆了一些化合物的颗粒以形成分析物特异性缀合物，这些化合物可以包括蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、肽、糖肽、半抗原、多糖、脂多糖、核酸或类似物(PNA、LNA等)。这些化合物会在某处与可能存在于待分析样品中的分析物或其类似物进行特异性反应。合适颗粒的实例包括但不限于胶体金颗粒；胶体硫颗粒；胶体硒颗粒；胶体硫酸钡颗粒；胶体硫酸铁颗粒；金属碘酸盐颗粒；卤化银颗粒；胶体银、胶体钯、胶体铂、胶体铑、二氧化硅颗粒；胶体金属(含水的)氧化物颗粒；胶体金属硫化物颗粒；胶体硒化铅颗粒；胶体硒化镉颗粒；胶体金属磷酸盐颗粒；胶体金属铁酸盐颗粒；碳纳米管；涂有有机或无机层的任何上述胶体颗粒；蛋白质或肽分子；脂质体；有色微粒、有色纳米颗粒、荧光微米和纳米颗粒或有机聚合物聚苯乙烯颗粒。在一个优选的实施方案中，颗粒为胶体金颗粒或聚苯乙烯(胶乳)微球。胶体金颗粒的直径可以为约5到约60纳米。优选地，使用直径为约20到约40纳米的颗粒。可以使用已经由几种化学官能团例如羧基、胺基、羟基和巯基活化的聚苯乙烯(胶乳)微球。在一个优选的实施方案中，使用未活化的和胺活化的聚苯乙烯微球。优选地，使用直径为约20到约1000纳米和优选约150到约350纳米的微球。
为了进行多色检测，使用不同的有色微球(例如，分析物A用红色，分析物B用蓝色，而对照线用绿色)。
在本发明的薄板状重力驱动试验装置(1)中使用的分析物特异性颗粒涂覆有与待检测分析物或其类似物直接或间接特异性结合的化合物。
根据本发明的薄板状重力驱动试验装置(1)的检测区(4)可由纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、玻璃纤维、尼龙、丙烯酸共聚物/尼龙、聚醚砜、聚乙烯和聚酯制成，但是优选由来自Advanced Microdevices Pvt，Ltd.的硝化纤维素制成。还可以使用来自其它供应商(Schleicher & Schuell或Millipore或Porex或Pall或Whatman)的膜。
优选通过在合适的缓冲液中稀释试剂(7、7’)并利用接触系统(例如lmagen Technology的IsoFlow)将其分配到优选为硝化纤维素(16)的膜上来进行涂覆。速度分布可以为从约50mm/s到约10mm/s，但是优选固定到约40mm/s或较好在约30mm/s。分配的材料体积为约0.5至约3μl/cm，优选为约0.7至约2μl/cm，更确切而言为从约1至约2μl/cm。
试剂浓度为从约0.1至约10mg/ml，优选为约0.15至约2mg/ml。在本发明的一个优选实施方案中，用于涂覆的缓冲液由pH约为7.2的磷酸盐缓冲的盐溶液(NaCl)构成。
在本发明的一个实施方案中，本发明的薄板状重力驱动试验装置(1)包括吸收已经输送到硝化纤维素(16)末端的溶液的吸收区(5)。物质的实例包括纤维素和玻璃纤维。已经优选使用了纤维素(MDI)或玻璃纤维(Schleicher & Schuell)。
本发明的薄板状重力驱动试验装置(1)优选还包括优选含有至少一条对照线的对照分区(在其它内部对照和/或迁移对照之中)。迁移对照缀合物不应与特异性缀合物反应，也不应与分析物本身反应，也不应与在待分析样品中可能存在的任何物质反应。优选迁移对照线形成为总是具有相同的强度，并且不依赖于特异性信号及其强度。如上文所述涂覆对照试剂。迁移捕获缀合物或者与特异性缀合物在缀合物垫中混合，或者单独浸渍。
重力驱动试验装置优选竖直(即处于直立位置)安放在固定器、支持体或空试管中。
本文使用的术语“竖直”指的是基本直立的位置。当竖直放置该装置时，本发明中使用的测试条可以与水平面形成45°～135°，优选60°～120°，优选80°～100°的角。含有待检测的分析物或其类似物的液体样品置于装置(1)的顶部并迁移通过第一吸收膜(12)到达缀合物垫(13)并且使两种缀合物(即特异于分析物或其类似物的缀合物和对照缀合物)再次水合。如果存在相关的分析物或其类似物，则会形成几种复合物。它们会到达非毛细管区(14)并在此混合。由于液体靠重力前进，所以它穿过第二吸收膜(15)以经历优选用硝化纤维素制成的活性膜(16)。所述复合物在阳性反应的情况下会产生可见的(例如红色、蓝色、绿色等)线或分区，同时对照缀合物也前进到达并与其涂覆试剂反应产生可见的有色线(绿色)。对照信号除了表明试验已经正常进行之外，在没有特异性反应时也出现。对照信号还可以充当定量的参照。特异性信号和对照信号可以具有相同或不同的颜色。对照缀合物和特异性缀合物的颗粒尺寸可以相同或不同。在根据本发明的一个具体实施方案中，优选为金缀合物的两种(对照和特异性)缀合物浸渍到可以为聚酯或尼龙的固体惰性膜中。优选为聚酯。此处所用的聚酯膜具有27×260mm的尺寸，并且来自Advanced Microdevices Pvt，Ltd(印度)。在进行试验时，用经历特定缓冲液中稀释步骤之后的优选金缀合物浸渍所述膜以提供利用液体样品的最佳再水合。Schleicher& Schuell的AccuFlow G膜也可用于该目的，并且缀合物可有利地直接喷涂到吸收膜上。
在根据本发明的另一个具体实施方案中，优选为聚苯乙烯有色微球的两种(对照和特异性)缀合物浸入到可为聚酯或玻璃纤维的固体惰性膜上。优选为玻璃纤维。此处所用的玻璃纤维膜具有27×260mm的尺寸，并且来自Whatman。
当使用Advanced Microdevices Pvt的聚酯膜时，可以通过浸入适当的小瓶中来浸渍膜，该小瓶具有1.6ml的有限体积，但是可以根据所用的浸渍系统减小至1.3ml。膜在室温下干燥过夜。然后将其在约55℃的烘箱中干燥约20分钟。干燥后，将膜存放在最大相对湿度为10％的具有干燥剂的专用箱中。将膜(称为缀合物垫(13))切成宽约5mm的片，并粘到如图1、2和3中示出的叠层的第一粘合部上。为了达到特定用途所期望的最大可检测性，这些膜的位置很重要。然后，将玻璃纤维制成的吸收纸或任何其它吸收物质粘到测试条的上粘合部上，前提是它们通过重叠或边对边地与含有缀合物的聚酯膜相接触，以允许液体再水合缀合物并使缀合物与样品中存在的分析物或其类似物反应。
当使用AccuFlow G或Standard 14或膜8964
Figure S200680046016XD00241
的膜时，缀合物喷涂有lmagen Technology的IsoFlow AtomizingNozzle系统。在该情况下，在1～20磅/平方英寸的压力下以50mm/s的速度喷涂缀合物，喷涂量为0.8μl/mm～3.0μL/mm。膜在室温下干燥过夜。然后将其在约55℃的烘箱中干燥约10分钟。干燥后，将膜存放在最大相对湿度为10％的具有干燥剂的专用箱中。将这些膜(称为缀合物垫(13))切成宽约5～10mm的片或不切成片，并粘到如图1、2和3中示出的叠层的上粘合部上。为了达到特定用途所期望的最大可检测性，这些膜的位置很重要。然后将玻璃纤维制成的吸收纸(Whatman的Fusion 5)或任何其它吸收物质粘到测试条的上粘合部上，前提是它们边对边地接触含有缀合物的聚酯膜或通过部分或完全覆盖含有缀合物的膜，以允许液体使缀合物再水合并使缀合物与样品中存在的分析物或其类似物反应。
一些试验需要进行定量以知晓例如抗原的浓度或血清对例如待检测抗原的响应是否高于或低于规定的截止水平。这可以通过比较检测线(特异性线(8))的强度和强度恒定或渐变的一条或几条对照线(9)的强度来完成。以该方式获得的参比刻度由它们之间的强度不同的几条线构成，但是对于它们之一则是恒定的和可再现的。由此优选在预定浓度下干燥每种缀合物以获得恒定的强度。试验线信号的强度会与例如抗原的浓度成比例，至少在包括截止水平的期望预定浓度范围内是如此。
本发明还包括引入根据本发明装置的试剂盒，包装并入所述装置、组合外壳、固定器和用于支持所述装置的设备。所述支持设备也称为支持构件，指的是可以起到将根据本发明的重力驱动试验装置保持在基本竖直位置并且使样品施加区位于所述装置顶端的作用的材料。用作支持设备的材料包括但不限于玻璃、塑料等。
在本发明的另一方面，提供用于检测样品中至少一种分析物或其类似物的试验试剂盒。这些试验试剂盒可以包括分别包装的或一起包装的根据本发明的薄板状重力驱动试验装置和任选的用于处理或提取样品的任何附加试剂。
本文使用的术语“试剂盒”指的是可用于实施本发明方法的试剂或装置的任意组合。本发明的试剂盒还可以包括任何附加的试剂、缓冲液、赋型剂、容器和/或如本文中描述所需要的或本领域已知的装置来实施本发明的方法。其它的试剂盒元件可以包括用于包装一个或更多个装置元件的容器、包装材料、供装置使用的水溶液等。上述装置可以包装并作为用于检测分析物的试剂盒出售。实际上，上述独立成套(self-contained)且便于使用的装置自身也是试剂盒。
通常还包括一组用于指导用户使用根据本发明装置或方法的使用说明。
在另一方面中，本发明提供用于检测样品中至少一种分析物的分析物检测方法，其包括使试验装置接触样品，允许样品在重力作用下从所述装置的顶部移到底部，和检测所述分析物或其类似物。在本发明的一个具体实施方案中，分析物检测方法包括以下步骤：竖直放置(即放置在基本垂直的位置)试验装置，将样品施加到装置顶部，使样品迁移通过装置，由此允许所述样品中的分析物与捕获试剂反应并产生可检测的信号，由此检测所述分析物。
本文使用的术语“试验装置”包括根据本发明的重力驱动试验装置以及测试条、试纸条、诊断条(diagnostic strip)、流式装置和侧流式装置等。测试条、试纸条、流式装置和侧流式装置是常规形式的；因此，本领域的技术人员会非常熟悉这类测试条的设计，在此将不再详细地对其进行描述。然而，每个测试条、试纸条、流式装置和侧流式装置会具有优选相互毛细管连通的用于结合分析物(以表示分析物样品中存在分析物的阳性试验结果)的试验区和用于结合示踪剂(以表示试验的正确运行)的对照区。
本发明方法由此包括在基本竖直的位置使用该试验装置，其中样品施加区在所述装置的顶部，使得在施加样品时，样品从装置的顶部迁移到底部。出人意料地，即使是对于通常由于堵塞和粘度而难以移动的样品，与在装置底部施加样品并允许样品通过毛细管作用从装置底部移动到顶部的现有技术方法相比，本发明方法也允许所述样品迁移得更快且更容易。
在另一方面，本发明涉及一种适用于包装试验装置的制造或包装制品，其包括在包装上的或与包装相关的指明其内含物的标签，和含有使用说明的包装插入物。优选试验装置选自下组，包括根据本发明的重力驱动试验装置、测试条、试纸条、流式装置和侧流式装置等。优选地，每个测试条的试验区和对照区位于各测试条上的相同位置处，使得可以以并列的方式查看各个测试条。根据本发明的包装提供快速存取、单元试验装置计量性和对试验装置更好的物理保护。
图5、6和7示出适用于重力驱动试验和/或免疫色谱和寡核苷酸色谱(oligochromatography)试验装置(34)的包装(30)的不同实施方案。
参照图5a，根据本发明的包装(30)由用于容纳一个或更多个试验装置(34)的固定器(31)组成。固定器(31)可以至少部分用盖板(32)封闭。任选地，固定器(31)的部分另外用可剥去的活动盖板(33)封闭，所述活动盖板(33)优选与盖板(32)的部分重叠。图5b以分解图示出根据本发明一个实施方案的包装。根据本发明的包装(30)由包括用于容纳一个或更多个测试条(34)的一个或更多个小室(311)的固定器(31)组成。优选所述小室(311)是热成型的。各个小室通过凸起的隔离物与固定器(31)中的相邻小室隔开。小室(311)通常为矩形形式，优选其宽度比试验装置(34)的宽度略窄。在一个实施方案中，可以沿凸起的隔离物的长度方向使其削弱(例如预切)以能够将每个小室彼此拆开。相应地，封在固定器上的盖板和活动盖板还可以配有对应的预切割线，用于断开包括一个装置的组合包装。
所述固定器(31)优选由选自单金属层、多金属层、单塑料层、多塑料层以及金属和塑料复合层的不透水固体材料制成，而盖板(32)和/或(33)是选自单金属层、多金属层、金属和塑料复合层、金属和纸复合层以及金属、塑料和纸复合层的薄板。所述固定器(31)优选由塑料材料制成。
参照图6，包装(30)由包括用于容纳一个或更多个实验装置(34)的一个或更多个小室(311)的固定器(31)组成，其中所述小室的一端包括样品存放区(312)，其可以与具有样品施加区的试验装置(34)的一端直接连通，使得可以将样品通过样品存放区(312)施加到所述试验装置(34)。
固定器由盖板(32)和任选部分重叠所述第一盖板(32)的活动盖板(33)部分封闭。图7b示出根据本发明一个实施方案的包装(30)的后视图，其中固定器(31)任选配有并置在试验装置(34)至少部分上方的观察窗(35)，使得包含在所述试验装置(34)中的至少检测区(4)与固定器(31)的外部视觉连通。作为替代方案，与试验装置(34)检测区重叠的固定器(31)的部分是透明的，以允许在视觉上观察待检查的每个区中显示的结果。作为替代方案，盖板(32)是透明的，以允许在视觉上观察待检查的每个区中显示的结果。
试验装置(34)可以通过粘附到每个小室的底板上来固定到小室(311)内；然而，将盖板(32)放置到固定器(31)上已足以将试验装置(34)保持在小室(311)中。为此，盖板(32)和/或活动盖板(33)可以方便地由不透明带构成，其中沿样品检测区形成至少一个用于查看试验结果的透明窗。为了将盖板(32)固定到固定器(31)上以及将试验装置(34)固定到小室(311)内，将盖板(32)压入一定位置以在盖(32)和固定器(31)的横栏上缘之间形成粘附性连接。方便地，盖(32)和/或活动盖板(33)还配有透明的窗，通过该窗，可以看到试验装置(34)上的标签。该标签(未图示)可以印有试验中所用的信息，例如可用各试验装置检测的分析物的特性。
根据本发明的包装尤其适用于实施根据本发明的检测方法，其中在将样品施加到试验装置的样品施加区上之后，竖直放置所述试验装置，使得样品施加区在所述装置的顶端，并且其中允许样品在重力作用下迁移通过所述装置。例如，可以竖直放置包装以竖直放置试验装置。为此，包装可以包括额外的支持设备，用于将所述包装保持在基本竖直的位置。
在使用中，优选将包括一个或更多个试验装置(34)的包装(30)安放在竖直位置，其中活动盖板(33)位于所述包装(30)的顶端。然后可以移去活动盖板(33)以露出各自包括样品存放区(312)和装置(34)的一个或更多个小室(311)。含有待检测分析物或其类似物的液体样品置于装置(34)的顶部，并迁移通过用于结合分析物的试验区和用于结合示踪物并产生可检测信号的对照区，由此检测所述分析物。
本发明通过以下实施例进一步举例说明，但是这些实施例并不以任何方式来限制本发明。
实施例
实施例1：检测轮状病毒和40/41型肠腺病毒(组F，株40 & 41)。制备聚苯乙烯微球
在特定的洗涤缓冲液(Coris BioConcept)中洗涤聚苯乙烯微球(Estapor)。然后在13000转/分下将微球离心5～10分钟以回收1ml体积。然后将小球重新悬浮在活化缓冲液中并搅拌1小时。然后悬浮体在所述洗涤缓冲液中洗涤两次，在最终离心之后最终重新悬浮在偶联缓冲液中。
将抗体偶联到未活化和氨基活化的聚苯乙烯微球：
基本按制造商提供的方案将试剂偶联到聚苯乙烯微球。
利用针对A组轮状病毒抗原的小鼠单克隆抗体以及蓝色NH2-聚苯乙烯微球来进行第一次偶联。
利用针对肠腺病毒(40和41型)的小鼠单克隆抗体以及未活化的红色聚苯乙烯微球来进行第二次偶联。
利用具有天然鸡IgY的未活化绿色聚苯乙烯微球来进行第三次偶联。
免疫重力驱动试验装置：
本实施例的薄板状免疫重力驱动试验装置(1)由塑料背板固体支持体(MDI)(2)构成，其上具有由Fusion 5(Whatman)构成的样品施加区(2)(该样品施加区覆盖由含有所述三种缀合物的Standard 14(Whatman)构成的缀合物垫(13))、非毛细管区(14)、由GFBR-1(MDI)构成的中间区(6)、由硝化纤维素(MDI)制成的检测区(4)和由纤维素(MDI)制成的吸收区(5)。
用三种试剂敏化硝化纤维素膜。所遇到的第一试剂是针对腺病毒的单克隆抗体，位于检测区(4)的活性膜(16)的上部。这被定义为“Ad40/41试验线”。样品遇到的第二试剂是针对轮状病毒的豚鼠多克隆抗体，位于样品检测区中的活性膜的中部。这被定义为“Rota试验线”。第三试剂是抗鸡IgY多克隆抗体，位于检测区(4)的活性膜(16)的下部。这被定义为迁移对照线。使用三种缀合物：缀合至蓝色NH2-聚苯乙烯微球的针对轮状病毒的单克隆抗体，缀合至红色聚苯乙烯微球的针对肠腺病毒(40和41型)的单克隆抗体和缀合至绿色聚苯乙烯微球的鸡IgY多克隆抗体。这三种缀合物的混合物被置于该装置的样品施加区的第一反应区(3)(Whatman的Standard 14)中。该膜被第一吸收膜(12)(Whatman的Fusion 5)全部覆盖。
中间区由与活性膜(16)重叠1mm的GFBR-1(MDI)膜构成。
粘附物可以覆盖所有三个第一区，即样品施加区、非毛细管区(提供液体通过重力在其中会自由移动的空间)、和中间区。其粘附在活性区(16)上2mm。
实施试验
通过将本发明的免疫重力驱动试验装置放在试管中来竖直地进行试验，其中样品施加区在顶部。
在样品缓冲液中稀释含有轮状病毒或肠腺病毒(40或41型)的样品。吸取100～250μL该溶液并置于样品施加区上的装置顶部。
通过在样品检测区的上部区中出现的红线(Ad 40/41试验线)将检测到肠腺病毒(40或41型)的存在，而通过在检测区的中部区中出现的蓝线(Rota试验线)将检测到轮状病毒的存在。鸡的绿色聚苯乙烯缀合物的迁移将与涂覆的抗鸡IgY反应，产生绿色的迁移对照线。试验进行10分钟。
在所有的情况下，迁移对照线出现，表明样品已经从免疫重力驱动试验装置(1)的顶部移动到了底部。
实施例2：检测嗜肺性军团菌尿抗原
制备胶体金颗粒
约40nm的胶体金颗粒购自商业来源(Diagam)。
偶联抗体至胶体金颗粒：
将抗体偶联至胶体金颗粒是本领域公知的。在本实施例中，使用纯化的针对嗜肺性军团菌尿抗原的兔抗体。用碳酸钾溶液对胶体金颗粒悬浮液进行缓冲处理以获得期望的pH，然后胶体金颗粒悬浮液与纯化的多血清(polyserum)反应。该pH是预定的，对于各种免疫试剂而言可以不同。待用于偶联反应的纯化多血清的稀释度在预备实验中确定。
在该预备实验中，将增加稀释度的多血清与缓冲的胶体金颗粒反应三分钟，然后加入氯化钠来达到约1％的最终浓度。记录在630nm处的吸光度。选择吸光度等于或近似于利用稀释度较低的多血清获得的吸光度的最高多血清稀释度作为用于将试剂偶联至胶体金颗粒的参比稀释度。
对于偶联本身，使选定稀释度的多血清和缓冲的胶体金颗粒反应三分钟。然后使此所谓的缀合物饱和，并通过离心和再悬浮而洗涤几次以除去任何未缀合的抗体，并最终悬浮在保存缓冲液中。
使用由纯化的鸡IgY多克隆抗体制成的第二缀合物作为对照缀合物，并且根据如上文所述相同的方案进行偶联。
免疫重力驱动试验装置
本实施例的薄板状免疫重力驱动试验装置(1)由其上具有施加区、非毛细管区、中间区、检测区和吸收区的塑料背板固体支持体(MDI)(18)构成。
样品施加区(2)由AccuflowG(Whatman-Schleicher &Schuell)构成，中间区(6)由GFBR-1(MDI)构成，检测区(4)由硝化纤维素(MDI)制成，其优选具有但不限于10μm的空隙，而吸收区(5)由纤维素(MDI)制成。
利用两种试剂来敏化硝化纤维素膜。第一试剂是针对嗜肺性军团菌尿抗原的纯化兔多血清试剂，位于检测区(4)的活性膜(16)的上部。这被定义为“Lp试验线”。第二试剂是纯化的兔多血清抗鸡IgY，会与偶联至胶体金颗粒的鸡IgY多克隆抗体反应。其位于检测区(4)的活性膜(16)的下部区中。这被定义为“迁移对照线”。特异性嗜肺性军团菌尿抗原缀合物和鸡IgY对照缀合物都浸溃在样品施加区(2)的AccuflowG(Whatman-Schleicher & Schuell)中。在一个优选的实施方案中，将稀释缓冲液喷涂到AccuFlow G膜的顶部，产生不需液体缓冲液的试验。
实施试验
本试验的目的是利用本发明的免疫重力驱动试验装置(1)来检测嗜肺性军团菌尿抗原。其实施类似于第一实施例中所述。
在特定缓冲液中以3V/V的比例稀释含有嗜肺性军团菌抗原的尿样。将本发明的免疫重力驱动试验装置(1)放在试管中，样品施加区在顶部。当特定稀释缓冲液已经浸渍到AccuFlow G样品膜上时，将尿样直接放到施加区。
吸取100～250μl的该溶液并置于装置顶部的样品施加区上。
试验显示具有特异性：随含有嗜肺性军团菌抗原的样品出现“Lp试验线”，并且其强度随样品稀释度的增加而降低。
同样，在所有的情况下都出现“对照线”，即使在样品对尿抗原呈阴性时也具有相同的强度。试验进行15分钟。

Claims (33)

1.一种用于检测样品中至少一种分析物的用于非诊断目的的分析物检测方法，其包括以下步骤：竖直放置试验装置，使所述的试验装置接触样品，允许所述样品通过重力从所述装置的顶部向底部移动通过所述装置的非毛细管区(14)，以及检测所述分析物，其中所述试验装置包括在固体支持体(18)的一个或更多侧面上从所述装置的顶部向底部布置的如下所述(a)、(c)和(b)，其中： 
(a)第一毛细管区，其包括样品施加区(2)，其中所述样品施加区(2)包括具有用于检测所述至少一种分析物的直接或间接标记的至少一种分析物特异性缀合物； 
(b)第二毛细管区，其包括检测区(4)；所述检测区(4)包括特异性识别所述至少一种分析物的至少一种捕获试剂；和 
(c)非毛细管区(14)，其将所述第一毛细管区的所述样品施加区(2)与所述第二毛细管区的所述检测区(4)隔开， 
其中所述样品施加区(2)、所述非毛细管区(14)和所述检测区(4)经布置使得当使用所述装置时，样品可以仅通过重力从所述样品施加区(2)流到所述检测区(4)。 
2.根据权利要求1的分析物检测方法，其中 
第二毛细管区还包括紧靠所述检测区(4)布置的中间区(6)， 
非毛细管区(14)将所述第一毛细管区的所述样品施加区(2)与所述中间区(6)隔开， 
其中所述样品施加区(2)、所述非毛细管区(14)和所述中间区(6)经布置使得当使用所述装置时，样品可以仅通过重力从所述样品施加区(2)流到所述中间区(6)。 
3.根据权利要求1的分析物检测方法，其中第二毛细管区还包括紧靠所述检测区(4)布置的吸收区(5)。 
4.根据权利要求1的分析物检测方法，其中所述检测区(4)还包括 对照分区。 
5.根据权利要求1所述的分析物检测方法，其包括使所述装置上的样品施加区接触样品，允许所述样品通过毛细管作用迁移通过所述样品施加区到达非毛细管区，允许所述样品在重力作用下迁移通过所述非毛细管区到达检测区，和允许所述样品通过毛细管作用迁移通过所述检测区并检测所述分析物。 
6.根据权利要求2所述的分析物检测方法，包括以下步骤： 
竖直放置所述试验装置， 
将样品施加到所述装置顶部， 
使所述样品迁移通过所述样品施加区(2)并使所述至少一种分析物特异性缀合物水合， 
使所述样品中的至少一种分析物与所述至少一种分析物特异性缀合物反应，由此形成至少一种复合物， 
使所述至少一种复合物到达所述非毛细管区，以通过重力穿过所述非毛细管区来接触和迁移通过所述中间区(6)并通过所述检测区(4)，由此与所述至少一种捕获试剂反应，和 
产生检测信号，从而检测所述至少一种分析物。 
7.根据权利要求1～6中任一项所述的分析物检测方法，其中所述分析物来自选自包括下列的微生物：小球隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)、鼠弓形体(Toxoplasma gondii)、兰伯贾第虫(Giardia lamblia)、大肠杆菌(E.coli)、痢疾阿米巴(E.histolytica)、艰难梭菌(C.difficile)、呼吸道合胞病毒、A型和B型流感病毒、轮状病毒、40&41型腺病毒或其它腺病毒组、嗜肺性军团菌(Legionella pneumophila)、人和动物源性的冠状病毒和人偏肺病毒(Human Metapneumoviruses)。 
8.根据权利要求7所述的分析物检测方法，其中所述分析物来自有害 微生物。 
9.根据权利要求1～6中任一项所述的分析物检测方法，其中所述捕获试剂选自下组：寡核苷酸或其类似物、多克隆或单克隆抗体或超变抗体片段或通过血清化合物识别的抗原或生物素-抗生物素蛋白链菌素中之一的特异性试剂。 
10.根据权利要求9的分析物检测方法，其中所述血清化合物选自IgG、IgA、IgE和IgM。 
11.根据权利要求1～6中任一项所述的分析物检测方法，其中所述样品施加区(2)还包括至少一种对照缀合物。 
12.根据权利要求1～6中任一项所述的分析物检测方法，其中所述检测区(4)包括具有特异性识别所述施加区(2)中所述对照缀合物的至少一种对照捕获试剂(7’)的至少一种对照试验线。 
13.根据权利要求1～6中任一项所述的分析物检测方法，其中所述分析物特异性缀合物包括标记物，所述标记物选自包括缀合的金属胶体、缀合的聚苯乙烯微球、碳纳米管和具有特定颜色的微米或纳米颗粒和荧光微米或纳米颗粒的组。 
14.根据权利要求11的分析物检测方法，其中所述对照缀合物包括标记物，所述标记物选自包括缀合的金属胶体、缀合的聚苯乙烯微球、碳纳米管和具有特定颜色的微米或纳米颗粒和荧光微米或纳米颗粒的组。 
15.根据权利要求1～6中任一项所述的分析物检测方法，其中所述检测区(4)包括由硝化纤维素制成的活性膜(16)。 
16.根据权利要求2～6中任一项所述的分析物检测方法，其中所述中间区(6)包括吸收膜(15)。 
17.根据权利要求2～6中任一项所述的分析物检测方法，其中粘附物(20)覆盖所述样品施加区(2)、所述非毛细管区(14)和所述中 间区(6)，并且与所述检测区(4)部分重叠。 
18.根据权利要求1～6中任一项所述的分析物检测方法，其中所述装置设置在中空外壳或热模制外壳中或嵌入聚合物中。 
19.根据权利要求2的分析物检测方法，其中第二毛细管区还包括紧靠所述检测区(4)布置的吸收区(5)。 
20.根据权利要求2的分析物检测方法，其中所述检测区(4)还包括对照分区。 
21.根据权利要求2所述的分析物检测方法，其包括使所述装置上的样品施加区接触样品，允许所述样品通过毛细管作用迁移通过所述样品施加区到达非毛细管区，允许所述样品在重力作用下迁移通过所述非毛细管区到达检测区，和允许所述样品通过毛细管作用迁移通过所述检测区并检测所述分析物。 
22.根据权利要求19-21中任一项所述的分析物检测方法，其中所述分析物来自选自包括下列的微生物：小球隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)、鼠弓形体(Toxoplasma gondii)、兰伯贾第虫(Giardia lamblia)、大肠杆菌(E.coli)、痢疾阿米巴(E.histolytica)、艰难梭菌(C.difficile)、呼吸道合胞病毒、A型和B型流感病毒、轮状病毒、40&41型腺病毒或其它腺病毒组、嗜肺性军团菌(Legionella pneumophila)、人和动物源性的冠状病毒和人偏肺病毒(Human Metapneumoviruses)。 
23.根据权利要求22所述的分析物检测方法，其中所述分析物来自有害微生物。 
24.根据权利要求19-21中任一项所述的分析物检测方法，其中所述捕获试剂选自下组：寡核苷酸或其类似物、多克隆或单克隆抗体或超变抗体片段或通过血清化合物识别的抗原或生物素-抗生物素蛋白链菌素中之一的特异性试剂。 
25.根据权利要求24的分析物检测方法，其中所述血清化合物选自 IgG、IgA、IgE和IgM。 
26.根据权利要求19-21中任一项所述的分析物检测方法，其中所述样品施加区(2)还包括至少一种对照缀合物。 
27.根据权利要求19-21中任一项所述的分析物检测方法，其中所述检测区(4)包括具有特异性识别所述施加区(2)中所述对照缀合物的至少一种对照捕获试剂(7’)的至少一种对照试验线。 
28.根据权利要求19-21中任一项所述的分析物检测方法，其中所述分析物特异性缀合物包括标记物，所述标记物选自包括缀合的金属胶体、缀合的聚苯乙烯微球、碳纳米管和具有特定颜色的微米或纳米颗粒和荧光微米或纳米颗粒的组。 
29.根据权利要求26的分析物检测方法，其中所述对照缀合物包括标记物，所述标记物选自包括缀合的金属胶体、缀合的聚苯乙烯微球、碳纳米管和具有特定颜色的微米或纳米颗粒和荧光微米或纳米颗粒的组。 
30.根据权利要求19-21中任一项所述的分析物检测方法，其中所述检测区(4)包括由硝化纤维素制成的活性膜(16)。 
31.根据权利要求19-21中任一项所述的分析物检测方法，其中所述中间区(6)包括吸收膜(15)。 
32.根据权利要求19-21中任一项所述的分析物检测方法，其中粘附物(20)覆盖所述样品施加区(2)、所述非毛细管区(14)和所述中间区(6)，并且与所述检测区(4)部分重叠。 
33.根据权利要求19-21中任一项所述的分析物检测方法，其中所述装置设置在中空外壳或热模制外壳中或嵌入聚合物中。 
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