CN101310767A

CN101310767A - 一种冷冻外科抗癌抗原制剂及其制备方法

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Publication number: CN101310767A
Application number: CNA2008101381838A
Authority: CN
Inventors: 亓前军
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2008-07-11
Filing date: 2008-07-11
Publication date: 2008-11-26
Also published as: WO2010003279A2

Abstract

本发明公开了一种抗癌药物制剂，特别公开了一种冷冻外科抗癌抗原制剂及其制备方法。该冷冻外科抗癌抗原制剂，其特殊之处在于：是由以下配比的原料制成：去除非瘤组织的肿瘤标本10克、刀豆提取液0.1～0.3克、白介素－280～120万单位、大豆脂质体1～3克、利多卡因0.1～0.3克。CAAP临床应用疗效特检“皮肤试验”为作者首创，方法简便易行，深受病患与医护人员欢迎。同种属、同脏器、同肿瘤分型的“三同原则”是作者倡导“肿瘤库”(“肿瘤银行”)，实施CAAP肿瘤生物治疗的重要理论与物质基础。严格的专一性和个性化治疗，“哪把钥匙开哪把锁”，万不可混淆，是CAAP根治效应的重要保证。

Description

一种冷冻外科抗癌抗原制剂及其制备方法

(一)技术领域

本发明涉及一种抗癌药物制剂，特别涉及一种冷冻外科抗癌抗原制剂及其制备方法。

(二)背景技术

目前对于癌症的治疗，多采用手术治疗、放射治疗或化学治疗，都具有较好的疗效。但是手术治疗法五年生存低、易恢复；化疗副作用较大，尤其是对骨髓的抑制，使白细胞下降，具有一定的风险。

(三)发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种无毒副作用、疗效显著的冷冻外科抗癌抗原制剂及其制备方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种冷冻外科抗癌抗原制剂，其特殊之处在于：是由以下配比的原料制成：去除非瘤组织的肿瘤标本10克

刀豆提取液0.1～0.3克白介素-2 80～120万单位

大豆脂质体1～3 克利多卡因 0.1～0.3 克。

本发明的上述冷冻外科抗癌抗原制剂的制备方法，其特殊之处在于：自身外科手术切取标本，分离并去除非瘤组织，剪成小块，以药用乙醚-生理盐水饱和液洗涤两次，加定量生理盐水，无菌条件下进行组织粉碎，零下195.8～269℃超低温条件下，以100～1000℃/分钟速度，快速冷冻，10℃/分钟速度融化后，以不同浓度生理盐水分次抽提，调整PH值为6.5，加刀豆提取液和重组白介素-2，37℃培养24小时，离心滤膜过滤，负压下提纯浓缩，浓缩液加大豆脂质体，混合均匀，沉化，加利多卡因，调整一定浓度，分装于2ml制剂瓶中，于零下24℃冻存备用。

本发明的冷冻外科抗癌抗原制剂的制备方法，其特殊之处在于：三同肿瘤外科手术切取标本，分离并去除非瘤组织，剪成小块，以药用乙醚-生理盐水饱和液洗涤两次，加定量生理盐水，无菌条件下进行组织粉碎，零下195.8～269℃超低温条件下，以100～1000℃/分钟速度，快速冷冻，10℃/分钟速度融化后，以不同浓度生理盐水分次抽提，调整PH值为6.5，加刀豆提取液和重组白介素-2，37℃培养24小时，离心滤膜过滤，负压下提纯浓缩，浓缩液加利多卡因，沉化后，分装于2ml制剂瓶中，冷冻干燥后封装；另取大豆脂质体，分装于2ml制剂瓶中，零下4℃保存；临用前，将CAAP冻干品与脂质体混合均匀后抽取皮下注射。

本发明的冷冻外科抗癌抗原制剂(简称CAAP)源自临床冷冻外科启示，为解决肿瘤生物治疗中强化疗效与检测设题研究，实验与临床相结合，反复验证，历时18年方行科技成果鉴定。CAAP创新之作，临床确有实用价值。上世纪70年代那种“前进后出”的情景，随着肿瘤治疗学的不断发展，而今60％以上的多种癌患可以获得完全的康复。包括CAAP在内，中西结合综合治疗(第一治疗)及其康复治疗(第二治疗)，在追求肿瘤完全治愈(根治)方面，CAAP为其特色亮点。

本发明临床试用观察近20余年，通过《肿瘤银行》、《肿瘤库》两种服务形式，得到进一步拓展。可以预期肿瘤治疗问题，尽管存在发病机理欠详现状，人癌CAAP将会成为“癌症治疗大厦”上闪亮的一片砖瓦，《冷冻外科》可有效的破坏癌基因，并增强肿瘤细胞的免疫原性。CAAP是冷冻外科发展的产物，或称其模拟强化剂，冷冻佐剂的构成，为已知其他异构方法所不及。肿瘤细胞抗原被剥离、激活、诱导与转化，形成与原癌母体蛋白全然不同的生物活性。“致癌”变成“抑癌”，“紫外分析”图像分析可获得充分的说明。

本发明实验研究手段采用国内外公认的多种纯种动物及其实验瘤株，或应用同胎动物以控制个体差异。严格的理论统计设计与结果分析，临床随机取组和双盲法，最大限度的排除或出现人为及偶然记录的误断。结论经多次重复验证和必要的反证试验。CAAP作用机理的初步认识以及其作用如同“锁与钥匙的关系”，能较形象的概括CAAP治疗特点，有利于“医患”之间对CAAP的沟通和理解。

CAAP特检技术，“皮肤试验”虽属迟发性超敏反应，但反应微显和缓，绝无类似青霉素反应之危象。细胞免疫功能正常呈阳性反应，否则无反应(包括晚期肿瘤病人)。依此对患者细胞免疫功能和疗效观察，作为治疗预期判定指标有其一定意义。本发明将特异性皮肤反应试验与非特异性反应相结合，形成特定的自身CAAP治疗或“三同”CAAP治疗前后，患者免疫状况及其变化尺度的认定指标。CAAP治疗特检皮肤试验，源自免疫学理论，是实践创新的一成功举措，治疗与检测合一，极大地调动了患者的求治欲望，改变了病人对治疗措施一定程度上的盲从局面，对治疗效果看得见，感觉得到，拉近了医患距离，对创建和谐医疗和对医院知名度的提升大为有益。

从肿瘤免疫理论和治疗角度审视，体内癌细胞数在10⁴时疗效佳，10⁸则无效，临床外科治疗常以五年生存为限判定效果。CAAP疗效虽不能做出如此严格的评定数据，研究人员初步而较强的认识是：在一定程度上，CAAP疗效似突破了上述界定。从临床治疗出发，考虑到患者不同个体差异及其内外环境之别，以及机体的病程和免疫状况等，医患两方面均应客观的对待CAAP的应用问题。倡导抓“三早”，取“综合治疗”原则，走中西结合之路。CAAP并用手术，适度放化疗，中医药治疗和其他生物治疗(BRM)仍为上策。

CAAP在主动特异性免疫治疗(AS1)及非特异性免疫治疗理论基础上，加以修饰强化，增强了肌体的免疫机能，在识别“非已”和消灭潜在癌细胞，控制其扩散转移，延缓复发，加速康复过程，以及延长生命提高生存质量，改善其症状与体征等各方面疗效显著，安全无毒无副作用。

本发明具有以下特点：

1.CAAP为肿瘤生物治疗与疗效检测的一种创新制剂。其特点：取材癌症患者手术中切除的肿瘤组织，不做X射线或化学药物等方法灭活，采用超低温，(零下195.8-269以100-1000摄氏度/分钟的速度冷冻和10摄氏度/分钟速度融化。)使癌细胞移植活性完全丧失(W256、SRS、S180、Eac和L615等多种实验瘤株反复验证，临床试用恶性黑色素瘤、胃癌、乳腺癌多种癌症患者，历时18年以上严格随诊)。避免了灭活过程中，对癌免疫原性之不利影响，并加入适量“老来白”提取液等，为进一步强化创造了条件。“低温培养”为特异性抗原进一步强化步骤。“致癌”基因的分离，诱导和强化，转变为“抑癌”因素，再激活介导与冷冻佐剂效应(包括未活化癌)，使原癌的免疫原性大为增强。离心，通过过滤膜获得一定的纯化浓度。大豆“脂质体”令增强了的特异性免疫原性和抑癌因素更加有效的发挥。CAAP生产全过程在无菌条件下进行，包括原材料、试剂、应用器材、人员和室内必须无菌和净化。原材料不得用福尔马林处理或其他液体浸泡，CAAP成品不得用任何防腐剂、消毒剂，不能高压灭菌。贮存于专用容器中(利用太阳能零下24摄氏度冻存)。自身CAAP与“三同”CAAP区别于取材来源和后续生产流程略有不同，前者自身单一，后者严格遵循“三同原则”。与大豆脂质体混合前，冷冻干燥分装，临床应用前与另安瓿的“脂质体”再混合用力摇匀使用。自身CAAP与“三同”CAAP二者特异性与免疫原性基本相同，个性化治疗与疗效检测合一，无明显差别。

2.CAAP治疗开始及疗程结束最后一次CAAP注射前夕，均行特定的“皮肤试验”。吸取少量CAAP直接注入患者前臂内侧皮内，观察肤色变化，30分钟记录“红云”直径(面积)。无“红云”反应(-)，视为体内存在瘤细胞；“红云”1cm(+-)显示免疫反应较弱；2cm(++)较好；(+++)说明体内已无瘤细胞存在。医患共商，是否继续进行下一疗程的CAAP治疗。

3.CAAP治疗有严格的种属特异性、脏器特异性和肿瘤特异性。遵循“三同”原则，一般临床疗效显著，患哪种癌用哪种CAAP，“哪把钥匙开哪把锁”不可有误。如肺腺癌患者不用肺鳞癌CAAP，乳腺癌不能用胃癌CAAP，肿瘤分化不同亦有差异。否定，“三同”原则则无CAAP疗效可言，故CAAP治疗与检测时，绝对不可违规，遵循“三同原则”即尊重免疫学理论指导，是21世纪倡导“个性化”治疗的基础保证。同时也使一定规模的产业化生产和较大范围的临床应用，为广大癌症患者服务成为可能。

CAAP是一种肿瘤抗原复合制剂或其抗原混合物，目前尚难对其进一步提纯，CAAP有较好的抗癌疗效无毒副作用，能治疗，可预防，检测生产基本稳定，简称“冷冻抗癌疫苗”，可较大范围的应用临床，有别于其他“肿瘤疫苗”。人世间肿瘤高发，CAAP不失为一种有用的抗癌制剂。如有较大资本投入，将会获得社会与经济效益的双丰收。

本发明人在晚期恶性黑色素瘤及子宫颈癌冷冻外科治疗中获得启示，通过W256，S180，SRS、EAC及L615等多种动物实验瘤株反复验证，所创新的一种独特型冷冻外科模拟强化剂(Cryosurgery-Anticancer-Anti-genpreparatin，简称冷冻抗癌疫苗)，可使原癌细胞移植毒性完全丧失。W256-CAAP抗癌复发生存率为127.5％，S180-CAAP为67.40％，EAC-CAAP为215.63％。各瘤株间无交叉反应，专一性强。在此基础上逐步发展起来的人癌CAAP，是由人癌手术标本(切取的癌组织)，采用液氮液氦超低温冷冻、分离、强化，制成无菌注射液。经小鼠、豚鼠、同胎家兔和狗一般毒性试验、过敏试验、内脏器官的影响病理学分析和血象检查等，未发现任何毒性、副反应(包括急性和亚急性、慢性观察)。

人胃癌CAAP纯家兔“皮肤试验”显示，不同浓度与反应强度呈正相关。间接血凝试验、琼脂扩散试验均表明抗原抗体反应显著强化。动物胸腺、脾脏与体重比值，HC50、CH50的T测验呈显著差别。人结肠癌、肺癌CAAP“紫外”光谱分析与原癌蛋白化学构型表明：发生了“质的变化”。

通过临床设组治疗观察，17例乳腺癌，常规根治术3年生存16.7％，合并CAAP为63.6％；6例肺癌晚期，配合保驾手术切除瘤体，疗效满意。72例晚期胃癌伴大部切除，对照组3年生存16.7％，无4年生存，CAAP为41.6％，4年生存为33.3％，5年生存25.0％，7-10年生存为16.7％(CAAP均为1疗程)。1例输尿管癌晚期，因广泛转移无法切除随之关闭，CAAP3疗程，CT证实瘤体完全消失，康复恢复工作。1例胃癌(台商)术后复发，不愿再手术和化疗，单用CAAP，3疗程完全康复，胃镜(-)，如今已15年之久，健康如常(08年6月8日电话随诊)。

CAAP能明显改善患者症状及体征，在消灭残余癌灶或最后一个癌细胞，控制或延缓复发转移方面有其独到之处，因之具有根治性效果。作为肿瘤外科后一种辅助治疗或术后60天康复计划重要手段，令人瞻目。

CAAP临床应用疗效特检“皮肤试验”为作者首创，方法简便易行，深受病患与医护人员欢迎。同种属、同脏器、同肿瘤分型的“三同原则”是作者倡导“肿瘤库”(“肿瘤银行”)，实施CAAP肿瘤生物治疗的重要理论与物质基础。严格的专一性和个性化治疗，“哪把钥匙开哪把锁”，万不可混淆，是CAAP根治效应的重要保证。

(四)具体实施方式

实施例1：

该冷冻外科抗癌抗原制剂，是由以下配比的原料制成：去除非瘤组织的肿瘤标本10克、刀豆提取液0.2克、白介素-2 100万单位、大豆脂质体2克、利多卡因0.2克。

其制备方法采用如下两种方法中的一种：

自身肿瘤外科手术切取标本(留取病理诊断外之全部)，分离并去除非瘤组织，剪成小块，以适量药用乙醚-生理盐水饱和液洗涤两次，酌加定量生理盐水，无菌条件下进行组织粉碎，超低温(零下195.8～269℃)，以100～1000℃/分钟速度，快速冷冻，10℃/分钟速度融化后，以不同浓度生理盐水分次抽提，调整PH值为6.5，加适量“老来白”提取液(产于沂蒙山区，应为刀豆提取液【c.ensiformis(l.)dc.】)和重组白介素-2，37℃培养24小时，离心过滤(滤膜)，负压下提纯浓缩，浓缩液加适量“大豆脂质体”(东北沈阳药学院制药厂)，混合均匀，沉化，加适量利多卡因(lidocaine)，调整一定浓度，分装于2ml制剂瓶中，于零下24℃冻存备用；

源自“三同”瘤体标本，如上法负压下提纯浓缩液，加利多卡因适量，沉化后，分装于2ml制剂瓶中，冷冻干燥后封装；另取“大豆脂质体”2ml，分装于2ml制剂瓶中，零下4℃保存。临用前，将CAAP冻干品与脂质体混合均匀后抽取皮下注射。

用法：一般情况下，患者手术后两周或60天内，医患共同商定，由病患填写《志愿应用CAAP知情单》，医生填写《恶性肿瘤手术标本入库要求及注意事项》表，领取专用的CAAP。

一般情况一次皮下注射2ml(腋下或大腿内侧淋巴区部位)，一周2次，7～11次为1疗程。第一次注射前于左前臂内侧先做“皮肤试验”，观察30～50分钟局部是否呈现“红云”反应(探查体内有否潜在癌细胞)，于疗程结束末次注射前重复观察并记录。无反应(一)提示体内存在瘤细胞可能，“红云”反应面积小于1分分(-+)难以评定，2分分(++)可评为体内已无瘤细胞存在；(+++)为3分分，评为本疗程治疗已取得良好效果。应定期随诊3～6个月，决定是否再进行多疗程治疗。

适宜人群：前列腺癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌等。可用于肿瘤外科、保驾放化疗或中医药及其他生物治疗、或肿瘤康复治疗，以求肿瘤根治性效果。不适宜人群：癌症晚期，肿瘤外科手术无法切除之危重病人。

实施例2：

该冷冻外科抗癌抗原制剂，是由以下配比的原料制成：去除非瘤组织的肿瘤标本10克、刀豆提取液0.1克、白介素-2用80万单位、大豆脂质体1克、利多卡因 0.1克。其它与实施例1相同。

实施例3：

该冷冻外科抗癌抗原制剂，是由以下配比的原料制成：去除非瘤组织的肿瘤标本10克、刀豆提取液0.3克、白介素-2用120万单位、大豆脂质体3克、利多卡因0.3克。其它与实施例1相同。

实施例4：

如同专家鉴定委员会意见，本制剂很好地解决了一个多世纪以来，困绕肿瘤抗癌性低下和去毒灭活两大难题，临床有重要实用价值。该研究成果意义重大深远，为国内外首创，是对人类科学的巨大贡献。治疗研究用大型“肿瘤库”创建，提供社会需求的“三同”人癌CAAP是现实可能，社会效益与经济效益显著。采用CAAP综合治疗肿瘤可能取得更大的效果。古人云：“善治者，治未病”，CAAP在肿瘤外科后的康复地位已为众家关注。在控制肿瘤转移复发，促进机体免疫机能的恢复等颇有特点。21世纪倡导个性化治疗，东方医学的“以毒攻毒”、“以癌治癌”和肿瘤生物治疗，CAAP应是一成功范例。

病例1：周某某，女，54岁，青岛市人，胃部不适一年余，近半年加重，自感头晕乏力，上腹部隐痛。1979年7月3日当地医院X线确诊溃疡型胃癌，瘤大8*12厘米，病已晚期，失去手术机会，即转院接受本治疗。查患者老年女性呈慢性失血病容，口唇苍白，颜面浮肿，上腹部扪及约12*15厘米肿块，质硬，尚活动，可叩及少量腹水，大便隐血(++)，血色素7.5克，白细胞总数6500，心肺(-)，血压130/90mmHg。临床诊断胃癌，X线报告胃癌溃疡型。79年7月10日剖腹探查，术中见瘤大12*20*10厘米，病理报告胃腺癌侵犯浆膜层与胰腺粘连。行胃大部手术+“体外冷冻”方法CAAP注射，每周一次共5次。术后半年健康恢复，料理家务，洗衣做饭，无任何不适。自述病已治愈。术后3年、5年、10年随诊无癌发迹象。末次随诊为1992年春节，健在如常。

病例2：宋氏，女，36岁，山东莱芜市人，因左乳房肿块于1979年10月入院，超根治手术，病理诊断单纯型腺癌。1980年4月因局部癌复发要求接受本治疗。80年5月4日入院，随及将癌转移灶冷冻外科治疗，并注射CAAP一疗程，合并卵巢切除。拆线一期愈合出院。1996年10月随诊，健在生存已超过15年。

病例3：翁某某，男，60岁，台籍，1991年8月因腰疼入院，CT诊断右输尿管癌，手术探查见癌广泛转移无法切除而关闭。患者拆线出院，经香港、日本、美国专家会诊均未接待。1991年12月下旬，经海外医生介绍，专程来沪，要求接受CAAP治疗。1992年5月，接受CAAP综合治疗三个疗程，同年8月，病人头发由白转黑，体重增加，康复回籍。CT检查，肿物基本消失。1993年3月患者亲自长话告知，二次CT，检查肿瘤完全消失，病体完全康复，已买机票去日美公干。恢复工作已半年多。

病例4：施某某，男，50岁，福建石狮人，1993年4月6日因咳血痰3月余住入泉州医院，CT检查“左下肺癌伴双肺转移”，左锁骨上淋巴结活检“转移性腺癌”，MMT，CTX，VCR联合化疗二次后，患者要求转院。1993年4月16日入上海胸科医院，X光片示“左下肺背段6*5厘米肿块，毛刺；右下叶多个结节影”，诊断“原发性支气管肺癌，双侧，腺型，左锁骨上淋巴结转移，T4N3M0”。认为病晚期，不适合手术。5月6日开始化疗，一疗程。三周后复查原发病灶未见明显缩小，5月18日病人要求出院。同年6月8日二次入院行支气管动脉化疗，合并干扰素，IL-2。化疗反应大，头发全脱，全身衰弱，自认为难于人世，要求出院回福建。7月上旬经人介绍要求接受生物综合治疗咨询服务二周，93年8月2日行左肺下叶切除术，上叶癌灶冷冻电凝术。探查见左下叶与胸膛广泛粘连，上下二叶大小不等癌性结节12个。术后用本发明CAAP制剂生物综合治疗二周。93年9月27日右肺冷冻电凝+部分肺叶切除，上纵膈淋巴结切除术。术中见肺癌结节41个，上纵膈见淋巴结转移灶3个。病理报告左下叶前内段腺癌，中度分化，瘤大7*6*4厘米，部分乳头状腺癌，累及支气管。另见背段低分化腺癌3*3*2厘米。右肺中度分化腺癌，纵膈淋巴结癌性转移。术后化疗一次(DDP，VP16)。体重100斤。93年10月22日出院接受第三次生物综合治疗，意在改善症状体征，消灭残余癌灶，控制或延缓肿瘤复发，延长生命和提高生存质量。93年11月14日，CAAP一疗程完成。患者咳喘基本转为正常，体重由112斤增加至116斤，体质明显康复，头发长满全黑，精神佳。93年11月24日，CAAP第二疗程开始，12月14日结束，病人基本康复，体重增加至120斤，面色红润。12月14日拍片复查，全身一般健康状况恢复，X线拍片，未发现新癌灶，肝肾功能及血象检查正常范围，病情稳定。

Claims

1.一种冷冻外科抗癌抗原制剂，其特征在于：是由以下配比的原料制成：去除非瘤组织的肿瘤标本10克

刀豆提取液 0.1～0.3克白介素-2 80～120万单位

大豆脂质体 1～3克利多卡因 0.1～0.3克。

2.根据权利要求1所述冷冻外科抗癌抗原制剂的制备方法，其特征在于：自身外科手术切取标本，分离并去除非瘤组织，剪成小块，以药用乙醚-生理盐水饱和液洗涤两次，加定量生理盐水，无菌条件下进行组织粉碎，零下195.8～269℃超低温条件下，以100～1000℃/分钟速度，快速冷冻，10℃/分钟速度融化后，以不同浓度生理盐水分次抽提，调整PH值为6.5，加刀豆提取液和重组白介素-2，37℃培养24小时，离心滤膜过滤，负压下提纯浓缩，浓缩液加大豆脂质体，混合均匀，沉化，加利多卡因，调整一定浓度，分装于2ml制剂瓶中，于零下24℃冻存备用。

3.根据权利要求1所述冷冻外科抗癌抗原制剂的制备方法，其特征在于：三同肿瘤外科手术切取标本，分离并去除非瘤组织，剪成小块，以药用乙醚-生理盐水饱和液洗涤两次，加定量生理盐水，无菌条件下进行组织粉碎，零下195.8～269℃超低温条件下，以100～1000℃/分钟速度，快速冷冻，10℃/分钟速度融化后，以不同浓度生理盐水分次抽提，调整PH值为6.5，加刀豆提取液和重组白介素-2，37℃培养24小时，离心滤膜过滤，负压下提纯浓缩，浓缩液加利多卡因，沉化后，分装于2ml制剂瓶中，冷冻干燥后封装；另取大豆脂质体，分装于2ml制剂瓶中，零下4℃保存；临用前，将CAAP冻干品与脂质体混合均匀后抽取皮下注射。