CN101309895B - 胰高血糖素受体拮抗剂、制备和治疗用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了具有胰高血糖素受体拮抗剂或反激动剂活性的新型式I化合物或其可药用盐，以及制备这类化合物的方法。在另一实施方案中，本发明公开了包含式I化合物的药物组合物、以及用它们治疗糖尿病和其它胰高血糖素相关性代谢失调等的方法。

Description

胰高血糖素受体拮抗剂、制备和治疗用途
本专利申请要求享有2005年11月17日提交的美国临时专利申请号60/737,627的优先权。
本发明涉及胰高血糖素受体的拮抗剂或反激动剂化合物，并涉及它们的药物组合物、以及这些化合物和组合物在人或动物体治疗中的应用。本发明的化合物显示出对胰高血糖素受体的高亲合力和选择性结合，因而用于治疗对胰高血糖素受体调节敏感的紊乱，如糖尿病性紊乱及其它胰高血糖素相关性代谢失调等。
胰高血糖素是一种与胰岛素协同作用的主要激素剂，介导血液中葡萄糖量的体内平衡调节。当血糖水平下降时胰高血糖素主要通过刺激某些细胞(在这类细胞中肝细胞比较重要)发挥作用，释放葡萄糖。胰高血糖素的作用与胰岛素的作用相反，胰岛素的作用是当血糖水平升高时刺激细胞吸收和贮存葡萄糖。胰高血糖素和胰岛素都是肽类激素。胰高血糖素在胰腺的α胰岛细胞中生成，而胰岛素在β胰岛细胞中生成。胰高血糖素通过结合并激活其受体而发挥其作用，所述受体是7-跨膜G蛋白偶联受体族的胰高血糖素-分泌素支族的成员。该受体通过激活腺苷酸环化酶第二信使系统而起作用，导致cAMP水平升高。胰高血糖素受体或该受体的天然变体可能在体外和在体内具有内在的结构活性(即在没有激动剂的存在下的活性)。起反激动剂作用的化合物可抑制这种活性。糖尿病是一种常见的葡萄糖代谢紊乱。该疾病的特征为高血糖，可分为I型糖尿病(胰岛素依赖型)或II型糖尿病(在性质上其为非胰岛素依赖性)。I型糖尿病患者呈血糖过多和低胰岛素，对此型疾病的常规处理是提供胰岛素。然而，在一些I型或II型糖尿病患者中，绝对或相对升高的胰高血糖素水平已经显示出有助于高血糖状态。在健康对照动物以及I型和II型糖尿病动物模型中，用选择性和特异性抗体除去循环的胰高血糖素已导致血糖水平降低。具有胰高血糖素受体纯合缺失的小鼠显示出葡萄糖耐量增加。此外，用反义寡核苷酸抑制胰高血糖素受体表达能改善db/db小鼠的糖尿病综合症。这些研究表明胰高血糖素抑制或对抗胰高血糖素的作用可以作为糖尿病患者高血糖常规治疗的有用的辅助治疗。可通过提供拮抗剂或反激动剂(即抑制或阻止构建的或胰高血糖素诱导的胰高血糖素受体介导的反应的物质)来抑制胰高血糖素的作用。
若干出版物公开了据称起胰高血糖素拮抗剂作用的肽。肽类激素的肽拮抗剂通常是有效的；然而已知它们由于被生理酶降解和体内分布差通常不被口服利用。因此，可口服利用的肽类激素的非肽拮抗剂通常是优选的。
近年出现的许多出版物报道了作用于胰高血糖素受体的非肽作用剂。例如，WO 03/048109，WO 2004/002480，和Kurukulasuriya等，″Biaryl amide glucagon receptor antagonists″Bioorganic&MedicinalChemistry Letters，vol 14，no 9，第2047-2050页，2004，各自公开了据说具有胰高血糖素受体拮抗剂活性的非肽化合物。尽管有许多胰高血糖素相关疾病的治疗，但目前的治疗遭受一种或多种不足之处，包括功效差的或不足、不能接受的副作用以及对某些患者群有禁忌症。因此，还需要利用可供选择的或改进的药物制剂的改进治疗，所述药物制剂能调节胰高血糖素受体活性和治疗可受益于胰高血糖素受体调节的疾病。本发明向本领提供这样的技术贡献，其基于一类对胰高血糖素受体具有高亲和性、选择性和有效抑制活性的新型化合物的发现。本发明的特点在于特定的结构及其活性。
发明概述
本发明提供以结构式I表示的化合物或其可药用盐：
Figure S2006800429010D00021
其中：
R1和R2独立地为-H或-卤素；
R3为
-(C1-C8)-烷基(任选地被1-3个卤素取代)，-(C3-C7)环烷基，-(C1-C6)烷基-(C3-C7)环烷基，或-(C3-C7)环烷基-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)；
R4和R5独立地为
-H，-卤素，-羟基，羟甲基，-CN，-(C1-C7)烷氧基，-(C2-C7)链烯基，或-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)；
R6为
-H，-卤素，或
Figure S2006800429010D00031
其中之字形标记表示与母体分子的连接点；
R7和R8独立地为
-H，-卤素，-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)，-(C1-C6)烷氧基，-(C3-C7)-环烷基，-C(O)R10，-COOR10，-OC(O)R10，-OS(O)2R10，-SR10，-S(O)R10，-S(O)2R10，或-O(C2-C7)链烯基；
R9独立地为
-H，卤素，-CN，-(C3-C7)环烷基，-C(O)R10，-COOR10，-OC(O)R10，-OS(O)2R10，-SR10，-S(O)R10，-S(O)2R10，或-O(C2-C7)链烯基，-(C1-C3)烷氧基(任选地被1-3个卤素取代)，或-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)，且
R10在每次出现时独立地为
-氢，或-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。
本发明提供用作胰高血糖素受体拮抗剂或反激动剂的化合物。本发明进一步提供胰高血糖素受体的选择性拮抗剂或反激动剂(相对于GLP-1受体)化合物。本发明进一步提供包含式I化合物或其药用盐和可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。本发明进一步提供应用这些化合物和组合物治疗对胰高血糖素受体调节敏感的紊乱如糖尿病性及其它胰高血糖素相关性代谢失调的方法。
发明详述
在一个实施方案中，本发明提供本文中详细描述的式I化合物。尽管本发明的所有化合物都有用，但是某些化合物特别使人感兴趣而且是优选的。下面的列举阐述了若干组优选的化合物。应当理解每一个列举可以与其它列举组合以产生本文中所述的其它组的优选实施方案。
在另一实施方案中本发明提供式I化合物，其中
R1和R2为-H；
R3为
-(C1-C8)-烷基(任选地被1-3个卤素取代)，-(C3-C6)环烷基，-(C1-C6)烷基-(C3-C6)环烷基，或-(C3-C6)环烷基-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)；
R4和R5独立地为
-H，-卤素，或-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)；
R6为
其中之字形标记表示与母体分子的连接点；
R7和R8独立地为
-H，-卤素，-(C1-C3)烷基(任选地被1-3个卤素取代)，
-(C1-C3)烷氧基；且
R9独立地为
-H，卤素，或-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。
在另一实施方案中本发明提供式I化合物，其中
R1和R2为-H；
R3为
-(C1-C8)-烷基(任选地被1-3个卤素取代)，-(C3-C6)环烷基，-(C1-C6)烷基-(C3-C6)环烷基，或-(C3-C6)环烷基-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)；
R4和R5独立地为
-H，-卤素，或-CH3(任选地被1-3个卤素取代)；
R6为
Figure S2006800429010D00051
其中之字形标记表示与母体分子的连接点；
R7和R8独立地为-H，或-卤素；
且R9独立地为-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。
在另一实施方案中本发明提供式I化合物，其中
R1和R2为-H；R3为-(C1-C8)-烷基(任选地被1-3个卤素取代)，-(C3-C6)环烷基，-(C1-C6)烷基-(C3-C6)环烷基，或-(C3-C6)环烷基-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)；R4和R5为-CH3(任选地被1-3个卤素取代)且各自占据R6连接的苯环上相邻于R6的位置；
R6为
Figure S2006800429010D00052
其中之字形标记表示与母体分子的连接点；
R7和R8为-H；且R9独立地为-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。
在另一实施方案中本发明提供式I化合物，其中R1和R2独立地为氢或卤素；R3为甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，戊基，己基，庚基，辛基，3，3-二甲基丁基，2-甲基丙基，3-甲基-丁基，叔丁基，4-甲基戊基，2，2-二甲丙基，3-三氟丙基，4-三氟丁基，环丙基，环丁基，环戊基或环己基；R4和R5独立地为氢，甲基，乙基，叔丁基，环己基，戊基，异丙氧基，氯，氟，溴，羟基，三氟甲基，-CN，甲氧基，羟甲基，4-甲基戊氧基，或戊氧基；R7和R8独立地为氢，氟，氯，甲基，乙基，戊基，异丙基，叔丁基，三氟甲基，乙酰基，2-甲基丙基，甲氧基，环己基，或三氟甲氧基；R9为氢，溴，氟，甲基，叔丁基，三氟甲基或异丙基。
提供本发明的其它实施方案，其中本文中上面描述的每一个实施方案按照下面优选方案中的描述进一步缩小范围。具体而言，以下每一个优选方案都独立地与上面每一个实施方案组合，且特定的组合提供另一实施方案，其中在优选方案中显示的变量按照优选缩小范围。
优选地R1为-H。优选地R1为氟。优选地R1为氯。优选地R2为-H。优选地R2为氟。优选地R2为氯。优选地R1和R2为-H。优选地R1为氟且R2为氟。
优选地R3为-(C1-C8)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R3为乙基，丙基，异丙基，丁基，叔丁基，3-甲基-丁基，戊基，己基，庚基，辛基，3，3-二甲基丁基，2-甲基丙基，4-甲基戊基，2，2-二甲丙基，3-三氟丙基，或4-三氟丁基。优选地R3为异丙基，丁基，叔丁基，3-甲基-丁基，戊基，3，3-二甲基丁基，2-甲基丙基，4-甲基戊基，2，2-二甲丙基，3-三氟丙基，或4-三氟丁基。优选地R3为异丙基，3-甲基-丁基，三氟丙基或4-三氟丁基。
优选地R3为-(C3-C7)环烷基。优选地R3为环丙基，环丁基，环戊基或环己基。优选地R3为环丙基。优选地R3为环丁基。优选地R3为环戊基。优选地R3为环己基。
优选地R3为-(C1-C6)烷基-(C3-C7)环烷基。优选地R3为-(C1-C3)烷基-(C3-C6)环烷基。优选地R3为-(C1-C3)烷基-环丙基。优选地R3为-(C1-C3)烷基-环丁基。优选地R3为-(C1-C3)烷基-环戊基。优选地R3为-(C1-C3)烷基-环己基。
优选地R3为-(C3-C7)环烷基-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R3为-环丙基-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R3为-环丁基-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R3为-环戊基-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R3为-环己基-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。
优选地R4为-H，-卤素，-羟基，羟甲基，或-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R4为-H，-卤素，或-(C1-C3)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R4为-H，-卤素或-CH3。优选地R4为-H，优选地R4为氟，氯，溴或碘。优选地R4为-CH3。
优选地R5为-H，-卤素，-羟基，羟甲基，或-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R5为-H，-卤素，或-(C1-C3)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R5为-H，-卤素或-CH3。优选地R5为-H。优选地R5为氟，氯，溴或碘。优选地R5为-CH3。
优选地R4和R5为-H。优选地R4为卤素且R5为-H。优选地R4为-H且R5为-CH3。优选地R4和R5为-CH3。优选地R4和R5为-CH3且各自占据R6连接的苯环上相邻于R6的位置。
优选地R6为-H。优选地R6为-卤素。优选地R6为
Figure S2006800429010D00071
其中之字形标记表示与母体分子的连接点。
优选地R7为-卤素，-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)，-(C1-C6)烷氧基，-(C3-C7)-环烷基，-C(O)R10，-COOR10，-OC(O)R10，-OS(O)2R10，-SR10，-S(O)R10，-S(O)2R10，或-O(C2-C7)链烯基。优选地R7为-卤素，-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)，或-(C1-C6)烷氧基。优选地R7为-H或-卤素。优选地R7为-H。
优选地R8为-卤素，-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)，-(C1-C6)烷氧基，-(C3-C7)-环烷基，-C(O)R10，-COOR10，-OC(O)R10，-OS(O)2R10，-SR10，-S(O)R10，-S(O)2R10，或-O(C2-C7)链烯基。优选地R8为-卤素，-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)，或-(C1-C6)烷氧基。优选地R8为-H或-卤素。优选地R8为-H。优选地R7为-H且R8为-H。
优选地R6为
Figure S2006800429010D00072
其中之字形标记表示与母体分子的连接点，R7为-H且R8为-H。
优选地R9为-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。优选地R9为甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，叔丁基，三氟甲基，3-甲基-丁基，戊基，己基，3，3-二甲基丁基，2-甲基丙基，4-甲基戊基，2，2-二甲丙基，3-三氟丙基或4-三氟丁基。优选地R9为异丙基，叔丁基或三氟甲基。
优选地R6为
其中之字形标记表示与母体分子的连接点，R7为-H且R8为-H，且R9为异丙基，叔丁基或三氟甲基。
优选地R10在每次出现时独立地为-(C1-C6)烷基(任选地被1-3个卤素取代)。
本发明的其它实施方案包括式Z1至Z6的化合物。本发明的其它实施方案是本文中描述的任何新的中间体制剂，其用于制备式I或Z1至Z6的胰高血糖素受体拮抗剂或反激动剂。
表1
Figure S2006800429010D00081
由于它们与胰高血糖素受体相互作用，本发明的化合物用于治疗各种其中与胰高血糖素受体的相互作用是有益的病症和紊乱。这些紊乱和病症本文中定义为“糖尿病性及其它胰高血糖素相关性代谢失调”。本领域技术人员能够通过与紊乱病理生理学中或对紊乱的体内平衡响应中胰高血糖素受体介导的征兆联系来鉴定“糖尿病性及其它胰高血糖素相关性代谢失调”因此，这类化合物可例如用于预防、治疗或缓解内分泌系统、中枢神经系统、周围神经系统、心血管系统、肺系统和胃肠系统的疾病或病症或相关症状或后遗症，同时减少和或消除与目前治疗相关的一种或多种不希望的副作用。“糖尿病性及其它胰高血糖素相关性代谢失调”包括但不限于糖尿病、I型糖尿病、II型糖尿病、高血糖、高胰岛素血症、β-细胞休息、通过恢复初期响应改进β-细胞功能、膳食高血糖、预防细胞凋亡、空腹血糖异常(impaired fasting glucose，IFG)、代谢综合症、低血糖、高/低钾血、胰高血糖素水平正常化、改善的LDL/HDL比、减少零食、进食障碍、体重减轻、多囊性卵巢综合征(PCOS)、糖尿病引起的肥胖、潜在的成人自身免疫性糖尿病(LADA)、胰岛炎、胰岛移植、小儿糖尿病、妊娠期糖尿病、糖尿病晚期并发症、微/大蛋白尿、肾病、视网膜病、神经病变、糖尿病性脚溃疡、胰高血糖素给药引起的肠运动降低、短肠综合征、止泻、胃液分泌增加、血流量减小、勃起机能障碍、青光眼、手术后应激反应、改善由缺血后血流再灌注所引起的器官组织损伤、缺血性心脏损伤、心脏机能不全、充血性心力衰竭、中风、心肌梗塞、心律不齐、早产儿死亡、抗细胞凋亡、伤口愈合、葡萄糖耐量降低(IGT)、胰岛素抵抗综合征、综合征X、高脂血症、血脂障碍、高甘油三酯血症、高脂蛋白血症、高胆固醇血症、动脉硬化症包括动脉粥样硬化、胰高血糖素瘤、急性胰腺炎、心血管疾病、高血压、心脏肥大、胃肠道病症、肥胖症、肥胖症引起的糖尿病、糖尿病性血脂异常等。
此外，本发明提供式I化合物或其药用盐或包含式I化合物或其药用盐和可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物：用于抑制胰高血糖素受体；用于抑制哺乳动物中胰高血糖素受体介导的细胞反应；用于降低哺乳动物的血糖水平；用于治疗过量的胰高血糖素引起的疾病；用于治疗哺乳动物的糖尿病性及其它胰高血糖素相关性代谢失调；以及用于治疗糖尿病、肥胖症、高血糖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、中风、神经病变和伤口愈合。因此，本发明的方法包括式I化合物的预防和治疗性给药。
本发明进一步提供式I化合物或其药用盐的用途：用于制备抑制胰高血糖素受体的药物；用于制备抑制哺乳动物中胰高血糖素受体介导的细胞反应的药物；用于制备降低哺乳动物血糖水平的药物；用于制备治疗过量的胰高血糖素引起的疾病的药物；用于制备治疗哺乳动物的糖尿病性及其它胰高血糖素相关性代谢失调的药物；以及用于制备预防或治疗糖尿病、肥胖症、高血糖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、中风、神经病变和不适性伤口愈合的药物。
本发明进一步提供治疗哺乳动物过量的胰高血糖素导致的病症的方法；抑制哺乳动物胰高血糖素受体的方法；抑制哺乳动物中胰高血糖素受体介导的细胞反应的方法；降低哺乳动物血糖水平的方法；治疗哺乳动物的糖尿病性及其它胰高血糖素相关性代谢失调的方法；预防或治疗糖尿病、肥胖症、高血糖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、中风、神经病变和不适性伤口愈合的方法。所述方法包括给需要这种治疗的哺乳动物施用抑制胰高血糖素受体量的式I化合物或其可药用盐或包含式I化合物或其药用盐和可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。
此外，本发明提供包含式I化合物或其药用盐和可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物：该组合物适合用于抑制胰高血糖素受体；适合用于抑制胰高血糖素受体介导的细胞反应；适合用于降低哺乳动物的血糖水平；适合用于治疗哺乳动物的糖尿病性及其它胰高血糖素相关性代谢失调；以及适合用于预防或治疗糖尿病、肥胖症、高血糖、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、中风、神经病变和伤口愈合。
本发明的化合物或盐进一步提供用于鉴定具有胰高血糖素受体缺损的患者的诊断试剂，作为增加胃酸分泌、以及逆转胰高血糖素给药引起的肠运动降低的治疗。本发明还提供治疗其中胰高血糖素拮抗作用是有益的紊乱或疾病的方法，该方法包括给需要这种治疗的患者施用有效量的本发明的化合物。在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物用于制备治疗胰高血糖素介导的任何病症和疾病的药物。在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物用于制备治疗高血糖的药物。在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物用于制备降低哺乳动物血糖的药物。本发明的化合物在降低禁食(fasting)和饭后阶段的血糖中都是有效的。在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物用于制备治疗IGT的药物组合物。在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物用于制备治疗II型糖尿病的药物组合物。在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物用于制备延缓或预防IGT发展为II型糖尿病的药物组合物。在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物用于制备延缓或预防非胰岛素需要性II型糖尿病发展为胰岛素需要性II型糖尿病的药物组合物。在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物用于制备治疗I型糖尿病的药物组合物。这种治疗通常伴随胰岛素治疗。在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物用于制备治疗肥胖症的药物组合物。在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物用于制备治疗脂类代谢紊乱的药物组合物。在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物用于制备治疗食欲调节或能量消耗紊乱的药物组合物。在本发明的其它实施方案中，用本发明的化合物对患者进行的治疗与节食和/或锻炼相结合。
在本发明的另一方面，本发明的化合物与一种或多种其它活性物质以任意合适的比值联合给药。这类其它的活性物质例如可选自抗糖尿病药、抗肥胖症药、抗高血压药、治疗与糖尿病相关或由糖尿病引起的并发症的治疗剂、以及治疗由肥胖引起的或与肥胖相关的并发症和紊乱的治疗剂。以下的列举阐述了若干组组合。应当理解所指出的每一种治疗剂可与所指出的其它治疗剂组合以产生另外的组合。
因此，在本发明的其它实施方案中本发明的化合物可与一种或多种抗糖尿病药联合给药。
适宜的抗糖尿病药包括胰岛素、胰岛素类似物和衍生物，如EP 792290(Novo Nordisk A/S)中公开的那些，例如NεB29-十四酰des(B30)人胰岛素，EP 214 826和EP 705 275(Novo Nordisk A/S)中公开的那些，例如AspB28人胰岛素，US 5,504,188(Eli Lilly)中公开的那些，例如LysB28ProB29人胰岛素，EP 368 187(Aventis)中公开的那些，例如，其在此全部引入作为参考，GLP-1和GLP-1衍生物如WO 98/08871(NovoNordisk A/S)中公开的那些，其在此引入作为参考，以及口服活性降血糖药。
口服活性降血糖药优选包括咪唑啉类、磺脲类、双胍类、meglitinides、噁二唑烷二酮类(oxadiazolidinediones)、噻唑烷二酮类、胰岛素敏化剂、胰岛素促泌剂，如格列美脲、α-葡糖苷酶抑制剂、作用于β细胞的ATP依赖性钾通道的治疗剂，例如钾通道启动子，如在WO97/26265、WO 99/03861和WO 00/37474(Novo Nordisk A/S)中公开的那些，在此引入作为参考，或米格列奈，或钾通道阻滞剂，如BTS-67582、那格列奈，胰高血糖素拮抗剂如WO 99/01423和WO 00/39088(NovoNordisk A/S和Agouron Pharmaceuticals，Inc.)中公开的那些，此引入作为参考，GLP-1-拮抗剂，DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制剂，PTP酶(蛋白质酪氨酸磷酸酶)抑制剂，与糖原异生和/或糖原分解刺激有关的肝酶抑制剂，葡萄糖摄取调节剂，葡糖激酶(GK)激活剂，如WO 00/58293，WO01/44216，WO 01/83465，WO 01/83478，WO 01/85706，WO 01/85707和WO 02/08209(Hoffman-La Roche)中公开的那些或WO 03/00262，WO03/00267和WO 03/15774(AstraZeneca)中公开的那些，在此引入作为参考，GSK-3(糖原合酶激酶-3)抑制剂，改变脂类代谢的化合物如抗脂药如HMG CoA抑制剂(他丁类)，降低食物摄入的化合物，PPAR(过氧物酶体增殖子激活的受体)配体包括PPAR-α，PPAR-γ和PPAR-Δ亚型，以及RXR(类视黄醇X受体)激动剂，如ALRT-268，LG-1268或LG-1069。
在另一实施方案中，本发明的化合物与胰岛素或胰岛素类似物或衍生物如NεB29-十四酰des(B30)人胰岛素，AspB28人胰岛素，LysB28人胰岛素，，或包含这些中的一种或多种治疗剂的混合制备物联合给药。
在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物与磺脲如格列本脲、格列吡嗪、tolbautamide、chloropamidem、甲磺吖庚脲、格列美脲、glicazide和glyburide联合给药。
在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物与双胍类例如二甲双胍联合给药。
在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物与meglitinide例如瑞格列奈或那格列奈联合给药。
在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物与噻唑烷二酮胰岛素敏化剂联合给药，噻唑烷二酮胰岛素敏化剂例如有曲格列酮、环格列酮、piolitazone、罗西格列酮、isaglitazone、达格列酮、恩格列酮、CS-011/CI-1037或T 174或WO 97/41097、WO 97/41119、WO 97/41120、WO 00/41121和WO 98/45292(Dr Reddy′s Research Foundation)中公开的化合物，在此引入作为参考。
在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物可与胰岛素敏化剂联合给药，胰岛素敏化剂例如，GI 262570、YM-440、MCC-555、JTT-501、AR-H039242、KRP-297、GW-409544、CRE-16336、AR-H049020、LY510929、MBX-102、CLX-0940、GW-501516或WO 99/19313、WO00/50414、WO 00/63191、WO 00/63192、WO 00/63193中公开的化合物如ragaglitazar(NN 622或(-)DRF 2725)(Dr Reddy′s ResearchFoundation)以及WO 00/23425、WO 00/23415、WO 00/23451、WO00/23445、WO 00/23417、WO 00/23416、WO 00/63153、WO 63196、WO 00/63209、WO 00/63190和WO 00/63189(Novo Nordisk A/S)中公开的化合物，在此引入作为参考。
在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物与α-葡糖苷酶抑制剂，例如，伏格列波糖、乙格列酯、米格列醇或阿卡波糖联合给药。
在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物与作用于β细胞的ATP依赖性钾通道的治疗剂，例如，甲苯磺丁脲、格列本脲、格列吡嗪、glicazide、BTS-675 82或瑞格列奈联合给药。
在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物可与那格列奈联合给药。
在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物与抗脂药或抗高血脂药例如消胆胺、考来替泊、氯苯丁酯、吉非贝齐、洛伐他丁、普伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、普罗布考、右旋甲状腺素、非诺贝特或阿伐他丁联合给药。
在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物与降低食物摄入的化合物联合给药。
在本发明的另一实施方案中，本发明的化合物与上述化合物中一种以上的化合物联合给药，例如与二甲双胍和磺脲如glyburide；磺脲和阿卡波糖；那格列奈和二甲双胍；瑞格列奈和二甲双胍、阿卡波糖和二甲双胍；磺酰脲、二甲双胍和曲格列酮；胰岛素和磺酰脲；胰岛素和二甲双胍；胰岛素、二甲双胍和磺酰脲；胰岛素和曲格列酮；胰岛素和洛伐他丁等联合给药。
在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物可与一种或多种减肥药或食欲调节剂联合给药。这类治疗剂可选自CART(可卡因安非他明调节的转录)激动剂、NPY(神经肽Y)拮抗剂、MC4(黑皮质素4)激动剂、MC3(黑皮质素3)激动剂、阿立新拮抗剂、TNF(肿瘤坏死因子)激动剂、CRF(促皮质素释放因子)激动剂、CRF BP(促皮质素释放因子结合蛋白)拮抗剂、urocortin激动剂、β3肾上腺素激动剂如CL-316243、AJ-9677、GW-0604、LY362884、LY377267或AZ-40140 MSH(促黑素细胞激素)激动剂、MCH(黑素细胞浓缩激素)拮抗剂、CCK(缩胆囊素)激动剂、5-羟色胺重摄取抑制剂如氟苯氧丙胺、塞尔特或西酞普兰、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素能化合物混合物、5HT(5-羟色胺)激动剂、铃蟾素激动剂、促生长激素神经肽拮抗剂、生长激素、生长因子如催乳激素或胎盘催乳激素、生长激素释放化合物、TRH(促甲状腺激素释放激素)激动剂、UCP 2或3(解偶联蛋白2或3)调节剂、来普汀激动剂、DA激动剂(溴隐亭、doprexin)、脂肪酶/淀粉酶抑制剂、PPAR(过氧物酶体增殖子激活的受体)调节剂、RXR(类视黄醇X受体)调节剂、TR β激动剂、AGRP(Agouti相关蛋白)抑制剂、H3组胺拮抗剂、阿片拮抗剂(如纳曲酮)、exendin-4、GLP-1和睫状神经营养因子(如axokine)、大麻素受体拮抗剂例如CB-1(如利莫那班)。在另一实施方案中减肥药为右旋安菲他明或安非他明。在另一实施方案中减肥药为来普汀。在另一实施方案中减肥药为苯氟拉明或exfenfluramine。在另一实施方案中减肥药为西布曲明。在其它实施方案中减肥药为奥利司他。在另一实施方案中减肥药为马吲哚或苯丁胺。在另一实施方案中减肥药为苯甲曲秦、安非泼拉酮、氟西汀、丁氨苯丙酮、托吡酯或依考匹泮。
此外，本发明的化合物可与一种或多种抗高血压药联合给药。抗高血压药的实例是β-阻断剂如心得舒、阿替洛尔、噻吗洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔和美托洛尔、SCE(血管紧张肽转化酶)抑制剂如贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、喹那普利和雷米普利，钙通道阻断剂如硝苯地平、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地尔硫卓和维拉帕米，以及α-阻断剂如多沙唑嗪、乌拉地尔、哌唑嗪和特拉唑嗪。其它文献可参考Remington：The Science and Practice ofPharmacy，第19版，Gennaro Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1995。
本发明的化合物可与FAS抑制剂联合给药。本发明的化合物还可与化学解偶联剂、激素敏感性脂肪酶抑制剂、咪唑啉类、11-β-羟甾醇脱氢酶抑制剂、脂蛋白脂肪酶激活剂、AMPK激活剂、免疫抑制药物、烟酰胺、ASIS、抗雄激素或羧肽酶抑制剂联合给药。
应当理解本发明化合物与节食和/或锻炼以及一种或多种上述化合物的任何适宜的联合都被认为在本发明的范围之内。
描述本文中所述的化合物、组合物以及方法中所用的普通术语具有它们通常的含义。在本申请通篇中，下列术语具有所述的含义：
“GLP-1指胰高血糖素样肽1。术语“胰高血糖素受体”指一种或多种与胰高血糖素特异性相互作用产生生物信号的受体。术语“GLP-1受体”指一种或多种与胰高血糖素样肽1特异性相互作用产生生物信号的受体。
术语“高血糖素受体拮抗剂”指在响应胰高血糖素中具有能够阻断cAMP产生的能力的本发明化合物。术语“胰高血糖素受体反激动剂”指具有能抑制胰高血糖素受体构建活性的能力的本发明化合物。术语“选择性”拮抗剂或反激动剂指与对GLP-1受体的亲和性相比对胰高血糖素受体具有更大亲和性的化合物。
在本申请文本的通式中，一般的化学术语具有它们的通常的含义。例如；
“卤素”或“卤代”指氟、氯、溴和碘。
除非另有说明，术语“烷基”指那些直链或支链饱和构型的具有所标明碳原子数的烷基。如本文中所用的，“(C1-C3)烷基”为一至三个碳原子，如甲基、乙基、丙基、正丙基、异丙基等及其支链或异构形式，且任选地可被一至三个卤素或本文中列举的实施方式中所标数量的取代基取代。“(C1-C6)烷基”为一至六个碳原子，如甲基、乙基、丙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基、戊基、异戊基、己基等，及其支链或异构形式，且任选地可被一至三个卤素或本文中列举的实施方式中所标数量的取代基取代。“(C1-C8)烷基”为一至八个碳原子，如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基等，及其支链或异构形式，且任选地可被一至三个本文中列举的实施方式中所述的卤素取代。
术语“(C3-C7)环烷基指含一个或多个3至7个碳原子环的饱和或部分饱和碳环。(C3-C7)环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
术语“(C1-C6)烷氧基”表示通过氧桥连接的一至六个碳原子的烷基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基等。术语“(C1-C7)烷氧基”表示通过氧桥连接的一至七个碳原子的烷基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基等，且可任选地被三个本文列举的实施方式中所述的卤素取代。
术语“(C2-C7)链烯基”指具有至少一个碳-碳双键的直链或支链构型的二至七个碳原子烃链，其中碳-碳双键可出现在链的任何位置，如乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、乙烯基、烷基、2-丁烯基等，且可任选地被一至三个本文列举的实施方式中所述的卤素取代。
本文中所用的术语“任选地被取代”或“任选的取代基”指涉及的基团不被取代或被一个或多个指定的取代基取代。当所涉及的基团被一个以上的取代基取代时，取代基可以相同或不同。此外，当使用术语“独立地”、“独立地为”和“独立地选自”时，意味着所涉及的基团可以相同或不同。某些本文中定义的术语可以在结构式中出现一次以上，并且在这种情形出现时，每个术语的定义都独立于其它术语。
术语“患者”包括人和非人动物如伴侣动物(狗和猫等)和牲畜动物。牲畜动物是用于食物生产的饲养动物。反刍动物如母牛、公牛、小母牛、阉牛、绵羊、水牛、美洲野牛、山羊和羚羊为牲畜的实例。其它牲畜的实例包括猪和禽(家禽)如小鸡、鸭、火鸡和鹅。还有其它牲畜的实例包括水产养殖的鱼、贝类和甲壳类动物。还包括用于食物生产的外来动物如鳄鱼、水牛和平胸鸟(例如，鸸鹋、美洲鸵或鸵鸟)。受治疗的患者优选为哺乳动物，特别是人。
术语“胰高血糖素受体介导的细胞反应”包括哺乳动物细胞对胰高血糖素刺激或胰高血糖素受体活性的各种反应。例如“胰高血糖素受体介导的细胞反应”包括但不限于作为对胰高血糖素刺激或胰高血糖素受体活性的反应的葡萄糖从肝或其它细胞的释放。本领域普通技术人员能容易鉴定胰高血糖素受体活性介导的其它细胞反应，例如通过使细胞与有效剂量的胰高血糖素接触之后观测反应细胞边界点(endpoint)的变化来鉴定。
本文中所用的术语“治疗”，包括其普遍接受的含义，即为了预防、阻止、抑制、减轻、改善、减缓、终止、延缓或逆转本文中描述的疾病、紊乱或病理性病症的发展而对患者进行的处理和护理，包括减轻或解除症状或并发症，或者治愈或消除疾病、紊乱或病症。
“组合物”指药物组合物，意在包括包含活性成分(包括式I化合物)和构成的惰性成份的药物产品。因此，本发明的药物组合物包括将本发明化合物和可药用载体混合而制备的任何组合物。
术语“适宜的溶剂”指任何溶剂或溶剂的混合物，该溶剂对进行的反应为惰性，其能充分地溶解反应物以提供在其中完成所需反应的介质。
术语“单位剂型”指适于作为人及其它非人动物的单元剂型的物理分离的单元，各单位含预定量的活性物质，其经计算与适宜的药物载体结合产生期望的治疗效果。
本发明的化合物可以是手性的，这意味着任何对映异构体，不论是纯的、部分纯化的还是外消旋混合物，都包括在本发明的范围内。此外，当分子中存在双键或完全或部分饱和的环系或一个以上的不对称中心或具有受限的可旋转性的键时可以形成非对映异构体。这意味着任何非对映异构体，无论是以分离的、纯的或部分纯化的非对映异构体或其混合物形式，都包括在本发明范围内。此外，本发明的一些化合物可以以不同互变异构形式存在，这意味着化合物能形成的任何互变异构形式都包括在本发明的范围内。本发明还包括式I化合物的互变异构体、对映异构体及其它立体异构体。此类变化形式都应在本发明的范围之内。
式I化合物当以非对映体混合物的形式存在时，可以分离成对映异构体的非对映体对，例如，通过从适宜的溶剂例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物中分步结晶得到。如此得到的对映异构体对可通过常规方法，例如通过利用旋光活性酸作为拆解试剂，分离成单个的立体异构体。或者，式I化合物的任何对映异构体可利用光学纯的起始原料或已知构型的试剂或通过对映选择性合成通过立体定向合成获得。
本文中所用的术语“对映体富集”指与另一种对映异构体相比一种对映异构体的量增加。表达所获得的对映体富集的便利方法是对映体过剩这一概念，或“ee”，见下面的公式：
ee = E 1 - E 2 E 1 + E 2 × 100
其中E1为第一对映异构体的量，E2为第二对映异构体的量。因此，如果两种对映异构体的初始比值是50∶50，如在外消旋混合物的情形下，且获得足以产生70∶30的最终比值的对映体富集，则对于第一对映异构体的ee为40％。然而，如果最终比值为90∶10，则对于第一对映异构体ee为80％。大于90％的ee为优选，大于95％的ee为最优选，大于99％的ee为最特别优选。对映体富集由本领域普通技术人员采用标准技术和操作，如具有手性柱的气相色谱或高效液相色谱，很容易测定。完成对映体对的分离所必需的适宜的手性柱、洗脱剂和条件的选择，在本领域普通技术人员知识范围之内。另外，式I化合物特定立体异构体和对映异构体可由本领域普通技术人员运用公知的技术和方法来制备，如J.Jacques等，″Enantiomers，Racemates，and Resolutions，″John Wiley andSons，Inc.，1981，和E.L.Eliel和S.H.Wilen，″Stereochemistry of Organic Compounds，″(Wiley-Interscience 1994)，以及1998年4月29日公布的欧洲专利申请EP-A-838448中公开的技术和方法。拆分的实例包括重结晶技术或手性色谱。除非另有指明，表明为“异构体1”的化合物将是从手性分离柱上洗脱出的第一异构体，而“异构体2”则为第二异构体。
本发明还包括本发明化合物的可药用盐。通常，术语“药用的”作为形容词使用时指对活体基本上无毒。例如，本文中所用的术语“药用盐”指式I化合物的盐，其对活体基本上无毒。参见，例如，Berge，S.M，Bighley，L.D.，和Monkhouse，D.C，″Pharmaceutical Salts，″J.Pharm.Sci.，66：1，1977。可药用盐及制备它们的常规方法为本领域公知。参见，例如，P.Stahl等，″Handbook Of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，andUse，″(VCHA/Wiley-VCH，2002)；Berge，S.M，Bighley，L.D.，和Monkhouse，D.C.，″Pharmaceutical Salts，″J.Pharm.Sci.，66：1，1977。
本发明还包括本发明化合物的前药，其在给药时变为药理学活性物质之前通过代谢过程进行化学转化。通常，这类前药会是本发明化合物的官能衍生物，其容易在体内转化为本发明的化合物。选择和制备适宜的前药衍生物的常规方法例如描述于″Design of Prodrugs″，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985。
式I化合物可由本领域普通技术人员按照各种方法来制备，其中有一些如下述的方法和流程图所示。制备式I化合物所要求的步骤的具体顺序取决于所要合成的具体化合物、起始化合物和取代基团的相对倾向性(liability)。试剂或起始原料容易由本领域技术人员获得，没有市售的情况下可由本领域普通技术人员按照本领域常规使用的标准方法以及下述的各种方法和流程图容易合成。
提供下面的流程图、制备、实施例和方法是为了更好地阐明本发明的实施，无论如何不应当解释为限制本发明的范围。本领域技术人员将明白可进行各种改变而不背离本发明的精神和范围。在说明书中提到的所有出版物都显示本发明所属领域技术人员的水平。
完成流程图的反应、制备、实施例和方法的最佳时间可通过常规的色谱技术监测反应的进程来确定。此外，优选在惰性气氛例如氩气或特别是氮气下进行本发明的反应。溶剂的选择通常并不关键，只要所用的溶剂对于正在进行的反应是惰性并充分溶解反应物以完成所需反应即可。优选在化合物用于随后的反应之前将其分离和纯化。一些化合物在其形成过程中可从反应溶液中结晶出来然后通过过滤收集，或者可通过萃取、蒸发或倾析除去反应溶剂。如果需要，式I的中间体和最终产物可通过常规的技术如重结晶或在固体载体(如硅胶或氧化铝)上的色谱进一步纯化。
技术人员将理解不是所有的取代基适合于所有的反应条件。这些化合物可在合成中的适当点上用本领域熟知的方法进行保护或改性。
除非另有说明，在本文的流程图、制备、实施例和方法中所用的术语和缩写具有它们的正常含义。例如，如本文中所用的，下列术语具有所指的含义：“min”指分钟；“h”或“hr”指小时；“TLC”指薄层色谱；“HPLC”指高效液相色谱；“Rf”指保留因子；“Rt”指保留时间；“δ”指偏离四甲基硅烷百万分率低场；“MS”指质谱；“MS(ES)”指电子喷射质谱，“UV”指紫外分光法；“1H NMR”指质子核磁共振波谱法。此外；“RT”指室温；“DEAD”指二乙基偶氮二羧酸酯；“PPh3”指三苯膦；“ADDP”指1，1′-(偶氮二羰基)二哌啶；“PBu3”指三丁基膦；“OTF”指三氟甲磺酸盐；“LAH”指氢化锂铝；“DIBAL-H”指二异丁基氢化铝；“KOtBu”指叔丁醇钾；“THF”指四氢呋喃；“TBP”指三丁基膦；“EDCI”指1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二酰胺盐酸盐；“DMAP”指二甲氨基吡啶；“HNMe(OMe)”指N，N-二甲羟胺；“CDMT”指2-氯-4，6-二甲氧基-[1，3，5]三嗪；“NMM”指N-甲基吗啉；“DCM”指二氯甲烷；“DMSO”指二甲基亚砜；“ET3N”指三乙胺；“DMF”指二甲基甲酰胺；分子式中“Et”指乙基，例如Et2O指二乙醚，EtOAc指乙酸乙酯；“PyBOP”指溴-三吡咯烷基-六氟磷酸鏻；“Me”指甲基，如在MeOH(甲醇)中；“Pa/C”指10％碳载钯。除非另有指明，异构体1指手性分离中洗脱出的第一异构体，异构体2指手性分离中洗脱出的第二异构体。
一般流程
本发明的所有化合物都可化学制备，例如通过下面的流程图和/或制备和实施例中所述的下列合成路线制备。不过，下面的论述决不打算限制本发明的范围。例如，所述每条路线的具体合成步骤可以不同的方式结合，或与不同流程图中的步骤结合，以制备其它的式I化合物。
流程图I
在流程图I步骤A中，将式1的4-硝基苯酚经形成三氟甲基磺酸酯中间体之后用溴阴离子进行芳烃亲核取代转化为式2的1-溴-4-硝基苯。将4-硝基苯酚在有机碱如吡啶的存在下用三氟甲磺酸酐在0℃至室温下处理1至20小时得到式2的三氟甲磺酸盐。精制之后将产物残留物溶于高沸点的惰性溶剂如DMSO或DMF中，优选DMF。该三氟甲磺酸盐用溴阴离子源如四丁基溴化铵、溴化铯、溴化钠或溴化锂(优选溴化锂)在150℃的温度下处理约8至48小时，得到式2的1-溴-4-硝基苯。
在流程图I步骤B中，运用Suzuki反应将式2的1-溴-4-硝基苯与式3的苯基硼酸偶合得到式4的硝基联苯。本领域技术人员将认识到这类用芳基三氟磺酸盐和苯基硼酸进行的Suzuki偶合可应用多种反应条件完成。优选的条件是在氮气氛中使用四(三苯基膦)钯与氟化钾。该反应在惰性溶剂如甲苯或苯和水中于40℃至反应的回流温度下进行约4至48小时。
在流程图I步骤C中，将式4的硝基联苯还原成式4的联苯胺。许多还原硝基苯的方法为技术人员熟知，可见于下列教科书中：R.C.Larock，″Comprehensive Organic Transformations″，VCH Publishers，1989，第412-415页。硝基在溶剂如THF、乙酸乙酯、甲醇或乙醇(优选乙醇)中经5或10％碳载钯还原。将反应在室温下置入氢气下约2至24小时。将式5的联苯胺如流程图III中所示进一步精制，其中R6是被R7、R8和R9取代的苯基。
流程图II
Figure S2006800429010D00211
在流程图II步骤A中，将式6的4-甲酰基苯甲酸甲酯通过与格氏试剂如己基溴化镁或异丁基溴化镁反应转化为式7的仲醇。
在流程图II步骤B中，将式7的仲醇氧化为式8的酮。有许多氧化仲醇的方法为本领域技术人员已知。这类方法包括但不限于高锰酸钾、氧化锰(IV)、四氧化钌、重铬酸吡啶鎓、
Figure S2006800429010D00212
、邻碘苯甲酸、Dess-Martinperiodinane、过钌酸四丙基铵(TPAP)等。优选的条件是在惰性溶剂如二氯甲烷中在室温下使用氯铬酸吡啶进行约2至48小时。
流程图III
在流程图III步骤1中，式5a的苯胺(其中R6如前面定义)与式8的酮化合得到式9的仲胺。本领域技术人员将知道有许多用还原剂如硼氢化钠、三乙酰氧硼氢化钠或氰基硼氢化钠实施还原胺化的方法。优选的条件是在惰性溶剂如二氯甲烷中使用氯化钛(IV)作为脱水剂。当起始原料耗尽时将产生的亚胺在甲醇中用氰基硼氢化钠处理。用氢氧化钠水溶液处理反应碱并用乙酸乙酯萃取得到式9的胺。
在流程图III步骤2中，将含在式9化合物中的酯官能团在溶剂如THF、乙醇或甲醇中用无机碱如氢氧化钾或氢氧化钠水解成式10的苯甲酸。用氢氧化钠作为碱在0至50℃反应约2至24小时时甲醇为优选的溶剂。产物可采用常规的提取技术用盐酸水溶液分离。
在流程图III步骤3中，将式10的苯甲酸酰化得到式12的酰胺。本领域技术人员将会知道有许多条件用于在羧酸和胺之间形成酰胺键。这类方法可见于下列教科书中：R.C.Larock，″Comprehensive OrganicTransformations″，VCH Publishers，1989，第972-976页。优选的条件是使用催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)、1，[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI)和有机碱如二异丙基乙胺或三乙胺在惰性溶剂如二氯甲烷中进行。活性酯用式11的胺在0℃至溶剂的回流温度下、但优选在室温下处理约4至48小时。
在流程图III步骤4中，采用上面流程图III步骤2中描述的条件将式12的甲酯水解成式13的酸。
制备和实施例
本文中提供的实施例用于说明本申请中要求保护的发明而不决不旨在限制所要求保护的发明的范围。制备和实施例的名称根据ChemDraw得到。
记录Varian 400MHz分光计上室温下的1H NMR谱。1H-NMR显示对于所描述的化合物得到了令人满意的NMR谱。在Agilent G1956BMSD单四极子仪器上运用电喷射离子化(ESI或ES)获得单同位素的质谱数据。在EM Reagent 0.25mm硅胶60-F板上进行分析薄层色谱。以紫外光显形。除非另有说明所有的实施例都为外消旋。
制备1
4′-叔丁基-联苯-4-基胺
步骤A.4′-叔丁基-4-硝基-联苯
向1-溴-4-硝基-苯(2.02g，10mmol)的甲苯(20mL)溶液中加入四三苯基膦钯(1.156g，1mmol)、4-叔丁基苯基硼酸(3.56g，20mmol)和氟化钾(1.74g，30mmol)。该反应用氮气驱气(purged)三次并在氮气氛中加热至回流。在回流温度下，将水(5ml)加入到反应中并让反应在氮气氛中回流。以HPLC监测反应，在反应完成时，使其冷却至室温。反应用乙酸乙酯稀释并加入，之后加入水。然后将该混合物通过
Figure S2006800429010D00232
垫过滤。将溶液倾入分液漏斗中，有机层用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩。所得残留物经快速柱层析法纯化，用乙酸乙酯/己烷洗脱得到1.8g的黄色固体产物。1H-NMR。
步骤B.4′-叔丁基-联苯-4-基胺
向4′-叔丁基-4-硝基-联苯(1.8g)的乙醇(20mL)溶液中加入碳(0.15g)载钯(10％)。将反应在氢气中充气到30psi并搅拌4h。然后将混合物通过
Figure S2006800429010D00233
垫过滤。将溶液浓缩并用0.1％TFA(在水和乙腈中)经反相HPLC纯化，得到1.6g的白色固体标题化合物。1H-NMR。
制备2
4′-三氟甲基-联苯-4-基胺
标题化合物通过制备1示例的一般方法用1-溴-4-硝基-苯和4′-三氟甲基苯基硼酸作为起始原料来制备。1H-NMR。
制备3
2，6-二甲基-4′-三氟甲基-联苯-4-基胺
步骤A.2-溴-1，3-二甲基-5-硝基-苯
将2′6′-二甲基-4-硝基苯酚(3g，18mmol)加入到二氯甲烷(50ml)中，之后加入吡啶(3.6ml)。将溶液冷却至0℃，并在20分钟内滴加三氟甲磺酸酐(3.6ml)。将反应在0℃下搅拌3小时。加入水(25ml)中止反应。有机层用1N HCl(2×25ml)、水(2×25ml)、1N NaOH(2×25ml)、水(2×25ml)萃取。有机部分用MgSO4干燥，并在减压下浓缩。将所得残留物溶于DMF(40ml)中，之后加入溴化锂(4.7g，540mmol)。将混合物在150℃下回流17h。将混合物在高真空下浓缩。将残留物与水(60ml)和乙酸乙酯(60ml)一起搅拌。将混合物过滤，将有机层分离并用MgSO4干燥。将有机层浓缩并经柱层析法纯化，用乙酸乙酯/己烷洗脱得到2.7g的黄色固体标题化合物。1H-NMR。
步骤B.2，6-二甲基-4-硝基-4′-三氟甲基-联苯
向2-溴-1，3-二甲基-5-硝基-苯(1g，4.3mmol)的甲苯(20mL)溶液中加入四三苯基膦钯(0.5g，0.43mmol)、4-三氟甲基苯基硼酸(1.65g，8.7mmol)和氟化钾(0.75g，12.9mmol)。该反应用氮气驱气三次并在氮气氛中加热至回流。在回流温度下，将水(5ml)加入到反应中并让反应在氮气氛中回流。以HPLC监测反应，在反应完成时，使其冷却至室温。反应用乙酸乙酯稀释并加入
Figure S2006800429010D00241
，之后加入水。然后将该混合物通过
Figure S2006800429010D00242
垫过滤。将溶液倾入分液漏斗中，有机层用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。所得残留物经快速柱层析法纯化，用乙酸乙酯/己烷洗脱得到0.68g的黄色固体标题化合物。1H-NMR。
步骤C.2，6-二甲基-4′-三氟甲基-联苯-4-基胺
向2，6-二甲基-4-硝基-4′-三氟甲基-联苯(0.68g)的乙醇(20mL)溶液中加入10％碳载钯(0.02g)。将反应于氢气中充气到30psi并搅拌4h。然后将混合物通过
Figure S2006800429010D00243
垫过滤。将溶液浓缩并用0.1％TFA(在水和乙腈中)经反相HPLC纯化，得到0.63g的标题化合物。1H-NMR。
制备4
4-(3-甲基-丁酰基)-苯甲酸甲酯
步骤A.外消旋4-(1-羟基-3-甲基-丁基)-苯甲酸甲酯
将4-甲酰基苯甲酸甲酯(32.4g，147mmol)在无水THF(800mL)中的溶液冷却至0℃，同时在氮气氛中搅拌。在10分钟内慢慢加入异丁基溴化镁(2.0M在乙醚中，110ml，221mmol)。将反应物在0℃下搅拌1h，然后使其温热至室温。通过HPLC监测反应，在醛耗尽时，用1N HCl小心地中止反应。将反应用乙醚和水稀释，之后萃取。有机层用水和盐水洗涤，之后以无水硫酸钠干燥。将溶液过滤并浓缩，然后采用快速柱层析法用乙酸乙酯/己烷进一步纯化，得到12g(37％)的产物。
步骤B.4-(3-甲基-丁酰基)-苯甲酸甲酯
向4-(1-羟基-3-甲基-丁基)-苯甲酸甲酯(19.72g，88.78mmol)的二氯甲烷(300mL)溶液中加入氯铬酸吡啶(22.03g，97.65mmol)。将混合物在室温下搅拌，溶液随着时间的过去而变黑。通过HPLC监测反应。当完全转化时，将反应产物用二氯甲烷稀释并向混合物中加入硅胶(2％重量)。混合物通过快速柱层析用二氯甲烷作为流动相纯化，生成15.79g(72％)的产物。MS(ES)：221.3(M++1).
制备5
4-己酰基-苯甲酸甲酯
标题化合物通过制备4中示例的一般方法以4-甲酰基苯甲酸甲酯和己基溴化镁作为起始原料来制备。1H-NMR。
实施例1
外消旋3-{4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸
Figure S2006800429010D00251
步骤A.4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酸甲酯向4-(3-甲基-丁酰基)-苯甲酸甲酯(制备4)(440mg，2mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中加入4′-叔丁基-联苯-4-基胺(制备1)(450mg，2mmol)和三乙胺(606mg，6mmol)。滴加在二氯甲烷(1M，1ml)中的氯化钛(IV)。通过TLC监测反应。一旦起始原料耗尽，用在MeOH(5mL)中的氰基硼氢化钠(377mg，6mmol)小心地中止反应并搅拌2h。将反应体系用5NNaOH调至pH＝13，用EtOAc萃取，干燥(Na2SO4)，并在减压下浓缩。所得残留物经硅胶色谱纯化，以二氯甲烷洗脱得到718mg的标题化合物。1H-NMR。
步骤B.4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酸
将4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酸甲酯(718mg)置入MeOH(10ml)中，之后加入5N NaOH(1mL)。将反应搅拌4小时，用EtOAc稀释，用HCl水溶液和盐水洗涤。有机部分经MgSO4干燥、浓缩得到510mg的标题化合物，将其直接用于下一步反应。
步骤C.3-{4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸甲酯
在室温下向4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酸(310mg，0.75mmol)在二氯甲烷(7mL)中的混合物中加入三乙胺(0.31mL，2.24mmol)、DMAP(5.0mg)、3-氨基-丙酸甲酯(156mg，1.12mmol)和EDCI(431mg，2.24mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，装在硅胶上，以己烷采用0-100％乙酸乙酯梯度洗脱，得到230mg白色固体的标题化合物。1H-NMR。
步骤D.3-{4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸
将3-{4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸甲酯(30mg)置入MeOH(10mL)中，之后加入5N NaOH(1mL)。将反应搅拌4小时，用EtOAc稀释，以HCl水溶液和盐水洗涤。有机部分经MgSO4干燥，浓缩，得到16mg的标题化合物。MS(ES)：487.3[M+H]+。
实施例2
外消旋3-{4-[3-甲基-1-(4′-三氟甲基-联苯-4-基氨基)-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸
标题化合物通过实施例1中示例的一般方法采用4-(3-甲基-丁酰基)-苯甲酸甲酯(制备4)和4′-三氟甲基-联苯-4-基胺(制备2)作为起始原料来制备。MS(ES)：499.2[M+H]+。
实施例3
外消旋3-{4-[1-(2，6-二甲基-4′-三氟甲基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸
Figure S2006800429010D00271
标题化合物通过实施例1中示例的一般方法采用4-(3-甲基-丁酰基)-苯甲酸甲酯(制备4)和2，6-二甲基-4′-三氟甲基-联苯-4-基胺(制备3)作为起始原料来制备。MS(ES)：527.2[M+H]+。
实施例4
外消旋3-{4-[1-(4′-氰基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸
Figure S2006800429010D00272
标题化合物通过实施例1中示例的一般方法采用4-(3-甲基-丁酰基)-苯甲酸甲酯(制备4)和4′-氨基-联苯基-4-腈作为起始原料来制备。MS(ES)：456.2[M+H]+。
实施例5
外消旋3-{4-[1-(4′-氰基-联苯-4-基氨基)-己基]-苯甲酰氨基}-丙酸
Figure S2006800429010D00273
标题化合物通过实施例1中示例的一般方法采用3-(4-己酰-苯甲酰氨基)-丙酸甲酯(制备5)和4′-氨基-联苯基-4-腈作为起始原料来制备。MS(ES)：470.2[M+H]+。
实施例6
外消旋3-{4-[1-(2-甲氧基-联苯-4-基氨基)-己基]-苯甲酰氨基}-丙酸
Figure S2006800429010D00281
标题化合物通过实施例1中示例的一般方法采用3-(4-己酰-苯甲酰氨基)-丙酸甲酯(制备5)和2-甲氧基-联苯-4-基胺作为起始原料来制备。MS(ES)：475.2[M+H]+。
实施例7
3-{4-[1-(4′-氰基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸，异构体1
Figure S2006800429010D00282
手性分离：将外消旋3-{4-[1-(4′-氰基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸甲酯(在实施例4的制备中获得)在Chiralcel OJ-H柱(4.6×150mm)上进行拆分。以甲醇(100)洗脱并浓缩该部分，得到纯的对映异构体酯(异构体1，＞99％ee)。将该酯的纯对映异构体以类似于实施例1步骤D中描述的方式水解得到标题化合物。MS(ES)：456.2[M+H]+。
以下对映体纯的化合物(实施例8-12)通过基本上类似于实施例7中描述的酯的手性分离法利用Chiralpak-H柱(4.6×150mm)或Chiralcel OJ-H柱(4.6×150mm)，之后按照实施例1步骤D中描述进行水解而获得。
实施例8
3-{4-[1-(4′-氰基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸，异构体2
Figure S2006800429010D00291
标题化合物通过将外消旋3-{4-[1-(4′-氰基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸甲酯(在实施例4的制备中获得)在ChiralcelOJ-H柱(4.6×150mm)上进行拆分、之后水解而获得。MS(ES)：456.2[M+H]+。
实施例9
3-{4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸，异构体1
和
实施例10
3-{4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸，异构体2
Figure S2006800429010D00292
标题化合物通过将外消旋3-{4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸甲酯(实施例1，步骤C)在Chiralcel OJ-H柱(4.6×150mm)上进行拆分、之后水解而获得。异构体1 MS(ES)：487.3[M+H]+。异构体2 MS(ES)：487.3[M+H]+。
实施例11
3-{4-[3-甲基-1-(4′-三氟甲基-联苯-4-基氨基)-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸，异构体1
和
实施例12
3-{4-[3-甲基-1-(4′-三氟甲基-联苯-4-基氨基)-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸，异构体2
标题化合物通过将外消旋3-{4-[3-甲基-1-(4′-三氟甲基-联苯-4-基氨基)-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸甲酯(在实施例2的制备中获得)在ChiralcelOJ-H柱(4.6×150mm)上进行拆分、之后水解而获得。异构体1 MS(ES)：499.2[M+H]+。Isomer 2 MS(ES)：499.2[M+H]+。
优选地该化合物以口服给药。优选地，药物制剂为单位剂型。在此类形式中，制备物被细分为适当大小的单位剂量，其中单位剂量含适量的活性组分，例如，获得所需目的的有效量。因此，本发明的另一实施方案为包含式I化合物或盐以及一种或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。这类药物组合物及其制备方法为本领域熟知。参见，例如，REMINGTON：THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(A.Gennaro等人编，第19版，Mack Publishing Co.，1995)。构成本发明有效量所要求的式(I)化合物或其可药用盐的具体剂量将取决于所要治疗的病症的具体情况。需要考虑的事项如剂量、给药途径和剂量给药的频率由主治医师优选决定。
可对本发明的组合物进行配制使得活性组分在施用于患者之后提供迅速、持续或延迟释放的释放。在缓释剂型中可对本发明的组合物进行配制以提供任何一种或多种成分或活性成分的速率控制释放，使得治疗效果即胰高血糖素受体拮抗剂活性及类似效果最佳化。缓释的适宜剂型包括含多层变化崩解速率或控制释放的聚合物基质(充满活性组分并以片剂的形式成形)的层片或含这种充满或包囊的多孔聚合物基质的胶囊。
优选地，药物制剂为单位剂型。在单位剂量的制备物中本发明活性组合物的量，根据具体的应用，通常可从约0.01毫克至约1000毫克、优选从约0.01至约950毫克、更优选从约0.01至约500毫克、典型地从约1至约250毫克进行变化或调节。所用的实际剂量可随患者的年龄、性别、体重以及所治疗病症的严重程度而变化。这种技术为本领域技术人员熟知。通常，含活性成分的人用口服剂型可每天给药1或2次。
越来越多的证据表明胰高血糖素在葡萄糖体内平衡中发挥重要作用。式I化合物作为胰高血糖素受体的拮抗剂或反激动剂是有效的，因而能抑制胰高血糖素受体的活性。更具体而言，这类化合物为胰高血糖素受体的选择性拮抗剂或反激动剂。作为选择性拮抗剂或反激动剂，式I化合物用于治疗对胰高血糖素受体失活敏感的疾病、紊乱或病症，包括但不限于糖尿病性及其它胰高血糖素相关性紊乱。可以预见胰高血糖素受体的选择性拮抗剂或反激动剂会降低血浆葡萄糖水平，因而能预防或治疗糖尿病性及其它胰高血糖素相关性代谢失调。
药理学方法
在下面的部分中描述用于评价本发明化合物功效的结合试验和功能试验。化合物与胰高血糖素受体的结合、以及抗hGlp1受体的选择性，可在竞争结合试验中采用克隆的人胰高血糖素受体进行测定。拮抗作用可以在该试验中在5nM胰高血糖素的存在下以化合物抑制所形成的cAMP量的能力进行测定。
胰高血糖素受体(hGlucR)结合试验
受体结合试验采用从293HEK膜中分离的克隆人胰高血糖素受体(Lok S，Kuijper JL，Jelinek LJ，Kramer JM，Whitmore TE，Sprecher CA，Mathewes S，Grant FJ，Biggs SH，Rosenberg GB等，Gene 140(2)，203-209(1994))。将hGlucR cDNA亚克隆至表达质粒phD中(完全γ-羧化的重组体人蛋白C(一种抗血栓因子)的反式激活表达，Grinnell，B.W.，Berg，D.T.，Walls，J.和Yan，S.B.Bio/Technology 5：1189-1192(1987))。将该质粒DNA转染至293 HEK细胞中并用200μg/mL潮霉素进行选择。
用悬浮培养的细胞制备粗胞质膜。在含25mM Tris HCL、pH 7.5、1mM MgCl2、DNAsel、20μ/mL和Roche完全抑制剂的低张缓冲液(不含EDTA)中在冰上使细胞溶解。用玻璃杜恩斯匀浆器以Teflon杵击25下将细胞悬液匀化。将匀浆物在1800xg下于4℃离心15分钟。收集上清液并将颗粒物重新悬浮于低张缓冲液中再匀化。将混合物在1800xg下离心15分钟。将第二份上清液与第一份上清液合并。将合并的上清液在1800xg下再次离心15分钟直至澄清。将澄清的上清液转入高速管中并在25000xg下于4℃离心30分钟。将膜颗粒物重新悬浮于匀化缓冲液中并作为冷冻的等分试样于-80℃的冷冻箱中贮存到需要时为止。
胰高血糖素通过I-125-乳过氧化物酶方法进行放射性碘标记并经反相HPLC以Perkin-Elmer/NEN(NEX207)纯化。比活度为2200Ci/mmol。由于在I-125胰高血糖素材料中丙醇的含量高，因而采用同质(homologous)竞争代替饱和结合进行Kd测定。Kd经计算为3nM，其用于计算所有试验化合物的Ki值。
结合试验采用闪烁亲近测定法(Amersham)进行，预先将WGA珠用1％不含脂肪酸的BSA(ICN)封闭。结合缓冲液含25mM Hepes、pH 7.4、2.5mM CaCl2、1mM MgCl2、0.1％不含脂肪酸的BSA(ICN)、0.003％吐温-20和不含EDTA的罗什完全抑制剂。将胰高血糖素以1mg/ml溶于0.01 N HCl，并立即以30μl等分试样于-80℃冷冻。将胰高血糖素等分试样稀释并在一小时之内在结合试验中使用。将试验化合物溶于DMSO中并以DMSO连续稀释。将10μl稀释的化合物或DMSO转移到Corning3632中，Corning 3632为装有90μl试验结合缓冲液或冷胰高血糖素(NSB最终浓度为1μM)的底部透明的不透明试验平皿。加入50μl的I-125胰高血糖素(在反应中终浓度为0.15nM)、50μl的膜(300μg/孔)和40μl的WGA珠(150mg/孔)、覆盖、并颠倒混合。在室温下14小时的稳定时间之后用MicroBeta对平皿读数。
结果以在化合物的存在下特异性I-125-胰高血糖素结合的百分率进行计算。化合物的绝对EC50剂量通过对I-125-胰高血糖素特异性结合的百分率相对所加入的化合物剂量进行非线性回归得出。运用Cheng-Prusoff公式将EC50剂量转化为Ki(Cheng Y.，Prusoff W.H.，Biochem.Pharmacol.22，3099-3108，1973)。
胰高血糖素样肽1(Glp1-R)受体结合试验
该受体结合试验采用从293HEK膜中分离的克隆人胰高血糖素样肽1受体(hGlp1-R)(Graziano MP，Hey PJ，Borkowski D，Chicchi GG，StraderCD，Biochem Biophys Res Commun.1993 Oct 15；196(1)：141-6)。将hGlp1-R cDNA亚克隆到表达质粒phD中(完全γ-羧化的重组人蛋白C(一种抗血栓因子)的反式激活表达，Grinnell，B.W.，Berg，D.T.，Walls，J.和Yan，S.B.Bio/Technology 5：1189-1192(1987))。将该质粒DNA转染到293 HEK细胞中并用200μg/mL潮霉素进行选择。
用悬浮培养的细胞制备粗胞质膜。将细胞在含25mM Tris HCl、pH7.5、1mM MgCl2、DNAse、20μ/mL和不含EDTA的罗什完全抑制剂低张的缓冲液中在冰上溶解。用玻璃杜恩斯匀浆器以Teflon杵击25下将细胞悬液匀化。将匀浆物在1800xg下于4℃离心15分钟。收集上清液并将颗粒物重新悬浮于低张缓冲液中再匀化。将混合物在1800xg下离心15分钟。将第二份上清液与第一份上清液合并。将合并的上清液在1800xg下再次离心15分钟直至澄清。将澄清的上清液转入高速管中并离心在25000xg下于4℃离心30分钟。将膜颗粒物重新悬浮于匀化缓冲液中并作为冷冻的等分试样在-80℃的冷冻箱中贮存直到使用。
将胰高血糖素样肽1(Glp-1)通过I-125-乳过氧化物酶方法进行放射性碘标记，并经反相HPLC以Perkin-Elmer/NEN(NEX308)纯化。比活度为2200Ci/mmol。由于在I-125 GIp-1材料中丙醇的含量高，因而采用同质(homologous)竞争代替饱和结合进行Kd测定。Kd经计算为3nM，其用于计算所有试验化合物的Ki值。
结合试验采用闪烁亲近测定法(Amersham)进行，预先将小麦胚凝集素(WGA)珠用1％不含脂肪酸的BSA(ICN)封闭。结合缓冲液含25mMHepes、pH 7.4、2.5mM CaCl2、1mM MgCl2、0.1％不含脂肪酸的BSA(ICN)、0.003％吐温-20和不含EDTA的罗什完全抑制剂。将胰高血糖素样肽1以1mg/mL溶于PBS中并立即以30μl等分试样于-80℃冷冻。将胰高血糖素样肽等分试样稀释并在一小时之内在结合试验中使用。将试验化合物溶于DMSO中并以DMSO连续稀释。将10μl稀释的化合物或DMSO转移到Corning 3632中，其为含90μl试验结合缓冲液或冷胰高血糖素样肽1(NSB的最终浓度为1μM)的底部透明的不透明试验平皿。加入50μl的I-125胰高血糖素样肽1(在反应中的终浓度为0.15nM)、50μl的膜(600μg/孔)、和40μl的WGA珠(150μg/孔)、覆盖，并颠倒混合。在室温下14小时的稳定时间之后用MicroBeta对平皿读数。
结果以在化合物的存在下特异性I-125-胰高血糖素样肽1结合的百分率进行计算。化合物的绝对EC50剂量通过对I-125-胰高血糖素样肽1的特异性结合百分率相对所加入的化合物剂量进行非线性回归得出。运用Cheng-Prusoff公式将EC50剂量转化为Ki(Cheng Y.，Prusoff W.H.，Biochem.Pharmacol.22，3099-3108，1973)。
胰高血糖素刺激的cAMP功能拮抗剂试验
该cAMP功能试验采用与上述hGlucR结合试验同样的分离的克隆人胰高血糖素受体细胞系。将细胞在化合物的存在下用EC80剂量的胰高血糖素混合物刺激。细胞内产生的cAMP采用放大荧光接近均质试验，α筛选(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay，AlphaScreen，源自Perkin Elmer(6760625R))进行测定。简单地说，细胞内的cAMP为结合生物素酰化的cAMP而竞争，从试剂盒到包被的抗cAMP抗体受体珠和strepavidin包衣的供体珠。当细胞内的cAMP水平增加时，出现受体珠生物素酰化的cAMP-供体珠复合体破坏，信号减弱。
将胰高血糖素以1mg/mL溶于0.01 N HCl中并立即以30μl等分试样于-80℃冷冻。将胰高血糖素等分试样稀释并在一小时之内在功能试验中使用。从低融合的(sub-confluent)组织培养平皿中用无酶的细胞解离溶液(Specialty Media 5-004-B)采集细胞。让细胞低速造粒并用试验缓冲液[25mM在HBSS中的Hepes-含Mg和Ca(GIBCO，14025-092)，含0.1％不含脂肪酸的BSA(ICN)]洗涤3次，然后稀释至终浓度为250000个细胞/mL。将化合物连续稀释到DMSO中，然后稀释到含3X浓度的胰高血糖素和3％DMSO的试验缓冲液中。胰高血糖素的EC80根据完整的胰高血糖素剂量反应进行预测定，其表示胰高血糖素产生80％的最大胰高血糖素反应的剂量。在试验缓冲液中制备从α筛选试剂盒得到的生物素酰化cAMP(最终1单位/孔)和3X IBMX(1500μM)的混合物。
在96孔、小容积的白色聚苯乙烯Costar平皿(3688)中进行功能试验。在每个孔中放入生物素酰化cAMP/IBMX混合物(0.02mL)，之后加入0.02mL的胰高血糖素剂量反应、cAMP标准曲线、或化合物/胰高血糖素混合物。反应由加入0.02mL的细胞(最终5000/孔)开始。在室温下60分钟之后，加入0.03mL的溶胞缓冲液[10mM Hepes，pH 7.4，1％NP40和0.01％不含脂肪酸的BSA(ICN)，每个孔含1个单位的得自α筛选试剂盒的受体和供体珠]终止反应。在绿光下加入溶胞缓冲液以防止检测珠漂白。将平皿以薄箔包好，在室温下平衡过夜。将平皿在Packard FusionTM-α测试仪上读数。
将α筛析单位转化为基于cAMP标准曲线每孔产生的cAMP的pmol数。将在化合物的存在下产生的cAMP的pmol数转化为单用EC80的剂量胰高血糖素的最大反应的百分率。对于每个实验，测定产生pmd的cAMP的50％反应所需要的胰高血糖素剂量。该EC50剂量运用修正的Cheng-Prusoff公式将结果标准化为Kb(Cheng Y.，Prusoff W.H.，Biochem.Pharmacol.22，3099-3108，1973)，其中Kb＝(EC50化合物)/[1+(pM所用的胰高血糖素/胰高血糖素剂量反应的EC50，pM)]。
本发明的化合物优选具有不大于50μM的Ki值，如由本文中公开的胰高血糖素受体(hGlucR)结合试验所测定。更优选本发明的化合物具有低于5μM、优选低于500nM、甚至更优选低于100nM的Ki值，如由本文中公开的胰高血糖素受体(hGlucR)结合试验所测定。通常，本发明的化合物显示出对胰高血糖素受体比GLP-1受体更高的亲和性，优选地对胰高血糖素受体具有比对GLP-1受体高的结合亲和性。本文中提供的所有实施例都具有低于1μM的Ki值。
对于所指的化合物结果如下。
表1：
Figure S2006800429010D00351
从以上描述可知，本领域技术人员可确定本发明的必要特征，在不背离其精神和范围的情况下，可对本发明进行各种变化和改变以使其适合各种应用和病症。因而，其它实施方案也在权利要求的范围之内。

Claims (9)

1.以结构式I表示的化合物或其可药用盐，
其中：
R1和R2独立地为-H；
R3为：
任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C8)-烷基；
R4和R5独立地为：
-H，-(C1-C7)烷氧基，或任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C6)烷基；
R6为：
Figure FSB00000733540700012
其中之字形标记表示与母体分子的连接点；
R7和R8独立地为：
-H或卤素；
R9独立地为：
-H、-CN或任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C6)烷基。
2.权利要求1的化合物或盐，其中
R1和R2为-H；
R3为：
任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C8)-烷基；
R4和R5独立地为：
-H或任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C6)烷基；
R6为： 
Figure FSB00000733540700021
其中之字形标记表示与母体分子的连接点；
R7和R8独立地为：
-H或卤素；且
R9独立地为：
-H或任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C6)烷基。
3.权利要求1的化合物或盐，其中
R1和R2为-H；
R3为：
任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C8)-烷基；
R4和R5独立地为：
-H或任选地被1-3个卤素取代的-CH3；
R6为：
其中之字形标记表示与母体分子的连接点；
R7和R8独立地为-H或卤素；且
R9独立地为任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C6)烷基。
4.权利要求1的化合物或盐，其中：
R1和R2为-H；R3为任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C8)-烷基；
R4和R5为任选地被1-3个卤素取代的-CH3且各自占据R6连接的苯环上相邻于R6的位置；
R6为：
Figure FSB00000733540700023
其中之字形标记表示与母体分子的连接点；
R7和R8为-H；且R9独立地为任选地被1-3个卤素取代的-(C1-C6)烷基。
5.权利要求1的化合物或盐，其中：
R1和R2独立地为氢；R3为甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，戊基，己基，庚基，辛基，3，3-二甲基丁基，2-甲基丙基，3-甲基-丁基，叔丁基，4-甲基戊基，2，2-二甲丙基，3-三氟丙基，或4-三氟丁基；R4和R5独立地为氢，甲基，乙基，叔丁基，戊基，异丙氧基，三氟甲基，甲氧基，4-甲基戊氧基，或戊氧基；R7和R8独立地为氢，氟，或氯；且R9为氢，甲基，叔丁基，三氟甲基或异丙基。
6.权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物选自式Z1至Z6：
Figure 2006800429010100001DEST_PATH_IMAGE002
Figure FSB00000733540700041
7.权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物选自：
外消旋3-{4-[1-(4′-叔丁基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸；
外消旋3-{4-[3-甲基-1-(4′-三氟甲基-联苯-4-基氨基)-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸；
外消旋3-{4-[1-(2，6-二甲基-4′-三氟甲基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸；
外消旋3-{4-[1-(4′-氰基-联苯-4-基氨基)-3-甲基-丁基]-苯甲酰氨基}-丙酸；
外消旋3-{4-[1-(4′-氰基-联苯-4-基氨基)-己基]-苯甲酰氨基}-丙酸；
外消旋3-{4-[1-(2-甲氧基-联苯-4-基氨基)-己基]-苯甲酰氨基}-丙酸；
Figure FSB00000733540700042
Figure FSB00000733540700051
8.药物组合物，其包含权利要求1-7中任一项的化合物或盐和可药用载体。
9.权利要求1-7中任一项的式I化合物或其盐，或权利要求8所述的药物组合物的用途，用于制备治疗II型糖尿病的药物。 
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