CN101302474B - 生物膜的制造方法及其培养容器 - Google Patents

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Abstract

本发明是关于一种生物膜的培养容器及其制造方法，由该培养容器及该制造方法所生产的生物膜可后制成面膜，且不需经过更动形状的工艺，因此能提高良率；所制成的面膜能成为补充水份并保养皮肤的有效面膜。

Description

生物膜的制造方法及其培养容器
技术领域
本发明是关于一种生物膜的制造方法及培养容器，尤其是指一种适用于利用微生物生产高分子聚合物形成生物膜的制造方法及培养容器。
背景技术
为符合人体肌肤保养中的各种需求，市面上有各式各样符合需求的面膜。其中常见者是以不织布为基材，进而添加各类保养品及药妆品成分。由于此种不织布面膜并非使用线编织而成的布状物，而是一种纤维原料且未经编织工艺的纺织品，因此具有透气性、吸湿性、耐久性、耐药品性、绝缘性等等性质。但由于过于透气的性质，使得其内所添加的各种活性物质双向暴露在外，而造成分解或挥发过快至使面膜功效未能全然发挥。
因此发展出通过微生物生成高分子聚合物，统称为生物膜，此种生物膜经处理后，适用于各种用途上，例如为食用的膳食纤维、保养皮肤的面膜等。此种生物膜具有极强的吸水性，可以加载大量营养功能物质，若将其后制成面膜，可提供皮肤表面营养成分，并因其具有大量自由官能基，而易将皮肤的污质吸除，所以具许多良好的功效。
为了避免使用者脸部的眼、鼻、口等器官皆被遮蔽而无法视、嗅以及饮食、说话等，不论是传统不织布或生物膜于制作面膜时，皆预设有预留孔，以满足使用者前述的需求。不过，该预留孔的制作，必须由二次刀膜进行形成裁切，造成施工繁琐，此外常会造成面膜或预留孔边缘破损，使得面膜成品良率降低，而造成成本上的浪费。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物膜的培养容器，由该培养容器所培养的生物膜，不需经过更动形状的工艺，且该容器可纵向堆栈，以节省生产时的横向空间，且纵向堆栈后的该容器仍具有良好的通气效果。
本发明的另一目的在于提供一种生物膜的制造方法，利用能自然生产出高分子聚合物如多醣体、聚麸胺酸等的微生物菌株，于一特定形状的容器内，形成特定形状的生物膜。并且，此生物膜可后制成面膜，而不须经任何形状更动的工艺，能提高良率，而所制成的面膜能成为保养皮肤、补充皮肤水份的有效面膜。
为实现上述目的，本发明提供的生物膜的培养容器，包含
一底板；
一周壁，该周壁位于该底板上，环绕该底板的周缘，并与该底板形成一容置空间；以及
至少一突出物，位于并突出于该底板的表面。
所述的培养容器，其中，该周壁的上部具有一凹阶缘，而该周壁的下部具有一凸阶缘。
所述的培养容器，其中，该周壁具有复数个槽孔，该些槽孔位于该周壁的上表面，且该周壁包含有复数个凸栓，该些凸栓对应于该些槽孔，并位于该周壁的下表面。
所述的培养容器，其中，该些槽孔的深度小于或等于该些凸栓的高度。
所述的培养容器，其中，该些凸栓上部的横切面积大于或等于该些槽孔的横切面积。
所述的培养容器，其中，该周壁侧边上部或下部具有复数个凹口。
所述的培养容器，其中，该突出物为柱状、锥状、或片状。
所述的培养容器，其中，该周壁所围成的形状为圆形、椭圆形、多边形、不规则形、或蛋形。
所述的培养容器，其中，该容器通过该些凸栓对应于该些槽孔堆栈。
本发明提供的生物膜的制造方法，包含以下步骤：
(a)将一菌株置于一第一培养基中，震荡培养形成一种菌；
(b)将该种菌置于一培养容器中，该培养容器内含一第二培养基，且该培养容器包含一底板、一周壁、以及至少一突出物，其中该周壁位于该底板上，环绕该底板的周缘，并与该底板形成一容置空间，且该至少一突出物位于并突出于该底板的表面；以及
(c)形成一具预设厚度的生物膜。
所述的制造方法，其中，该菌株为醋酸杆菌属(Acetobacter spp.)、葡糖醋酸杆菌属(Gluconacetobacter spp.)、黄单胞菌属(Xanthomonasspp.)、或芽孢杆菌属(Bacillus spp.)。
所述的制造方法，其中，该醋酸杆菌属的菌株为A.xylinum。
所述的制造方法，其中，该葡糖醋酸杆菌属的菌株为G.xylinus subsp.Xylinus、或G.Hansenii。
所述的制造方法，其中，该黄单胞菌属的菌株为X.campeastris。
所述的制造方法，其中，该芽孢杆菌属的菌株为B.subtilis var Natto。
所述的制造方法，其中，该第一培养基及该第二培养基包含碳水化合物、含氮化合物、矿物质、及辅助成长因子。
所述的制造方法，其中，该碳水化合物的含量为1％～30％，该含氮化合物的含量为0.1％～6％，该矿物质的含量为0.05％～3％，以及该辅助成长因子的含量为0.05％～2％。
所述的制造方法，其中，该碳水化合物至少一种选自单醣、双醣或多醣、具有羧基的化合物、及其混合物所组成的群组。
所述的制造方法，其中，该含氮化合物至少一种选自酵母萃取物(yeastextract)、蛋白胴(peptone)、黄豆粉、明胶(gelatin)、及其混合物所组成的群组。
所述的制造方法，其中，该矿物质至少一种选自氯盐、铵盐、硫盐、钾盐、磷酸盐、镁盐、钠盐、及其混合物所组成的群组。
所述的制造方法，其中，该辅助成长因子至少一种选自维生素、烟碱酸、柠檬酸、及其混合物所组成的群组。
所述的制造方法，其中，于该步骤(a)之后还包含一步骤(a1)，将该种菌放大培养以得一量产规模的种菌。
换言之，本发明提供的生物膜的培养容器，包含一底板；一周壁，该周壁系位于该底板的上，环绕该底板的周缘，并与该底板形成一容置空间；以及至少一突出物，位于并突出于该底板的表面。
在上述所提供的培养容器中，可将该周壁的上部形成有一凹阶缘，而于该周壁的下部形成有一凸阶缘。并且于该周壁的上表面可具有复数个槽孔，另应于该些槽孔的该周壁的下表面可包含有复数个凸栓。若将该些培养容器纵向堆栈，可节省横向陪养空间，且通过该些凸栓对应于该些槽孔，或者通过该凹阶缘与该凸阶缘上下对应嵌合，还可该培养容器纵向堆栈的结构，使其不容易松脱倒垮。其中该些槽孔的深度可小于或等于该些凸栓的高度，并且该些凸栓上部的横切面积可大于或等于该些槽孔的横切面积。
另外，该周壁侧边上部或下部可具有复数个凹口，且该些凹口不限定其形状。该周壁所围成的形状不受限制，可为圆形、椭圆形、多边形、不规则形、或蛋形。该突出物也不受限制，可为柱状、锥状、或片状，并且该突出物于该容器中的位置不受限制，可对应人的眼、鼻、及口等器官。该底板可为平面或非平面，而该非平面系指一具有弧度的表面。
上述的培养容器中，该至少一突出物的成型方法可以由底部的外侧面向内侧凹陷，令内侧面形成相对浮凸，此可有效节省材质的运用；至于所使用的材质不受限定，可如PVC(聚氯乙烯)、PP(聚丙烯)或PE(聚乙烯)等透明或非透明的有机材质，或者使用抗氧化的金属制成。另外该培养皿的表面，可选择性涂布一层PEP(防锈膜)。
本发明另提供一种生物膜的制造方法，包含以下步骤：
(a)将一菌株置于一第一培养基中，震荡培养形成一种菌；(b)将该种菌置于一培养容器中，该培养容器内含一第二培养基，且该培养容器包含一底板、一周壁、以及至少一突出物，其中该周壁位于该底板的上，环绕该底板的周缘，并与该底板形成一容置空间，且该至少一突出物位于并突出于该底板的表面；以及(c)形成一具预设厚度的生物膜。
在本发明所提供的制造方法中，该菌株较佳为醋酸杆菌属(Acetobacterspp.)、葡糖醋酸杆菌属(Gluconacetobacter spp.)、黄单胞菌属(Xanthomonasspp.)、或芽孢杆菌属(Bacillus spp.)。其中该醋酸杆菌属的菌株更佳为A.xylinum；该葡糖醋酸杆菌属的菌株更佳选自G.xylinus subsp.XylinusATTC10821、G.xylinus subsp.Xylinus ATTC700187及G.Hansenii ATCC23769所组成的群组；该黄单胞菌属的菌株更佳为X.campeastris；以及该芽孢杆菌属的菌株更佳为B.subtilis var Natto。
在本发明所提供的制造方法中，该第一培养基及该第二培养基包含碳水化合物、含氮化合物、矿物质、及辅助成长因子。其中该碳水化合物的含量较佳为1％～30％，该含氮化合物的含量较佳为0.1％～6％，该矿物质的含量较佳为0.05％～3％，以及该辅助成长因子的含量较佳为0.05％～2％。该碳水化合物不受限制，较佳是至少一种选自单醣、双醣或多醣、具有羧基的化合物、及其混合物所组成的群组。该含氮化合物不受限制，较佳是至少一种选自酵母萃取物(yeast extract)、蛋白胴(peptone)、黄豆粉、明胶(gelatin)、及其混合物所组成的群组。该矿物质不受限制，较佳是至少一种选自氯盐、铵盐、硫盐、钾盐、磷酸盐、镁盐、钠盐、及其混合物所组成的群组。该辅助成长因子不受限制，较佳是至少一种选自维生素、烟碱酸、柠檬酸、及其混合物所组成的群组。
本发明所提供的制造方法，为了得一量产规模的种菌，可将该菌株及该种菌至于25℃～37℃培养，并于步骤(a)之后还包含一步骤(a1)，先将该种菌放大培养，如此该种菌放大培养后，便可得大量种菌以利后续生物膜的量产制造。
利用本发明的制造方法所制出的生物膜，可利用后续工艺，将该生物膜后工艺一面膜、眼膜、胸膜或唇膜，作为有效提供皮肤水份，达到保养功效的一种生物膜。并且其后续工艺，不需对其形状作任何加工，而可防止因形状加工的过程所造成的破损及良率下降。
附图说明
图1a为本发明实施例生物膜培养容器的示意图。
图1b为本发明实施例培养生物膜的示意图。
图2为本发明实施例培养生物膜的示意图。
图3为本发明实施例培养生物膜的示意图。
图4为本发明实施例培养生物膜的示意图。
图5为本发明实施例所生成的生物膜示意图。
图6为本发明实施例1～30的生物性纤维素生产量比较图。
图7为本发明实施例31～60的生物性纤维素生产量比较图。
具体实施方式
以下实施例中，本发明的生物膜制造方法所使用的菌株为醋酸杆菌属(Acetobacter spp.)、葡糖醋酸杆菌属(Gluconacetobacter spp.)、黄单胞菌属(Xanthomonas spp.)、或芽孢杆菌属(Bacillus spp.)。在醋酸杆菌属中，主要使用A.xylinum作为菌株；在葡糖醋酸杆菌属中，主要使用G.xylinus subsp.Xylinus ATTC10821、G.xylinus subsp.Xylinus ATTC700187及G.Hansenii ATCC23769作为菌株；在黄单胞菌属中，主要使用X.campeastris作为菌株；以及在芽孢杆菌属中，主要使用B.subtilis varNatto作为菌株。上述菌株中，A.xylinum与G.xylinus虽为不同菌名，但实际为同一种菌。
在本发明的生物膜制造方法中，培养基主要包含碳水化合物、含氮化合物、矿物质、及辅助成长因子。以下实施例中，碳水化合物的含量范围为1％～30％，该含氮化合物的含量范围为0.1％～6％，该矿物质的含量范围为0.05％～3％，以及该辅助成长因子的含量范围为0.05％～2％。并且，实施例中所使用的碳水化合物种类通常为单醣、双醣或多醣、具有羧基的化合物、或上述碳水化合物的混合物；含氮化合物种类通常为酵母萃取物(yeastextract)、蛋白胴(peptone)、黄豆粉、明胶(gelatin)、或上述含氮化合物的混合物；矿物质种类通常为氯盐、铵盐、硫盐、钾盐、磷酸盐、镁盐、钠盐、或上述盐类的混合物；辅助成长因子通常维生素、烟碱酸、柠檬酸、或上述辅助成长因子的混合物。
本发明的生物膜制造方法中所使用的容器形状，一般端看所需形状，若需长方形，则使用长方体的容器，若需圆形，则使用圆柱体的容器。以下实施例中，本发明生物膜生长的容器，使用如图1a至图4，以利得到所需的形状，然此并非代表本发明仅能使用图1a至图4的容器，其材质可以由PVC(聚氯乙烯)、PP(聚丙烯)或PE(聚乙烯)等所制成，或者由抗氧化的金属制成。可选择性培养容器的表面涂布PEP(防锈膜)，该PEP(防锈膜)为高分子防锈蚀膜，可以包覆阻隔方式防止腐蚀性气体穿透，在腐蚀性气体穿透防锈膜时将中和，以及将被包覆在内潜藏的腐蚀性气体反应将其中和，使包覆物内的空气不再具有腐蚀性。
实施例1～30
将斜面培养的A.xylinum，取约1～5个白金耳量接种至已灭菌的液体培养基配方(如下表1)，于37℃振荡培养生长1～3天，以2～30倍培养液进行再次放大培养，此放大培养可以在发酵槽或振荡培养箱进行，生长1～2天后即可为量产规模的种菌。
表1
 
成份 含量(％)
葡萄糖 2
蛋白胴(peptone) 1
酵母萃取物 1
柠檬酸 0.1
磷酸氢钠 0.3
本实施例所使用的培养容器如图1a所示，该培养容器包含一底板11；一周壁12，该周壁12位于该底板11上，环绕该底板11的周缘，并与该底板11形成一容置空间；以及至少一突出物13，位于并突出于该底板11的表面。上述突出物13包含多种不同形状，例如第一突出物132形成椭圆柱状、第二突出物133为锥状、以及第三突出物133为叶形柱状等等，可依据所欲形成的生物膜形状进行设计，而置放于不同的相对位置。
再如图1b所示，将种菌约1％～50％量与表2的培养液相混后置入上述培养容器的容置空间中，依据该模型容器的形状，生长成一定形状的生物膜20，并于定温下静置培养至生物膜20生成至适当的厚度即完成生产阶段。而后将该生物膜20取出，如图5所示，该生物膜20于图1a所示的突出物13的相对位置，便形成有多数开口232、233、及234。
表2
Figure S07198296520070518D000091
表2-续
经不同培养液组成的测试后，其结果如图6，依据生物膜生成的重量来看，培养液中若含1％酵母萃取物，则添加0.1％碳酸钙及2.5％葡萄糖，具有最佳生物膜产量。
实施例31～60
将斜面培养的A.xylinum，取约1～5个白金耳量，接种至已灭菌的液体培养基配方(如同实施例1～30的表1)，于37℃振荡培养生长1～3天，以2～30倍培养液进行再次放大培养，此放大培养可以在发酵槽或振荡培养箱进行，生长1～2天后即可为量产规模的种菌。
本实施例所使用的培养容器如图2所示，该培养容器大致上同于于图1a所示的容器，唯一不同点在于该培养容器于该周壁12上表面另外具有复数槽孔123，且该周壁12下表面具有复数个凸栓124，该些凸栓124对应于该些槽孔123。
将种菌约1％～50％量与表2的培养液相混后置入上述培养容器的容置空间中，且该培养容器可如图2所示，可将该培养容器纵向堆栈，并且通过该些凸栓124与该些槽孔123对更加稳度纵向迭起的结构，防此相互堆栈的培养容器松脱垮倒，因此节省生产时的横向空间。依据该模型容器的形状，生长成一定形状的生物膜20，并于定温下静置培养至生物膜20生成至适当的厚度即完成生产阶段。而后将该生物膜20取出，可得如图5所示形状的生物膜20。
表3
Figure S07198296520070518D000101
表3-续
Figure S07198296520070518D000111
经不同培养液组成的测试后，其结果如图7，依据生物膜生成的重量来看，培养液中若含0.5％酵母萃取物，则添加2％碳酸钙及5％葡萄糖，具有最佳生物膜产量。
实施例61～63
将斜面培养的G.xylinus subsp.Xylinus ATTC10821、G.xylinus subsp.Xylinus ATTC700187、以及G.Hansenii ATCC23769，分别取约1～5个白金耳量，接种至已灭菌的液体培养基配方(如同实施例1～30的表1)，于30℃振荡培养生长1～2天，以2～30倍培养液进行再次放大培养，此放大培养可以在发酵槽或振荡培养箱进行，生长1～2天后即可为量产规模的种菌。
本实施例所使用的培养容器如图3所示，该培养容器大致上同于于图2所示的容器，但不同点在于该周壁12内侧的上部具有凹阶缘121及下部具有凸阶缘122，并且该些凸栓124上部的直径系大于该些槽孔123的直径。
将种菌约1％～50％量与表2的培养液相混后置入上述培养容器的容置空间中，通过该凹阶缘121及该凸阶缘122对应嵌合，可纵向层迭该培养容器。虽图3仅示出该凹阶缘121及该凸阶缘122仅形成于该周壁12的内侧，然该凹阶缘121及该凸阶缘122也可形成于该周壁12的外侧。
另外，纵向层迭该培养容器也可如图3所示，通过该些凸栓124与该些槽孔123对应纵向迭起，且可发现两纵向相邻的培养容器间，具有一定高度隔开，因此空气可通过此高度流通，所以可以增加通气以利生物膜生长。依据该模型容器的形状，生长成一定形状的生物膜20，并于定温下静置培养至生物膜20生成至适当的厚度即完成生产阶段。而后将该生物膜20取出，可得如图5所示形状的生物膜20。
表4
 
成份 含量(％)
葡萄糖 2
蛋白胴(peptone) 1
酵母萃取物 1
碳酸钙 0.5
硫酸镁 0.1
实施例64
将斜面培养的X.campeastris，取约1～5个白金耳量接种，至已灭菌的液体培养基配方(如下表5)，于30℃振荡培养生长1～2天，以2～30倍培养液进行再次放大培养，此放大培养可以在发酵槽或振荡培养箱进行，生长1～2天后即可为量产规模的种菌。
表5
 
成份 含量(％)
葡萄糖 4
果糖 2
蛋白胴(peptone) 2
酵母萃取物 2
柠檬酸 0.2
磷酸氢钾 0.2
本实施例所使用的培养容器如图4所示，该培养容器大致上同于于图2所示的容器，唯一不同点在于该培养容器于该周壁12侧边具有凹口125，该些凹口125不限定如图4所示位于该周壁12的四边，可为单边、对边、或三边。
将种菌约1％～50％量与表2的培养液相混后置入上述培养容器的容置空间中，且该培养容器可如图4所示，通过该些凸栓124与该些槽孔123对应纵向迭起，并且由该些凹口125使空气可流通以增加通气，有利于生物膜生长。依据该模型容器的形状，生长成一定形状的生物膜20，并于定温下静置培养至生物膜20生成至适当的厚度即完成生产阶段。而后将该生物膜20取出，可得如图5所示形状的生物膜20。
实施例65
将斜面培养的B.subtilis var Natto，取约1～5个白金耳量，接种至已灭菌的液体培养基配方(如同实施例64的表5)，于37℃振荡培养生长1～3天，以2～30倍培养液进行再次放大培养，此放大培养可以在发酵槽或振荡培养箱进行，生长1～2天后即可为量产规模的种菌。
本实施例可使用上述图1～4所示的容器。将种菌约1％～50％量与表2的培养液相混后置入上述培养容器的容置空间中。依据该模型容器的形状，生长成一定形状的生物膜20，并于定温下静置培养至生物膜20生成至适当的厚度即完成生产阶段。而后将该生物膜20取出，可得如图5所示形状的生物膜20。
将上述实施例1～65所制出的生物膜，经过碱性溶液预处理，而后再利用酸性溶液处理，之后经本领域习知处理生物膜的蒸煮及漂洗等过程后，再经过杀菌、添加有效成分、包装、及标示等面膜工艺后，便形成具有效成分的生物性面膜。因此本发明所提供的生物膜，其形成生物性面膜的过程中，不需要经过额外改变其形状的工艺，例如压制成形、或裁切等过程，待生成后便具有所需形状，因此可避免经过上述成形过程所造成的边缘破损，使得面膜成品良率可大大提高，因而可以节省成本，防止造成浪费。
上述实施例仅为了方便说明而举例而已，本发明所主张的权利范围自应以权利要求范围所述为准，而非仅限于上述实施例。熟习此技术的人士可由本说明书所揭示的内容轻易地了解本发明的其它优点与功效。本发明亦可由其它不同的具体实施例加以施行或应用，本说明书中的各项细节亦可基于不同观点与应用，在不悖离本发明的精神下进行各种修饰与变更。

Claims (20)

1.一种面膜培养容器，包含
一底板；
一周壁，该周壁位于该底板上，环绕且连接该底板的周缘，并与该底板形成一容置空间，其中该周壁具有复数个槽孔及复数个凸栓，该些槽孔位于该周壁的上表面，该些凸栓对应于该些槽孔且位于该周壁的下表面；以及
至少一突出物，位于并突出于该底板的表面，该突出物为柱状、锥状、或片状，且对应眼、鼻及口器官；
其中两培养容器可通过其中一培养容器的凸栓插入另一培养容器的槽孔而对应堆栈，且两培养容器之间具有一定距离而有利于各培养容器内的通气。
2.如权利要求1所述的培养容器，其中，该周壁的上部具有一凹阶缘，而该周壁的下部具有一凸阶缘。
3.如权利要求1所述的培养容器，其中，该些槽孔的深度小于或等于该些凸栓的高度。
4.如权利要求1所述的培养容器，其中，该些凸栓上部的横切面积大于或等于该些槽孔的横切面积。
5.如权利要求1所述的培养容器，其中，该周壁侧边上部或下部具有复数个凹口。
6.如权利要求1所述的培养容器，其中，该周壁所围成的形状为圆形、椭圆形、多边形、或不规则形。
7.一种面膜的制造方法，包含以下步骤：
(a)将一菌株置于一第一培养基中，震荡培养形成一种菌；
(b)将该种菌置于一培养容器中，该培养容器内含一第二培养基，且该培养容器包含一底板、一周壁、以及至少一突出物，其中该周壁位于该底板上，环绕且连接该底板的周缘，并与该底板形成一容置空间，且该至少一突出物位于并突出于该底板的表面，该突出物为柱状、锥状、或片状，且对应眼、鼻及口器官，其中该周壁具有复数个槽孔及复数个凸栓，该些槽孔位于该周壁的上表面，该些凸栓对应于该些槽孔且位于该周壁的下表面，且两培养容器可通过其中一培养容器的凸栓插入另一培养容器的槽孔而对应堆栈，以及两培养容器之间具有一定距离而有利于各培养容器内的通气；以及
(c)形成一具预设厚度的面膜。
8.如权利要求7所述的制造方法，其中，该菌株为醋酸杆菌属(Acetobacter spp.)、葡糖醋酸杆菌属(Gluconacetobacter spp.)、黄单胞菌属(Xanthomonas spp.)或芽孢杆菌属(Bacillus spp.)。
9.如权利要求8所述的制造方法，其中，该醋酸杆菌属的菌株为A.xylinum。
10.如权利要求8所述的制造方法，其中，该葡糖醋酸杆菌属的菌株为G.xylinus subsp.Xylinus或G.Hansenii。
11.如权利要求8所述的制造方法，其中，该黄单胞菌属的菌株为X.campestris s。
12.如权利要求8所述的制造方法，其中，该芽孢杆菌属的菌株为B.subtilis var Natto。
13.如权利要求7所述的制造方法，其中，该第一培养基及该第二培养基包含碳水化合物、含氮化合物、矿物质及辅助成长因子。
14.如权利要求13所述的制造方法，其中，该碳水化合物的含量为1％～30％，该含氮化合物的含量为0.1％～6％，该矿物质的含量为0.05％～3％，以及该辅助成长因子的含量为0.05％～2％。
15.如权利要求13所述的制造方法，其中，该碳水化合物至少一种选自单糖、双糖、多糖或所组成的群组。
16.如权利要求13所述的制造方法，其中，该碳水化合物是具有羧基的化合物。
17.如权利要求13所述的制造方法，其中，该含氮化合物至少一种选自酵母萃取物(yeast extract)、蛋白酮(peptone)、黄豆粉、明胶(gelatin)、及其混合物所组成的群组。
18.如权利要求13所述的制造方法，其中，该矿物质至少一种选自氯盐、铵盐、硫盐、钾盐、磷酸盐、镁盐、钠盐、及其混合物所组成的群组。
19.如权利要求13所述的制造方法，其中，该辅助成长因子至少一种选自维生素、烟碱酸、柠檬酸、及其混合物所组成的群组。
20.如权利要求7所述的制造方法，其中，于该步骤(a)之后包含一步骤(a1)，将该种菌放大培养以得一量产规模的种菌。
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