CN101313066A - 糖皮质激素受体表达的调节 - Google Patents

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Abstract

提供了用于调节糖皮质激素受体表达的化合物、组合物和方法。组合物包括具有特别的体内性质，靶向编码糖皮质激素受体的核酸的反义化合物，特别是反义寡核苷酸。提供了使用这些化合物用于调节糖皮质激素受体表达和用于治疗疾病的方法。

Description

糖皮质激素受体表达的调节
序列表
在磁盘上包含名称为BIOL0065WOSEQ.txt的文件的机读形式的序列表引入本文作为参考，所述文件为37,122字节(在MS-DOS中测量)并且于2006年9月19日创建。
发明领域
本文公开了用于调节糖皮质激素受体在细胞、组织或动物中的表达的化合物、组合物和方法。
发明背景
因为增加的糖异生被视为糖尿病中增加的葡萄糖生产的主要来源，所以用于抑制肝葡萄糖生成的许多治疗靶已得到研究。由于糖皮质激素受体(也称为细胞核受体亚家族3，组C，成员1；NR3C1；GCCR；GCR；GRL；糖皮质激素受体，淋巴细胞)拮抗剂在动物模型中改善糖尿病的能力，此类化合物属于正在探究的潜在疗法。然而，存在糖皮质激素受体拮抗剂的有害全身效应，包括HPA轴的活化(Link，Curr Opin InvestigDrugs，2003，4，421-429)。增加的HPA轴活性与免疫相关的炎性作用抑制相关，这可以增加对于传染剂和赘生物的敏感性。通过HPA轴或其靶组织中的缺陷与免疫介导的炎症抑制相关的状况包括库欣氏综合征、慢性应激、慢性酒精中毒和忧郁型抑郁症(Chrousos，N Engl J Med，1995，332，1351-1362)。因此，开发肝和脂肪特异性糖皮质激素受体拮抗剂是很有价值的。
发明概述
本发明涉及靶向编码GCCR的核酸分子且可与编码GCCR的核酸分子杂交的寡聚化合物，所述寡聚化合物调节GCCR的表达。本文提供了被称为“缺口聚体(gapmers)”的嵌合寡核苷酸，所述嵌合寡核苷酸包含在5’和3’末端中的每一个上与“翼”侧接的脱氧核苷酸区域或“缺口”，所述“翼”包含1-4个2’-O-甲氧乙基核苷酸。本发明的寡核苷酸的脱氧核苷酸区域包含超过10个脱氧核苷酸，因此与包含10个脱氧核苷酸的缺口区域的嵌合化合物，例如美国公开US2005-0164271(所述专利整体引入本文作为参考)中例示的化合物比较，本发明的缺口聚体是“缺口加宽的”。在某些实施方案中，与具有相同序列但包含在5’和3’末端上都与5个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸区域的寡核苷酸比较，缺口加宽的寡核苷酸具有相似或改善的效力，而没有寡核苷酸在肝中的积聚增加。因此，本发明的实施方案包括靶向GCCR的缺口加宽的寡核苷酸，其中效力与具有相同序列但包含在5’和3’末端上都与5个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸的区域的寡核苷酸相似或更佳，而没有寡核苷酸在靶组织中的积聚增加。
本发明的另一个实施方案包括靶向GCCR的缺口加宽的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的肾浓度相对于具有相同序列但包含在5’和3’末端上都与5个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸的区域的寡核苷酸相似或降低，同时维持或改善在靶组织例如肝中的效力。
进一步提供了调节细胞、组织或动物中的GCCR表达的方法，所述方法包括使所述细胞、组织或动物与本发明的一种或多种化合物或组合物接触。例如，在一个实施方案中，本发明的化合物或组合物可以用于减少细胞、组织或动物中的GCCR表达。
在一个实施方案中，本发明提供了治疗动物中由糖皮质激素表达介导的疾病或状况的方法，所述方法包括使动物与有效量的本发明的化合物接触。所述疾病或状况包括糖尿病、2型糖尿病、肥胖、代谢综合征X、高血糖症、高脂血症或肝脂肪变性。在某些实施方案中，高脂血症与升高的脂质例如血胆固醇或升高的血甘油三酯相关。血脂包括血浆脂质和血清脂质。进一步提供了通过施用本发明的化合物降低血脂水平的方法，减少体脂量的方法，降低肝脏甘油三酯水平的方法，和改善动物中的胰岛素敏感性的方法。
还提供了降低动物中的血糖水平的方法，所述方法包括施用本发明的化合物。血糖水平可以是空腹或餐后葡萄糖水平，并且血糖水平包括血清或血浆葡萄糖水平。进一步提供了增加胰岛素敏感性和抑制肝葡萄糖排出的方法。
本发明的另一个方面是通过施用本发明的化合物延迟或预防动物中的血脂或血糖水平开始增加的方法。
本申请还与整体引入作为参考的美国申请号60/718,684相关。本申请还与各自整体引入本文作为参考的美国申请号11/231,243和PCT申请号PCT/US2005/033837相关。
详述：
概述
本文公开了用于在编码GCCR的核酸分子表达调节中使用的寡聚化合物，包括反义寡核苷酸和其他反义化合物。这通过提供与一种或多种编码GCCR的靶核酸分子杂交的寡聚化合物来完成。
依照本发明的是用于调节GCCR(也称为糖皮质激素受体；细胞核受体亚家族3，组C，成员1；GR；GRL；NR3C1)表达的组合物和方法。表1中列举了可以用于设计靶向GCCR的寡聚化合物的序列的
Figure A20068004324200091
登记号。本发明的寡聚化合物包括与表1中所示的一种或多种靶核酸分子杂交的寡聚化合物，以及与编码GCCR的其他核酸分子杂交的寡聚化合物。
寡聚化合物可以靶向编码GCCR的核酸分子的任何区域、片段或位点。合适的靶区域、片段和位点包括但不限于，5’UTR、起始密码子、终止密码子、编码区、3’UTR、5’帽区、内含子、外显子、内含子-外显子连接处、外显子-内含子连接处、和外显子-外显子连接处。
表1
基因靶
活性寡聚化合物将与之杂交的靶核酸上的位置在下文中被称为“验证的靶片段”。如本文所使用的，术语“验证的靶片段”被定义为活性寡聚化合物所靶向的靶区域的至少8个核碱基的部分。尽管不希望被理论束缚，但目前认为这些靶片段代表容易进行杂交的靶核酸的部分。
本发明包括是嵌合化合物的寡聚化合物。嵌合化合物的例子是具有由非脱氧核苷酸区域或“翼”侧接的2’个脱氧核苷酸区域或“缺口”的缺口聚体。尽管不希望被理论束缚，但缺口聚体的缺口提供了当与RNA靶结合时可由RNA酶H识别的底物，而翼不是最佳底物但可以赋予其他性质，例如促成双链体稳定性或有利的药代动力学效应。每个翼可以是一种或多种非脱氧寡核苷酸单体。在一个实施方案中，缺口聚体包含在5’和3’末端中的每一个上由2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸的翼侧接的16个2’个脱氧核苷酸的区域。这被称为2-16-2缺口聚体。因此，这种嵌合寡聚化合物或缺口聚体的“基序”是2-16-2。在另一个实施方案中，所有核苷间键都是硫代磷酸酯键。在另一个实施方案中，缺口聚体的胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
本发明的实施方案包括包含长度为13-26个核苷酸的序列的寡聚化合物，所述序列包含在5’和3’末端的每一个上与至少一个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接，长度超过10个核碱基的脱氧核苷酸区域。优选的“缺口加宽的”寡核苷酸在寡核苷酸的缺口部分中包含11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个脱氧核苷酸。优选的5’和3’侧翼区包含1个、2个、3个或4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸。优选的缺口加宽的缺口聚体具有包括1-18-1、1-17-2、2-17-1、2-16-2、3-14-3和4-12-4的基序。
在优选实施方案中，寡聚化合物靶向GCCR RNA或与GCCR RNA杂交。在另一个实施方案中，寡聚化合物减少GCCR RNA的表达。在其他实施方案中，寡聚化合物减少GCCR的表达，其中GCCR的表达减少至少10％、至少20％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％。
本发明的寡核苷酸包括其中所述寡核苷酸的肾浓度相对于具有相同序列但包含在5’和3’末端上都与5个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸的区域的寡核苷酸降低的那些。本发明的寡核苷酸包含其中所述寡核苷酸的肾浓度相对于具有相同序列但包含在5’和3’末端上都与5个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸的区域的寡核苷酸的那些相似或降低的那些。本发明的寡核苷酸包括其中关于靶减少的效力或疗效与具有相同序列但包含在5’和3’末端上都与5个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸的区域的寡核苷酸的那种相似或更佳，而没有寡核苷酸在靶组织中的增加积聚的那些。优选的靶组织包括肝和脂肪组织。
本发明提供了靶向编码GCCR的核酸分子、长度为13-26个核碱基的反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含第一个区域、第二个区域和第三个区域，其中所述第一个区域包含至少11个脱氧核苷酸并且其中所述第二个和第三个区域包含1-4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸，所述第二个和第三个区域在所述第一个区域的5’和3’末端上侧接第一个区域。
在某些实施方案中，本发明的寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在某些实施方案中，“缺口”区域包含11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个核碱基。在某些实施方案中，反义寡核苷酸长度为20个核碱基。
寡聚化合物可以包含约8-约80个核碱基(即约8-约80个连接的核苷)，优选地约13-约26个核碱基。本领域普通技术人员应当理解预期的优选的寡聚化合物包括长度为13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个或26个核碱基的化合物。
本发明的化合物包括这样的寡核苷酸序列，其包含来自举例说明性反义化合物之一的5’末端的至少8个连续核碱基(剩余核碱基是相同寡核苷酸的连续段，其在可与靶核酸特异性杂交的反义化合物的5’末端紧邻的上游开始，且持续直至寡核苷酸包含约13-约26个核碱基)。其他化合物可以由这样的寡核苷酸序列表示，其包含来自举例说明性反义化合物之一的3’末端的至少8个连续核碱基(剩余核碱基是相同寡核苷酸的连续段，其在可与靶核酸特异性杂交的反义化合物的3’末端紧邻的下游开始，且持续直至寡核苷酸包含约13-约26个核碱基)。还应当理解化合物可以由这样的寡核苷酸序列表示，其包含来自举例说明性化合物的序列内部部分的至少8个连续核碱基，并且可以在2个方向的任一方向或2个方向上延伸直至寡核苷酸包含约13-约26个核碱基。
本发明的寡核苷酸包括长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸靶向编码GCCR的核酸分子，并且包含SEQ ID NO：34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的至少8个核碱基的部分。
在一个实施方案中，本发明的寡核苷酸是靶向核酸分子的、长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，所述核酸分子编码GCCR并且具有SEQ IDNO：34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的序列。在一个实施方案中，本发明的寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的核碱基序列。
本发明提供了包含SEQ ID NO：37的核碱基序列的反义寡核苷酸。在一个实施方案中，本发明的寡核苷酸包含SEQ ID NO：37的核碱基序列的至少8个核碱基的部分。
在一个实施方案中，本发明提供了长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，所述寡核苷酸靶向编码GCCR的核酸分子，并且包含SEQ ID NO：34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的至少8个核碱基的部分，其中所述寡核苷酸包含长度为12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个核碱基的脱氧核苷酸区域，所述脱氧核苷酸区域在其5’和3’末端上与1-4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接，并且其中所述寡核苷酸与GCCR RNA特异性杂交且减少GCCR RNA的表达。
在一个实施方案中，侧翼区是对称的(在5’侧翼区中具有与3’侧翼区中相同数目的核苷酸)。在另一个实施方案中，侧翼区是不对称的(与3’侧翼区比较，在5’侧翼区中具有不同数目的核苷酸)。
本发明的反义寡核苷酸可以包含至少一个经修饰的核苷间键。经修饰的核苷间键包括硫代磷酸酯键。本发明的反义寡核苷酸还可以包含至少一个经修饰的核碱基。在优选实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在其他实施方案中，本发明包括具有SEQ ID NO：37的核碱基序列的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸的特征在于在5’和3’末端上与4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域，在5’和3’末端上与3个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域，在5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域，在5’和3’末端上与1个或2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域，或在5’和3’末端上与1个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与3个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有其5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与1个或2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与1个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在另一个实施方案中，反义寡核苷酸包含SEQ ID NO：33的核碱基序列。在一个实施方案中，本发明的寡核苷酸包含SEQ ID NO：33的核碱基序列的至少8个核碱基的部分。
在其他实施方案中，本发明包括具有SEQ ID NO：33的核碱基序列的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸的特征在于在5’和3’末端上与4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域，在5’和3’末端上与3个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域，在5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域，在5’和3’末端上与1个或2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域，或在5’和3’末端上与1个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：33的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：33的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与3个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与1个或2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与1个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
本发明提供了包含SEQ ID NO：45的核碱基序列的反义寡核苷酸。在一个实施方案中，本发明的寡核苷酸包含SEQ ID NO：45的核碱基序列的至少8个核碱基的部分。
在其他实施方案中，本发明包括具有SEQ ID NO：45的核碱基序列的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸的特征在于在5’和3’末端上与4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域，在5’和3’末端上与3个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域，在5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域，在5’和3’末端上与1个或2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域，或在5’和3’末端上与1个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：45的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：45的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与3个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：45的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：45的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与1个或2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO：45的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5’和3’末端上与1个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
本文还涉及药物组合物，所述药物组合物包含本发明的反义寡核苷酸并任选包含药学上可接受的载体、稀释剂、增强剂或赋形剂。本发明的化合物还可以在用于治疗与由GCCR介导的糖皮质激素活性相关的疾病和病症的药物制备中使用。
本发明的实施方案包括减少细胞或组织中的GCCR表达的方法，所述方法包括使所述细胞或组织与本发明的药物组合物或反义寡核苷酸接触，降低动物中的血糖水平、血甘油三酯水平或血胆固醇水平的方法，所述方法包括给所述动物施用本发明的药物组合物。血液水平可以是血浆或血清水平。还涉及增加胰岛素敏感性的方法，降低肝脏甘油三酯水平的方法，和抑制动物中的肝葡萄糖排出的方法，所述方法包括给所述动物施用本发明的药物组合物。增加的胰岛素敏感性可以由循环胰岛素水平中的降低来指示。本发明的另一个方面是减少动物中的体脂量的方法。
本发明的其他实施方案包括治疗具有与糖皮质激素受体表达相关的疾病或状况的动物的方法，所述方法包括给所述动物施用治疗或预防有效量的本发明的反义寡核苷酸。疾病或状况可以是代谢疾病或状况。在某些实施方案中，代谢疾病或状况是糖尿病、肥胖、代谢综合征X、高血糖症、高脂血症或胰岛素抵抗。在某些实施方案中，疾病是2型糖尿病。在某些实施方案中，肥胖是饮食诱导的。在某些实施方案中，高脂血症与升高的血脂水平相关。脂质包括胆固醇和甘油三酯。在一个实施方案中，状况是肝脂肪变性。在某些实施方案中，脂肪变性是脂肪肝或非酒精性脂肪肝。
还提供了预防或延迟动物中升高的血糖或血脂水平开始的方法。
本发明的化合物可以用于调节有需要的动物例如人中的GCCR表达。在一个非限制性实施方案中，该方法包括给所述动物施用有效量的反义化合物的步骤，所述反义化合物减少GCCR的表达。在一个实施方案中，本发明的反义化合物有效减少GCCR RNA的水平或功能。因为GCCR mRNA水平中的减少也可以导致表达的GCCR蛋白质产物中的改变，使用此类所得到的改变也可以进行测量。有效减少GCCR RNA或表达的蛋白质产物的水平或功能的本发明反义化合物被视为活性反义化合物。在一个实施方案中，如通过本文例示的测定法测量的，本发明的反义化合物减少GCCR的表达，引起RNA减少至少10％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％。
反义机制
“反义机制”是涉及化合物与靶核酸杂交的所有那些，其中杂交的结果或效应是靶降解或靶占据，伴随涉及例如转录或剪接的细胞机制停止。
靶
如本文所使用的，为了方便起见，术语“靶核酸”和“编码GCCR的核酸分子”已用于包含编码GCCR的DNA，由此类DNA转录的RNA(包括前-mRNA和mRNA或其部分)，以及由此类RNA衍生的cDNA。
区域、片段和位点
靶向过程通常还包括确定用于发生反义相互作用的靶核酸内的至少一个靶区域、片段或位点，从而使得将导致所需效应，例如表达的调节。“区域”被定义为具有至少一种可鉴定的结构、功能或特征的靶核酸的部分。在靶核酸的区域内是片段。“片段”被定义为靶核酸内的区域的较小或亚部分。如本发明所使用的，“位点”被定义为靶核酸内的独特核碱基位置。
一旦鉴定一个或多个靶区域、片段或位点，就设计与靶充分互补的寡聚化合物，即充分良好地杂交并且具有足够的特异性，以产生所需效应。
变体
本领域还已知的是由DNA的相同基因组区域可以产生可变RNA转录物。这些可变转录物一般称为“变体”。更具体而言，“前mRNA变体”是由相同基因组DNA产生的转录物，所述转录物在其起始或终止位置方面不同于由相同基因组DNA产生的其他转录物，并且包含内含子和外显子序列。
在剪接过程中一个或多个外显子或内含子区域或其部分切除后，前mRNA变体产生较小的“mRNA变体”。因此，mRNA变体由前mRNA变体进行加工，并且由于剪接，每个独特的前mRNA变体必须始终产生独特的mRNA变体。这些mRNA变体也称为“可变剪接变体”。如果不存在前mRNA的剪接，那么前mRNA变体等同于mRNA变体。
本领域还已知的是变体可以通过使用可变信号以起始或终止转录来产生，并且前mRNAs和mRNAs可以具有超过一个起始密码子或终止密码子。源于使用可变起始密码子的前mRNA或mRNA的变体被称为那种前mRNA或mRNA的“可变起始变体”。使用可变终止密码子的那些转录物被称为那种前mRNA或mRNA的“可变终止变体”。可变终止变体的一种具体类型是“聚腺苷酸变体”，其中产生的多个转录物来源于通过转录机制的“聚腺苷酸终止信号”之一的可变选择，从而产生在独特的聚腺苷酸位点处终止的转录物。因此，本文描述的变体类型也是合适的靶核酸。
靶表达的调节
“调节”意指功能干扰，例如，表达中的增加(刺激或诱导)或降低(抑制或减少)。作为另一个例子，表达的调节可以包括干扰前mRNA加工的剪接位点选择。“表达”包括基因的编码信息通过其转变成细胞中存在和运作的结构的所有功能。这些结构包括转录和翻译产物。“表达的调节”意指此类功能的干扰。“调节剂”是调节GCCR表达并且包含与有效靶片段互补的至少8核碱基部分的那些化合物。
靶核酸表达的调节可以通过改变任何数目的核酸(DNA或RNA)功能来达到。待调节的DNA功能可以包括复制和转录。复制和转录例如可以来自内源性细胞模板、载体、质粒构建体或其他。待调节的RNA功能可以包括易位功能，这包括但不限于，RNA易位至蛋白质翻译位点，RNA易位至细胞内远离RNA合成位点的位点，和来自RNA的蛋白质翻译。可以进行调节的RNA加工功能包括但不限于，RNA剪接以产生一种或多种RNA种类、RNA加帽、RNA的3’成熟和可以由RNA参与或由RNA促进的涉及RNA的催化活性或复合物形成。表达的调节可以暂时地或通过净稳态水平导致一个或多个核酸种类的水平增加，或一个或多个核酸种类的水平降低。对于靶核酸功能的此类干扰的一种结果是GCCR表达的调节。因此，在一个实施方案中，表达的调节可以意指靶RNA或蛋白质水平的增加或降低。在另一个实施方案中，表达的调节可以意指一种或多种RNA剪接产物的增加或降低，或2种或更多剪接产物比率的改变。
杂交和互补性
“杂交”意指寡聚化合物的互补链配对。尽管不限制于具体机制，但最常见的配对机制涉及在寡聚化合物链的互补核苷或核苷酸碱基(核碱基)之间的氢键结合，所述氢键结合可以是沃森-克里克、Hoogsteen或反向Hoogsteen氢键结合。例如，腺嘌呤和胸腺嘧啶是通过形成氢键配对的互补核碱基。杂交可以在不同环境下发生。当在希望特异性结合的条件下，即，在体内测定法或治疗性处理的情况下在生理条件下，和在体外测定法的情况下进行测定的条件下，存在足够程度的互补性以避免寡聚化合物与非靶核酸序列的非特异性结合时，寡聚化合物是可特异性杂交的。
“严格杂交条件”或“严格条件”指寡聚化合物将与其靶序列杂交，但与最少数目的其他序列杂交的条件。严格条件是序列依赖性的，并且在不同环境下将是不同的，并且寡聚化合物与靶序列杂交的“严格条件”由寡聚化合物的性质和组成以及它们在其中进行研究的测定法决定。
如本文所使用的，“互补性”指1条或2条寡聚化合物链上的2个核碱基之间精确配对的能力。例如，如果反义化合物的某个位置上的核碱基能够与靶核酸的某个位置上的核碱基氢键键合，那么寡核苷酸和靶核酸之间的氢键键合位置被视为互补位置。当每个分子中足够数目的互补位置由可以与彼此氢键键合的核碱基占据时，寡聚化合物和进一步的DNA或RNA彼此互补。因此，“可特异性杂交的”和“互补的”是用于指示在足够数目的核碱基上足够程度的精确配对或互补性，从而使得稳定和特异性结合在寡聚化合物和靶核酸之间发生的术语。
本领域中理解，寡聚化合物的序列无需与其可特异性杂交的靶核酸的序列100％互补。此外，寡核苷酸可以在一个或多个片段上杂交，从而使得插入或邻近片段不参与杂交事件(例如，环结构、错配或发夹结构)。本发明的寡聚化合物与其靶向的靶核酸序列内的靶区域包含至少70％、或至少75％、或至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少92％、或至少95％、或至少97％、或至少98％、或至少99％的序列互补性。例如，其中反义化合物的20个核碱基中的18个与靶区域互补并且因此是可特异性杂交的寡聚化合物，将表示90％的互补性。在这个例子中，剩余的非互补核碱基可以成簇或散布在互补核碱基内并且无需彼此邻接或与互补核碱基邻接。因此，长度为18个核碱基，具有由与靶核酸完全互补的2个区域侧接的4个(四个)非互补核碱基的寡聚化合物将与靶核酸具有77.8％的总互补性，并且因此将包含在本发明的范围内。寡聚化合物与靶核酸区域的互补性百分比可以使用本领域已知的BLAST程序(基本局部比对检索工具)和PowerBLAST程序进行常规测定(Altschul等人，J.Mol.Biol.，1990，215，403-410；Zhang和Madden，Genome Res.，1997，7，649-656)。同源性百分比、序列同一性或互补性可以通过例如Gap程序(Wisconsin Sequence Analysis Package，Version8 for Unix，Genetics Computer Group，University Research Park，MadisonWI)，使用缺省设置进行测定，所述Gap程序使用Smith和Waterman(Adv.Appl.Math.，1981，2，482-489)的算法。
寡聚化合物
术语“寡聚化合物”指能够与核酸分子区域杂交的聚合结构。这个术语包括寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸类似物、寡核苷酸模拟物和这些的嵌合组合。寡聚化合物进行常规地线性制备并且可以进行连接或以其他方式制备成环状的。此外，分支结构是本领域已知的。“反义化合物”或“反义寡聚化合物”指与核酸分子区域至少部分互补的寡聚化合物，所述核酸分子与之杂交并且调节(增加或降低)其表达。因此，尽管所有反义化合物都可以说成寡聚化合物，但并非所有寡聚化合物都是反义化合物。“反义寡核苷酸”是这样的反义化合物，其是基于核酸的寡聚物。反义寡核苷酸可以进行化学修饰。寡聚化合物的非限制性例子包括引物、探针、反义化合物、反义寡核苷酸、外部指导序列(EGS)寡核苷酸、可变剪接子和siRNAs。因此，这些化合物可以以单链、双链、环状、分支或发夹的形式引入，并且包含结构元件例如内部或末端突起或环。寡聚双链化合物可以是杂交的2条链以形成双链化合物，或具有足够的自我互补性的单链以允许杂交和形成完全或部分双链的化合物。
在本发明上下文中的“嵌合”寡聚化合物或“嵌合体”是单或双链寡聚化合物，例如寡核苷酸，其包含2个或更多个化学上不同的区域，各自包含至少一个单体单位，即，在寡聚化合物的情况下是核苷酸。
“缺口聚体”被定义为具有由非脱氧寡核苷酸片段侧接的2′-脱氧寡核苷酸区域的寡聚化合物，一般是寡核苷酸。中央区被称为“缺口”。侧接片段被称为“翼”。如果翼之一具有0个非脱氧寡核苷酸单体，那么描述了“半聚体”。
NAFLD
术语“非酒精性脂肪性肝病”(NAFLD)包含从肝细胞中的简单甘油三酯积聚(肝脂肪变性)到具有炎症(脂肪肝)、纤维化和硬化的肝脂肪变性的疾病谱。非酒精性脂肪肝(NASH)由NAFLD超过甘油三酯沉积的进展而发生。能够诱导坏死、炎症和纤维化的第二击是NASH发展所需的。关于第二击的候选物可以分成广泛的种类：引起氧化应激增加的因子和促进促炎细胞因子表达的因子。已提出增加的肝脏甘油三酯导致动物和人肝细胞中增加的氧化应激，表明肝脏甘油三酯积聚、氧化应激和肝脂肪变性进展至NASH之间潜在的原因和效应关系(Browning和Horton，J.Clin.Invest.，2004，114，147-152)。高甘油三酯血症和高脂肪酸血症(hyperfattyacidemia)可以引起周围组织中的甘油三酯积聚(Shimamura等人，Biochem.biophys.Res.Commun.，2004，322，1080-1085)。本发明的一个实施方案是通过施用预防或治疗有效量的本发明的寡聚化合物减少动物肝中的脂质的方法。本发明的另一个实施方案是通过施用预防或治疗有效量的本发明的寡聚化合物治疗动物中的肝脂肪变性的方法。在某些实施方案中，脂肪变性是脂肪肝。在某些实施方案中，脂肪变性是NASH。
化学修饰
经修饰和可替代的核碱基
本发明的寡聚化合物还包括不同的碱基存在于化合物的一个或多个核苷酸位置上的变体。例如，如果第一种核苷酸是腺苷，那么可以产生在那个位置上包含胸苷、鸟苷或胞苷的变体。这可以在寡聚化合物的任何位置上进行。这些化合物随后使用本文描述的方法进行检测以确定其使GCCR mRNA表达减少的能力。
寡聚化合物还可以包括核碱基(在本文中通常称为杂环碱基或简单地“碱基”)修饰或取代。如本文所使用的，“未修饰的”或“天然的”核碱基包括嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。“取代”是用另一种未修饰的或天然的碱基替换未修饰的或天然的碱基。“经修饰的”核碱基意指其他合成的和天然的核碱基例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C)，5-羟甲基胞嘧啶，黄嘌呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基及其他烷基衍生物，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基及其他烷基衍生物，2-硫尿嘧啶，2-硫代胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶，5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔基(-C≡C-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶碱基的其他炔基衍生物、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫尿嘧啶，8-卤素、8-氨基、8-巯基、8-烷硫基、8-羟基及其他8-取代腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤代特别是5-溴、5-三氟甲基及其他5-取代尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤，2-F-腺嘌呤，2-氨基-腺嘌呤，8-氮鸟嘌呤和8-氮腺嘌呤，7-脱氮鸟嘌呤，7-脱氮腺嘌呤和3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤。进一步修饰的核碱基包括三环嘧啶例如吩噁嗪胞苷(1H-嘧啶并(5，4-b)(1，4)苯并噁嗪-2(3H)-酮)，吩噻嗪胞苷(1H-嘧啶并(5，4-b)(1，4)苯并噻嗪-2(3H)-酮)，G-夹(clamps)例如取代的吩噁嗪胞苷(例如9-(2-氨基乙氧基)-H-嘧啶并(5，4-b)(1，4)苯并噁嗪-2(3H)-酮)，咔唑胞苷(2H-嘧啶并(4，5-b)吲哚-2-酮)，吡啶并吲哚胞苷(H-吡啶并(3′，2′：4，5)吡咯并(2，3-d)嘧啶-2-酮)。经修饰的核碱基还可以包括嘌呤或嘧啶碱基替换为其他杂环的那些，例如7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮鸟苷、2-氨基吡啶和2-吡啶酮。更多的核碱基包括美国专利号3,687,808中公开的那些，The Concise Encyclopedia Of Polymer ScienceAnd Engineering，第858-859页，Kroschwitz，J.I.，编辑John Wiley & Sons，1990中公开的那些，由Englisch等人，Angewandte Chemie，InternationalEdition，1991，30，613描述的那些，和由Sanghvi，Y.S.，第15章，Antisense Research and Applications，第289-302页，Crooke，S.T.和Lebleu，B.，编辑，CRC Press，1993公开的那些。这些核碱基中的某些是本领域技术人员已知为适合于增加本发明的化合物的结合亲和力。这些包括5-取代嘧啶，6-氮嘧啶和N-2、N-6和O-6取代嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代已显示使核酸双链体稳定性增加0.6-1.2℃，并且是目前合适的碱基取代，甚至更特别是当与2′-O-甲氧乙基糖修饰组合时。本领域应当理解碱基修饰不会使得此类化学修饰能够在核酸序列中产生取代。
教导了上述经修饰的核碱基中的某些以及其他经修饰的核碱基的制备的代表性美国专利包括但不限于，上文描述的U.S.3,687,808，以及U.S.：4,845,205；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121,5,596,091；5,614,617；5,645,985；5,830,653；5,763,588；6,005,096；5,681,941；和5,750,692。
本发明的寡聚化合物还可以包括多环杂环化合物代替一个或多个天然存在的杂环碱基部分。许多三环杂环化合物先前已得到报道。这些化合物常规地用于反义应用中以增加经修饰的链与靶链的结合性质。研究最多的修饰靶向鸟苷，因此它们已命名为G-夹或胞苷类似物。在第二条链中与鸟苷形成3个氢键的代表性胞嘧啶类似物包括1，3-二氮杂吩噁嗪-2-酮(Kurchavov，等人，Nucleosides and Nucleotides，1997，16，1837-1846)，1，3-二氮杂吩噻嗪-2-酮，(Lin，K.-Y.；Jones，R.J.；Matteucci，M.J.Am.Chem.Soc.1995，117，3873-3874)和6，7，8，9-四氟-1，3-二氮杂吩噁嗪-2-酮(Wang，J.；Lin，K.-Y.，Matteucci，M.Tetrahedron Lett.1998，39，8385-8388)。掺入寡核苷酸内的这些碱基修饰显示与互补鸟嘌呤杂交，并且后者也显示与腺嘌呤杂交并且通过延伸的叠加相互作用增强螺旋的热稳定性(还参见美国授权前公开20030207804和20030175906)。
当胞嘧啶类似物/取代物具有与刚性1，3-二氮杂吩噁嗪-2-酮支架附着的氨基乙氧基部分时，已观察到进一步的螺旋稳定性质(Lin，K.-Y.；Matteucci，M.J.Am.Chem.Soc.1998，120，8531-8532)。结合研究证实单个掺入可以增强模型寡核苷酸与其互补靶DNA或RNA的结合亲和力，其中相对于5-甲基胞嘧啶(dC5me)，ΔTm最高达18℃，这是关于单个修饰的高亲和力增加。另一方面，螺旋稳定性中的增加不会破坏寡核苷酸的特异性。
适于在本发明中使用的更多的三环杂环化合物和使用其的方法公开于美国专利6,028,183和6,007,992中。
吩噁嗪衍生物增强的结合亲和力连同其不受破坏的序列特异性使得它们成为有价值的核碱基类似物用于开发更有效的基于反义的药物。事实上，有希望的数据已从体外实验获得，证实包含吩噁嗪取代的七核苷酸能够活化RNA酶H、增强细胞摄取并且显示增加的反义活性(Lin，K-Y；Matteucci，M.J.Am.Chem.Soc.1998，120，8531-8532)。活性增加在G-夹的情况下甚至更显著，因为单个取代显示明显改善20聚体2’-脱氧硫代磷酸酯寡核苷酸的体外效力(Flanagan，W.M.；Wolf，J.J.；Olson，P.；Grant，D.；Lin，K.-Y.；Wagner，R.W.；Matteucci，M.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1999，96，3513-3518)。
作为杂环碱基有用的更多的经修饰的多环杂环化合物公开于下述专利中，但不限于下述专利：上文描述的美国专利3,687,808，以及美国专利：4,845,205；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,434,257；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121，5,596,091；5,614,617；5,645,985；5,646,269；5,750,692；5,830,653；5,763,588；6,005,096；和5,681,941，以及美国授权前公开20030158403。
组合
本发明的组合物可以包含2种或更多寡聚化合物。在另一个相关实施方案中，本发明的组合物可以包含靶向第一种核酸的一种或多种反义化合物，特别是寡核苷酸，和靶向第二种核酸靶的一种或多种另外的反义化合物。可替代地，本发明的组合物可以包含靶向相同核酸靶的不同区域的2种或更多反义化合物。2种或更多组合的化合物可以一起或顺次使用。
组合疗法
本发明的化合物可以在组合疗法中使用，其中通过施用本发明的一种或多种化合物和一种或多种其他合适的治疗/预防化合物以治疗状况来达到附加效应。合适的一种或多种治疗/预防化合物包括但不限于，降糖剂、减肥药、和降脂剂。降糖剂包括但不限于，激素，激素模拟物或肠降血糖素模拟物(例如，胰岛素，包括吸入胰岛素，GLP-1或GLP-1类似物例如liraglutide、或依西奈肽)，DPP(IV)抑制剂，磺酰脲(例如，乙酸己脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、甲磺吖庚脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲或格列齐特)，双胍(二甲双胍)，氯茴苯酸(例如，那格列奈或瑞格列奈)，噻唑烷二酮或其他PPAR-γ激动剂(例如，吡格列酮或罗格列酮)，α-葡糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖或米格列醇)，或不靶向GCCR的反义化合物。还包括了双PPAR-激动剂(例如，由Bristol-Myers Squibb开发的莫格列他，或由Astra-Zeneca开发的替格列扎)。还包括了在开发中的其他糖尿病治疗(例如，由Novartis开发的LAF237；由Merck开发的MK-0431；或由Sanofi-Aventis开发的利莫那班)。减肥药包括但不限于，食欲抑制剂(例如苯丁胺或MeridiaTM)，脂肪吸收抑制剂例如奥利司他(例如XenicalTM)，和抑制刺激食欲的饥饿信号的改良形式的睫状神经营养因子。降脂剂包括但不限于，胆盐掩蔽树脂(例如考来烯胺、考来替泊和盐酸考来维仑)，HMGCoA-还原酶抑制剂(例如，洛伐他汀、普伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀和氟伐他汀)，烟酸，纤维酸衍生物(例如，氯贝丁酯、吉非贝齐、非诺贝特、苯扎贝特和环丙贝特)，普罗布可，新霉素，右甲状腺素，植物stanol酯，胆固醇吸收抑制剂(例如，依泽替米贝)，CETP抑制剂(例如，拖彻普和JTT-705)，MTP抑制剂(例如，英普他派)，胆酸转运体抑制剂(顶端钠依赖性胆酸转运蛋白)，肝CYP7a调节剂，ACAT抑制剂(例如Avasimibe)，雌激素替代疗法(例如，它莫西芬)，合成HDL(例如，ETC-216)，抗炎剂(例如，糖皮质激素)，或不靶向GCCR的反义化合物。这些药物中的一种或多种可以与GCCR的一种或多种反义抑制剂组合以达到附加疗效。
寡聚物合成
经修饰的和未修饰的核苷的寡聚化可以根据关于DNA(Protocolsfor Oligonucleotides and Analogs，编辑Agrawal(1993)，Humana Press)和/或RNA(Scaringe，Methods(2001)，23，206-217.Gait等人，Applications of Chemically synthesized RNA in RNA：ProteinInteractions，编辑Smith(1998)，1-36.Gallo等人，Tetrahedron(2001)，57，5707-5713)的文献操作和美国公开号US2005-0164271常规地进行，所述专利引入本文作为参考。
本发明的寡聚化合物可以通过众所周知的固相合成技术来方便地和常规地制备。用于此类合成的设备由几个厂商出售，包括，例如AppliedBiosystems(Foster City，CA)。可以另外地或可替代地使用本领域已知的用于此类合成的任何其他方法。众所周知的是使用相似技术以制备寡核苷酸例如硫代磷酸酯和烷基化衍生物。
寡聚物纯化和分析
寡核苷酸纯化和分析的方法是本领域技术人员已知的。分析方法包括毛细管电泳法(CE)和电雾化质谱法。此类合成和分析方法可以在多孔板中进行。
非限制性公开内容和引入作为参考
尽管已依照某些实施方案具体地描述了本发明的某些化合物、组合物和方法，但本文的实施例仅用于举例说明本发明的化合物并且不意欲对其进行限制。本申请中引用的参考文献、
Figure A20068004324200261
登记号等各自整体引入本文作为参考。
实施例1
测定表达的调节
GCCR表达的调节可以以本领域已知的各种方法进行测定。GCCRmRNA水平可以通过例如RNA印迹分析、竞争聚合酶链式反应(PCR)或实时PCR来定量。RNA分析可以通过本领域已知的方法对总细胞RNA或poly(A)+mRNA来进行。RNA分离的方法在例如Ausubel，F.M.等人，Current Protocols in Molecuar Biology，第1卷，第4.1.1-4.2.9和4.5.1-4.5.3页，John Wiley & Sons，Inc.，1993中教导。
RNA印迹分析是本领域常规的，并且在例如Ausubel，F.M.等人，Current Protocols in Molecular Biology，第1卷，第4.2.1-4.2.9页，JohnWiley & Sons，Inc.，1996中教导。实时定量(PCR)可以使用商购可得的ABI PRISMTM 7700序列检测系统来方便地完成，其可从PE-AppliedBiosystems，Foster City，CA获得并且根据制造商的说明书来使用。
由GCCR编码的蛋白质水平可以以本领域众所周知的各种方法进行定量，例如免疫沉淀、蛋白质印迹分析(免疫印迹)、ELISA或荧光激活的细胞分选(FACS)。针对由GCCR编码的蛋白质的抗体可以从各种来源进行鉴定且获得，例如MSRS抗体目录(Aerie Corporation，Birmingham，MI)，或可以经由常规抗体产生方法进行制备。用于制备多克隆抗血清的方法在例如Ausubel，F.M.等人，Current Protocols inMolecular Biology，第2卷，第11.12.1-11.12.9页，John Wiley & Sons，Inc.，1997中教导。用于制备单克隆抗体的方法在例如Ausubel，F.M.等人，Current Protocols in Molecular Biology，第2卷，第11.4.1-11.11.5页，John Wiley & Sons，Inc.，1997中教导。
免疫沉淀法是本领域标准的，并且可以在例如Ausubel，F.M.等人，Current Protocols in Molecular Biology，第2卷，第10.16.1-10.16.11页，John Wiley & Sons，Inc.，1998找到。蛋白质印迹(免疫印迹)分析是本领域标准的，并且可以在例如Ausubel，F.M.等人，Current Protocols inMolecular Biology，第2卷，第10.8.1-10.8.21页，John Wiley & Sons，Inc.，1997找到。酶联免疫吸附测定法(ELISA)是本领域标准的，并且可以在例如Ausubel，F.M.等人，Current Protocols in MolecularBiology，第2卷，第11.2.1-11.2.22页，John Wiley & Sons，Inc.，1991找到。
本发明的寡聚化合物对靶核酸表达的影响可以在各种细胞类型中的任何一种中进行测试，条件是靶核酸以可测量的水平存在。本发明的寡聚化合物对靶核酸表达的影响可以使用例如PCR或RNA印迹分析常规地测定。细胞系衍生自正常组织和细胞类型并且衍生自与各种病症(例如过度增殖性病症)相关的细胞。衍生自多种组织和种类的细胞系可以得自美国典型培养物保藏中心(ATCC，Manassas，VA)、日本癌症研究资源库(Japanese Cancer Research Resources Bank)(Tokyo，Japan)、或英国应用微生物与研究中心(Centre for Applied Microbiologyand Research)(Wiltshire，United Kingdom)。
原代细胞或从动物中分离且不实施连续培养的那些细胞可以根据本领域已知的方法进行制备，或从各种商业供应者获得。此外，原代细胞包括从临床情况中的人受试者(即供血者，手术患者)获得的那些。
细胞类型
寡聚化合物对靶核酸表达的影响在HepG2细胞和原代大鼠肝细胞中进行测试。
HepG2细胞：
人肝胚细胞瘤细胞系HepG2得自美国典型培养物保藏中心(Manassas，VA)。HepG2细胞在Eagle′s MEM中进行常规培养，所述Eagle′s MEM补充有10％胎牛血清、1mM非必需氨基酸和1mM丙酮酸钠(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)。当它们达到约90％汇合时，细胞通过胰蛋白酶消化和稀释进行常规传代。通过用在磷酸盐缓冲盐水中1∶100稀释的1型大鼠尾部胶原(BD Biosciences，Bedford，MA)包被，制备多孔培养板用于细胞培养。包含胶原的板于37℃温育约1小时，这之后去除胶原并且用磷酸盐缓冲盐水洗涤孔2次。以约8,000个细胞/孔的密度将细胞种植到96孔板(Falcon-Primaria#353872，BD Biosciences，Bedford，MA)内用于在寡聚化合物转染实验中使用。
原代大鼠肝细胞：
原代大鼠肝细胞由购自Charles River Labs(Wilmington，MA)的Sprague-Dawley大鼠制备，并且在高糖DMEM(Invitrogen LifeTechnologies，Carlsbad，CA)中进行常规培养，所述DMEM补充有10％胎牛血清(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)、100单位/mL青霉素和100μg/ml链霉素(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)。以约4,000-6,000个细胞/孔的密度将细胞种植到96孔板(Falcon-Primaria #353872，BD Biosciences，Bedford，MA)内用本发明的寡聚化合物处理。
用寡聚化合物处理
当细胞达到合适的汇合时，如所述的使用转染方法将它们用寡核苷酸进行处理。本领域已知的其他合适的转染试剂包括但不限于，LIPOFECTAMINETM、OLIGOFECTAMINETM和FUGENETM。本领域已知的其他合适的转染方法包括但不限于电穿孔。
LIPOFECTINTM
当细胞达到65-75％汇合时，将它们用寡核苷酸进行处理。使寡核苷酸在Opti-MEMTM-1减少的血清培养基(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)中与LIPOFECTINTM(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)进行混合，以达到寡核苷酸的所需浓度和2.5或3μg/mL/100nM寡核苷酸的LIPOFECTINTM浓度。使这种转染混合物在室温下温育约0.5小时。对于在96孔板中生长的细胞，细胞用100μLOPTI-MEMTM-1洗涤1次，并随后用130μL转染混合物进行处理。在24孔板或其他标准组织培养板中生长的细胞使用合适体积的培养基和寡核苷酸进行类似地处理。一式两份或一式三份地处理细胞且获得数据。于37℃处理约4-7小时后，将包含转染混合物的培养基替换为新鲜培养基。在寡核苷酸处理后16-24小时收获细胞。
CYTOFECTINTM
当细胞达到65-75％汇合时，将它们用寡核苷酸进行处理。使寡核苷酸在Opti-MEMTM-1减少的血清培养基(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)中与CYTOFECTINTM(Gene Therapy Systems，San Diego，CA)进行混合，以达到寡核苷酸的所需浓度和2或4μg/mL/100nM寡核苷酸的CYTOFECTINTM浓度。使这种转染混合物在室温下温育约0.5小时。对于在96孔板中生长的细胞，细胞用100μL OPTI-MEMTM-1洗涤1次，并随后用130μL转染混合物进行处理。在24孔板或其他标准组织培养板中生长的细胞使用合适体积的培养基和寡核苷酸进行类似地处理。一式两份或一式三份地处理细胞且获得数据。于37℃处理约4-7小时后，将包含转染混合物的培养基替换为新鲜培养基。在寡核苷酸处理后16-24小时收获细胞。
对照寡核苷酸
对照寡核苷酸用于测定关于特定细胞系的最佳寡聚化合物浓度。此外，当本发明的寡聚化合物在寡聚化合物筛选实验或表型分析中进行测试时，对照寡核苷酸与本发明的化合物平行地进行测试。在某些实施方案中，对照寡核苷酸用作阴性对照寡核苷酸，即作为用于测量对基因表达或表型的影响不存在的手段。在可替代的实施方案中，对照寡核苷酸用作阳性对照寡核苷酸，即作为已知影响基因表达或表型的寡核苷酸。对照寡核苷酸显示于表2中。“靶名称”指寡核苷酸靶向的基因。“靶种类”指其中寡核苷酸与靶mRNA完全互补的种类。“基序”是包含寡核苷酸的化学上独特区域的指示。表2中的某些化合物是嵌合寡核苷酸，包含由2’-脱氧核苷酸组成的中央“缺口”区，所述中央“缺口”区在两侧(5’和3’)上由“翼”侧接。翼由2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸，也称为2’-MOE核苷酸组成。每个缺口聚体寡核苷酸的“基序”在表2中举例说明，并且指出了每个缺口区和翼中的核苷酸数目，例如“5-10-5”指具有由5个核苷酸的翼侧接的10个核苷酸的缺口区的缺口聚体。ISIS29848是随机化的寡聚化合物的混合物；其序列显示于表2中，其中N可以是A、T、C或G。表2中的寡核苷酸自始至终核苷间(主链)键是硫代磷酸酯。未修饰的胞嘧啶由核苷酸序列中的“uC”指出；所有其他胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。
表2
用于细胞系测试、寡聚化合物筛选和表型测定法的对照寡核苷酸
ISIS# 靶名称 靶物种 序列(5′至3′) 基序   SEQIDNO
  113131   CD86   人   CGTGTGTCTGTGCTAGTCCC   5-10-5   4
289865   叉头盒OlA(横纹肌肉瘤) 人 GGCAACGTGAACAGGTCCAA 5-10-5 5
  25237   整联蛋白β3   人   GCCCATTGCTGGACATGC   4-10-4   6
  196103   整联蛋白β3   人   AGCCCATTGCTGGACATGCA   5-10-5   7
148715 锯齿状2   人；小鼠；大鼠 TTGTCCCAGTCCCAGGCCTC 5-10-5 8
18076   Jun N-末端激酶-1 人 CTTTCuCGTTGGAuCuCCCTGGG 5-9-6 9
18078   Jun N-末端激酶-2 人 GTGCGuCGuCGAGuCuCuCGAAATC 5-9-6 10
  183881   驱动蛋白样1   人   ATCCAAGTGCTACTGTAGTA   5-10-5   11
  29848   无   无   NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN   5-10-5   12
226844   缺刻(果蝇)同源物1 人；小鼠 GCCCTCCATGCTGGCACAGG 5-10-5 13
105990   过氧化物酶体增生物激活的受体γ 人 AGCAAAAGATCAATCCGTTA 5-10-5 14
  336806   Raf激酶C   人   TACAGAAGGCTGGGCCTTGA   5-10-5   15
15770 Raf激酶C   小鼠；鼠肉瘤病毒；大鼠 ATGCATTuCTGuCuCuCuCuCAAGGA 5-10-5 16
使用的寡核苷酸浓度从细胞系到细胞系不同。为了测定关于特定细胞系的最佳寡核苷酸浓度，细胞用一系列浓度的阳性对照寡核苷酸进行处理。阳性对照显示于表2中。例如，对于人和非人灵长类动物细胞，阳性对照寡核苷酸可以选自ISIS 336806或ISIS 18078。对于小鼠或大鼠细胞，阳性对照寡核苷酸可以是例如ISIS 15770。导致靶mRNA减少80％的阳性对照寡核苷酸的浓度，随后用作对于那种细胞系的后续实验中关于新寡核苷酸的筛选浓度，所述靶mRNA例如对于ISIS 15770是大鼠Raf激酶C。如果未达到80％减少，那么导致靶mRNA减少60％的阳性对照寡核苷酸的最低浓度，随后用作对于那种细胞系的后续实验中的寡核苷酸筛选浓度。如果未达到减少60％，那么那种特定细胞系被视为不适合于寡核苷酸转染实验。当反义寡核苷酸使用脂质体试剂进行转染时，本文使用的反义寡核苷酸浓度为50nM-300nM，当反义寡核苷酸通过电穿孔进行转染时，浓度为1μM-40μM。
实施例2
GCCR mRNA水平的实时定量PCR分析
GCCR mRNA水平的定量通过实时定量PCR使用ABI PRISMTM7600、7700或7900序列检测系统(PE-Applied Biosystems，Foster City，CA)根据制造商的说明书来完成。
通过RT、实时PCR获得的基因靶量使用表达恒定的基因-GAPDH的表达水平，或通过使用RiboGreenTM(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)定量总RNA进行标准化。总RNA使用RiboGreenTM RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)进行定量。将170μLRiboGreenTM工作试剂(在10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 7.5中1∶350稀释的RiboGreenTM试剂)移液到包含30μL纯化的细胞RNA的96孔板内。板在CytoFluor 4000(PE Applied Biosystems)中进行读数，其中在485nm处激发和在530nm处发射。
GAPDH表达通过RT、实时PCR与靶的定量同时或分开进行定量。对于与靶水平的测量同时的测量，就其在定量PCR分析前与GAPDH扩增反应“多路进行(multiplexed)”的能力评估对测量的靶基因特异的引物-探针组。多路进行指在单管中进行多个DNA种类(在这种情况下是靶和内源性GAPDH对照)的检测，这要求GAPDH的引物-探针组不干扰靶的扩增。
用于在实时PCR中使用的探针和引物被设计成与靶特异性序列杂交。引物和探针设计的方法是本领域已知的。用于在实时PCR中使用的引物和探针的设计可以使用商购可得的软件来进行，例如Primer
Figure A20068004324200331
PE Applied Biosystems，Foster City，CA。引物和探针及与之杂交的靶核酸序列呈现于表4中。靶特异性PCR探针具有与5’末端共价连接的FAM和与3’末端共价连接的TAMRA或MGB，其中FAM是荧光染料，TAMRA或MGB是猝灭染料。
分离后，对RNA实施顺次的逆转录酶(RT)反应和实时PCR，这两者都在同一孔中进行。RT和PCR试剂得自Invitrogen LifeTechnologies(Carlsbad，CA)。RT、实时PCR通过向包含30μL总RNA溶液(20-200ng)的96孔板中加入20μL PCR混合物(cocktail)(2.5x PCR缓冲液减MgCl2，6.6mM MgCl2，dATP、dCTP、dCTP和dGTP各375μM，正向引物和反向引物各375nM，125nM探针，4单位RNA酶抑制剂，1.25单位Taq，5单位MuLV逆转录酶和2.5x ROX染料)同样进行。通过于48℃温育30分钟来进行RT反应。于95℃温育10分钟以激活
Figure A20068004324200333
Taq后，进行40个循环的2步PCR方案：95℃15秒(变性)，随后为60℃1.5分钟(复性/延伸)。
通过如本文其他实施例中所述的定量实时PCR，评估本发明的化合物对人靶mRNA水平的影响，其中使用设计为与人GCCR杂交的引物-探针组。例如：
正向引物：TTGACATTTTGCAGGATTTGGA(作为SEQ ID NO：17引入本文)
反向引物：CCAAGGACTCTCATTCGTCTCTTT(作为SEQ ID NO：18引入本文)
和PCR探针：
FAM-TTTCTTCTGGGTCCCC-MGB(作为SEQ ID NO：19引入本文)，其中FAM是荧光染料，MGB是非荧光猝灭染料。
通过如本文其他实施例中所述的定量实时PCR，评估本发明的化合物对大鼠靶mRNA水平的影响，其中使用设计为与大鼠GCCR杂交的引物-探针组。例如：
正向引物：AAACAATAGTTCCTGCAGCATTACC(作为SEQ ID NO：20引入本文)
反向引物：CATACAACACCTCGGGTTCAATC(作为SEQ ID NO：21引入本文)
和PCR探针：
FAM-ACCCCTACCTTGGTGTCACTGCT-TAMRA(作为SEQ ID NO：22引入本文)，其中FAM是荧光染料，TAMRA是猝灭染料。
通过如本文其他实施例中所述的定量实时PCR，评估本发明的化合物对小鼠靶mRNA水平的影响，其中使用设计为与小鼠GCCR杂交的引物-探针组。例如：
正向引物：GACATCTTGCAGGATTTGGAGTT(作为SEQ ID NO：23引入本文)
反向引物：AACAGGTCTGACCTCCAAGGACT(作为SEQ ID NO：24引入本文)
和PCR探针：
FAM-CGGGTCCCCAGGTAAAGAGACAAACGA-TAMRA(作为SEQ IDNO：25引入本文)，其中FAM是荧光染料，TAMRA是猝灭染料。
实施例3
通过5-10-5缺口聚体反义抑制人GCCR表达
设计一系列寡聚化合物以靶向人GCCR的不同区域，其中使用表1中引用的公开序列。化合物显示于表3中。表3中的所有化合物都是长度为20个核苷酸的嵌合寡核苷酸(“缺口聚体”)，包含由10个2’-脱氧核苷酸组成的中央“缺口”区，所述中央“缺口”区在两侧(5’和3’)上由5-核苷酸“翼”侧接。翼由2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸，也称为2’-MOE核苷酸组成。寡核苷酸自始至终核苷间(主链)键是硫代磷酸酯。所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。表3中显示的是寡核苷酸的序列，以及化合物结合的靶序列上的第一个(最5’)位置的靶位点。通过如本文其他实施例中所述的定量实时PCR分析化合物对基因靶mRNA水平的影响，其中使用设计为与人GCCR杂交的引物-探针组。
数据是来自3次实验的平均值，在所述实验中HepG2细胞用50nM公开的寡聚化合物使用LIPOFECTINTM进行处理。表达的减少表示为表3中的抑制百分比。如果存在，那么“N.D.”指“未测定”。这些寡聚化合物所抑制的靶区域在本文中被称为“验证的靶片段”。
表3
通过5-10-5缺口聚体抑制人GCCR mRNA水平
  5-10-5的ISIS No  靶SEQ ID NO 靶位点 序列 w/5-10-5抑制％ SEQ ID NO
  361132   1   394   TCTGTCTCTCCCATATACAG   65   26
  361133   1   398   TGTTTCTGTCTCTCCCATAT   56   27
  361134   1   402   CTTTTGTTTCTGTCTCTCCC   60   28
  361135   1   406   ATCACTTTTGTTTCTGTCTC   80   29
  180272   1   497   GTTTGCAATGCTTTCTTCCA   74   30
  345188   1   501   TGAGGTTTGCAATGCTTTCT   71   31
  361136   1   505   CTATTGAGGTTTGCAATGCT   10   32
  361137   1   509   CGACCTATTGAGGTTTGCAA   80   33
  180274   1   514   CTGGTCGACCTATTGAGGTT   68   34
  180275   1   672   CTGTGGTATACAATTTCACA   44   35
  180276   1   679   CTTTGGTCTGTGGTATACAA   78   36
  345198   1   689   GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG   79   37
  180279   1   877   GGTTTAGTGTCCGGTAAAAT   60   38
  361138   1   954   CTTTTTCTGTTTTCACTTGG   70   39
  180280   1   1000   TTCTCTTGCTTAATTACCCC   77   40
  345218   1   1004   CAGTTTCTCTTGCTTAATTA   67   41
  180281   1   1007   GCCCAGTTTCTCTTGCTTAA   74   42
  361139   1   1058   TTTATTACCAATTATATTTG   0   43
  361140   1   1062   ACATTTTATTACCAATTATA   35   44
  361141   1   1066   GCAGACATTTTATTACCAAT   78   45
  361142   1   1070   AATGGCAGACATTTTATTAC   40   46
  361143   1   1074   CAGAAATGGCAGACATTTTA   63   47
  361144   1   1078   TGAACAGAAATGGCAGACAT   61   48
  180283   1   1081   CCATGAACAGAAATGGCAGA   69   49
  361145   1   1085   CACACCATGAACAGAAATGG   30   50
  361146   1   1089   TACTCACACCATGAACAGAA   60   51
  361147   1   1093   GAGGTACTCACACCATGAAC   71   52
  5-10-5的ISIS No  靶SEQ ID NO 靶位点 序列 w/5-10-5抑制％ SEQ ID NO
  361148   1   1097   TCCAGAGGTACTCACACCAT   75   53
  361149   1   1101   GTCCTCCAGAGGTACTCACA   69   54
  361150   1   1105   ATCTGTCCTCCAGAGGTACT   53   55
  361151   1   1109   GTACATCTGTCCTCCAGAGG   75   56
  361152   1   1113   AGTGGTACATCTGTCCTCCA   62   57
  361153   1   1117   TCATAGTGGTACATCTGTCC   52   58
  361154   1   1121   CATGTCATAGTGGTACATCT   57   59
  361155   1   1125   TATTCATGTCATAGTGGTAC   41   60
  361156   1   1129   GCTGTATTCATGTCATAGTG   67   61
  361157   1   1133   GGATGCTGTATTCATGTCAT   67   62
  361158   1   1137   AAAGGGATGCTGTATTCATG   45   63
  180288   1   1141   TGAGAAAGGGATGCTGTATT   62   64
  180289   1   1181   TGGTGGAATGACATTAAAAA   54   65
  361159   1   1185   GAATTGGTGGAATGACATTA   24   66
  361160   1   1324   GAGCTTACATCTGGTCTCAT   59   67
  361161   1   1328   AGGAGAGCTTACATCTGGTC   65   68
  361162   1   1332   ATGGAGGAGAGCTTACATCT   18   69
  361163   1   1336   CTGGATGGAGGAGAGCTTAC   50   70
  361164   1   1339   GAGCTGGATGGAGGAGAGCT   49   71
  361165   1   1468   TGTCCTTCCACTGCTCTTTT   61   72
  361166   1   1472   GTGCTGTCCTTCCACTGCTC   65   73
  361167   1   1476   AATTGTGCTGTCCTTCCACT   62   74
  361168   1   1480   AGGTAATTGTGCTGTCCTTC   52   75
  361169   1   1543   CGGCATGCTGGGCAGTTTTT   78   76
  361170   1   1547   ATAGCGGCATGCTGGGCAGT   58   77
  361171   1   1549   CGATAGCGGCATGCTGGGCA   65   78
  361172   1   1570   ATTCCAGCCTGAAGACATTT   24   79
  361173   1   1574   GTTCATTCCAGCCTGAAGAC   52   80
  361174   1   1597   TTCTTTGTTTTTCGAGCTTC   62   81
  5-10-5的ISIS No  靶SEQ ID NO 靶位点 序列 w/5-10-5抑制％ SEQ ID NO
  361175   1   1601   TTTTTTCTTTGTTTTTCGAG   48   82
  180297   1   1680   CAGGAACTATTGTTTTGTTA   33   83
  361176   1   1682   TGCAGGAACTATTGTTTTGT   46   84
  361177   1   1765   GAGCTATCATATCCTGCATA   71   85
  361178   1   1769   AACAGAGCTATCATATCCTG   51   86
  361179   1   1773   CTGGAACAGAGCTATCATAT   67   87
  361180   1   1840   TTCACTGCTGCAATCACTTG   52   88
  361181   1   1844   CCATTTCACTGCTGCAATCA   55   89
  361182   1   1848   TTGCCCATTTCACTGCTGCA   70   90
  361183   1   1999   ATAATCAGATCAGGAGCAAA   36   91
  361184   1   2003   ATTAATAATCAGATCAGGAG   10   92
  361185   1   2007   GCTCATTAATAATCAGATCA   43   93
  361186   1   2011   CTCTGCTCATTAATAATCAG   0   94
  180302   1   2015   CATTCTCTGCTCATTAATAA   23   95
  180304   1   2053   AGCATGTGTTTACATTGGTC   73   96
  361187   1   2119   AAGGTTTTCATACAGAGATA   38   97
  361188   1   2123   CAGTAAGGTTTTCATACAGA   22   98
  361189   1   2127   GAAGCAGTAAGGTTTTCATA   46   99
  180307   1   2131   GAGAGAAGCAGTAAGGTTTT   32   100
  361190   1   2212   GCTTTTCCTAGCTCTTTGAT   74   101
  361191   1   2215   ATGGCTTTTCCTAGCTCTTT   68   102
  361192   1   2347   ATGGTCTTATCCAAAAATGT   63   103
  361193   1   2351   ACTCATGGTCTTATCCAAAA   66   104
  361194   1   2355   CAATACTCATGGTCTTATCC   54   105
  361195   1   2359   AATTCAATACTCATGGTCTT   69   106
  361196   1   2383   ATGATTTCAGCTAACATCTC   1   107
  180311   1   2386   GTGATGATTTCAGCTAACAT   59   108
  361197   1   2407   GAATATTTTGGTATCTGATT   59   109
  361198   1   2411   ATTTGAATATTTTGGTATCT   20   110
  5-10-5的ISIS No  靶SEQ ID NO 靶位点 序列 w/5-10-5抑制％ SEQ ID NO
  361199   1   2415   TTCCATTTGAATATTTTGGT   65   111
  361200   1   2419   ATATTTCCATTTGAATATTT   51   112
  361202   1   2425   TTTTTGATATTTCCATTTGA   20   113
表3中显示的使GCCR表达减少至少30％的5-10-5缺口聚体寡核苷酸是优选的。与这些优选序列互补的靶片段在本文中被称为“优选靶片段”，并且因此对于通过本发明的化合物进行的靶向是优选的。本发明的另一个方面是靶向GCCR的反义化合物，其包含SEQ ID NOs：26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113的8个核碱基的部分，其中所述化合物与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个实施方案中，反义化合物是长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与5个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸的区域。在一个实施方案中，所有核苷间键都是硫代磷酸酯键。在一个实施方案中，所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。
实施例4
通过缺口加宽的寡核苷酸反义抑制人GCCR表达
依照本发明，还测试了具有与表4中所述化合物相同序列的缺口加宽的寡核苷酸。表4中的所有化合物都是长度为20个核苷酸的嵌合寡核苷酸(“缺口聚体”)，包含由16个2’-脱氧核苷酸组成的中央“缺口”区，所述中央“缺口”区在两侧(5’和3’)上由2-核苷酸“翼”侧接。翼由2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸，也称为2’-MOE核苷酸组成。寡核苷酸自始至终核苷间(主链)键是硫代磷酸酯。所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。表4中显示的是寡核苷酸的序列，以及化合物与之结合的靶序列上的第一个(5’最末端)位置的靶位点。通过如本文所述的定量实时PCR就其对基因靶mRNA水平的影响分析2-16-2基序化合物。
数据是来自3次实验的平均值，在所述实验中HepG2细胞用50nM公开的寡聚化合物使用LIPOFECTINTM进行处理。表达的减少表示为表4中的抑制百分比。如果存在，那么“N.D.”指“未测定”。这些寡聚化合物所抑制的靶区域在本文中被称为“验证的靶片段”。
表4
通过2-16-2缺口聚体抑制人GCCR mRNA水平
  2-16-2的ISIS No  靶SEQ ID NO 靶位点 序列 w/2-16-2抑制％ SEQ ID NO
  372350   1   394   TCTGTCTCTCCCATATACAG   69   26
  372376   1   398   TGTTTCTGTCTCTCCCATAT   72   27
  372331   1   402   CTTTTGTTTCTGTCTCTCCC   67   28
  372341   1   406   ATCACTTTTGTTTCTGTCTC   63   29
  352983   1   497   GTTTGCAATGCTTTCTTCCA   64   30
  372365   1   501   TGAGGTTTGCAATGCTTTCT   69   31
  372387   1   505   CTATTGAGGTTTGCAATGCT   70   32
  372316   1   509   CGACCTATTGAGGTTTGCAA   73   33
  372310   1   514   CTGGTCGACCTATTGAGGTT   70   34
  372315   1   672   CTGTGGTATACAATTTCACA   35   35
  372326   1   679   CTTTGGTCTGTGGTATACAA   54   36
  372339   1   689   GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG   81   37
  372322   1   877   GGTTTAGTGTCCGGTAAAAT   78   38
  372361   1   954   CTTTTTCTGTTTTCACTTGG   70   39
  372308   1   1000   TTCTCTTGCTTAATTACCCC   84   40
  372304   1   1004   CAGTTTCTCTTGCTTAATTA   66   41
  352984   1   1007   GCCCAGTTTCTCTTGCTTAA   80   42
  372372   1   1058   TTTATTACCAATTATATTTG   0   43
  372327   1   1062   ACATTTTATTACCAATTATA   11   44
  372311   1   1066   GCAGACATTTTATTACCAAT   65   45
  372352   1   1070   AATGGCAGACATTTTATTAC   54   46
  2-16-2的ISIS No  靶SEQ ID NO 靶位点 序列 w/2-16-2抑制％ SEQ ID NO
  372337   1   1074   CAGAAATGGCAGACATTTTA   36   47
  372323   1   1078   TGAACAGAAATGGCAGACAT   73   48
  372347   1   1081   CCATGAACAGAAATGGCAGA   86   49
  372383   1   1085   CACACCATGAACAGAAATGG   73   50
  372348   1   1089   TACTCACACCATGAACAGAA   82   51
  372363   1   1093   GAGGTACTCACACCATGAAC   47   52
  372334   1   1097   TCCAGAGGTACTCACACCAT   82   53
  372359   1   1101   GTCCTCCAGAGGTACTCACA   69   54
  372344   1   1105   ATCTGTCCTCCAGAGGTACT   72   55
  372307   1   1109   GTACATCTGTCCTCCAGAGG   74   56
  372370   1   1113   AGTGGTACATCTGTCCTCCA   69   57
  372374   1   1117   TCATAGTGGTACATCTGTCC   0   58
  372355   1   1121   CATGTCATAGTGGTACATCT   65   59
  372385   1   1125   TATTCATGTCATAGTGGTAC   18   60
  372319   1   1129   GCTGTATTCATGTCATAGTG   23   61
  372366   1   1133   GGATGCTGTATTCATGTCAT   37   62
  372330   1   1137   AAAGGGATGCTGTATTCATG   80   63
  372333   1   1141   TGAGAAAGGGATGCTGTATT   68   64
  372358   1   1181   TGGTGGAATGACATTAAAAA   67   65
  372381   1   1185   GAATTGGTGGAATGACATTA   30   66
  372377   1   1324   GAGCTTACATCTGGTCTCAT   45   67
  372309   1   1328   AGGAGAGCTTACATCTGGTC   63   68
  372388   1   1332   ATGGAGGAGAGCTTACATCT   55   69
  372321   1   1336   CTGGATGGAGGAGAGCTTAC   51   70
  372312   1   1339   GAGCTGGATGGAGGAGAGCT   60   71
  372324   1   1468   TGTCCTTCCACTGCTCTTTT   73   72
  372332   1   1472   GTGCTGTCCTTCCACTGCTC   81   73
  372335   1   1476   AATTGTGCTGTCCTTCCACT   42   74
  372342   1   1480   AGGTAATTGTGCTGTCCTTC   100   75
  2-16-2的ISIS No  靶SEQ ID NO 靶位点 序列 w/2-16-2抑制％ SEQ ID NO
  372345   1   1543   CGGCATGCTGGGCAGTTTTT   82   76
  372356   1   1547   ATAGCGGCATGCTGGGCAGT   73   77
  372305   1   1549   CGATAGCGGCATGCTGGGCA   80   78
  372367   1   1570   ATTCCAGCCTGAAGACATTT   78   79
  372353   1   1574   GTTCATTCCAGCCTGAAGAC   70   80
  372364   1   1597   TTCTTTGTTTTTCGAGCTTC   47   81
  372340   1   1601   TTTTTTCTTTGTTTTTCGAG   100   82
  372369   1   1680   CAGGAACTATTGTTTTGTTA   56   83
  372378   1   1682   TGCAGGAACTATTGTTTTGT   41   84
  372317   1   1765   GAGCTATCATATCCTGCATA   84   85
  372351   1   1769   AACAGAGCTATCATATCCTG   69   86
  372389   1   1773   CTGGAACAGAGCTATCATAT   76   87
  372362   1   1840   TTCACTGCTGCAATCACTTG   64   88
  372328   1   1844   CCATTTCACTGCTGCAATCA   81   89
  372338   1   1848   TTGCCCATTTCACTGCTGCA   82   90
  372349   1   1999   ATAATCAGATCAGGAGCAAA   10   91
  372373   1   2003   ATTAATAATCAGATCAGGAG   30   92
  372360   1   2007   GCTCATTAATAATCAGATCA   27   93
  372384   1   2011   CTCTGCTCATTAATAATCAG   100   94
  372380   1   2015   CATTCTCTGCTCATTAATAA   2   95
  372320   1   2053   AGCATGTGTTTACATTGGTC   75   96
  372371   1   2119   AAGGTTTTCATACAGAGATA   37   97
  372382   1   2123   CAGTAAGGTTTTCATACAGA   44   98
  372306   1   2127   GAAGCAGTAAGGTTTTCATA   48   99
  372343   1   2131   GAGAGAAGCAGTAAGGTTTT   46   100
  372313   1   2212   GCTTTTCCTAGCTCTTTGAT   66   101
  372325   1   2215   ATGGCTTTTCCTAGCTCTTT   69   102
  372336   1   2347   ATGGTCTTATCCAAAAATGT   65   103
  372318   1   2351   ACTCATGGTCTTATCCAAAA   70   104
  2-16-2的ISIS No  靶SEQ ID NO 靶位点 序列 w/2-16-2抑制％ SEQ ID NO
  372375   1   2355   CAATACTCATGGTCTTATCC   85   105
  372346   1   2359   AATTCAATACTCATGGTCTT   47   106
  372386   1   2383   ATGATTTCAGCTAACATCTC   74   107
  372354   1   2386   GTGATGATTTCAGCTAACAT   66   108
  372357   1   2407   GAATATTTTGGTATCTGATT   13   109
  372368   1   2411   ATTTGAATATTTTGGTATCT   0   110
  372379   1   2415   TTCCATTTGAATATTTTGGT   44   111
  372390   1   2419   ATATTTCCATTTGAATATTT   0   112
  372329   1   2425   TTTTTGATATTTCCATTTGA   0   113
表4中显示的使GCCR表达减少至少30％的2-16-2寡核苷酸是优选的。与这些优选序列互补的靶片段在本文中被称为“优选靶片段”，并且因此对于通过本发明的化合物的靶向是优选的。
本发明的另一个方面是靶向GCCR的反义化合物，其包含SEQ IDNOs：26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113的8个核碱基的部分，其中所述化合物与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个实施方案中，反义化合物是长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。在一个实施方案中，所有核苷间键都是硫代磷酸酯键。在一个实施方案中，所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。
实施例5
靶向GCCR的跨物种寡核苷酸
先前实施例中描述的某些寡核苷酸是跨物种互补的，并且因此预期减少跨物种的糖皮质激素受体表达。表5中显示的是此类跨物种的寡核苷酸的序列，以及寡核苷酸的5-10-5基序形式和2-16-2基序形式的ISIS编号。关于每个序列还指出的是与化合物结合的人靶序列(NM 000176.1，作为SEQ ID NO：1引入本文)上的第一个(最5’)位置的靶位点。指出了关于人、猕猴、大鼠和小鼠GCCR mRNA的互补性(“是”意指完全互补性，“1mm”意指来自完全互补性的1个错配)。
表5
靶向GCCR的跨物种寡核苷酸
Figure A20068004324200431
实施例6
人和大鼠GCCR mRNA水平的反义抑制-使用5-10-5缺口聚体的剂量反应研究
在本发明的一个进一步的实施方案中，选择11种寡核苷酸用于另外的剂量反应研究。原代大鼠肝细胞用5、10、25、50、100或200nMISIS  180274、ISIS  180275、ISIS  180276、ISIS  180281、ISIS180304、ISIS 361137、ISIS 361141、ISIS 361151、ISIS 361156、ISIS345198、ISIS 361137或阴性对照寡核苷酸ISIS141923(CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC，作为SEQ ID NO：114引入本文)进行处理，并且如本文的其他实施例中所述测量mRNA水平。ISIS141923是包含由2’-MOE翼侧接的10个脱氧核苷酸的缺口和硫代磷酸酯主链的5-10-5缺口聚体。所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。未处理的细胞充当对照，数据对其进行标准化。
这些研究的结果显示于表6中。通过如本文所描述的实时PCR测量靶mRNA水平。数据是来自3次实验的平均值并且表示为相对于未处理对照的抑制百分比。
表6
在大鼠原代肝细胞中的GCCR表达的剂量依赖性抑制
Figure A20068004324200441
在本发明的一个进一步的实施方案中，在人HepG2细胞系中测试相同的寡核苷酸在指出的剂量时减少GCCR mRNA表达的能力。未处理的细胞充当对照，数据对其进行标准化。
这些研究的结果显示于表7中。通过如本文所描述的实时PCR测量靶mRNA水平。数据是来自3次实验的平均值并且表示为相对于未处理对照的抑制百分比。
表7
在HepG2细胞中的GCCR表达的剂量依赖性抑制
Figure A20068004324200451
如表6和表7中所示，靶向GCCR的反义寡核苷酸在以剂量依赖性方式减少人和大鼠靶mRNA水平方面是有效的。
实施例7
大鼠GCCR mRNA水平的反义抑制-用5-10-5缺口聚体的体内剂量反应研究
在大鼠中以各种剂量评估5种5-10-5缺口聚体基序寡核苷酸(ISIS180281、ISIS 361137、ISIS 345198、ISIS 180304和ISIS 361141)减少肝中的GCCR mRNA水平的能力。将8周龄的Sprague Dawley大鼠分成经由注射接受50、25或12.5mg/kg剂量的指出的寡核苷酸之一的治疗组。每个治疗组包含4只动物，并且每周给药2次，共3周。单独用盐水注射的动物充当对照组。每周评估动物的标准血液参数(ALT/AST、胆固醇、甘油三酯和葡萄糖)。在研究结束时处死动物，并且收集肝组织并使用本文描述的实时PCR分析法分析靶减少。结果作为用指出的寡核苷酸的指出的剂量处理后测量的GCCR mRNA的减少百分比显示于表8a和8b(分开实验)中。
表8a
体内大鼠筛选-GCCR反义寡核苷酸
Figure A20068004324200461
表8b
体内大鼠筛选-GCCR反义寡核苷酸
表8a和8b中的数据显示靶向GCCR的反义寡核苷酸在以剂量依赖性方式体内减少表达方面是有效的。选择ISIS345198(GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG；SEQ ID NO：37)用于在集中于缺口优化的结构-活性实验中的进一步评估。这种化合物与小鼠、大鼠、人、猴、兔和豚鼠糖皮质激素受体RNA完全互补。
实施例8
体内GCCR mRNA水平的反义抑制-缺口优化研究
设计一系列寡聚化合物以靶向具有各种大小的脱氧核苷酸缺口和2’-MOE翼的GCCR。测试的每种寡核苷酸具有相同的核碱基序列(GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG，作为SEQ ID NO：37引入本文)且因此靶向SEQ ID NO：1的相同片段(核碱基689-709)。如实施例5中所示，这种寡核苷酸也与大鼠GCCR完全互补。
化合物显示于表9中。文本指脱氧核苷酸，用粗体、加下划线的文本指定的核碱基是2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸。自始至终，核苷间键是硫代磷酸酯，所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。表9中指出的是每种化合物指示包含寡核苷酸的化学上独特区域的“基序”。
表9
靶向大鼠GCCR的反义化合物
  ISIS编号   化学  SEQ ID NO：   基序
  345198   GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG   37   5-10-5缺口聚体
  372339   GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG   37   2-16-2缺口聚体
  377130   GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG   37   3-14-3缺口聚体
  377131   GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG   37   4-12-4缺口聚体
9周龄的Sprague-Dawley大鼠用50、25、12.5和6.25mg/kg剂量的表9中呈现的寡核苷酸每周处理2次，共3周。单独用盐水注射的动物充当对照组。每个处理组包含4只动物，并且每周监控动物的血浆转氨酶、脂质、葡萄糖水平和体重增加。如对于正常动物预期的，没有观察到葡萄糖中的大量改变。基线(在治疗开始前)血浆胆固醇(CHOL)和甘油三酯(TRIG)水平和在第3周时测量的水平以mg/dL作为每个治疗组的平均值显示于表10中。
表10
在正常大鼠中靶向GCCR的寡核苷酸对血浆脂质水平的影响
处理   基线TRIG(mg/dL)   第3周TRIG(mg/dL)   基线CHOL(mg/dL)   第3周CHOL(mg/dL)
  盐水   78   70   77   62
  345198，50mg/kg   50   23   66   35
  345198，25mg/kg   99   34   69   39
  345198，12.5mg/kg   71   52   64   42
  345198，6.25mg/kg   139   99   78   58
  372339，50mg/kg   93   29   75   54
  372339，25mg/kg   86   33   70   40
  372339，12.5mg/kg   104   71   69   49
  372339，6.25mg/kg   103   102   71   56
  377130，50mg/kg   91   21   65   41
  377130，25mg/kg   82   32   75   41
  377130，12.5mg/kg   84   68   72   47
  377130，6.25mg/kg   76   67   70   52
  377131，50mg/kg   96   28   85   48
  377131，25mg/kg   83   25   75   42
  377131，12.5mg/kg   64   49   79   44
  377131，6.25mg/kg   119   110   75   60
如表10中所示，用靶向GCCR的反义寡核苷酸处理引起胆固醇和甘油三酯水平的剂量依赖性降低。因此，本发明的一个实施方案是降低动物中的血脂水平的方法，所述方法包括给所述动物施用缺口加宽的寡核苷酸。在一个优选实施方案中，缺口加宽的寡核苷酸具有SEQ ID NO：37的序列。在其他优选实施方案中，缺口加宽的寡核苷酸是ISIS 372339、ISIS 377130或ISIS 377131。
在研究结束时，处死动物，测量器官重量，并且收集组织用于测定靶减少和寡核苷酸浓度。
使用本文描述的实时PCR分析方法分析白色脂肪组织的靶减少。结果作为用指出的寡核苷酸的指出的剂量处理后测量的GCCR mRNA的减少百分比显示于表11a、11b和11c(分开实验)中。测定来自用每种缺口加宽的寡核苷酸处理的动物的组织的靶减少，与来自用5-10-5基序寡核苷酸处理的动物的组织一起用于比较。
表11a
使用2-16-2寡核苷酸的白色脂肪组织中GCCR水平的体内减少
Figure A20068004324200491
表11b
使用3-14-3寡核苷酸的白色脂肪组织中GCCR水平的体内减少
Figure A20068004324200492
表11c
使用4-12-4寡核苷酸的白色脂肪组织中GCCR水平的体内减少
Figure A20068004324200493
同样使用本文描述的实时PCR分析方法分析肝组织的靶减少。结果作为用指出的寡核苷酸的指出的剂量处理后测量的GCCR mRNA的减少百分比显示于表12a、12b和12c(分开实验)中。测定来自用每种缺口加宽的寡核苷酸处理的动物的组织的靶减少，与来自用5-10-5基序寡核苷酸处理的动物的组织一起用于比较。
表12a
使用2-16-2寡核苷酸的肝中GCCR水平的体内减少
Figure A20068004324200501
表12b
使用3-14-3寡核苷酸的肝中GCCR水平的体内减少
Figure A20068004324200502
表12c
使用4-12-4寡核苷酸的肝中GCCR水平的体内减少
如表11a、11b和11c中所示，测试的所有缺口加宽的寡核苷酸在体内以剂量依赖性方式减少GCCR水平方面都是有效的。此外，缺口加宽的寡核苷酸显示在肝中朝向比5-10-5缺口聚体更大的效力的趋势。
此外，为了确定改变缺口大小对药代动力学的影响，测定了肾和肝中的寡核苷酸浓度。测定组织中的寡核苷酸浓度的方法是本领域已知的(Geary等人，Anal Biochem，1999，274，241-248)。总寡核苷酸是在组织中检测到的所有寡核苷酸代谢产物总和。表12中显示的是用指出浓度的指出的寡核苷酸处理的动物肝中的总浓度和全长寡核苷酸(μg/g)浓度。
表12
大鼠肝中的GCCR寡核苷酸浓度
Figure A20068004324200511
如表12中所示，与ISIS 345198比较，对于ISIS 372339和ISIS377130，肝中的全长寡核苷酸水平是相似或减少的。加上如表11中所示的靶减少，这些数据显示缺口加宽的化合物的增强效力不是由于化合物在肝中的增加积聚。因此，本发明的优选寡核苷酸包括缺口加宽的寡核苷酸，其相对于相应的5-10-5缺口聚体的在靶减少方面显示增加或相似的效力，而没有化合物在靶组织中的增加积聚。在某些实施方案中，靶组织是脂肪，在某些实施方案中，靶组织是肝。
序列表
<110>Isis Pharmaceuticals，Inc.
     Monia，Brett P.
     McKay，Robert
     Freier，Susan M.
     Bhanot，Sanjay
     Watts，Lynnetta
<120>糖皮质激素受体表达的调节
<130>BIOL0065WO
<150>60/718,685
<151>2005-09-19
<160>114
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>4788
<212>DNA
<213>人
<400>1
tttttagaaa aaaaaaatat atttccctcc tgctccttct gcgttcacaa gctaagttgt      60
ttatctcggc tgcggcggga actgcggacg gtggcgggcg agcggctcct ctgccagagt     120
tgatattcac tgatggactc caaagaatca ttaactcctg gtagagaaga aaaccccagc     180
agtgtgcttg ctcaggagag gggagatgtg atggacttct ataaaaccct aagaggagga     240
gctactgtga aggtttctgc gtcttcaccc tcactggctg tcgcttctca atcagactcc     300
aagcagcgaa gacttttggt tgattttcca aaaggctcag taagcaatgc gcagcagcca     360
gatctgtcca aagcagtttc actctcaatg ggactgtata tgggagagac agaaacaaaa     420
gtgatgggaa atgacctggg attcccacag cagggccaaa tcagcctttc ctcgggggaa     480
acagacttaa agcttttgga agaaagcatt gcaaacctca ataggtcgac cagtgttcca     540
gagaacccca agagttcagc atccactgct gtgtctgctg cccccacaga gaaggagttt     600
ccaaaaactc actctgatgt atcttcagaa cagcaacatt tgaagggcca gactggcacc     660
aacggtggca atgtgaaatt gtataccaca gaccaaagca cctttgacat tttgcaggat     720
ttggagtttt cttctgggtc cccaggtaaa gagacgaatg agagtccttg gagatcagac     780
ctgttgatag atgaaaactg tttgctttct cctctggcgg gagaagacga ttcattcctt     840
ttggaaggaa actcgaatga ggactgcaag cctctcattt taccggacac taaacccaaa     900
attaaggata atggagatct ggttttgtca agccccagta atgtaacact gccccaagtg     960
aaaacagaaa aagaagattt catcgaactc tgcacccctg gggtaattaa gcaagagaaa    1020
ctgggcacag tttactgtca ggcaagcttt cctggagcaa atataattgg taataaaatg    1080
tctgccattt ctgttcatgg tgtgagtacc tctggaggac agatgtacca ctatgacatg    1140
aatacagcat ccctttctca acagcaggat cagaagccta tttttaatgt cattccacca    1200
attcccgttg gttccgaaaa ttggaatagg tgccaaggat ctggagatga caacttgact    1260
tctctgggga ctctgaactt ccctggtcga acagtttttt ctaatggcta ttcaagcccc    1320
agcatgagac cagatgtaag ctctcctcca tccagctcct caacagcaac aacaggacca    1380
cctcccaaac tctgcctggt gtgctctgat gaagcttcag gatgtcatta tggagtctta    1440
acttgtggaa gctgtaaagt tttcttcaaa agagcagtgg aaggacagca caattaccta    1500
tgtgctggaa ggaatgattg catcatcgat aaaattcgaa gaaaaaactg cccagcatgc    1560
cgctatcgaa aatgtcttca ggctggaatg aacctggaag ctcgaaaaac aaagaaaaaa    1620
ataaaaggaa ttcagcaggc cactacagga gtctcacaag aaacctctga aaatcctggt    1680
aacaaaacaa tagttcctgc aacgttacca caactcaccc ctaccctggt gtcactgttg    1740
gaggttattg aacctgaagt gttatatgca ggatatgata gctctgttcc agactcaact    1800
tggaggatca tgactacgct caacatgtta ggagggcggc aagtgattgc agcagtgaaa    1860
tgggcaaagg caataccagg tttcaggaac ttacacctgg atgaccaaat gaccctactg    1920
cagtactcct ggatgtttct tatggcattt gctctggggt ggagatcata tagacaatca    1980
agtgcaaacc tgctgtgttt tgctcctgat ctgattatta atgagcagag aatgactcta    2040
ccctgcatgt acgaccaatg taaacacatg ctgtatgttt cctctgagtt acacaggctt    2100
caggtatctt atgaagagta tctctgtatg aaaaccttac tgcttctctc ttcagttcct    2160
aaggacggtc tgaagagcca agagctattt gatgaaatta gaatgaccta catcaaagag    2220
ctaggaaaag ccattgtcaa gagggaagga aactccagcc agaactggca gcggttttat    2280
caactgacaa aactcttgga ttctatgcat gaagtggttg aaaatctcct taactattgc    2340
ttccaaacat ttttggataa gaccatgagt attgaattcc ccgagatgtt agctgaaatc    2400
atcaccaatc agataccaaa atattcaaat ggaaatatca aaaaacttct gtttcatcaa    2460
aagtgactgc cttaataaga atggttgcct taaagaaagt cgaattaata gcttttattg    2520
tataaactat cagtttgtcc tgtagaggtt ttgttgtttt attttttatt gttttcatct    2580
gttgttttgt tttaaatacg cactacatgt ggtttataga gggccaagac ttggcaacag    2640
aagcagttga gtcgtcatca cttttcagtg atgggagagt agatggtgaa atttattagt    2700
taatatatcc cagaaattag aaaccttaat atgtggacgt aatctccaca gtcaaagaag    2760
gatggcacct aaaccaccag tgcccaaagt ctgtgtgatg aactttctct tcatactttt    2820
tttcacagtt ggctggatga aattttctag actttctgtt ggtgtatccc ccccctgtat    2880
agttaggata gcatttttga tttatgcatg gaaacctgaa aaaaagttta caagtgtata    2940
tcagaaaagg gaagttgtgc cttttatagc tattactgtc tggttttaac aatttccttt    3000
atatttagtg aactacgctt gctcattttt tcttacataa ttttttattc aagttattgt    3060
acagctgttt aagatgggca gctagttcgt agctttccca aataaactct aaacattaat    3120
caatcatctg tgtgaaaatg ggttggtgct tctaacctga tggcacttag ctatcagaag    3180
accacaaaaa ttgactcaaa tctccagtat tcttgtcaaa aaaaaaaaaa aaaaagctca    3240
tattttgtat atatctgctt cagtggagaa ttatataggt tgtgcaaatt aacagtccta    3300
actggtatag agcacctagt ccagtgacct gctgggtaaa ctgtggatga tggttgcaaa    3360
agactaattt aaaaaataac taccaagagg ccctgtctgt acctaacgcc ctatttttgc    3420
aatggctata tggcaagaaa gctggtaaac tatttgtctt tcaggacctt ttgaagtagt    3480
ttgtataact tcttaaaagt tgtgattcca gataaccagc tgtaacacag ctgagagact    3540
tttaatcaga caaagtaatt cctctcacta aactttaccc aaaaactaaa tctctaatat    3600
ggcaaaaatg gctagacacc cattttcaca ttcccatctg tcaccaattg gttaatcttt    3660
cctgatggta caggaaagct cagctactga tttttgtgat ttagaactgt atgtcagaca    3720
tccatgtttg taaaactaca catccctaat gtgtgccata gagtttaaca caagtcctgt    3780
gaatttcttc actgttgaaa attattttaa acaaaataga agctgtagta gccctttctg    3840
tgtgcacctt accaactttc tgtaaactca aaacttaaca tatttactaa gccacaagaa    3900
atttgatttc tattcaaggt ggccaaatta tttgtgtaat agaaaactga aaatctaata    3960
ttaaaaatat ggaacttcta atatattttt atatttagtt atagtttcag atatatatca    4020
tattggtatt cactaatctg ggaagggaag ggctactgca gctttacatg caatttatta    4080
aaatgattgt aaaatagctt gtatagtgta aaataagaat gatttttaga tgagattgtt    4140
ttatcatgac atgttatata ttttttgtag gggtcaaaga aatgctgatg gataacctat    4200
atgatttata gtttgtacat gcattcatac aggcagcgat ggtctcagaa accaaacagt    4260
ttgctctagg ggaagaggga gatggagact ggtcctgtgt gcagtgaagg ttgctgaggc    4320
tctgacccag tgagattaca gaggaagtta tcctctgcct cccattctga ccacccttct    4380
cattccaaca gtgagtctgt cagcgcaggt ttagtttact caatctcccc ttgcactaaa    4440
gtatgtaaag tatgtaaaca ggagacagga aggtggtgct tacatcctta aaggcaccat    4500
ctaatagcgg gttactttca catacagccc tcccccagca gttgaatgac aacagaagct    4560
tcagaagttt ggcaatagtt tgcatagagg taccagcaat atgtaaatag tgcagaatct    4620
cataggttgc caataataca ctaattcctt tctatcctac aacaagagtt tatttccaaa    4680
taaaatgagg acatgttttt gttttctttg aatgcttttt gaatgttatt tgttattttc    4740
agtattttgg agaaattatt taataaaaaa acaatcattt gctttttg                 4788
<210>2
<211>6322
<212>DNA
<213>褐家鼠
<220>
<221>综合特征
<222>24，3663，3680，3684，3685，3791，3805，3806，3813，3854，
3861，4162，4177，4205，4206，4240，4246，4247，4262，4283，
4284，4293，4295，4311，4354，4358，4359，4360，4398，6010，
6011，6013，6014，6065，6069，6145，6161
<223>n＝A，T，C或G
<400>2
gacgctgcgg gggtggggga cctncggcgg cacggagtcc ccccccgggc tcacattaat      60
atttgccaat ggactccaaa gaatccttag ctccccctgg tagagacgaa gtccctggca     120
gtttgcttgg ccaagggagg gggagcgtaa tggactttta taaaagcctg aggggaggag     180
ctacagtcaa ggtttctgca tcttcgccct cagtggctgc tgcttctcag gcagattcca     240
agcagcagag gattctcctt gatttctcga aaggctccac aagcaatgtg cagcagcgac     300
agcagcagca gcagcagcag cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag cagcagccag     360
gcttatccaa agccgtttca ctgtccatgg ggctgtatat gggagagaca gaaacaaaag     420
tgatggggaa tgacttgggc tacccacagc agggccaact tggcctttcc tctggggaaa     480
cagactttcg gcttctggaa gaaagcattg caaacctcaa taggtcgacc agcgttccag     540
agaaccccaa gagttcaacg tctgcaactg ggtgtgctac cccgacagag aaggagtttc     600
ccaaaactca ctcggatgca tcttcagaac agcaaaatcg aaaaagccag accggcacca     660
acggaggcag tgtgaaattg tatcccacag accaaagcac ctttgacctc ttgaaggatt     720
tggagttttc cgctgggtcc ccaagtaaag acacaaacga gagtccctgg agatcagatc     780
tgttgataga tgaaaacttg ctttctcctt tggcgggaga agatgatcca ttccttctcg     840
aagggaacac gaatgaggat tgtaagcctc ttattttacc ggacactaaa cctaaaatta     900
aggatactgg agatacaatc ttatcaagtc ccagcagtgt ggcactaccc caagtgaaaa     960
cagaaaaaga tgatttcatt gaactttgca cccccggggt aattaagcaa gagaaactgg    1020
gcccagttta ttgtcaggca agcttttctg ggacaaatat aattggtaat aaaatgtctg    1080
ccatttctgt tcatggtgtg agtacctctg gaggacagat gtaccactat gacatgaata    1140
cagcatccct ttctcagcag caggatcaga agcctgtttt taatgtcatt ccaccaattc    1200
ctgttggttc tgaaaactgg aataggtgcc aaggctccgg agaggacagc ctgacttcct    1260
tgggggctct gaacttccca ggccggtcag tgttttctaa tgggtactca agccctggaa    1320
tgagaccaga tgtaagctct cctccatcca gctcgtcagc agccacggga ccacctccca    1380
agctctgcct ggtgtgctcc gatgaagctt caggatgtca ttacggggtg ctgacatgtg    1440
gaagctgcaa agtattcttt aaaagagcag tggaaggaca gcacaattac ctttgtgctg    1500
gaagaaacga ttgcatcatt gataaaattc gaaggaaaaa ctgcccagca tgccgctatc    1560
ggaaatgtct tcaggctgga atgaaccttg aagctcgaaa aacaaagaaa aaaatcaaag    1620
ggattcagca agccactgca ggagtctcac aagacacttc ggaaaatcct aacaaaacaa    1680
tagttcctgc agcattacca cagctcaccc ctaccttggt gtcactgctg gaggtgattg    1740
aacccgaggt gttgtatgca ggatatgata gctctgttcc agattcagca tggagaatta    1800
tgaccacact caacatgtta ggtgggcgtc aagtgattgc agcagtgaaa tgggcaaagg    1860
cgatactagg cttgagaaac ttacacctcg atgaccaaat gaccctgcta cagtactcat    1920
ggatgtttct catggcattt gccttgggtt ggagatcata cagacaatca agcggaaacc    1980
tgctctgctt tgctcctgat ctgattatta atgagcagag aatgtctcta ccctgcatgt    2040
atgaccaatg taaacacatg ctgtttgtct cctctgaatt acaaagattg caggtatcct    2100
atgaagagta tctctgtatg aaaaccttac tgcttctctc ctcagttcct aaggaaggtc    2160
tgaagagcca agagttattt gatgagattc gaatgactta tatcaaagag ctaggaaaag    2220
ccatcgtcaa aagggaaggg aactccagtc agaactggca acggttttac caactgacaa    2280
agcttctgga ctccatgcat gaggtggttg agaatctcct tacctactgc ttccagacat    2340
ttttggataa gaccatgagt attgaattcc cagagatgtt agctgaaatc atcactaatc    2400
agataccaaa atattcaaat ggaaatatca aaaagcttct gtttcatcaa aaatgactgc    2460
cttactaaga aaggttgcct taaagaaagt tgaatttata gcttttactg tacaaactta    2520
tcaatttgtc ttgtagatgt tttgttgttc tttttgtttc tgtcttgttt tgttttaaac    2580
acgcagtaca tgtggtttat agagggccaa gacttggcga cagaagcagt tgagtcaaca    2640
ctctgaagtg atgacacagc acacagtgaa gtgtattgtt ggtgtatcac agaaactaac    2700
agttacgtgg aggcatggcc actgtcagag agggaccgca cctaaaccac cgtgcccaag    2760
tccatgtggt tcaactttct gactcagaac tttacagttg gctgggtaaa actttctaga    2820
ctttctgttg gtgtattttt cccatgtata gttaggatgg tattttgatt tatgcatgca    2880
aacctgaaaa aagtttacaa gtgtatatca gaaaagggaa gttgtgcctt ttatagctat    2940
tactgtctgg ttttaacaat ttcctttata ttcagtgaac tatgcttgct cgtttctctt    3000
caataatttt tgtattccag ttattgtaca gctgtttaag atgggcagct gcttcacagc    3060
tttcctagac gctaacatta atttccgtgt gaaaatgggt cggtgcttct accctgttgg    3120
caccagctat cagaagacca cagaaattga ctcagatctc cagtattctt gttaaaaagc    3180
tcttactctg tatatatctg cttccatgga gaattacata ggctgagcag attacatagg    3240
ctgagcagat taaccgtcct aactggtgta gagcacctag tccagtgacc ttctgggtaa    3300
accgtggatg atggttacag aagactggtg ggaaaacagt aactaccaaa aggccccttt    3360
ccatctaatg caccatctct tcaatgggga gatagcaacc aagcccgtaa atcagctctt    3420
tcaggacctt ctggagtggt ttgcataaca ttttaaaatg tattattcca gatagccagc    3480
tctgataaag ccgagagatt gtttaatcag accaagtaac ttctctcatt aaacttaccc    3540
ccaactaaat cgctaataca gcaagaatgg ctagacaccc attttcacat ctcacccgca    3600
ccgattggtc tagctctcat ggtggtcagg agaatcagct actgattttt gttacttaga    3660
atnttcagga ctcgcatttn tccnnctaca catccctaca tgtgccatag aatttaacac    3720
aagtcctgtg aacttcttca cattgagaat tatcatttta aacaaaacag aagcagtagt    3780
agccctttct ntgtgcacct taccnncttt ctntgactca aagcttaata tgcttactaa    3840
gccacaagaa atcngatttc nacttaaagg cgccaaatta tttgtgtaat agaaaaactg    3900
aaaatctaat attaaaaata tgaaacttct aatatatttt tatatttagt tatagtttcg    3960
atatatatca tatcggtatt cactgatctt gggaaaggga aagggctact gcagctttac    4020
atgcaattta ttaactgact gtaaaatagc tgtatagtaa taagaatgac ttttagtgag    4080
attgctttat catgacatgt tatatatttt tcgtaggggt caaagaaata ttgatggata    4140
tgatagccta tatgatttaa tngtatataa aagcatncaa acaggcctta acgcgtcttg    4200
gaaannaaaa tacctttgtt ctaagctagg gaagggagcn ggagannggc cccgtgtgta    4260
tnggaggttc cgaggctcgg atnnaagaga tcnanagggg atctaattcc ntacctccat    4320
ctaattacct caccacccat gatcctgtca gtgnaggnnn ggttattaaa tcccccgtta    4380
tactaatata aatagganag aagggtggcg ctcacgtctg ttccaggcgc cgcagtagca    4440
gggttatttt ccatgcagcc tcccgacaag gttagcagag ggaggctttg gcaagtttgg    4500
cgtggcgtgc atagaggcac cagcaacatg taaacctaaa gagcccatag gaagccaaga    4560
atacactaat cctccccacc cttcaatagt ccatttccaa gtaagatgag gacatgctta    4620
tgttttcttt gaatgctttt agaatgttgt tattttcagt attttgcaga aattatttaa    4680
taaaaaagta taatttgaat tctctctaaa agggattgtt cagtttgtaa tggtttaaat    4740
tggtctcaaa gtactttaag ataattgtaa cccagctgga tgtgaaattt atggtgccta    4800
agaaatacca cttgaatatt atcaagacag tgttaagttt taaaatgagc ttctcaaaaa    4860
tagattattg tacatttatg gaatgttata tggttaaacc caaaaaagca catcacacat    4920
aaatctgctt tcagcttggc tttcaaaaat agagctccaa aaacgaaaaa ggagaagaaa    4980
aagtatatat atgcgttgtt attaacagaa ggcaacagac attcataaaa ctactaccga    5040
agctttcctt gaagcgtata aagagccatg ctcctttagt atgtggggaa gaagagagcc    5100
gtcatagttt cgagtacaga gagaagatgc ggtactgtct ccgtgtgtgg cttcataccg    5160
ttcctaacta tttaggttta taataacttc agtgagactc ggtgacatgc ctgtatgact    5220
catgaccgat cttgaaagat atctttaatt actggtagga caaaagggac actctggtta    5280
ttttaggcct tggcttggga tactgtatat ccagaagaaa ggagacagga aacttgggga    5340
agggaaggga acctaggaag cactgccttc tgtaggaaag aacacaccaa taagtgagag    5400
tacccaaagg gacaaggcca cacagtgtgg ggtctaagga tgagtcaggg tgagctctgg    5460
tgggcatgga gaagccagca actccagtgc tacagagcag ggcagggcag ggatgggaca    5520
agatggatgc ggatcccagt cccagtagtt tgctccctct tatttaccat gggatgaacc    5580
atggagtatt gatctgtcag cactcaagga tcatggagct tgagattccg gttggtcacc    5640
ccaacggtaa gctgagattg aatgtgtttc ttatgtgccg gtttcagtgt tagaaggcga    5700
aacagagtgt acagaagaca ctgcaaaccg gtcagatgaa agtcttctca ttcccaaact    5760
attttcagtc agcctgctct atcaggactg gtgaccagct gctaggacag ggtcggcgct    5820
tctgtctaga atatgcctga aaggatttta ttttctgata aatggctgta tgaaaatacc    5880
ctcctcaata acctgcttaa ctacatagag atttcagtgt gtcaatattc tattttgtat    5940
attaaacaaa ggctatataa tggggacaaa tctatattat actgtgtatg gcattattaa    6000
gaagcttttn nannattttt tatcacagta atttttaaat gtgtaaaaaa ttaaaaatta    6060
gtgantccng tttaaaaata aaagttgtag ttttttattc atgctgaata acctgtagtt    6120
taaaaatccg tctttctacc tacanagtga aatgtcagac ngtaaaattt tgtgtggaaa    6180
tgtttaactt ttatttttct ttaaatttgc tgtcttggta ttaccaaacc acacattgta    6240
ctgaattggc agtaaatgtt agtcagccat ttacagcaat gccaaatatg gataaacatc    6300
ataataaaat atctgctttt tc                                             6322
<210>3
<211>2575
<212>DNA
<213>小鼠
<400>3
ggaagttaat atttgccaat ggactccaaa gaatccttag ctccccctgg tagagacgaa      60
gtccccagca gtttgcttgg ccgggggagg ggaagcgtga tggacttgta taaaaccctg     120
aggggtggag ctacagtcaa ggtttctgcg tcttcaccct cagtggctgc tgcttctcag     180
gcagattcca agcagcagag gattctcctt gatttttcaa aaggctcagc aagcaatgca     240
cagcagcagc agcagcagca gcagccgcag ccagatttat ccaaagccgt ttcactgtcc     300
atgggactgt atatgggaga gaccgaaaca aaagtgatgg ggaatgactt gggctaccca     360
cagcagggcc agcttggcct ctcctctggg gaaacagact ttcggcttct ggaagaaagc     420
attgcaaacc tcaataggtc gaccagccgt ccagagaatc ccaagagttc aacacctgca     480
gctgggtgtg ctaccccgac agagaaggag tttccccaga ctcactctga tccatcttca     540
gaacagcaaa atagaaaaag ccagcctggc accaacggtg gcagtgtgaa attgtatacc     600
acagaccaaa gcacctttga catcttgcag gatttggagt tttctgccgg gtccccaggt     660
aaagagacaa acgagagtcc ttggaggtca gacctgttga tagatgaaaa cttgctttct     720
cctttggcgg gagaagatga tccattcctt ctggaagggg acgtgaatga ggattgcaag     780
cctcttattt taccggacac taaacctaaa attcaggata ctggagatac aatcttatca     840
agccccagca gtgtggcact gccccaagtg aaaacagaga aagatgattt cattgagctt     900
tgcacccctg gggtaattaa gcaagagaaa ctgggcccgg tttattgcca ggcaagcttt     960
tctgggacaa atataattgg gaataaaatg tctgccattt ctgttcatgg cgtgagtacc    1020
tctggaggac agatgtacca ctatgacatg aatacagcat ccctttctca gcagcaggat    1080
cagaagcctg tttttaatgt cattccacca attcctgttg gttctgaaaa ctggaatagg    1140
tgccaagggt ctggagagga caacctgact tccttggggg ctatgaactt cgcaggccgc    1200
tcagtgtttt ctaatggata ttcaagccct ggaatgagac cagatgtgag ttctcctccg    1260
tccagctcct ccacagcaac gggaccacct cccaaactct gcctggtgtg ctccgatgaa    1320
gcttcggtat gccattatgg ggtgctgacg tgtggaagct gtaaagtctt ctttaaaaga    1380
gcagtggaag gacagcacaa ttacctttgt gctggaagaa atgattgcat cattgataaa    1440
attcgaagaa aaaactgtcc agcatgccgc tatcgaaaat gtcttcaagc tggaatgaac    1500
ctggaagctc gaaaaacgaa gaaaaaaatt aaaggaattc agcaagccac tgcaggagtc    1560
tcacaagaca cttctgaaaa cgctaacaaa acaatagttc ctgccgcgct gccacagctt    1620
acccctaccc tggtgtcact gctggaggtg atcgagcctg aggtgttata tgcaggatat    1680
gacagctctg ttccagactc agcatggaga attatgacca cgctcaacat gttaggtggg    1740
cgccaagtga ttgccgcagt gaaatgggca aaggcgatac caggattcag aaacttacac    1800
ctggatgacc aaatgaccct tctacagtac tcatggatgt ttctcatggc atttgccctg    1860
ggttggagat catacagaca agcaagtgga aacctgctat gctttgctcc tgatctgatt    1920
attaatgagc agagaatgac tctaccctgc atgtatgacc aatgtaaaca catgctgttt    1980
atctccactg aattacaaag attgcaggta tcctatgaag agtatctctg tatgaaaacc    2040
ttactgcttc tctcctcagt tcctaaggaa ggtctgaaga gccaagagtt atttgatgag    2100
attcgaatga cttatatcaa agagctagga aaagccattg tcaaaaggga aggaaactcc    2160
agtcagaatt ggcagcggtt ttatcaactg acaaaacttt tggactccat gcatgatgtg    2220
gttgaaaatc tccttagcta ctgcttccaa acatttttgg ataagtccat gagtattgaa    2280
ttcccagaga tgttagctga aatcatcact aatcagatac caaaatactc aaatggaaat    2340
atcaaaaagc ttctgtttca tcagaaatga ctgccttact aagaaaggct gccttaaaga    2400
aagttgaatt tatagctttt actgtacaaa cttatcaact tgtcttgtag atgttttgtc    2460
gttctttttg tttgtcttgt ttgttttcta tacgcactac atgtggtctc tagagggcca    2520
agacttggca acagaagcag atgagccatc acttttcagt gacaggaaag cagac         2575
<210>4
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>4
cgtgtgtctg tgctagtccc                                                20
<210>5
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>5
ggcaacgtga acaggtccaa                                                            20
<210>6
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>6
gcccattgct ggacatgc                                                              18
<210>7
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>7
agcccattgc tggacatgca                                                            20
<210>8
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>8
ttgtcccagt cccaggcctc                                                            20
<210>9
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>9
ctttccgttg gacccctggg                                                            20
<210>10
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>10
gtgcgcgcga gcccgaaatc                                                            20
<210>11
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>11
atccaagtgc tactgtagta                                                            20
<210>12
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<220>
<221>综合特征
<222>1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，
18，19，20
<223>n＝A，T，C或G
<400>12
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn                                                            20
<210>13
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>13
gccctccatg ctggcacagg                                                            20
<210>14
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>14
agcaaaagat caatccgtta                                                            20
<210>15
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>15
tacagaaggc tgggccttga                                                            20
<210>16
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>16
atgcattctg cccccaagga                                                            20
<210>17
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物
<400>17
ttgacatttt gcaggatttg ga                                                         22
<210>18
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物
<400>18
ccaaggactc tcattcgtct cttt                                                       24
<210>19
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR探针
<400>19
tttcttctgg gtcccc                                                                16
<210>20
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物
<400>20
aaacaatagt tcctgcagca ttacc                                                      25
<210>21
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物
<400>21
catacaacac ctcgggttca atc                                                        23
<210>22
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR探针
<400>22
acccctacct tggtgtcact gct                                                        23
<210>23
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物
<400>23
gacatcttgc aggatttgga gtt                                                        23
<210>24
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物
<400>24
aacaggtctg acctccaagg act                                                        23
<210>25
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR探针
<400>25
cgggtcccca ggtaaagaga caaacga                                                    27
<210>26
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>26
tctgtctctc ccatatacag                                                            20
<210>27
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>27
tgtttctgtc tctcccatat                                                            20
<210>28
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>28
cttttgtttc tgtctctccc                                                            20
<210>29
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>29
atcacttttg tttctgtctc                                                            20
<210>30
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>30
gtttgcaatg ctttcttcca                                                            20
<210>31
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>31
tgaggtttgc aatgctttct                                                            20
<210>32
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>32
ctattgaggt ttgcaatgct                                                            20
<210>33
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>33
cgacctattg aggtttgcaa                                                            20
<210>34
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>34
ctggtcgacc tattgaggtt                                                            20
<210>35
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>35
ctgtggtata caatttcaca                                                            20
<210>36
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>36
ctttggtctg tggtatacaa                                                            20
<210>37
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>37
gtcaaaggtg ctttggtctg                                                            20
<210>38
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>38
ggtttagtgt ccggtaaaat                                                            20
<210>39
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>39
ctttttctgt tttcacttgg                                                            20
<210>40
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>40
ttctcttgct taattacccc                                                            20
<210>41
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>41
cagtttctct tgcttaatta                                                            20
<210>42
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>42
gcccagtttc tcttgcttaa                                                            20
<210>43
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>43
tttattacca attatatttg                                                            20
<210>44
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>44
acattttatt accaattata                                                            20
<210>45
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>45
gcagacattt tattaccaat                                                            20
<210>46
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>46
aatggcagac attttattac                                                            20
<210>47
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>47
cagaaatggc agacatttta                                                            20
<210>48
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>48
tgaacagaaa tggcagacat                                                            20
<210>49
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>49
ccatgaacag aaatggcaga                                                            20
<210>50
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>50
cacaccatga acagaaatgg                                                            20
<210>51
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>51
tactcacacc atgaacagaa                                                            20
<210>52
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>52
gaggtactca caccatgaac                                                            20
<210>53
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>53
tccagaggta ctcacaccat                                                            20
<210>54
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>54
gtcctccaga ggtactcaca                                                            20
<210>55
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>55
atctgtcctc cagaggtact                                                            20
<210>56
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>56
gtacatctgt cctccagagg                                                            20
<210>57
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>57
agtggtacat ctgtcctcca                                                            20
<210>58
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>58
tcatagtggt acatctgtcc                                                            20
<210>59
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>59
catgtcatag tggtacatct                                                            20
<210>60
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>60
tattcatgtc atagtggtac                                                            20
<210>61
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>61
gctgtattca tgtcatagtg                                                            20
<210>62
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>62
ggatgctgta ttcatgtcat                                                            20
<210>63
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>63
aaagggatgc tgtattcatg                                                            20
<210>64
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>64
tgagaaaggg atgctgtatt                                                            20
<210>65
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>65
tggtggaatg acattaaaaa                                                            20
<210>66
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>66
gaattggtgg aatgacatta                                                            20
<210>67
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>67
gagcttacat ctggtctcat                                                            20
<210>68
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>68
aggagagctt acatctggtc                                                            20
<210>69
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>69
atggaggaga gcttacatct                                                            20
<210>70
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>70
ctggatggag gagagcttac                                                            20
<210>71
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>71
gagctggatg gaggagagct                                                            20
<210>72
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>72
tgtccttcca ctgctctttt                                                            20
<210>73
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>73
gtgctgtcct tccactgctc                                                            20
<210>74
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>74
aattgtgctg tccttccact                                                            20
<210>75
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>75
aggtaattgt gctgtccttc                                                            20
<210>76
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>76
cggcatgctg ggcagttttt                                                            20
<210>77
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>77
atagcggcat gctgggcagt                                                            20
<210>78
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>78
cgatagcggc atgctgggca                                                            20
<210>79
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>79
attccagcct gaagacattt                                                            20
<210>80
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>80
gttcattcca gcctgaagac                                                            20
<210>81
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>81
ttctttgttt ttcgagcttc                                                            20
<210>82
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>82
ttttttcttt gtttttcgag                                                            20
<210>83
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>83
caggaactat tgttttgtta                                                            20
<210>84
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>84
tgcaggaact attgttttgt                                                            20
<210>85
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>85
gagctatcat atcctgcata                                                            20
<210>86
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>86
aacagagcta tcatatcctg                                                            20
<210>87
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>87
ctggaacaga gctatcatat                                                            20
<210>88
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>88
ttcactgctg caatcacttg                                                            20
<210>89
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>89
ccatttcact gctgcaatca                                                            20
<210>90
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>90
ttgcccattt cactgctgca                                                            20
<210>91
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>91
ataatcagat caggagcaaa                                                            20
<210>92
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>92
attaataatc agatcaggag                                                            20
<210>93
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>93
gctcattaat aatcagatca                                                            20
<210>94
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>94
ctctgctcat taataatcag                                                            20
<210>95
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>95
cattctctgc tcattaataa                                                            20
<210>96
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>96
agcatgtgtt tacattggtc                                                            20
<210>97
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>97
aaggttttca tacagagata                                                            20
<210>98
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>98
cagtaaggtt ttcatacaga                                                            20
<210>99
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>99
gaagcagtaa ggttttcata                                                            20
<210>100
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>100
gagagaagca gtaaggtttt                                                            20
<210>101
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>101
gcttttccta gctctttgat                                                            20
<210>102
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>102
atggcttttc ctagctcttt                                                            20
<210>103
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>103
atggtcttat ccaaaaatgt                                                            20
<210>104
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>104
actcatggtc ttatccaaaa                                                            20
<210>105
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>105
caatactcat ggtcttatcc                                                            20
<210>106
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>106
aattcaatac tcatggtctt                                                            20
<210>107
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>107
atgatttcag ctaacatctc                                                            20
<210>108
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>108
gtgatgattt cagctaacat                                                            20
<210>109
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>109
gaatattttg gtatctgatt                                                            20
<210>110
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>110
atttgaatat tttggtatct                                                            20
<210>111
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>111
ttccatttga atattttggt                                                            20
<210>112
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>112
atatttccat ttgaatattt                                                            20
<210>113
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>113
tttttgatat ttccatttga                                                            20
<210>114
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡聚化合物
<400>114
ccttccctga aggttcctcc                                                            20

Claims (75)

1.一种长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，所述寡核苷酸靶向编码GCCR的核酸分子，并且包含SEQ ID NO：34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的至少8个核碱基的部分，其中所述寡核苷酸包含长度为12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个核碱基的脱氧核苷酸区域，所述脱氧核苷酸区域在其5’和3’末端上与1-4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接，并且其中所述寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。
2.权利要求1的反义寡核苷酸，其中在所述5’和3’末端上与所述脱氧核苷酸区域侧接的所述核苷酸数目相同。
3.权利要求1的反义寡核苷酸，其中在所述5’和3’末端上与所述脱氧核苷酸区域侧接的所述核苷酸数目不同。
4.权利要求1的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
5.权利要求1的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
6.权利要求1的反义寡核苷酸，其具有SEQ ID NO：37的核碱基序列。
7.权利要求6的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。
8.权利要求7的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
9.权利要求7的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
10.权利要求6的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与3个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。
11.权利要求10的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
12.权利要求10的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
13.权利要求6的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。
14.权利要求13的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
15.权利要求13的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
16.权利要求6的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与1个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。
17.权利要求16的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
18.权利要求16的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
19.权利要求6的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与1个或2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。
20.权利要求19的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
21.权利要求19的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
22.权利要求1的反义寡核苷酸，其具有SEQ ID NO：33的核碱基序列。
23.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。
24.权利要求23的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
25.权利要求23的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
26.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与3个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。
27.权利要求26的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
28.权利要求26的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
29.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。
30.权利要求29的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
31.权利要求29的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
32.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与1个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。
33.权利要求32的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
34.权利要求32的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
35.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与1个或2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。
36.权利要求35的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
37.权利要求35的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
38.权利要求1的反义寡核苷酸，其具有SEQ ID NO：45的核碱基序列。
39.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。
40.权利要求39的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
41.权利要求39的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
42.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与3个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。
43.权利要求42的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
44.权利要求42的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
45.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与4个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。
46.权利要求45的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
47.权利要求45的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
48.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与1个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。
49.权利要求48的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
50.权利要求48的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
51.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5’和3’末端上与1个或2个2’-O-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。
52.权利要求51的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。
53.权利要求51的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
54.一种药物组合物，其包含权利要求1的反义寡核苷酸并任选包含药学上可接受的载体、稀释剂、增强剂或赋形剂。
55.一种减少细胞或组织中的糖皮质激素受体表达的方法，其包括使所述细胞或组织与权利要求54的药物组合物接触。
56.权利要求55的方法，其中所述组织是脂肪或肝组织。
57.一种治疗动物中由糖皮质激素表达介导的疾病或状况的方法，其包括使所述动物与有效量的权利要求54的药物组合物接触。
58.权利要求57的方法，其中所述疾病或状况是糖尿病、肥胖、代谢综合征X、高血糖症或高脂血症。
59.权利要求57的方法，其中所述疾病是2型糖尿病。
60.权利要求57的方法，其中所述疾病是与升高的血胆固醇或升高的血甘油三酯水平相关的高脂血症。
61.权利要求57的方法，其中所述状况是肝脂肪变性。
62.权利要求61的方法，其中所述脂肪变性是脂肪肝。
63.权利要求61的方法，其中所述脂肪变性是非酒精性脂肪肝。
64.一种降低动物中的血糖水平的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。
65.权利要求64的方法，其中所述动物是人。
66.权利要求64的方法，其中所述血糖水平是空腹血糖水平。
67.一种降低动物中的血脂水平的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。
68.权利要求67的方法，其中所述血脂水平是血胆固醇水平。
69.权利要求67的方法，其中所述血脂水平是血甘油三酯水平。
70.一种降低动物中的肝脏甘油三酯水平的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。
71.一种减少动物中的体脂量的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。
72.一种减少或改善动物中的胰岛素敏感性的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。
73.一种抑制动物中的肝葡萄糖排出的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。
74.一种延迟或预防动物中的血脂或血糖水平开始增加的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。
75.一种治疗具有代谢疾病或状况的动物的方法，其包括给所述动物施用与选自下述的抗糖尿病剂组合的权利要求1的化合物：PPAR激动剂，包括PPAR-γ、双PPAR或全PPAR激动剂、二肽基肽酶(IV)抑制剂、GLP-1类似物、胰岛素和胰岛素类似物、胰岛素促分泌素、SGLT2抑制剂、人胰淀素类似物，包括普兰林肽、葡萄糖激酶活化剂、双胍和α-葡萄糖苷酶抑制剂，以达到附加的疗效。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102427852A (zh) * 2009-05-15 2012-04-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于抑制糖皮质素受体(gcr)基因表达的组合物和方法
CN103906838A (zh) * 2011-10-25 2014-07-02 Isis制药公司 Gccr表达的反义调节
CN107106562A (zh) * 2014-10-15 2017-08-29 科赛普特治疗学股份有限公司 使用糖皮质激素和盐皮质激素受体拮抗剂的脂肪肝疾病治疗

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090326041A1 (en) 2006-05-05 2009-12-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating expression of sglt2
CN102770151B (zh) 2009-08-03 2018-07-31 因卡伯实验室有限责任公司 用于刺激肠道内肠促胰岛素产生的吞咽式囊和方法
US8759284B2 (en) 2009-12-24 2014-06-24 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
ES2671877T3 (es) * 2010-01-25 2018-06-11 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la RNASA (H1) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a RNASA H1
US9068185B2 (en) 2010-03-12 2015-06-30 Sarepta Therapeutics, Inc. Antisense modulation of nuclear hormone receptors
US9629799B2 (en) 2010-12-23 2017-04-25 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US9259386B2 (en) 2010-12-23 2016-02-16 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic preparation comprising somatostatin or somatostatin analogoue for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US8734429B2 (en) 2010-12-23 2014-05-27 Rani Therapeutics, Llc Device, system and methods for the oral delivery of therapeutic compounds
US9415004B2 (en) 2010-12-23 2016-08-16 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US9149617B2 (en) 2010-12-23 2015-10-06 Rani Therapeutics, Llc Device, system and methods for the oral delivery of therapeutic compounds
US10639272B2 (en) 2010-12-23 2020-05-05 Rani Therapeutics, Llc Methods for delivering etanercept preparations into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US8969293B2 (en) 2010-12-23 2015-03-03 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations comprising exenatide for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US8980822B2 (en) 2010-12-23 2015-03-17 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations comprising pramlintide for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US8809269B2 (en) 2010-12-23 2014-08-19 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations comprising insulin for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US9861683B2 (en) 2010-12-23 2018-01-09 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US8764733B2 (en) 2010-12-23 2014-07-01 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US8809271B2 (en) 2010-12-23 2014-08-19 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations comprising liraglutide for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US9402807B2 (en) 2010-12-23 2016-08-02 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US9402806B2 (en) 2010-12-23 2016-08-02 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US8846040B2 (en) 2010-12-23 2014-09-30 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations comprising etanercept for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US9283179B2 (en) 2010-12-23 2016-03-15 Rani Therapeutics, Llc GnRH preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US9284367B2 (en) 2010-12-23 2016-03-15 Rani Therapeutics, Llc Therapeutic agent preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
US9234200B2 (en) * 2011-12-15 2016-01-12 National University Of Corporation Tokyo University Of Agriculture And Technology Oligonucleotide, glucocorticoid sensitivity enhancer, pharmaceutical composition, and expression vector
WO2014076195A1 (en) 2012-11-15 2014-05-22 Santaris Pharma A/S Oligonucleotide conjugates
RU2649367C2 (ru) 2013-01-30 2018-04-02 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Конъюгаты углевода и lna-олигонуклеотида
EA031393B1 (ru) 2013-05-01 2018-12-28 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы модулирования экспрессии hbv и ttr
WO2015002971A2 (en) * 2013-07-02 2015-01-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of growth hormone receptor
BR112016022593B1 (pt) 2014-05-01 2022-04-26 Ionis Pharmaceuticals, Inc Compostos oligoméricos, composições que os compreendem, e usos dos mesmos
CA2946003A1 (en) 2014-05-01 2015-11-05 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating angiopoietin-like 3 expression
ES2812099T3 (es) 2014-05-01 2021-03-16 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y métodos para modular la expresión del receptor de la hormona del crecimiento
WO2015179693A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
WO2017079739A1 (en) 2015-11-06 2017-05-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. MODULATING APOLIPOPROTEIN (a) EXPRESSION
KR20190065341A (ko) 2016-10-06 2019-06-11 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 올리고머 화합물들의 접합 방법

Family Cites Families (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
DE3851889T2 (de) 1987-06-24 1995-04-13 Florey Howard Inst Nukleosid-derivate.
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
ATE154246T1 (de) 1990-07-27 1997-06-15 Isis Pharmaceuticals Inc Nuklease resistente, pyrimidin modifizierte oligonukleotide, die die gen-expression detektieren und modulieren
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) * 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
DE637965T1 (de) 1991-11-26 1995-12-14 Gilead Sciences Inc Gesteigerte bildung von triple- und doppelhelices aus oligomeren mit modifizierten pyrimidinen.
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
US5872242A (en) * 1992-10-05 1999-02-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide inhibition of ras
US5985558A (en) * 1997-04-14 1999-11-16 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense oligonucleotide compositions and methods for the inibition of c-Jun and c-Fos
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) * 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5646269A (en) 1994-04-28 1997-07-08 Gilead Sciences, Inc. Method for oligonucleotide analog synthesis
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US6133246A (en) * 1997-08-13 2000-10-17 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense oligonucleotide compositions and methods for the modulation of JNK proteins
AU9509798A (en) * 1997-09-25 1999-04-12 University Of Florida Antisense oligonucleotide compositions targeted to angiotensi n converting enzy me mrna and methods of use
US6007992A (en) 1997-11-10 1999-12-28 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US6028183A (en) 1997-11-07 2000-02-22 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives and oligonucleotides containing same
US6238921B1 (en) * 1998-03-26 2001-05-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of human mdm2 expression
US20030203862A1 (en) * 1998-03-26 2003-10-30 Miraglia Loren J. Antisense modulation of MDM2 expression
US20030228597A1 (en) * 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
US6821724B1 (en) * 1998-09-17 2004-11-23 Affymetrix, Inc. Methods of genetic analysis using nucleic acid arrays
US6228642B1 (en) * 1998-10-05 2001-05-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of tumor necrosis factor-(α) (TNF-α) expression
US6900187B2 (en) * 1999-02-26 2005-05-31 The University Of British Columbia TRPM-2 antisense therapy using an oligonucleotide having 2′-O-(2-methoxy)ethyl modifications
US6649341B1 (en) * 2000-04-19 2003-11-18 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Human glucocorticoid receptor 1A promoter and splice variants
WO2003070888A2 (en) * 2002-02-20 2003-08-28 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of checkpoint kinase-1 (chk-1) gene expression using short interfering nucleic acid
US20030092616A1 (en) * 2001-05-25 2003-05-15 Akio Matsuda STAT6 activation gene
WO2002097134A2 (en) 2001-05-25 2002-12-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modified peptide nucleic acid
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US7425545B2 (en) * 2001-07-25 2008-09-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of C-reactive protein expression
US20050043254A1 (en) * 2001-09-03 2005-02-24 Mikihiko Shinozaki Novel serine protease inhibitory protein mt0039
AU2003213054A1 (en) * 2002-02-20 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF POLYCOMB GROUP PROTEIN EZH2 GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
BR0308923A (pt) * 2002-03-27 2005-01-04 Aegera Therapeutics Inc OligÈmeros de nucleobase de iap anti-sentido e empregos destes
WO2003085110A2 (en) * 2002-04-05 2003-10-16 Santaris Pharma A/S Oligomeric compounds for the modulation hif-1alpha expression
JP2005525829A (ja) * 2002-05-20 2005-09-02 ファルマシア・コーポレーション 糖質コルチコイド受容体発現のアンチセンス調節
US7122527B2 (en) * 2002-08-16 2006-10-17 Rexahn Corporation Use of antisense oligonucleotides to inhibit the expression of human Akt-1
DK1530636T3 (da) * 2002-08-21 2010-11-29 Univ British Columbia Behandling af melanomer ved reduktion af clusterinniveauet
JP2006507841A (ja) * 2002-11-14 2006-03-09 ダーマコン， インコーポレイテッド 機能的ｓｉＲＮＡおよび超機能的ｓｉＲＮＡ
US7406521B2 (en) 2003-08-09 2008-07-29 Bohannon Gary P System and methods for controlled device access
US7825235B2 (en) * 2003-08-18 2010-11-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression
US20050142581A1 (en) * 2003-09-04 2005-06-30 Griffey Richard H. Microrna as ligands and target molecules
US20050053981A1 (en) * 2003-09-09 2005-03-10 Swayze Eric E. Gapped oligomeric compounds having linked bicyclic sugar moieties at the termini
US20050074801A1 (en) * 2003-09-09 2005-04-07 Monia Brett P. Chimeric oligomeric compounds comprising alternating regions of northern and southern conformational geometry
US8012944B2 (en) * 2003-10-30 2011-09-06 Pharmascience Inc. Method for treating cancer using IAP antisense oligomer and chemotherapeutic agent
US7622453B2 (en) * 2003-12-23 2009-11-24 Santaris Pharma A/S Oligomeric compounds for the modulation of Bcl-2
EP1711606A2 (en) * 2004-01-20 2006-10-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of glucocorticoid receptor expression
WO2006034348A2 (en) * 2004-09-17 2006-03-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced antisense oligonucleotides

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102427852A (zh) * 2009-05-15 2012-04-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于抑制糖皮质素受体(gcr)基因表达的组合物和方法
CN103906838A (zh) * 2011-10-25 2014-07-02 Isis制药公司 Gccr表达的反义调节
CN107106562A (zh) * 2014-10-15 2017-08-29 科赛普特治疗学股份有限公司 使用糖皮质激素和盐皮质激素受体拮抗剂的脂肪肝疾病治疗
CN107106562B (zh) * 2014-10-15 2020-08-18 科赛普特治疗学股份有限公司 使用糖皮质激素和盐皮质激素受体拮抗剂的脂肪肝疾病治疗
CN111557942A (zh) * 2014-10-15 2020-08-21 科赛普特治疗学股份有限公司 使用糖皮质激素和盐皮质激素受体拮抗剂的脂肪肝疾病治疗
CN111557942B (zh) * 2014-10-15 2023-10-03 科赛普特治疗学股份有限公司 使用糖皮质激素和盐皮质激素受体拮抗剂的脂肪肝疾病治疗

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