CN101316509B

CN101316509B - 化合物及其相应的控制植物病原体的用途

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Publication number: CN101316509B
Application number: CN2006800443840A
Authority: CN
Inventors: L·菲里皮尼; M·古斯莫罗利; S·莫米尔; G·瓦利亚; L·米兰纳; M·G·库鲁奇; F·阿庞纳
Original assignee: Isagro Ricerca SRL
Current assignee: Isagro Ricerca SRL
Priority date: 2005-10-17
Filing date: 2006-10-10
Publication date: 2011-11-09
Anticipated expiration: 2026-10-10
Also published as: ITMI20051957A1; CN101316509A

Abstract

具有通式(I)的甜菜碱型的两性离子结构的两性化合物及其控制植物病原体真菌或细菌和/或缓和非生物压力和生物压力的用途。

Description

化合物及其相应的控制植物病原体的用途

本发明涉及化合物及其相应的控制植物病原体的用途。

两性表面活性剂，例如烷基甜菜碱、烷基酰胺烷基甜菜碱、羟基磺酸基甜菜碱，是因其发泡(foaming)、粘性(viscosizing)、抗静电、软化特性而众所周知的化合物，并且由于它们与其它表面活性剂优秀的亲和力和固有的对皮肤和眼睛低刺激能力，其被广泛地用于清洁剂和化妆品。

还已知上述两性表面活性剂能够被用作农用药物配方中的组分，例如WO-A-97/47196和EP-B-0597488中和许多其它的专利中所描述的那样。

而且EP-A2-1542023要求保护两性表面活性剂作为已经上市的农用药物的“生物活性剂”的用途，在适当的农业应用中。特别是，其与一种除草化合物例如草甘膦混合改善了其生物活性。应该指出，“生物活性剂”的效果在增强植物组织或病原体表面内部的农用化学活性成分(除草剂、杀真菌剂、杀虫剂、杀螨剂……)的可吸收性，或者增强用于所关心的生物体的农用化学活性成分的有效性方面发挥了作用。

因此，EP-A2-1542023中描述的组合物允许减少由此加入的活性成分的应用浓度。

在EP-A2-1542023中，根据制剂组分的合理的作用(logicalrole)，两性表面活性剂仅仅作为有效组分的载体与其简单混合。清楚地排除了上述表面活性剂的生物活性。

而且，在农业领域，已知当给果树施用甘氨酸甜菜碱(glycinebetaine)时，其有助于控制非生物的和营养生长压力(nutritionalgrowth stress)、减少果皮的不完整性和成熟时果皮破裂(break)的趋势，如EP-A-0806897中所描述的，作为一种渗透调节剂起作用。

申请人现已令人吃惊地发现各种各样的两性化合物，它们在农业领域作为杀真菌和杀细菌产品具有令人惊讶的活性并且它们还使植物获得对于植物病原真菌和细菌的延长的保护作用。

因此，本发明的目的是提供一种两性化合物，其特征在于其具有通式(I)的甜菜碱(betainic)型的两性离子结构：

其中：

-R₁表示任选取代的直链或者支链的C₁-C₂₆烷基；任选取代的直链或支链C₁-C₂₆卤代烷基；任选取代的直链或者支链的C₁-C₂₆烷氧基；任选取代的直链或者支链的C₁-C₂₆烷硫基；任选取代的直链或者支链的C₂-C₂₆烯基；任选取代的直链或者支链的C₂-C₂₆炔基；任选稠合的C₃-C₃₀环烷基或者任选取代的甾类稠合C₁₇环烷基；任选稠合和任选取代的C₃-C₃₀环烷氧基；任选取代的杂环基；任选取代的芳基；任选取代的杂芳基；任选取代的直链或环状C₆-C₁₂糖类基团；C₁-C₂₆烷基胺基或n不为0时任选取代的C₂-C₂₆二烷基胺基；

-R₂和R₃，相同或不同，表示任选取代的C₁-C₃烷基；

-R₄和R₅，相同或不同，表示氢原子，或者任选取代的直链或者支链的C₁-C₆烷基；任选取代的直链或者支链C₂-C₆烯基；任选取代的C₃-C₆环烷基；羟基；任选取代的芳基；任选取代的杂芳基；任选取代的杂环基；

R₄和R₅可以独立的与R₂基团一起成环；

-X表示氮原子或者硫原子；

-Z表示碳原子或者硫原子；

-m表示1至5范围的数；

-n和p表示0至3范围的数；

-X＝硫时q为0或者X＝氮时q为1；

-Z＝碳时s为1或者Z＝硫时s为2。

申请人还发现通式(I)化合物，除了具有直接的杀真菌作用和杀细菌作用之外，还能够刺激植物的天然防御系统并且诱导植物本身的抗病性；这些控制疾病以及缓和非生物压力(温度、盐度、干旱，等等)和生物压力的方法，将变得越来越受关注，因为这种方法基于通过这些化合物的使用而增强已经存在于植物中的天然防御过程。

申请人还令人惊讶地发现，这些通式(I)化合物还代表在转基因的植物品种中通过增强原始天然防御来控制植物病原体的最佳形式。

因此，本发明的另一个目的是具有通式(I)的甜菜碱型的两性离子结构的两性化合物的控制植物病原体真菌或细菌和/或缓和非生物压力和生物压力的用途：

其中：

-R₂和R₃，相同或不同，表示任选取代的C₁-C₃烷基；

R₄和R₅可以独立的与R₂基团一起成环；

-X表示氮原子或者硫原子；

-Z表示碳原子或者硫原子；

-m表示1至5范围的数；

-n和p表示0至3范围的数；

-X＝硫时q为0或者X＝氮时q为1；

-Z＝碳时s为1或者Z＝硫时s为2。

而且，本发明的目的涉及具有通式(I)甜菜碱型两性离子的结构的两性化合物刺激植物对于非生物压力和生物压力的天然防御系统和诱导植物本身的抗病性的用途。

特别是，通式(I)化合物控制植物病原体真菌的用途为治疗性的和/或预防性的。

而且，所述控制植物病原体的用途对于转基因的蔬菜品种也是有效的。

本发明进一步的目的还涉及所述通式(I)化合物控制还在非生命底物上的真菌病害的用途，所述非生命底物例如塑料材料、金属、纺织纤维、玻璃、木材、纸、泡沫材料、砖等等。可以通过本领域熟知的方法将所述化合物应用到底物的表面，例如喷雾、涂抹、浸泡、浸渍等等，应用剂量取决于材料的种类和底物经受的状况。

C₁-C₂₆烷基指的是直链或支链C₁-C₂₆烷基，任选被一个或多个相同或不同的取代基取代。

该基团的例子是：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、辛基、十二烷基、十八烷基、二十烷基、二十六烷基。

C₁-C₂₆卤代烷基指的是直链或支链烷基，被一个或多个相同或不同的卤素原子所取代。

该基团的例子是：氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、2，2，2-三氟乙基、2，2，2-三氯乙基、2，2，3，3-四氟丙基、2，2，3，3，3-五氟丙基、全氟辛基、全氟十二烷基。

C₁-C₂₆烷氧基指的是C₁-C₂₆烷氧基，其中脂肪族部分为如前面所定义的C₁-C₂₆烷基。

该基团的例子是：甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基甲氧基、十二烷氧基。

C₁-C₂₆硫代烷基指的是C₁-C₂₆硫代烷基，其中脂肪族部分为如前面所定义的C₁-C₂₆烷基。

该基团的例子为硫代甲基、硫代乙基、硫代十二烷基、硫代辛基。

C₂-C₂₆烯基指的是直链或支链C₂-C₂₆烯基，任选被一个或多个相同或不同的取代基所取代。

该基团的例子是：乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-癸烯基、8-十七碳烯基、8，11，14-十七碳三烯基(heptadecatrienyl)、8，11-十七碳二烯基(heptadecadienyl)。

C₂-C₂₆炔基指的是直链或支链C₂-C₂₆炔基，任选被一个或多个相同或不同的取代基所取代。

该基团的例子是：乙炔基、炔丙基、1-十二碳炔基(dodecinyl)、1-十八碳炔基。

任选稠合的C₃-C₃₀环烷基指的是含有3-30个环碳原子的环烷基，任选被一个或多个相同或不同的取代基所取代。

该基团的例子是：环丙基、2，2-二氯环丙基、环丁基、环戊基、环己基、十氢化萘、松香基。

甾类稠合C₁₇环烷基指的是含有17个碳原子的甾类基团，任选被一个或多个相同或不同的取代基取代。

该基团的例子是：胆甾烷基、或鹅脱氧胆甾烷基、或熊去氧胆甾烷基、或脱氧胆甾烷基、或碘脱氧胆甾烷基(iodeoxycholanyl)、或石胆甾烷基(lithocholanyl)。

C₃-C₃₀环烷氧基指的是脂肪族部分为如上定义的C₃-C₃₀环烷基的C₃-C₃₀烷氧基。

该基团的例子是：环戊氧基、环己氧基、胆甾烯基。

C₁-C₂₆烷基胺或C₂-C₂₆二烷基胺基团指的是脂肪族部分分别为如上定义的C₁-C₂₆或两个C₁-C₁₃烷基的烷基胺或二烷基胺基团。

该基团的例子是：甲胺、二甲胺、乙胺、异丙胺、二丁胺、二辛胺、十六烷基胺、十二烷胺。

芳基指的是任选被一个或多个相同或不同基团取代的碳环芳香基。

该基团的例子是：苯基、萘基、菲基。

杂芳基指的是五元或六元杂环芳基、以及苯并稠合的该杂环芳基或者该杂环芳基构成的杂二环芳基，其含有1至4个选自氮、氧、硫的杂原子，任选被一个过多个相同或不同的基团所取代。

杂芳基的例子是：吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪、三嗪、四嗪、喹啉、喹喔啉、喹唑啉、呋喃、噻吩、吡咯、噁唑、噻唑、异噁唑、异噻唑、噁二唑、噻二唑、吡唑、咪唑、三唑、四唑、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并噁二唑、苯并噻二唑、苯并吡唑、苯并咪唑、苯并三唑、三唑并吡啶、三唑并嘧啶、噻唑并三唑、香豆素。

杂环基指的是具有3至12个环原子的饱和或不饱和环，含有至少一个选自氮、氧、硫的杂原子，任选与另一个芳香环或非芳环稠合。

杂环的例子是：吡咯烷、哌啶、二氢吡啶、哌嗪、2，6-二酮哌嗪、氮杂环丁-2-酮、吗啉、噻嗪、二氢吲哚。

直链或环状C₆-C₁₂糖类基团指的是开放或闭合形式的醣类基团。

该基团的例子是：葡萄糖基、吡喃葡糖基、β-D-呋喃果糖基-α-D-吡喃葡糖基、4-O-β-D-吡喃半乳糖基-D-葡萄糖基。

任选取代的意指，在本专利的各个部分，一个或多个、相同或不同的选自下列基团的取代基：卤素原子；C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷硫基，它们反过来又任选被卤素原子取代；C₁-C₆烷羰基和C₁-C₆烷氧羰基，任选被卤化；氨基羰基、C₁-C₆烷基氨基羰基、C₂-C₁₂二烷基氨基羰基，任选被卤化；羧基；任选被卤化的C₁-C₆烷基羰氧基；氰基；硝基；甲酰基；羟基；氨基；任选取代的芳基和杂芳基。

由于其活性而引起注意的通式(I)化合物的例子是：

·月桂基甜菜碱(laurylbetaine)；

·硬脂基甜菜碱(stearylbetaine)；

·辛基/癸基酰胺丙基甜菜碱(capryl/capricamidopropylbetaine)；

·鲸蜡基甜菜碱(cetylbetaine)；

·月桂基羟基二甲基磺基甜菜碱(laurylhydroxysultaine)；

·月桂基/鲸蜡基甜菜碱(lauryl/cetyl betaine)；

·月桂基酰胺丙基甜菜碱(laurylamidopropylbetaine)

·椰油酰胺丙基甜菜碱(cocamidopropylbetaine)；

·椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱(cocamidopropylhydroxysultaine)；

·胆固醇羰基酰胺丙基甜菜碱(cholesterylcarbonylamidopropylbetaine)；

·胆甾烷酰胺丙基甜菜碱(cholanylamidopropylbetaine)；

·鹅去氧胆甾烷酰胺丙基甜菜碱(chenodeoxycholanylamidopropylbetaine)；

·去氧胆甾烷酰胺丙基甜菜碱(deoxycholanylamidopropylbetaine)；

·石胆甾烷酰胺丙基甜菜碱(lithocholanylamidopropylbetaine)；

·环己氧基羰基酰胺丙基甜菜碱(cyclohexyloxycarbonylamidopropylbetaine)；

·葡糖基酰胺丙基甜菜碱(gluconylamidopropylbetaine)；

·N，N-二月桂基氨基丙基甜菜碱(N，N-dilaurylaminopropylbetaine)

·N-十六烷基脲基丙基甜菜碱(N-hexadecylureidopropylbetaine)；

·椰油酰胺丙基甲基乙酰硫代甜菜碱(cocamidopropylmethylacetothetine)；

·月桂酰胺丙基甲基乙酰硫代甜菜碱(laurylamidopropylmethylacetothetine)；

·鲸蜡基甲基乙酰硫代甜菜碱(cetylmethylacetothetine)；

·N，N-二辛基脲基丙基甜菜碱(N，N-dioctylureidopropylbetaine)；

·月桂基酰胺乙基甜菜碱(laurylamidoethylbetaine)；

·月桂基酰胺丙基[L]缬氨酸甜菜碱(laurylamidopropyl[L]valinebetaine)；

·月桂基酰胺丙基[L]脯氨酸甜菜碱(laurylamidopropyl[L]prolinebetaine)；

·月桂基酰胺丙基[L]丙氨酸甜菜碱(laurylamidopropyl[L]alaninebetaine)；

·月桂基酰胺丙基[L]苯基甘氨酸甜菜碱(laurylamidopropyl[L]phenylglycinebetaine)；

·月桂基酰胺丙基-β-苯基丙氨酸甜菜碱(laurylamidopropyl-β-phenylalaninebetaine)；

·月桂基酰胺丙基-β-4-氯苯基丙氨酸甜菜碱(laurylamidopropyl-β-4-chlorophenylalaninebetaine)；

·月桂基酰胺丙基-β-丙氨酸甜菜碱(laurylamidopropyl-βalaninebetaine)；

·椰油酰胺丙基[L]缬氨酸甜菜碱(cocamidopropyl[L]valinebetaine)；

·椰油酰胺丙基[L]脯氨酸甜菜碱(cocamidopropyl[L]prolinebetaine)；

·椰油酰胺丙基[L]丙氨酸甜菜碱(cocamidopropyl[L]alaninebetaine)；

·椰油酰胺丙基[L]苯基甘氨酸甜菜碱(cocamidopropyl[L]phenylglycinebetaine)；

·椰油酰胺丙基-β-苯基丙氨酸甜菜碱(cocamidopropyl-β-henylalaninebetaine)；

·椰油酰胺丙基-β-4-氯苯基丙氨酸甜菜碱(cocamidopropyl-β-4-chlorophenylalaninebetaine)；

·椰油酰胺丙基-β-丙氨酸甜菜碱(cocamidopropyl-β-alaninebetaine)；

·十氢-2-萘氧基羰基酰胺丙基甜菜碱(decahydro-2-naphthoxycarbonylamidopropylbetaine)；

·3，5-二叔丁基苯酰胺丙基甜菜碱(3，5-diterbutylphenylamidopropylbetaine)；

·3，5-二叔丁基苯氧基羰基酰胺丙基甜菜碱(3，5-diterbutylphenoxycarbonylamidopropylbetaine)；

·α-D-吡喃葡萄糖基-β-D-呋喃果糖基氧基羰基酰胺丙基甜菜碱(α-D-glucopyranosyl-β-D-fructofuranosyloxycarbonylamido-propylbetaine)；

·三甲基羟基丁酰甜菜碱(肉毒碱)(carnitine)。

当R₁具有除C₁-C₂₆烷氧基、或者C₁-C₂₆烷硫基、或者C₃-C₃₀环烷氧基、或者C₁-C₂₆烷胺基、或者C₂-C₂₆二烷基氨基外的上述定义时，可以根据反应流程A容易地获得n不为0的通式(I)化合物，并且可以根据反应流程B容易地获得n＝0的通式(I)化合物。

反应流程A

反应流程B

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、X、Z、m、p、q和s如上所定义，Y表示离去基团例如氯原子、溴原子、RSO₃ ^-基团，其中R表示任选取代的C₁-C₆烷基或者C₁-C₆卤代烷基或者苯基。

通式(I)化合物，根据反应流程A，可以根据本领域熟知的方法，例如Comprehensive Organic Transformations 1989，R.C.Larock，任选在碱的存在下在有机溶剂或水溶液中，对于X＝氮，通过缩合适当的N’，N’-二烷基氨基-N-烷基胺，或者，对于X＝硫，通过缩合ω-烷硫基烷基胺与具有有适当的R₁残基的羧酸和缩合剂来获得，从而形成相应的酰胺。

由此获得的中间体接着通过与具有离去基团Y的适当的有机酸的碱金属例如钠或者钾的盐反应进行烷基化，所述反应通过控制的加入强碱溶液，在水中或有机溶剂中进行，反应温度为室温至100℃，保持pH值在大约7.5。

通式(I)化合物，根据反应流程B，可以根据本领域熟知的方法，例如，Comprehensive Organic Transformations 1989，R.C.Larock，在碱的存在下在有机溶剂或水溶液中，对于X＝氮，通过适当的N’，N’-二烷基氨基-N-烷基胺的烷基化，对于X＝硫，可以通过适当的ω-烷硫基烷基胺与具有离去基团Y的理想的R₁残基的烷基化来获得，从而获得相应的叔胺。

当R₁表示C₁-C₂₆烷氧基、或C₁-C₂₆烷硫基、或C₃-C₃₀环烷氧基、或C₁-C₂₆烷胺基、或C₂-C₂₆二烷基胺基时，可以根据反应流程C容易地获得n不为0的通式(I)化合物：

反应流程C

其中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、X、Z、m、p、q和s具有如上所述的定义，Y表示离去基团例如氯原子、溴原子、RSO₃ ^-基团，其中R表示任选取代的C₁-C₆烷基或者C₁-C₆卤代烷基或者苯基。

通式(I)化合物，根据反应流程C，根据本领域熟知的方法，例如，Comprehensive Organic Transformations 1989，R.C.Larock，在光气或其功能替代物例如双光气、三光气、1，1′-羰二咪唑之一存在下，在有机溶剂或水中，对于X＝氮，可以通过适当的N’，N’-二烷基氨基-N-烷基胺或者，对于X＝硫，可以通过适当的ω-烷硫基烷基胺与具有醇、或者硫醇或者氨基官能团(aminic function)的期望的R₁残基的烷基化反应来获得，R₁分别表示C₁-C₂₆烷氧基、或C₃-C₃₀环烷氧基、或C₁-C₂₆烷硫基、或C₁-C₂₆烷胺基、或C₂-C₂₆二烷基氨基，从而获得相应的氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯或脲。

该反应可以在室温至反应混合物的沸点的温度范围下，任选在无机碱或有机碱存在下，在水中或者惰性有机溶剂中便利地进行。

优选的实现反应的溶剂的例子是醚(乙醚、异丙醚、四氢呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷等等)；酯(乙酸乙酯等等)；氯化烃(二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氯化碳等等)；芳香烃(苯、甲苯、二甲苯等等)；脂肪烃(己烷、庚烷、环己烷等等)；偶极非质子溶剂(N.N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、环丁砜等等)。

优选的无机碱的例子是：碱金属或碱土金属(钠、钾、钙等等)的氢氧化物、碳酸盐。

优选的有机碱的例子是：吡啶、二甲基氨基吡啶、脂肪胺(三乙胺等等)、环胺(吗啉、哌啶等等)。

如果取代基R₁、R₂、R₃、R₄、R₅含有光学或几何异构中心，通式(I)化合物可以以全部可能的结构的异构形式存在。

因此本发明的范围还包括通式(I)化合物作为任何比例的异构混合物的用途，以及还包括单一异构体的形式在农业领域中控制植物病原真菌的用途。

当来自天然提取物时，通式(I)化合物还可以以它们的同系物的混合物存在，因此本发明的范围还包括通式(I)化合物作为任何比例的它们的同系物混合物在农业领域控制植物病原体真菌和细菌的用途。

通式(I)化合物还可以以通过与任何数量的水分子配位的水合形式存在，或者以从水溶液中获得的水合形式存在，并且直接用于农业目的。

通式(I)化合物还可以包含并且可能地在其结构内部与其它金属阳离子例如钠、钙、钾配位，其数量可以随用于合成通式(I)化合物的制备方法不同而改变。

因此本发明的范围还包括包含所述盐的所述式(I)化合物溶液在农业领域控制植物病原真菌和细菌的用途。

通式(I)化合物能够控制众多真菌和细菌植物病原体，还具有对其它杀真菌剂的降低的敏感性。

通式(I)化合物有效作用的植物病原体真菌和细菌的例子是：

-禾谷类上的长蠕孢(Helminthosporium spp)；

-禾谷类上的白粉菌(Erysiphe spp)；

-禾谷类上的柄锈菌(Puccinia spp.)；

-葡萄上的葡生单轴霉(Plasmopara viticola)；

-蔬菜上的腐霉菌(Pythium spp)；

-蔬菜上的疫霉菌(Phytophthora spp.)；

-禾谷类上的喙孢菌(Rhynchosporium)；

-禾谷类上的壳针孢菌(Septoria spp.)；

-葫芦科植物(例如黄瓜)上的棕丝单囊壳(Sphaerothecafuliginea)；

-苹果树上的白叉丝单囊壳(Podosphaera leucotricha)；

-水稻上的稻梨孢菌(Pyricularia oryzae)；

-葡萄上的葡萄钩丝壳(Uncinula necator)；

-果树上的黑星菌(Venturia spp.)；

-葡萄和蔬菜上的灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)；

-禾谷类上的镰孢菌(Fusarium spp.)；

-果树和蔬菜上的链格孢菌(Alternaria spp.)；

-甜菜上的尾孢菌(Cercospora spp.)；

-黄单孢杆菌(Xantomonas)；

-芽孢杆菌(Bacillus spp.)

通式(I)化合物能够发挥治疗和预防性能两种杀真菌作用，并且具有较低的植物毒性或没有植物毒性。

因此本发明进一步的目的涉及通过使用具有通式(I)的甜菜碱型两性离子的结构的两性化合物控制农作物植物病原真菌和细菌的方法，其中所述两性化合物具有直接杀真菌和细菌活性，并且涉及通过使用具有通式(I)的甜菜碱型两性离子的结构的两性化合物刺激来自非生物压力(温度、盐度、干旱等等)和生物压力的植物天然防御系统和诱导植物本身抗病性的方法。

用于获得预期效果的化合物的量可以随各种各样的因素而变化，所述因素例如使用的化合物、保护的农作物、病原体的类型、侵染程度(the degree of infection)、气候条件、使用方法和采用的剂型。

通常每公顷10g至5kg的化合物剂量即可提供充分的控制。

对于农业上的实际应用，采用包含一或多种具有通式(I)的甜菜碱型两性离子结构的两性化合物的杀真菌组合物常常是有用的。

这些组合物可以在植物的各个部分，例如叶、茎、枝和根，或者播种前种子本身，或者植物生长地施用。

组合物能够以干粉、可湿性粉剂、乳油、微乳剂、糊剂、颗粒剂、溶液、悬浮液等等形式使用：组合物类型的选择将取决于特定的用途。

按照已知的方法制备组合物，例如通过使用溶剂介质和/或固体稀释剂稀释或者溶解活性物质，可能在表面活性剂存在下进行。

可以使用的固体稀释剂或者载体是，例如：二氧化硅、高岭土、斑脱土、滑石粉、硅藻土、白云石、碳酸钙、氧化镁、石膏、粘土、人造硅酸盐、绿坡缕石、海泡石。

可以使用的液体稀释剂，除水之外，是，例如：芳族有机溶剂(二甲苯或者烷基苯混合物、氯苯等等)，石蜡(油的馏分)，醇(甲醇、丙醇、丁醇、辛醇、甘油等等)，酯(乙酸乙酯，乙酸异丁酯等等)，酮(环己酮、丙酮、苯乙酮、异佛尔酮、乙戊酮等等)，酰胺(N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮等)。

可以使用的表面活性剂是钠、钙、三乙胺或者三乙醇胺的盐，烷基磺酸盐，烷基芳基磺酸盐，聚乙氧基化烷基酚，山梨糖醇聚乙氧基化酯，木质素磺酸盐，等等。

组合物还可以包含用于特别目的的特定添加剂，例如胶粘剂如阿拉伯树胶、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯等等。

还已发现，在农业实践中，当与众多其它杀真菌活性成分联合使用时通式(I)化合物的杀真菌作用特别有效，从而形成用于抵抗抗药性策略的优良的手段，进一步允许降低使用剂量并刺激植物的天然防御。

更准确地说，通过混合通式(I)化合物和已知的能够刺激植物的自然防御的其它化合物已经观察到高度的协同增效，所述其它化合物为例如水杨酸、乙酰水杨酸、乙酰水杨酸的铜(II)盐ASA₂Cu、2，6-二氯异烟酸(INA)、苯并[1，2，3]噻二唑-7-硫代羧酸1’S-甲酯(BTH)、糖精，从而以一种有效且安全的方式增强和调整生物活性。

特别是，已经注意到当与通式(I)化合物混合时下列化合物增强的生物活性：

·亚磷酸、其衍生物、其盐及其混合物，例如，K₂HPO₃、KH₂PO₃、Na₂HPO₃、NaH₂PO₃、(NH₄)₂HPO₃、NH₄H₂PO₃、三乙膦酸铝；

·苯霜灵(其外消旋形式或者作为旋光活性的R异构体)；

·杀真菌二肽IR5885(其外消旋形式或者作为旋光活性的R异构体)；

·氟醚唑(其外消旋形式或者作为旋光活性的R异构体)；

·抗性诱导剂例如：水杨酸、其衍生物和铜盐，乙酰水杨酸、其衍生物和铜盐，例如乙酰水杨酸铜(II)盐ASA₂Cu、水杨酸铜(II)盐SA₂Cu、水杨酸铜(II)盐SACu、2，6-二氯异烟酸(INA)、苯并[1，2，3]噻二唑-7-硫代羧酸1′S-甲酯(BTH)、糖精；

铜盐例如：氢氧化铜、王铜、铜钙氯氧化物(cuprocalciumoxychloride)、碱式硫酸铜；

·异丙菌胺；

·苯噻菌胺；

·氰霜唑。

所述杀真菌化合物是市售化合物或者几乎已经商业化的。

可以很容易地在技术文献中发现对其的描述，例如“杀虫剂手册(The Pesticide Manual)”，2000，XII版，British Crop CouncilEd.，在www.Agrowreports.Com。

IR5885，具有杀真菌活性的二肽，指的是专利申请EP 1028125中要求保护的化合物中的一个。

因此，本发明的目的涉及含有至少一种通式(I)两性化合物和一个或多个下述杀真菌化合物的所述组合物的用途：

·苯霜灵(其外消旋形式或者作为旋光活性的R异构体)；

·氟醚唑(其外消旋形式或者作为旋光活性的R异构体)；

·铜盐例如：氢氧化铜、王铜、铜钙氯氧化物(cuprocalciumoxychloride)、碱式硫酸铜；

·异丙菌胺；

·苯噻菌胺；

·氰霜唑；

与通过简单混合两种活性成分获得的混合物相比其具有令人惊讶的更高的生物活性。

根据本发明优选的组合物选自：

-甘氨酸甜菜碱(glycinebetaine)和K₂HPO₃；

-甘氨酸甜菜碱(glycinebetaine)和KH₂PO₃；

-甘氨酸甜菜碱和三乙膦酸铝；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和K₂HPO₃；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和KH₂PO₃；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和三乙膦酸铝；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和氟醚唑；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和氟醚唑R异构体；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和IR5885；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和异丙菌胺；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和苯噻菌胺；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和氰霜唑；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和R异构体IR5885；

-椰油酰胺丙基甜菜碱、IR5885和K₂HPO₃-KH₂PO₃；

-椰油酰胺丙基甜菜碱、IR5885和三乙膦酸铝；

-甘氨酸甜菜碱、IR5885和三乙膦酸铝；

-椰油酰胺丙基甜菜碱、R异构体IR5885和三乙膦酸铝；

-甘氨酸甜菜碱、R异构体IR5885和三乙膦酸铝；

-椰油酰胺丙基甜菜碱、R异构体IR5885和K₂HPO₃-KH₂PO₃；

-甘氨酸甜菜碱(glycinebetaine)、K₂HPO₃-KH₂PO₃和IR5885；

-甘氨酸甜菜碱(glycinebetaine)、K₂HPO₃-KH₂PO₃和异丙菌胺；

-甘氨酸甜菜碱(glycinebetaine)、K₂HPO₃-KH₂PO₃和苯噻菌胺；

-甘氨酸甜菜碱(glycinebetaine)、K₂HPO₃-KH₂PO₃和氰霜唑；

-甘氨酸甜菜碱(glycinebetaine)、K₂HPO₃-KH₂PO₃和R异构体IR5885；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和ASA₂Cu；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和SA₂Cu；

-椰油酰胺丙基甜菜碱和SACu；

-肉毒碱和K₂HPO₃；

-肉毒碱和KH₂PO₃；

-肉毒碱和K₂HPO₃-KH₂PO₃和IR5885。

上述组合物的活性成分的浓度可以在宽范围内变化，该范围取决于活性化合物、它们指定的用途、环境条件和采用的制剂的类型。

活性成分的浓度范围通常为1％至90％，优选5至50％。

下述实施例用于例举来更好地理解发明，并不用于限制本发明。

实施例1

月桂基酰胺丙基-N，N-二甲基胺的制备

在10g月桂酰氯的50ml二氯甲烷和4.74ml三乙胺溶液中加入4.67g3-二甲基氨基-1-丙胺。混合物在室温下搅拌过夜。萃取所获得的产物，水洗，用Na₂SO₄干燥，干燥后，获得12g期望的化合物(收率93％)。

元素分析[％实验值(理论值)]＝C 71.2(71.6)；H 12.5(12.6)；N 9.5(9.8)。

实施例2

二十烷基二甲基胺的制备

在10g二十烷基溴的水溶液中加入10.5ml二甲胺的40％水溶液。混合物在室温下搅拌过夜。萃取所获得的产物，水洗，用Na₂SO₄干燥，干燥后，获得8.1g期望的化合物(收率90％)。

元素分析[％实验值(理论值)]＝C 80.9(81.1)；H 14.3(14.7)；N 4.5(4.3)。

实施例3

胆固醇酰胺丙基二甲胺的制备

在15g氯甲酸胆固醇酯的70ml二氯甲烷和3.49ml三乙胺溶液中加入3.41g 3-二甲基氨基-1-丙胺。混合物在室温下搅拌过夜。萃取所获得的产物，水洗，用Na₂SO₄干燥，干燥后，获得15.8g期望的化合物(收率92％)。

元素分析[％实验值(理论值)]＝C 77.0(76.8)；H 11.9(11.2)；N 5.1(5.4)。

实施例4

月桂基酰胺丙基甜菜碱(化合物7)的制备

在反应器中加入溶于32ml水的12g月桂基酰胺丙基-N，N-二甲胺和4.9g单氯乙酸钠。反应混合物缓慢加热到98℃并通过连续加入50％重量的氢氧化钠溶液保持大约7.5的pH值。大约5小时后，起始物完全耗尽，获得的溶液可直接使用。

用与上述实施例类似的方法制备下列化合物：

表1

标号	化合物
		1	月桂基甜菜碱
2	硬脂基甜菜碱
		3	辛基/癸基酰胺丙基甜菜碱
4	鲸蜡基甜菜碱
		5	月桂基羟基二甲基磺基甜菜碱
6	月桂基/鲸蜡基甜菜碱
		7	月桂基酰胺丙基甜菜碱
8	椰油酰胺丙基甜菜碱
		9	椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱
10	胆甾醇羰基酰胺丙基甜菜碱
		11	胆甾烷酰胺丙基甜菜碱
12	鹅去氧胆甾烷酰胺丙基甜菜碱
		13	去氧胆甾烷酰胺丙基甜菜碱
14	石胆甾烷酰胺丙基甜菜碱
		15	环己氧基羰基酰胺丙基甜菜碱

16	葡糖基酰胺丙基甜菜碱
		17	N，N-二月桂基氨基丙基甜菜碱
18	N-十六烷基脲基丙基甜菜碱
		19	椰油酰胺丙基甲基乙酰硫代甜菜碱
20	月桂酰胺丙基甲基乙酰硫代甜菜碱
		21	鲸蜡基甲基乙酰硫代甜菜碱
22	N，N-二辛基脲基丙基甜菜碱
		23	月桂基酰胺乙基甜菜碱
24	月桂基酰胺丙基[L]缬氨酸甜菜碱
		25	月桂基酰胺丙基[L]脯氨酸甜菜碱
26	月桂基酰胺丙基[L]丙氨酸甜菜碱
		27	月桂基酰胺丙基[L]苯基甘氨酸甜菜碱
28	月桂基酰胺丙基-β-苯基丙氨酸甜菜碱
		29	月桂基酰胺丙基-β-4-氯苯基丙氨酸甜菜碱
30	月桂基酰胺丙基-β-丙氨酸甜菜碱
		31	椰油酰胺丙基[L]缬氨酸甜菜碱
32	椰油酰胺丙基[L]脯氨酸甜菜碱
		33	椰油酰胺丙基[L]丙氨酸甜菜碱
34	椰油酰胺丙基[L]苯基甘氨酸甜菜碱
		35	椰油酰胺丙基-β-苯基丙氨酸甜菜碱
36	椰油酰胺丙基-β-4-氯苯基丙氨酸甜菜碱
		37	椰油酰胺丙基-β-丙氨酸甜菜碱
38	十氢-2-萘氧基羰基酰胺丙基甜菜碱
		39	3，5-二叔丁基苯酰胺丙基甜菜碱
40	3，5-二叔丁基苯氧基羰基酰胺丙基甜菜碱
		41	α-D-吡喃葡萄糖基-β-D-呋喃果糖基氧基羰基酰胺丙基甜菜碱

实施例5

确定对抗藤本植物霜霉病(葡生单轴霉Plasmopara viticola)的杀真菌活性

使用化合物1、2和3通过对叶片两面喷雾处理在花瓶(vases)中设定环境下(20±1℃，70％相对湿度)生长的葡萄叶片(Dolcetto品种)，所述化合物分散在按体积20％丙酮中的丙酮水(hydroacetone)溶液中。

在设定环境中保持24小时之后，使用葡生单轴霉的分生孢子水悬浮液(每cm³20,000个分生孢子)对植物叶片两面进行喷雾。

将植物保持在21℃，湿度饱和的环境中，度过真菌潜伏期。

在此阶段的末期(7天)，按照从0(完全被侵染的植物)至100(健康植物)的评价百分比等级评定杀真菌活性。

表2

具有通式(I)的化合物对葡生单轴霉的7天预防活性

化合物编号	250ppm活性	125ppm活性
			5	99	85
7	100	95
			8	100	98
9	100	95
			10	95	90
11	94	90
			24	99	88
25	100	95
			26	95	90
28	99	90
			29	95	90
30	90	85
			31	98	85
32	95	88
			33	96	85
34	97	88
			35	95	89
36	94	85
			37	98	86

表3

具有通式(I)的化合物与其它杀真菌剂的混合物对葡生单轴霉的

7天预防活性

混合物	活性(剂量ppm)	活性(剂量ppm)	活性(剂量ppm)
				甘氨酸甜菜碱	30(30ppm)
K₂HPO₃-KH₂PO₃		40(500ppm)*
				甘氨酸甜菜碱+K₂HPO₃-KH₂PO₃			90(30+500ppm)
三乙膦酸铝		50(500ppm)*
				甘氨酸甜菜碱+三乙膦酸铝			90(30+500ppm)
氟醚唑	20(30ppm)
				化合物Nr.8		30(30ppm)
化合物Nr.8+K₂HPO₃-KH₂PO₃			95(30+500ppm)
				化合物Nr.8+三乙膦酸铝			95(30+500ppm)

氟醚唑+化合物Nr.8	95(30+30ppm)
		IR5885	41(0.45ppm)
IR5885+化合物Nr.8	100(0.45+30ppm)
		IR5885	15(0.22ppm)
IR5885+化合物Nr.8+K₂HPO₃-KH₂PO₃	100(0.22+30+500ppm)
		IR5885+化合物Nr.8+三乙膦酸铝		100(0.22+30+500ppm)

*当ppm剂量涉及亚磷酸钾时，用等当量亚磷酸表示。

实施例6

确定对抗小麦白粉病(禾白粉菌Erysiphe graminis)的杀真菌活性

使用化合物1、2和3通过对叶片两面喷雾处理在花瓶(vases)中设定环境下(20±1℃，70％相对湿度)生长的小麦叶片(Gemini品种)，所述化合物分散在按体积20％丙酮中的丙酮水(hydroacetone)溶液中。

在设定环境中保持24小时之后，使用禾白粉菌的分生孢子水悬浮液(每cm³200,000个分生孢子)对植物叶片两面进行喷雾。

将植物保持在18至24℃范围，湿度饱和的环境中，度过真菌潜伏期。

在此阶段的末期(12天)，按照从0(完全被侵染的植物)至100(健康植物)的评价百分比等级评定杀真菌活性。

表4

具有通式(I)的化合物与其它杀真菌剂的混合物对禾白粉菌的5

天预防活性

混合物	活性(剂量ppm)	活性(剂量ppm)	活性(剂量ppm)
				氟醚唑	48(1.8ppm)
化合物Nr.8		20(500ppm)
				氟醚唑+化合物Nr.8		97(1.8+500ppm)
IR5885	20(500ppm)
				IR5885+化合物Nr.8		93(500+500ppm)

实施例7

确定对抗小麦锈病(隐匿柄锈菌Puccinia recondita)的杀真菌活性

在设定环境中保持24小时之后，使用隐匿柄锈菌的分生孢子水悬浮液(每cm³200,000个分生孢子)对植物叶片两面进行喷雾。

在此阶段的末期(14天)，按照从0(完全被侵染的植物)至100(健康植物)的评价百分比等级评定杀真菌活性。

表5

具有通式(I)的化合物与其它杀真菌剂的混合物对隐匿锈菌的5

天预防活性

混合物	活性(剂量ppm)	活性(剂量ppm)	活性(剂量ppm)
				氟醚唑	58(30ppm)
化合物Nr.8		29(125ppm)
				氟醚唑+化合物Nr.8		92(30+125ppm)
IR5885	15(500ppm)
				IR5885+化合物Nr.8		81(500+125ppm)

实施例8

确定具有通式(I)的化合物以及它们与其它杀真菌剂的混合物的基因反应。

使用具有通式(I)的化合物以及它们与其它杀真菌剂的混合物处理四星期大的拟南芥(arabidopsis thaliana)幼苗，并且在处理24小时后收集叶片。

使用“Genelute哺乳动物总RNA试剂盒”(Genelute mammaliantotal RNA kit)(Sigma)按照规程指示从0.05g新鲜组织中提取总RNA。使用Fermentas生命科学(Life Sciences)商业化的“RevertAid^TMM-MuLV反转录酶(Reverse Transcriptase)”按照下列规程合成cDNA：2μg总RNA与0.5μg的oligo(dT)₁₈混合。

然后加入去离子水(不含核酸酶)使反应体积达到11μl，随后将反应物在70℃温育5分钟，然后在冰中冷却。

然后在混合物中加入下列试剂：

4μl的5×反应缓冲液，10mM的dNTP混合物，20单位的核糖核酸酶抑制剂。

将反应物在37℃温育5分钟，随后在混合物中加入200单位的RevertAid^TM M-MuLV反转录酶，并且将反应物在42℃温育60分钟。

然后通过在70℃温育10分钟钝化酶来终止反应。

PCR分析

使用核糖体RNA 18S的引物/competimers混合物以9∶1的比例作为内标(internal standard)作用于cDNA以进行定量PCR分析。

用于PCR反应的引物序列在下面列出：

-PR1 fw：5’GTAGCTCTTGTAGGTGCTCT 3’

-PR1 rev：5’CATCCTGCATATGATGCTCC 3’

在25μl具有下列组分的反应体系中进行PCR反应：

CDNA：0.5μl

10×反应缓冲液：2.5μl

50mM MgCl₂＝0.75μl

2.5mM dNTPs：0.5μl

5μM 18S引物：Competimer混合物(9∶1比例)：0.5μl

12.5μM基因特异正向引物(primer forward)：0.5μl

12.5μM基因特异反向引物(primer reverse)：0.5μl

Euroclone Taq(5u/μl)：0.25μl)

在94℃变性2分钟后，将下列扩增程序进行35个循环：

94℃：30sec

退火温度PR1：48℃：30sec

72℃：1min

随后在72℃进行额外循环10分钟。

在图1中，其中

A)ASA₂Cu 12.5ppm

B)甘氨酸甜菜碱800ppm

C)甘氨酸甜菜碱1600ppm

D)化合物Nr.8 800ppm

E)化合物Nr.8 1600ppm

F)ASA₂Cu 12.5ppm+化合物Nr.8 800ppm

G)空白对照

与空白对照和甘氨酸甜菜碱的比较分别显示了单独的化合物Nr.8及其与乙酰水杨酸铜(II)盐(ASA₂Cu)混合物的特殊基因反应。

Claims

1.组合物，其特征在于所述组合物选自：

-甘氨酸甜菜碱和K₂HPO₃；

-甘氨酸甜菜碱和KH₂PO₃；