CN101296706A

CN101296706A - Il-23和il-17拮抗剂治疗自身免疫性眼部炎性疾病的用途

Info

Publication number: CN101296706A
Application number: CNA2006800403078A
Authority: CN
Inventors: D·J·库艾; R·A·凯斯提兰; V·T·蔡; R·卡斯皮; P·席维; D·路格
Original assignee: United States, Represented by Secretary Department of Health; Schering Corp
Current assignee: The United States of America, Represented by the Secretary, Department of Health; Merck Sharp and Dohme Corp
Priority date: 2005-09-01
Filing date: 2006-08-30
Publication date: 2008-10-29
Anticipated expiration: 2026-08-30
Also published as: BRPI0615297A2; NZ566424A; AU2006284841A1; PT1933869E; JP2009507023A; US20140248279A1; HK1119578A1; SI1933869T1; US20110142831A1; TW200800259A; NO20081574L; RS51142B; ES2333260T3; US20130323251A1; EP2116258A1; JP5462838B2; US20100111950A1; WO2007027761A2; AU2006284841B2; CN101296706B

Abstract

本文公开用于治疗自身免疫性眼部炎性疾病的新方法和药品，所述方法包括给予拮抗IL－17和IL－23活性之一或两者的药物。

Description

IL-23和IL-17拮抗剂治疗自身免疫性眼部炎性疾病的用途

关于联邦政府资助的研究与开发的陈述

本发明在合作研究与开发协议(CRADA)号M-01969-04下部分由政府支持和修正，在Schering-Plough Biopharma与国立眼睛研究院、国立健康研究院之间执行。美国联邦政府对本发明具有一定的权利。

发明领域

[0001]本发明一般涉及调节眼睛免疫应答。更具体地讲，本发明涉及使用白介素-23(IL-23)和白介素-17(IL-17)拮抗剂治疗自身免疫性眼部炎性疾病的用途。

发明背景

[0002]眼部炎性疾病(OID)为包括其中炎症侵袭眼睛或周围组织的多种疾病和病症的通用术语。典型地，基于眼部炎症的位置给出OID的诊断名称。例如，葡萄膜炎为葡萄膜的炎症，巩膜炎为巩膜的炎症，睫状体平坦部炎(pars planitis)为睫状体扁平部(pars plana)的炎症等。OIDs引起疼痛、刺激和流泪并可导致视觉功能丧失。例如，葡萄膜炎为发达国家第三位主要致盲原因。OIDs可由感染、恶性病变、暴露于毒素、手术或损伤应答及自身免疫紊乱引起。

[0003]存在许多种自身免疫疾病，其中眼或眼的多个部分变为免疫介导的炎性发作目标的部位。患有自身免疫介导的OID(AOID)的患者经常呈现对视网膜抗原，诸如视网膜阻抑蛋白(视网膜可溶性抗原，S-Ag)、感光器间受体类维生素A(retinoid)结合蛋白(IRB)和与黑色素及其代谢相关的抗原，包括Gp100、MART1、TRP1和TRP2的细胞应答和体液应答(Pennesi，G.等.(2003)J.Clin.Invest.111：1171-1180；Gocho，K.等.(2001)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.42：2004-2009；Sugita S.等.，(1996)Int.Immmunol.8：799-803；Yamake，K.等.(2000)J.Immunol.165：7323-7329)。然而，在AOID的许多病例中，靶抗原是未知的。

[0004]通常，OID是全身性自身免疫疾病的一种表现形式，并且眼睛是易受侵袭的全身多个器官之一。这样的全身性自身免疫疾病的实例包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、结节性多动脉炎、复发性多软骨炎、多发性肉芽肿病(Wegener′s)、硬皮病、贝赛特氏(Behcet′s)病、莱特尔氏(Reiter′s)病、炎性肠病(溃疡性结肠炎和克罗恩氏(Crohn′s)病)及强直性脊柱炎。然而，眼睛可能是在自身免疫性疾病，诸如眼瘢痕性类天疱疮、莫尔恩氏(Mooren′s)角膜溃疡和各种形式葡萄膜炎中受到侵袭的特异性和仅有的靶标。

[0005]已经用多种类型化合物，包括甾体和非甾体抗炎药，诸如地塞米松、氟米龙、泼尼松龙、吲哚美辛、阿司匹林、氟比洛芬和双氯芬酸治疗AOIDs，诸如葡萄膜炎。然而，许多葡萄膜炎病例对这些药物不敏感或变得难以治疗(参见，如，Kulkarni，P.(2001)dournal ofOcular Pharmacology And Therapeutics 17：181-187)。而且，这些药物与严重副作用，诸如白内障、青光眼、延迟的伤口愈合、前列腺素的产生发生变化、角膜并发症、眼压增加、重复感染和对感染免疫力减小有关(参见，例如，同上，在181页；Guidera，A.C.，等.(2001)Ophthalmology 108：936-944；Olsen，E.G.& Davanger M.(1984)ActaOphtalmol.62：893-899)。

[0006]由于目前的AOID疗法未达最佳疗效或具有不合需要的副作用，因此需要新的治疗方案。有人建议调节与AOID发病有关的免疫调节机制在临床上可能是有益的(Caspi，R.R.(2002)Int RevImmunol 21：197-208)。

[0007]已经采用是人自身免疫性葡萄膜炎的动物模型的实验性自身免疫葡萄膜炎(EAU)对这些致病机制进行研究。在实验动物，诸如小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴子体内经用对葡萄膜炎患者显示反应性的视网膜抗原(例如阻抑蛋白、IRBP、视紫红质/视蛋白、光导蛋白、恢复蛋白)免疫接种或经对这些抗原特异性的T细胞输注诱导EAU。采用EAU模型的研究对于该疾病的诱导和进展机制提供明显矛盾的证据。一些实验结果显示，EAU的主要致病途径是由于白介素-12(IL-12)促进产生Th1效应器细胞的IFN-γ的生成作用(Caspi，R.R.(2002)Int Rev Immunol 21：197-208；Tarrant，T.K.等，(1998)J.Immunol.161：122-127；Caspi，R.R.(1998)Clin Immunol Immunopathol 88：4-13；Xu，H.等.(1997)Cell Immunol 178：69-78。然而，其它实验显示IFN-γ缺乏的剔除小鼠易患EAU，EAU由内源性IFN-γ抵消而加剧，并且升高的IFN-γ水平预防野生型小鼠EAU。(Caspi，R.R.等.(1994)J.Immunol.152：890-899；Jones等，J.Immunol.158：5997-6005；Tarrant，T.K.，等.(1999)J.Exp.Med.189：219-230。

[0008]因此，在本发明之前，在开发用于预防或治疗自身免疫性眼部炎性疾病的疗法中不清楚应该针对哪一种免疫途径。

发明概述

[0009]本发明基于以下发现：(1)阻断白介素-23(IL-23)或白介素-17(IL-17)活性防止诱导EAU；(2)诱导后，抵消IL-17活性抑制或逆转EAU的进展，但是抵消IL-23活性很少有作用甚至没有作用；和(3)IL-17活性对诱导EAU是不必要的。本发明在用于治疗或预防自身免疫性眼部炎性疾病的方法和组合物中使用EL-23和/或IL-17拮抗剂。这些拮抗剂或者拮抗靶细胞因子本身或者靶细胞因子的功能性受体。

[0010]IL-23为由两种亚单位组成的杂二聚体细胞因子：只针对IL-23的p19和与IL-12共有的p40。IL-23通过结合于由IL-23R和IL-12Rβ1(IL12RB1)组成与IL-12受体共用的杂二聚体受体介导信号传导。新近的论文报导了IL-23促进以产生IL-17、IL-17F、TNF、IL-6及其它因子为特征为产生的T细胞群，并称这些细胞为“Th₁₇细胞”(Langrish等.(2005)J.Exp.Med.201：233-240))。

[0011]最初被称为细胞毒性T-淋巴细胞相关抗原8(CTLA8)的IL-17为结合于IL-17RA(也称为IL17R)和IL-17C的同型二聚体。确信IL-17的功能性受体为包含IL-17RA和IL-17RC中的一种或两种(例如，IL-17RA同型二聚体、L-17RC同型二聚体或IL-17RA/IL-17RC杂二聚体)和可能的话第三种还不知道的蛋白的多聚受体复合物(Toy，D.等，(2006)J.of Immunol.177(1)：36-39，未公开的数据)。

[0012]在一方面，本发明提供了治疗患有自身免疫性眼部炎性疾病的患者的方法，该方法包括给予所述患者IL-17拮抗剂。AOID的存在不需要直接被诊断，但是可通过患者具有属于被公认的自身免疫病因学和/或呈现一个或多个自身免疫应答特征的眼部炎症进行推断。一种特别优选的AOID为自身免疫性葡萄膜炎，例如，没有传染性病因学的葡萄膜炎。

[0013]IL-17拮抗剂可抑制IL-17或IL-17R或IL-17RC的表达或者可通过与一个或多个这些多肽的直接或间接相互作用以防止功能性配体-受体相互作用而抑制IL-17信号传导。在一些优选的实施方案中，IL-17拮抗剂为结合于IL-17、IL-17R或IL-17C并抑制它们的活性的抗体或抗体片段。在一个特别优选的实施方案中，IL-17拮抗剂为特异性结合于IL-17的单克隆抗体。在其它优选的实施方案中，IL-17拮抗剂为结合于IL-23p19和IL-17、IL-23p19和IL-17RA、IL-23R和IL-17或者IL-23R和IL-17RA并抑制它们的活性的双特异性抗体。在另一个特别优选的实施方案中，IL-17拮抗剂为结合于IL-23p19和IL-17并抑制它们的活性的双特异性抗体。

[0014]在一些实施方案中，按照特定的治疗方案给予IL-17拮抗剂。例如，在一个实施方案中，可在第一个疗程期间以特定的时间间隔给予特定剂量的拮抗剂，可以在一个或多个AOID症状消失后或者在特定的持续时间内结束给药。在一个优选的实施方案中，治疗方案还包括在第一个疗程结束时开始并在停止用IL-17拮抗剂的疗法时结束的第二个疗程期间，逐渐减小IL-17拮抗剂的剂量。典型地，第二个疗程的持续时间在1-12个月、1-9个月、1-6个月或1-3个月之间。

[0015]在一些优选的实施方案中，特定的治疗方案也包括在每一个第1与第二个疗程的期间或者仅在第二个疗程期间给予所述患者IL-23拮抗剂。IL-23拮抗剂可抑制两种细胞因子亚单位中任何一种(IL-23p19或p40)、两种功能性受体亚单位中任何一种(IL-23R或IL-12β1)的表达，或者可通过与这些多肽中一个或多个直接或间接相互作用以防止功能性配体-受体相互作用而抑制IL-23信号传导。在一些优选的实施方案中，IL-23拮抗剂是结合于IL-23p19或IL-23R并抑制IL-23p19或IL-23R活性的抗体或抗体片段。在一个特别优选的实施方案中，IL-23拮抗剂是特异性结合于IL-23p19的单克隆抗体。

[0016]可以特定的剂量，在第1与第2疗程的1个或2个疗程期间以特定的时间间隔给予IL-23拮抗剂。在第二个疗程中给予的IL-23拮抗剂的剂量可低于在第一个疗程中给予的剂量。而且，在所述任何一个或两个疗程中，IL-17和IL-23拮抗剂的剂量可以彼此相同或不同。类似地，两种拮抗剂可在每一个疗程期间以相同或不同的时间间隔给药。在第二个疗程期间，可减小IL-17拮抗剂的剂量而使IL-23拮抗剂的剂量保持恒定，或者可逐渐减小每一种拮抗剂的剂量。

[0017]在其它优选的实施方案中，IL-23拮抗剂的剂量在第二个疗程期间保持恒定和用IL-23拮抗剂的疗法在于第二个疗程结束时(即停止用IL-17拮抗剂的疗法时)开始的第三个疗程期间依旧不变。在第三个疗程期间，可以与第二个疗程相同的剂量和时间间隔或者可以比前一疗程使用的更低的剂量和更小频率的时间间隔给予IL-23拮抗剂。也可在第三个疗程期间逐渐减小IL-23拮抗剂的剂量。第三个疗程的持续时间一般地在1-12个月、1-9个月、1-6个月或1-3个月之间。

[0018]仍然在其它的实施方案中，特定的治疗方案也包括在任何一个或所有疗程期间给予不拮抗IL-17或IL-23活性但是能够减轻AOID的至少一种症状或者IL-17或IL-23拮抗剂的至少一种副作用的治疗剂。在一些优选的实施方案中，治疗剂为已知具有治疗葡萄膜炎效能的甾体或非甾体抗炎药(例如NSAID)。在其它优选的实施方案中，治疗剂靶向促进Th1应答的细胞因子。

[0019]本发明另一方面提供了预防性治疗被诊断为易于患自身免疫性眼部炎性疾病的患者的方法，该方法包括给予所述患者IL-23和IL-17中一种或两种拮抗剂。在该预防性方法的一些优选实施方案中，易感性诊断基于曾发生过眼部炎症的患者。在其它优选的实施方案中，易感性诊断基于正在罹患全身性自身免疫疾病的的患者。可以特定的剂量在典型于3个月、6个月、9个月后或于2年用拮抗剂的疗法后结束的第一个疗程期间以特定的时间间隔给予拮抗剂。在一些优选的实施方案中，在第一个疗程结束时开始并且通常具有1-3个月持续时间的第二个疗程期间逐渐减小拮抗剂的剂量。

[0020]仍然在另一方面，本发明提供了治疗患者自身免疫性眼部炎性疾病的方法，该方法包括给予所述患者IL-23拮抗剂。可在第一个疗程期间以特定的时间间隔给予IL-23拮抗剂，随后进行第二个疗程，其中以更低的剂量或更小频率的时间间隔或以逐渐减小的剂量给予IL-23拮抗剂。用IL-23拮抗剂的疗法典型地持续至少3-6个月并可持续多达12个月、18个月或24个月。

[0021]本发明的另一个方面是IL-17拮抗剂或IL-23拮抗剂用于制备用于在患者中治疗或预防自身免疫性眼部炎性疾病(AOID)的药用组合物的用途。在优选的实施方案中，药用组合物是用于依据在此描述的任何治疗方案给予的拮抗剂。

[0022]仍然在另一方面，本发明提供了用于治疗自身免疫性眼部炎性疾病的制备的药品。该药品包含(i)含有IL-17拮抗剂的第一种药用制剂；和(ii)含有IL-23拮抗剂的第二种药用制剂。在优选的实施方案中，该药品包括含有用于依据在此描述的任何治疗方案给予的药用制剂的说明书的产品信息。

发明详述

I.定义

[0023]为了使本发明可更易于理解，以下具体定义某些技术和科学术语。除非在该资料中另外具体定义，在此使用的所有其它技术和科学术语具有应当由本发明所属领域普通技术人员在使用如本文类似的上下文时所通常理解的含义。

[0024]如在此使用的，包括附属的权利要求，词语的单数形式例如“一”、“一个”和“该”包括它们相应的复数形式，除非上下文另外明确指出。

[0025]“拮抗剂”意指可在体外或体内预防、抵消、抑制或减小所靶向活性，即细胞因子例如IL-17或IL-23的活性的任何分子。细胞因子拮抗剂包括，但不限于以干扰细胞因子信号转导和下游活性的方式，结合于细胞因子(或它的任何亚单位)或它的功能性受体(或它的任何亚单位)的拮抗性抗体、肽、肽模拟物、多肽和小分子。肽和多肽拮抗剂的实例包括以减少可得到用来结合于其功能性受体的细胞因子的量或者防止细胞因子结合于其功能性受体的量的方式，结合于细胞因子的细胞因子受体的截短的种类或片段(例如可溶性胞外域)。拮抗剂也包括防止包含细胞因子或其受体的任何亚单位表达的分子，诸如，例如靶向mRNA和干扰信使RNA的反义寡核苷酸(参见例如Arenz和Schepers(2003)Naturwissenschaften 90：345-359；Sazani和Kole(2003)J.Clin.Invest.112：481-486；Pirollo，等.(2003)Pharmacol.Therapeutics 99：55-77；Wang，等.(2003)Antisense Nucl.Acid Drug Devel.13：169-189)。拮抗剂的抑制作用可通过常规方法检测。例如，为了评价对细胞因子诱导活性的抑制作用，用细胞因子处理表达细胞因子功能性受体的人细胞，并在潜在拮抗剂存在或不存在下检测已知被细胞因子活化或抑制的基因表达。当与适当的对照组比较时，用于本发明的拮抗剂抑制靶向的活性达到至少25％，优选至少50％，更优选至少75％，和最优选至少90％。

[0026]“抗体”指呈现要求的生物活性，诸如抑制配体结合于其受体或通过抑制配体诱导的受体信号传导的任何形式抗体。因此，“抗体”以最广泛的意义使用并且具体地讲包括(但不限于)单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体和多特异性抗体(例如双特异性抗体)。

[0027]“抗体片段”和“抗体结合片段”意指抗体的抗原结合片段和类似物，典型地包含亲本抗体的抗原结合或可变区(例如一个或多个CDRs)的至少一个部分。抗体片段保留至少一些亲本抗体的结合特异性。典型地，当基于摩尔基准表达活性时，抗体片段保留至少10％的亲本结合活性。优选地，抗体片段保留至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更多对靶标的亲本抗体结合亲和性。抗体片段的实例包括，但不限于Fab、Fab’、F(ab’)₂和Fv片段；双链抗体、线形抗体、单链抗体分子，例如sc-Fv；和自抗体片段形成的多特异性抗体。(基因_工程抗体变异体在Holliger和Hudson(2005)Nat.Biotechnol.23：1126-1136中得到评述。

[0028]“Fab片段”包含一个轻链和C_H1及一个重链的可变区。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。

[0029]“Fc”区包含含有抗体的C_H1与C_H2区的两个重链片段。两个重链片段通过两个或更多个二硫键和通过C_H3区的疏水作用结合在一起。

[0030]“Fab’片段”包含一个轻链和含有V_H区与C_H1区的一个重链的部分以及在C_H1与C_H2区之间的区域，以致于可在两个Fab’片段的两个重链之间形成链间二硫键以形成F(ab’)₂分子。

[0031]“F(ab’)2片段”包含两个轻链和在C_H1与C_H2之间含有恒定区部分的两个重链，以致于在两个重链之间形成链间二硫键。因此F(ab’)₂片段由通过两个重链之间的二硫键结合在一起的两个Fab’片段组成。

[0032]“Fv区”包含来自重和轻链两者但是缺乏恒定区的可变区。

[0033]“单链Fv抗体”(或“scFv抗体”)指包含抗体的V_H和V_L区的抗体片段，其中这些区存在于单个多肽链上。通常，Fv多肽在使得scFv能够形成用于抗原结合的要求结构的V_H和V_L区之间还包含多肽连接体。对于scFv的评述参见Pluckthun(1994)单克隆抗体的药理学(THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONALANTIBODIES)，第113卷，Rosenburg和Moore编辑.Springer-Verlag，New York，第269-315页。也参见国际专利申请公开号WO 88/01649和美国专利第4,946,778和5,260,203号。

[0034]“双链抗体”是具有两个抗原结合位点的小的抗体片段。片段包含以相同多肽链(V_H-V_L或V_L-V_H)连接轻链可变区(V_L)的重链可变区(V_H)。通过采用太短使得在相同链上的两个区之间不能配对的连接体，所述区被迫与另一个链的互补区配对并产生两个抗原结合位点。双链抗体在例如EP 404,097、WO 93/11161和Holliger等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448中得到更充分描述。

[0035]“域抗体片段”为仅含有重链可变区或轻链可变区的免疫功能性免疫球蛋白片段。在一些实例中，两个或更多个V_H区与肽连接体共价连接产生二价域抗体片段。二价域抗体片段的两个V_H区可靶向相同或不同的抗原。

[0036]自身免疫介导的眼部炎性疾病(AOID)意指任何疾病或病症，其中(a)炎症存在于眼睛或周围组织的任何部分(包括视神经、血管、肌肉)和(b)炎症为需要IL-23与IL-17中的一个或两者或由IL-23与IL-17中的一个或两者促进的免疫应答的部分。没有传染性病因学的眼内炎症典型地被认为是AOID。AOIDs的非限定性实例列于下文。

[0037]鸟枪弹样视网膜脉络膜病变(Birdshotretinochoriodopathy(BSRC))：主要侵袭眼后部(后段)的慢性眼内炎性疾病。BSRC不同于与HLA-A29.2抗原具有强烈相关的其它形式的后段葡萄膜炎。它的病因学仍是未知的。自身免疫机制可能起重要致病作用。

[0038]瘢痕性眼类天疱疮(OCP)：一种全身自身免疫疾病。明确的证据支持了免疫调节机能失调的观点：抗体朝着结膜和衍生于分层鳞状上皮和偶尔地衍生于皮肤的其它粘膜的基底膜区(BMZ)。OCP为通常需要用免疫抑制治疗的威胁视觉的疾病。

[0039]角膜炎、周边溃疡性角膜炎：角膜炎为角膜的炎症，角膜是形成眼睛外表最前部分的外部、透明、圆顶样结构。如果溃疡发生在外周角膜，称作周边溃疡性角膜炎。

[0040]“交感性眼炎(Sympathetic ophtahlmia)”为其中一只眼受创伤，之后突然促使另一只(“交感”)眼产生有害炎症的AOID，明显是由于应对受伤眼释放的抗原的自身免疫应答而产生。

[0041]伏-小柳-原田三(VKH)：伏-小柳-原田三氏综合征(VKH)，从前称作uveomenigitic综合征，为涉及包括眼、听觉、神经和皮肤(皮肤)系统的多个器官的系统性疾病。与视网膜下液体蓄积有关的严重双侧全葡萄膜炎是眼VKH的标志。

[0042]富克斯氏(Fuchs′)虹膜异色性虹膜睫状体炎：慢性、单侧前葡萄膜炎，特征为虹膜异色性，其中一只眼睛与另一只不同颜色的状况。该葡萄膜炎典型地发生于青壮年的较浅颜色的眼睛。

[0043]“结合化合物”指能够结合于特定靶点的分子、小分子、大分子、抗体、片段或其类似物或可溶性受体。“结合化合物”也可指能够结合于特定靶点的任何以下物质：分子的复合物(例如非共价分子复合物)、电离分子和共价或非共价改性分子(例如通过磷酸化、酰化、交联、环合或有限裂解)。在其中结合化合物可溶解或悬浮于溶液中的情况中，“结合”可定义为结合化合物与靶标的缔合，其中缔合导致结合化合物的正常布朗运动减少。

[0044]“结合组合物”指结合化合物与至少一种其它物质，诸如稳定剂、赋形剂、盐、缓冲剂、溶剂或添加剂的联合。

[0045]“双特异性抗体”意指具有两个抗原结合位点的抗体，所述抗原结合位点对两个不同抗原决定部位具有特异性，可在相同抗原上或在两个不同抗原上。双特异性抗体包括双特异性抗体片段。参见例如Hollinger等.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：6444-48，Gruber等，J.Immunol.152：5368(1994)。

[0046]如贯穿本说明书和权利要求所使用的“基本上由......组成”和变体，诸如“基本上由......组成”或“基本上包括”表示包括任何列举的要素或要素组，并任选包括与所列举要素具有相似或不同性质，不显著改变所特定给药方案、方法或组合物的基本性或新颖性的其它要素。作为非限定性实例，基本上包含所列举氨基酸序列的细胞因子也可包含一个或多个不显著影响细胞因子性质的氨基酸。

[0047]“白介素-12Rβ1”或“IL12RB1”意指基本上由如在NCBI蛋白质序列数据库登记号(NCBI Protein Sequence Database AccessionNumbers)NP714912、NP005526中描述的那样的、人IL12RB1成熟形式序列的单多肽链或其自然存在的变体组成。

[0048]“白介素-17”(或“IL-17”)意指包含一个或两个多肽链，每一个链基本上有如在NCBI蛋白质序列数据库登记号NP002181、AAH67505、AAH67503、AAH67504、AAH66251、AAH66252的任何一项中描述的那样的、人IL17A成熟形式序列的蛋白或其自然存在的变体组成。

[0049]“IL-17R”或“IL-17RA”意指基本上有如在WO 96/29408或在NCBI蛋白质序列数据库登记号NP 055154、Q96F46、CAJ86450的任何一项中描述的那样的、人IL-17RA成熟形式序列的单多肽链或这些序列自然存在的变体组成。

[0050]“IL-17RC”意指基本上有如在WO 238764A2或在NCBI蛋白质序列数据库登记号NP703191、NP703190和NP116121的任何一项中描述的那样的、人IL-17RC成熟形式序列的单多肽链或这些序列自然存在的变体组成。

[0051]“白介素-23”(或“IL-23”)意指包含两个多肽链的蛋白。一个链基本上有如在NCBI蛋白质序列数据库登记号NP057668、AAH67511、AAH66267、AAH66268、AAH66269、AAH667512、AAH67513的任何一项中描述的那样的人IL23、亚单位p19(也称作IL23A)的成熟形式序列或这些序列自然存在的变体组成。另一个链基本上有如在NCBI蛋白质序列数据库登记号NP002178、P29460、AAG32620、AAH74723、AAH67502、AAH67499、AAH67498、AAH67501的任何一项中描述的那样的IL12，亚单位p40(也称作IL12B和IL23、亚单位p40)的成熟形式序列或这些序列自然存在的变体组成。

[0052]“白介素-23R”或“IL-23R”意指基本上有如在NCBI蛋白质序列数据库登记号NP653302中描述的那样的人IL23R成熟形式序列的单多肽链，或其自然存在的变体组成。

[0053]“mAb”的“单克隆抗体”意指得自充分均匀的抗体群的抗体，其并不解释为需要通过特别的方法产生抗体。

[0054]“非肠道给药”意指静脉内、皮下或肌内注射。

[0055]“小分子”意指分子量小于10kD，通常小于2kD和更优选地小于1kD的分子。小分子包括，但不限于无机分子、有机分子、含有无机部分的有机分子、含有放射性原子的分子、合成分子、肽模拟物和抗体模拟物。抗体的肽模拟物和细胞因子是本领域已知的。参见例如Casset等.(2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.307：198-205；Muyldermans(2001)J.Biotechnol.74：277-302；Li(2000)Nat.Biotechnol.18：1251-1256；Apostolopoulos等.(2002)Curr.Med.Chem.9：411-420；Monfardini等.(2002)Curr.Pharm.Des.8：2185-2199；Domingues等.(1999)Nat.Struct.Biol.6：652-656；Sato和Sone(2003)Biochem.J.371：603-608；Stewart等发布的美国专利第6,326,482号。

[0056]当提到结合对，诸如细胞因子及其受体和抗体及其抗原或抗原决定部位成员之间的结合作用时，“特异的”或“特异地”表示决定蛋白和其它生物制品的异质群体中存在一种结合对成员的结合反应。因此，在所设计的条件下，一种结合对成员对另一种结合对成员比无关蛋白具有明显更大的亲和性。例如，如果结合于具有比其对不同蛋白的亲和性高至少10倍，和优选地高50倍亲和性的蛋白，认为该抗体对特定蛋白是特异性的。“特异性结合”于包含具体抗原决定部位的蛋白的抗体，不以任何可测的程度结合于不包含所述抗原决定部位的蛋白。优选地，对靶蛋白特异性的抗体，将对如通过例如Scatchard分析测定的大于约10⁹升/mol的靶蛋白具有亲和性(Munsen等.(1980)Analyt.Biochem.107：220-239)。

[0057]“治疗”或“治疗(treating)”意指给予需要的患者内用或外用治疗剂，诸如包含在本文描述的IL-17和IL-23拮抗剂中任何一种的组合物。典型地，以有效预防或缓解一个或多个疾病症状或者不同治疗剂的一个或多个治疗副作用的量给予该药，或者通过防止这样症状或副作用的发展包括退化或者通过抑制这样症状或副作用的进展达临床合适的程度。有效缓解任何具体疾病症状或副作用的治疗剂的量(也称作“治疗有效量”)可根据多种因素变化，例如患者的疾病状态、年龄和体重以及治疗剂在患者得到要求应答的能力。通过典型地由医生或其它医疗保健技术提供者用于评价所述症状或副作用的严重性或进展状况的任何临床检测方法，可评价疾病症状或副作用是否已被减轻。当将治疗剂给予具有有效疾病的患者时，治疗有效量将典型地导致所检测的疾病症状减少达至少5％，通常达至少10％，更通常地达至少20％，最通常地达至少30％，优选地为至少40％，更优选地为至少50％，最优选地为至少60％，理想地为至少70％，更理想地为至少80％和最理想地为至少90％。尽管本发明的实施方案(例如治疗方法或制备的产品)在预防或缓解每一个患者的靶疾病症状或副作用方面可能不都是有效的，但是它应该在具有统计学显著意义数目的患者中减轻这样的症状或副作用，所述数目如通过本领域已知的任何统计学检验方法，如t检验、chi²检验、Mann和Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验确定。

[0058]葡萄膜炎意指侵袭组成葡萄膜的眼睛三部分中的一个或更多部分的炎症，三部分包括：虹膜(眼睛的着色部分)、睫状体(在虹膜后，负责制备眼内房水)和脉络膜(在视网膜下的脉管衬里组织)。全葡萄膜炎意指在同一个眼睛的多个部分(前、中和后部)存在炎症。

[0059]葡萄膜炎可为急性或慢性。慢性形式通常更多与全身性疾病包括强直性脊柱炎、贝切特氏综合症、炎性肠病、青年期类风湿性关节炎、莱特尔氏综合症、结节病、梅毒、结核病和莱姆病有关。

[0060]前葡萄膜炎是涉及眼睛前部分的炎症，是葡萄膜炎的最常见形式。炎症通常局限于虹膜；因此前葡萄膜炎通常称为虹膜炎。在一些患者，前葡萄膜炎可与自身免疫疾病，诸如类风湿性关节炎或强直性脊柱炎的存在有关，但是大多数前葡萄膜炎病例出乎以外地发生于健康者，并不表明有全身性疾病的基础。该OID可仅侵袭单眼并且最常发生于年轻和中年人。自身免疫疾病的病史是危险因素。前葡萄膜炎的大多数发作在边治疗时持续几天-几周，但常见复发。

[0061]中间葡萄膜炎意指主要涉及前玻璃体、外周视网膜和睫状体，伴有最少或不伴有前节段或者脉络膜视网膜炎性体征的特发性炎性综合症。

[0062]睫状体平坦部炎为虹膜与脉络膜之间狭窄部分的睫状体扁平部的炎症。睫状体平坦部炎通常发生于年轻男性并且一般与任何其它疾病无关。然而，已经存在与克罗恩氏病有关的几个病例报告，并且一些专家提示可能与多发性硬化症的关联。为了这个原因，这些专家推荐25岁以上诊断患有睫状体平坦部炎的患者接受大脑和脊柱的MRI检查。

[0063]后葡萄膜炎侵袭葡萄膜的后部且主要涉及脉络膜。此被称为脉络膜炎。后葡萄膜炎特征为视网膜下的血管层炎症，通常也是视网膜的炎症。如果还累及邻近视网膜，则典型地将该病症称为脉络膜视网膜炎。后葡萄膜炎可继发于全身感染或与自身免疫疾病关联发生。在后葡萄膜炎中，即使一边进行治疗，炎症可持续数月至数年并可引起永久性视觉损伤。

II.通法

[0064]本发明提供应用对治疗自身免疫性眼部炎性疾病具有活性的IL-17和IL-23拮抗剂的方法。

[0065]在Kolls，J.等.(2004)Immunity第21卷，第467-476页中评述的IL17活性，包括促进中性粒细胞聚积于定位的区域和使中性粒细胞活化。依细胞类型不同，IL17可诱导或促进产生任何一种以下促炎性和中性粒细胞动员细胞因子：IL-6、MCP-1、CXCL8(IL-8)、CXCL1、CXCL6、TNFα、IL-1β、G-CSF、GM-CSF、MMP-1和MMP-13。

[0066]IL-23活性包括诱导记忆T细胞、PHA胚细胞、CD45RO T细胞、CD45RO T细胞的增殖；及通过PHA胚细胞或CD45RO T细胞促进干扰素γ(IFNγ)产生。与IL-12相反，在人和小鼠两者中IL-23优先刺激记忆T细胞群而不是原始T细胞群。IL-23激活多种胞内细胞信号传导分子，例如Jak2、Tyk2、Stat1、Stat2、Stat3和Stat4。IL-12激活该相同组分子，但是应答于IL-23的Stat4相对弱，而应答于IL-12的Stat4强(Oppmann等，上文；Parham等.(2002)J.Immunol.168：5699-5708)。IL-23还牵涉到与产生IL-17的细胞，也称作Th₁₇细胞的维持和增殖(参见Cua和Kastelein(2006)Nature Immunology7：557-559)。

[0067]用于本发明的拮抗剂包括含有针对IL-17或IL-23的功能性受体胞外域的可溶性受体。可按照标准方法(参见，例如Jones，等.(2002)Biochim.Biophys.Acta 1592：251-263；Prudhomme，等.(2001)Expert Opinion Biol.Ther.1：359-373；Fernandez-Botran(1999)Crit.Rev.Clin.Lab Sci.36：165-224)制备和使用可溶性受体。

[0068]用于本发明的优选的IL-17拮抗剂为特异性结合并抑制IL-17、IL-17RA、1L-17RC及含有IL-17RA和1L-17RC的异聚体复合物中任何一种的活性的抗体。更优选地，IL-17拮抗剂的靶标为IL-17或IL-17RA。尤其优选的IL-17拮抗剂特别结合于IL-17并抑制IL-17的活性。

[0069]用于本发明的另一种优选的IL-17拮抗剂为也拮抗IL-23活性的双特异性抗体或双特异性抗体片段。这样的双特异性拮抗剂具体地讲结合并抑制以下组合中任何一种的每一种成员的活性：IL-17与IL-23、IL-17与IL-23p19、IL-17与IL-12p40、IL-17与IL-23R/IL12RB1复合物、IL-17与IL-23R、IL-17与IL12RB1、IL17RA与IL-23、IL-17R与IL-23p19、IL-17RA与IL-12p40、IL-17RA与IL-23R/IL12RB1复合物、1L-17RA与IL-23R、IL-17RA与IL12RB1、IL17RC与IL-23、IL-17RC与IL-23p19、IL-17RC与IL-12p40、IL-17RC与IL-23R/IL12RB1复合物、IL-17RC与IL-23R、IL-17RC与IL12RB1、IL-17RA/IL-17RC复合物与IL-23、IL-17RA/IL-17RC复合物与IL-23p19、IL-17RA/IL-17RC复合物与IL-12p40、IL-17RA/IL-17RC复合物与IL-23R/IL12RB1复合物、IL-17RA/IL-17RC复合物与IL-23R以及IL-17RA/IL-17RC复合物与L12RB1。用于本发明的被双特异性抗体靶向的优选组合为：IL-17与IL-23、IL-17与IL-23p19、IL17RA与IL-23以及IL-17RA与IL-23p19。特别优选的双特异性抗体具体地讲结合于IL-17与IL-23p19中每一种并抑制它们的活性。

[0070]优选的IL-23拮抗剂为结合于IL-23、IL-23p19、IL-12p40、IL23R、IL12RB1和IL-23R/IL12RB1复合物中任何一种并抑制它们的活性的抗体。另一种优选的IL-23拮抗剂为基本上包含IL-23胞外域，例如GenBankAAM44229或其片段的氨基酸1-353的IL-23结合多肽。

[0071]可通过本领域已知用于制备抗体的任何方法制备用于本发明的抗体拮抗剂。单克隆、多克隆和人源化抗体的制备在Sheperd和Dean(编辑)(2000)单克隆抗体(Monoclonal Antibodies)，牛津大学出版社，纽约，NY；Kontermann和Dubel(编辑)(2001)抗体工程(AntibodyEngineering)，Springer-Verlag，纽约；Harlow和Lane(1988)抗体实验室手册(Antibodies A Laboratory Manual)，冷泉港实验室出版社(ColdSpring Harbor Laboratory Press)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY，第139-243页；Carpenter等.(2000)免疫学杂志(J.Immunol).165：6205；He，等.(1998)免疫学杂志(J.Immunol).160：1029；Tang，等.(1999)生物化学杂志(J.Biol.Chem).274：27371-27378；Baca，等.(1997)生物化学杂志(J.Biol.Chem).272：10678-10684；Chothia，等.(1989)自然(Nature)342：877-883；Foote和Winter(1992)分子生物学杂志(J.MoI.Biol).224：487-499以及Vasquez等发布的美国专利第6,329,511号中得到描述。

[0072]需要的靶标的任何抗原形式可用于产生抗体，所述抗体可用于对具有要求拮抗活性的那些抗原进行筛选。因此，得到的抗原可为含有单一抗原决定部位或多抗原决定部位的肽，或者单独或与一个或多个本领域已知的免疫原性增强剂联合为整体蛋白。为了改善抗原性肽的免疫原性，可将所述肽与载体蛋白共轭。抗原也可为分离的全长蛋白、细胞表面蛋白(例如用抗原的至少一部分转染的细胞进行免疫)或可溶性蛋白(例如仅用蛋白的胞外域部分进行免疫)。可用基因修饰的细胞表达抗原，其中编码抗原的DNA为基因组的或非基因组的(例如在质粒上)。

[0073]基本上包含所预测高抗原性区域的肽可用于抗体产生。例如，如通过用Vector NTISuite(Informax，Inc，Bethesda，MD)采用Parker图分析测定的那样，人p19的高抗原性区域存在于GenBankAAQ89442(gi：37183284)的氨基酸16-28、57-87、110-114、136-154和182-186，而人IL-23R的高抗原性区域存在于GenBank AAM44229(gi：21239252)的氨基酸22-33、57-63、68-74、101-112、117-133、164-177、244-264、294-302、315-326、347-354、444-473、510-530和554-558。

[0074]可采用任何合适的免疫方法。这样的方法可包括使用佐剂、其它免疫刺激剂、重复的加强免疫和使用一个或多个免疫途径。也可用DNA载体免疫实施免疫，参见，例如Wang等.(1997)病毒学(Virology)228：278-284。或者，可用具有所研究抗原的细胞免疫动物，它可比用纯化的抗原免疫提供产生更优良的抗体(Kaithamana等.(1999)免疫学杂志(J.Immunol).163：5157-5164)。

[0075]优选的抗体拮抗剂为可通过技术人员熟悉的多种技术得到的单克隆抗体。用于产生单克隆抗体的方法通常在Stites等.(编辑)基础与临床免疫学(BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY)(第4版)Lange Medical Publications，Los Altos，CA及其中所列举的参考文献；Harlow和Lane(1988)抗体：实验室手册(ANTIBODIES：ALABORATORY MANUAL)CSH出版社；Goding(1986)单克隆抗体：原理与实践(MONOCLONAL ANTIBODIES：PRINCIPLES ANDPRACTICE)(第2版)学术出版社(Academic Press)，纽约，NY中得到描述。典型地，自经免疫的哺乳动物宿主分离的脾细胞通常由于用骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤为永生化的。参见Kohler和Milstein(1976)欧洲免疫学杂志(Eur.J.Immunol).6：511-519；Meyaard，等.(1997)免疫(Immunity)7：283-290；Wright，等.(2000)免疫(Immunity)13：233-242；Preston，等.(1997)欧洲免疫学杂志(Eur.J.Immunol).27：1911-1918。另一种可供选择的永生化方法包括用Epstein Barr病毒、癌基因或其它逆转录病毒转化或本领域已知的其它方法。参见，例如Doyle，等.(1994年编辑和周期性增补)细胞和组织培养：实验室方法(CELL ANDTISSUE CULTURE：LABORATORY PROCEDURES)，John Wiley和Sons，纽约，NY。采用适当的结合与生物试验筛选由单一永生化细胞产生的克隆，用于产生所要求的特异性、亲和性和抑制活性的抗体。例如，例如通过表面等离子共振(Karlsson，等.(1991)免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)145：229-240；Neri，等.(1997)自然生物技术(Nat.Biotechnol).15：1271-1275；Jonsson，等.(1991)生物技术(Biotechniques)11：620-627)或通过竞争ELISA(Friguet，等.(1985)免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)77：305-319；Hubble(1997)免疫学今天(Immunol.Today)18：305-306)，可检测靶向结合性质的抗体。

[0076]或者，人们可分离通过筛选来自人B细胞的DNA库编码单克隆抗体或其结合片段的DNA序列，参见，例如Huse，等.(1989)科学(Science)246：1275-1281。其它合适的技术包括筛选噬菌体抗体呈现库。参见例如Huse等，科学(Science)246：1275-1281(1989)和Ward等，自然(Nature)341：544-546(1989)；Clackson等.(1991)自然(Nature)352：624-628和Marks等.(1991)分子生物学杂志(J.MoI.Biol).222：581-597；Presta(2005)变态反应临床免疫学杂志(J.Allergy Clin.Immunol).116：731。

[0077]用于本发明的优选单克隆抗体为“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中可变区来自在实验性哺乳动物，诸如大鼠或小鼠产生的亲本抗体，且恒定区得自人抗体，以致于生成的嵌合抗体比亲本哺乳动物抗体更少可能在患者上得到不利的免疫应答。更优选地，用于本发明的单克隆抗体为“人源化抗体”，其中可变区中的所有或基本上所有高变环(例如，互补性确定区或CDRs)与非人免疫球蛋白的相符，而可变区中的所有或基本上所有构架(FR)区为人免疫球蛋白序列的那些构架区。用于本发明特别优选的单克隆抗体为“完全人源抗体”，例如仅包含人免疫球蛋白蛋白序列的抗体。完全人源抗体可包含来自产生它的细胞种类的糖链，例如，如果在小鼠、小鼠细胞或自小鼠细胞衍生的杂交瘤产生，完全人抗体典型地包含鼠类的糖链。

[0078]用于本发明的单克隆抗体也可包括骆驼化的(camelized)单域抗体。参见，例如Muyldermans等.(2001)生化科学发展趋势(Trends Biochem.Sci).26：230；Reichmann等.(1999)免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)231：25；WO 94/04678；WO 94/25591；美国专利第6,005,079号。

[0079]用于本发明的拮抗性抗体可能具有修饰(或阻断的)Fc区以提供改变的效应器功能。参见，例如美国专利第5,624,821号、WO2003/086310、WO2005/120571、WO2006/0057702。Fc区的改变包括氨基酸变化(取代、缺失和插入)、糖基化或去糖基化及加入多个Fc。变为Fc可改变治疗性抗体的半衰期，使得给药次数更少并因此增加便利和减少原料使用。参见Presta(2005)变态反应临床免疫学杂志(J.Allergy Clin.Immunol).116：731在734-35页。

[0080]抗体也可与在贮存期间改善抗体稳定性或增加抗体体内半衰期的分子共轭(例如共价连接)。增加半衰期的分子的实例为白蛋白(例如人血浆白蛋白)和聚乙二醇(PEG)。可采用本领域熟知的技术制备白蛋白连接的或PEG化的抗体衍生物。参见，例如Chapman，A.P.(2002)Adv.Drug Deliv.Rev.54：531-545；Anderson和Tomasi(1988)免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)109：37-42；Suzuki，等.(1984)生物化学和生物物理学学报(Biochim.Biophys.Acta)788：248-255以及Brekke和Sandlie(2003)自然评论(Nature Rev.)2：52-62)。

[0081]可通过本领域已知的任何技术制备拮抗IL-17和IL-23两者活性的双特异性抗体。例如，可采用两种免疫球蛋白重链/轻链对的共表达重组产生双特异性抗体。参见，例如Milstein等.(1983)自然(Nature)305：537-39。或者，可采用化学键合制备双特异性抗体。参见例如Brennan，等.(1985)科学(Science)229：81。也可通过二硫化物交换、产生杂交杂交瘤(双杂交瘤法)，通过转录和翻译产生包含双特异性抗体的单一多肽链，或转录和翻译产生多于一个可共价连接产生双特异性抗体的多肽链，制备这些双功能抗体。也可完全通过化学合成制备所期待的双特异性抗体。双特异性抗体可包含两个不同的可变区、两个不同的恒定区、一个可变区和一个恒定区或其它变体。

[0082]用于本发明的抗体将通常结合至少约10^-3M，更通常为至少10^-6M，典型地至少10^-7M，更典型地为至少10^-8M，优选地至少约10^-9M和更优选地至少10^-10M，并且最优选地至少10^-11M的K_D(参见，例如Presta，等.(2001)Thromb.Haemost.85：379-389；Yang，等.(2001)Crit.Rev.Oncol.Hematol.38：17-23；Carnahan，等.(2003)Clin.Cancer Res.(增刊)9：3982s-3990s)。

[0083]典型地，IL-17拮抗剂与IL-23拮抗剂作为药用组合物给予所述患者，在该药用组合物中拮抗剂与药学上可接受的载体或赋形剂混合，所述载体或赋形剂参见，例如雷明顿氏药剂学(Remington’sPharmaceutical Sciences)和美国药典：国家处方集(U.S.Pharmacopeia：National Formulary)，默克出版公司(Mack Publishing Company)，Easton，PA(1984)。可以适合于打算给药途径的任何方式配制药用组合物。药用组合物的实例包括冷冻干燥粉剂、糖浆剂、水溶液剂、混悬剂和缓释制剂(参见例如Hardman，等.(2001)古德曼和吉尔曼氏治疗的药理学基础(Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis ofTherapeutics)，McGraw-Hill，纽约，NY；Gennaro(2000)雷明顿：药剂科学与实践(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，Lippincott，Williams和Wilkins，纽约，NY；Avis，等.(编辑)(1993)药用剂型：非肠道药物(Pharmaceutical Dosage Forms：ParenteralMedications)，Marcel Dekker，NY；Lieberman，等.(编辑)(1990)药用剂型：片剂(Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets)Marcel Dekker，NY；Lieberman，等.(编辑)(1990)药用剂型：分散系统(Pharmaceutical DosageForms：Disperse Systems)，Marcel Dekker，NY；Weiner和Kotkoskie(2000)赋形剂毒性和安全性(Excipient Toxicity and Safety)，MarcelDekker，Inc.，纽约，NY)。

[0084]给药途径将取决于药用组合物中所使用的拮抗剂或其它治疗剂的性质。可能的给药途径是将药用组合物以膏剂、凝胶或可滴液体形式采用本领域已知的眼传递系统例如施用器或滴眼器局部给予眼睛。或者，可通过放置在眼结膜下的高分子植入物或通过直接注入眼睛经由眼内给予药用组合物。优选地，通过口服摄入，通过静脉内、腹膜内、脑内、肌内、眼内、动脉内、脑脊髓内、病灶内或肺部途径注射或输注，或者通过持续释放系统，诸如植入物，给予含有IL-17拮抗剂与IL-23拮抗剂的药用组合物。已有描述基因转移载体注入大脑神经系统(参见，例如Cua，等.(2001)免疫学杂志(J.Immunol).166：602-608；Sidman等.(1983)生物聚合物(Biopolymers)22：547-556；Langer，等.(1981)生化物质研究杂志(J.Biomed.Mater.Res).15：167-277；Langer(1982)化学技术(Chem.Tech).12：98-105；Epstein，等.(1985)美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)82：3688-3692；Hwang，等.(1980)美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)77：4030-4034；美国专利第6,350,466和6,316,024号)。

[0085]用于本发明的药用组合物可按照改善或预防一个或多个AOID症状的任何治疗方案给药。选择治疗方案将取决于几种组合依赖的和患者依赖的因素，所述因素包括(但不限于)拮抗剂的半衰期、患者症状的严重性、任何副作用的类型或持续时间长度。优选地，给药方案使传递给患者的与可接受的副作用水平一致的治疗剂量最大化。可得到选择治疗抗体和小分子合适剂量的指南(参见，例如Wawrzynczak(1996)抗体疗法(Antibody Therapy)，生物科学出版有限公司(Bios Scientific Pub.Ltd)，Oxfordshire，UK；Kresina(编辑)(1991)单克隆抗体、细胞因子和关节炎(Monoclonal Antibodies，Cytokines andArthritis)，Marcel Dekker，纽约，NY；Bach(编辑)(1993)自身免疫疾病中的单克隆抗体和肽疗法(Monoclonal Antibodies and Peptide Therapyin Autoimmune Diseases)，Marcel Dekker，纽约，NY；Baert，等.(2003)新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)348：601-608；Milgrom，等.(1999)新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)341：1966-1973；Slamon，等.(2001)新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)344：783-792；Beniaminovitz，等.(2000)新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)342：613-619；Ghosh，等.(2003)新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)348：24-32；Lipsky，等.(2000)新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)343：1594-1602)。

[0086]可通过连续输注或以例如每天1次、每周1次或每周2-7次、每隔一周1次或每月1次的间隔给药，提供生物学拮抗剂，诸如抗体。抗体的总每周剂量通常为至少0.05μg/kg体重，更通常为至少0.2μg/kg，最通常为至少0.5μg/kg，典型地为至少1μg/kg，更典型地为至少10μg/kg，最典型地为至少100μg/kg，优选地为至少0.2mg/kg，更优选地为至少1.0mg/kg，最优选地为至少2.0mg/kg，最佳地为至少10mg/kg，更加最佳地为至少25mg/kg和最最佳地为至少50mg/kg(参见，例如Yang，等.(2003)新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)349：427-434；Herold，等.(2002)新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)346：1692-1698；Liu，等.(1999)神经与神经外科心理学杂志(J.Neurol.Neurosurg.Psych.)67：451-456；Portielji，等.(20003)癌免疫学免疫疗法(Cancer Immunol.Immunother.)52：133-144)。小分子治疗剂，例如肽模拟物、天然产物或有机化合物的要求剂量为(基于摩尔/kg基准)约与抗体或多肽相同。合适剂量由临床医生例如，采用本领域已知或推测的影响治疗或预计影响治疗的参数或因素确定。通常，开始剂量为稍微少于最佳剂量的量并且之后剂量以小的增幅增加，直到达到相对于任何不良副作用的所需或最佳作用。

[0087]典型地，由主治医生确定采用IL-17或IL-23拮抗剂的治疗方案并考虑患者的年龄、医疗史、疾病症状和不同类型药物的耐受性及给药方案。通常治疗方案被设计为抑制过度攻击性的免疫系统，使得身体最终再次自身调节，结果通常是在患者已经保持全身给药以抑制不适当的免疫应答有限长度的时间(例如1年)后，那么在没有自身免疫发病的复发时可递减并停止药物。有时确实发生重新开始发病，在这样的情况下患者必须再次接受治疗。

[0088]因此，在一些情况下，医生可给患者开出一定数目剂量的拮抗剂以服用特定的持续时间，之后停止用该拮抗剂的疗法。优选地，在其中一个或多个疾病急性症状消失的初始疗程之后，医生将继续激动剂疗法一些时间，其中在治疗停止之前逐渐减少所给予拮抗剂的量和/或次数。

[0089]本发明也期待其中IL-17拮抗剂与IL-23拮抗剂联合使用的治疗方案。这样的方案尤其可用于治疗急性期的AOID，其中IL-17拮抗剂抑制存在的Th₁₇细胞的活性，而IL-23拮抗剂防止新的Th₁₇细胞产生。这样的联合疗法可采用较低剂量的IL-17拮抗剂和/或给予IL-17拮抗剂较短的持续时间，提供对AOID的有效治疗。当症状减轻时，优选停止用IL-17拮抗剂的疗法，同时继续给予IL-23拮抗剂以防止产生新的可导致疾病复发的自身反应性Th₁₇细胞。可同时以单一组合物或以分开的组合物给予两种拮抗剂。或者，可以分开的时间间隔给予两种拮抗剂。也可使用不同剂量的拮抗剂。类似地，也可在急性期期间给予双特异性拮抗剂并逐渐取消，随后用IL-23拮抗剂治疗以保持对疾病的抑制。

[0090]治疗方案也可包括使用其它治疗剂以减轻AOID的一种或多种症状或者防止或减轻拮抗剂疗法的副作用。已经用于治疗AOID症状的治疗剂的实例为甾体和其它抗炎药。这样疗法的实例包括，但不限于甾体类，诸如地塞米松、氟米龙和泼尼松龙，以及非甾体抗炎药，诸如吲哚美辛、阿司匹林、氟比洛芬和双氯芬酸，抗代谢物(例如甲氨蝶呤、硫唑嘌呤)、转录因子抑制剂(例如环胞菌素、他克莫司)和DNA交联剂(例如环磷酰胺、苯丁酸氮芥)。靶标为细胞因子和它们受体的新药，其中许多通过抑制重要的Th1细胞因子而不是信号传导途径起作用，开始用于治疗患有葡萄膜炎的患者。这些药物包括TNF抑制剂，诸如英利昔单抗(Infliximab(Remicade，Centocor，Malvern，PA))、依那西普(Etanercept(Enbrel

，Amgen，Thousand Oaks，CA))和阿达木单抗(Adalimumab(Humira

，Abbott Laboratories，AbbottPark，IL))以及IL-2信号传导的特异性抑制剂，包括达克利珠单抗(Daclizumab(Zenapax

，Roche Laboratories，Nutley，NJ))和巴利西单抗(Basiliximab(Simulect

，Novartis Pharmaceutical Co.，East Hanover，NJ))。

[0091]应该理解，在此描述的其中使用两种或更多种不同治疗物质(例如IL-17拮抗剂与IL-23拮抗剂、IL-17拮抗剂与不拮抗IL-17或IL-23活性的治疗剂)的任何疗法中，不同治疗物质彼此联合给予，即可同时以相同的药用组合物或作为分开的药用组合物给予它们或者可在分开的时间并以不同顺序给予所述物质。

[0092]诊断患者AOID的存在典型地包括检查患者已知与这样疾病一致的症状。例如，前葡萄膜炎的典型表现包括疼痛、畏光和流泪过多(hyperlacrimation)。患者报告深度、不快的、累及眼睛与周围范围的疼痛。对光的相关敏感性可以是严重的。继发于增加的泪腺神经刺激，发生过度流泪，并且患者未报告异物感。如果存在粘连或睫状体假膜(cyclitic membranes)，视敏度可在轻微模糊至显著视觉丧失范围内变化。检查可展现轻微至中度眼睑肿胀，导致假睑下垂。结膜和巩膜外层的深度、角膜缘周围充血是典型的，尽管睑结膜特性正常。角膜可呈现轻微水肿。

[0093]前葡萄膜炎的特征体征包括前房中的细胞与红肿。如果前房反应显著，可存在称作角膜后沉着物的小的灰至棕色内皮沉积物。那么这可导致内皮细胞机能障碍和角膜水肿。虹膜观察结果可包括粘连于晶状体囊(后粘连)，或者不太经常地粘连于角膜周围(前粘连)。另外，肉芽肿小结可出现于虹膜表面。由于在累及的眼中睫状体的分泌张力减退，眼内压最初减小。然而，随着反应持续，炎性副产物可在小梁蓄积。如果该碎屑显著堆积，并且如果睫状体重新开始正常分泌排出，IOP可急剧升高，导致继发性葡萄膜炎青光眼。

[0094]为了鉴别易患AOID的患者，典型地采集个人和家庭病史，并且可包括进行遗传实验。例如，一些个体具有与自身免疫疾病过程相关的、易患葡萄膜炎的遗传体质。这些“基因”中最常见的是可仅易于诱发葡萄膜炎或者也诱发血清阴性脊柱关节病变和肠病性关节病变的HLA B27单一型。实例为强直性脊柱炎、反应性关节炎(赖特尔氏综合症(Reiters syndrome))、牛皮癣关节炎、易激惹性肠病和克罗恩氏(Crohn′s)病。如果患者存在任何这些自身免疫疾病的家族史，或者患者已经被诊断患有这样的疾病，则也可诊断为易患AOID。

[0095]可采用诊断性检测方法，诸如，例如受侵袭眼的眼部炎症的量或炎性细胞因子水平的炎性症状减少或发生，确定拮抗剂疗法用于在具体患者中预防或治疗AOID的有效性。眼部炎症症状很大程度上取决于眼睛的损伤区域。最通常的体征和症状是：疼痛发红、悬浮物、视力减退和对光敏感。例如通过使所研究炎性细胞因子的结合化合物与来自患者眼睛的样品以及与来自对照受试者的样品，或来自未损伤组织的样品，或来自患者的液体接触，然后比较通过结合化合物检测的细胞因子水平，可测量炎性细胞因子的水平。可提供来自对照受试者或对照样品的表达或活性作为预先确定的值，例如从统计学上适当的对照受试者组所获得的值。

实施例

[0096]本发明基于IL-23p19敲除(KO)小鼠并给予自身免疫葡萄膜炎鼠模型抗-IL-23p19和抗-IL-17抗体的研究。这些试验根据在以下部分II中描述的材料和方法实施。

I.结果与讨论

[0097]在涉及IL-23p19KO小鼠的实验中，将IL-23p19KO(IL-23缺乏)小鼠的EAU易感性与IL-12p35 KO(IL-12缺乏)和IL-12p40KO(IL-12和IL-23缺乏)小鼠的EAU易感性相比较。所有小鼠为C57BL/6背景，并且如在以下通法中描述的那样进行EAU诱导和记分。发现IL-12p35对于产生IRBP特异性眼组织破坏不是必需的。相反，IL-23p19对EAU发展是必需的(表1)。衍生于IRBP免疫小鼠的淋巴结细胞培养物的细胞因子分析显示，EAU易感的IL-12缺乏小鼠(IL-12p35KO)与IL-23缺乏小鼠(IL-23p19KO和IL-12p40KO)相比较具有升高水平的IFN-γ、IL-6、IL-17和IL-18。通过耳肿胀实验检验对3KO株的IRBP迟发性过敏(DTH)反应显示，应答于IRBP的DTH与各自小鼠的EAU评分具有很好的相关性，与野生型(WT)相比较，对p19与p40KO具有明显更低水平的应答和对p35KO具有明显更高水平的应答。

表1：IL-23(但不是IL-12)对EAU发展是必需的

	EAU平均评分+/-SE	DTH特异性肿胀+/-SE(μm×10^-1)	IFN-γ(ng/ml)	IL-6(ng/ml)	IL-17(ng/ml)	IL-18(ng/ml)
	EAU平均评分+/-SE	DTH特异性肿胀+/-SE(μm×10^-1)	IFN-γ(ng/ml)	IL-6(ng/ml)	IL-17(ng/ml)	IL-18(ng/ml)	野生型IL-12p35KOIL-23p19KOIL-12p40KO	0.21±0.110.57±0.1200	44±757±225±422±3	39166.5＜1	3.21.90.55.08	2.24.91.20.85	0.250.290.100.11

[0098]通过在高易感性B10.RIII株的葡萄膜炎小鼠模型上采用抗小鼠IL-23p19抗体实验，使这些结果得到进一步支持。据发现，抗小鼠IL-23p19抗体治疗显著阻断免疫介导的眼部炎症。如通过免疫后11天收集的眼睛组织病理学测定的那样，在每只小鼠每隔一天330μg的剂量下，抗IL-23p19治疗小鼠的EAU疾病指数与抗同种型抗体治疗的指数和无抗体对照组的指数相比较显著减小(表2)。另外，在阻断EAU中，抗IL-23p19疗法如泼尼松一样有效。IL-17，但不是IFN-γmRNA在抗IL-23p19治疗小鼠的眼中表达水平低于对照组，提示靶向IL-23通过阻断IL-17产生细胞的浸润或防止致病IL-17产生细胞在眼中的表达抑制EAU。抗IL-23p19治疗小鼠的中性粒细胞弹性蛋白酶和髓过氧化物酶mRNA水平可与首次用于实验的以及泼尼松对照组比较，而“无抗体”和同种型对照治疗的小鼠在表达这些炎性基因中呈现10-100倍增加。其它促炎因子例如IL-1β、TNF、IL-6、NOS2和COX2在抗IL-23p19治疗小鼠中稍微减少。这些结果证实了靶向IL-23抑制自身免疫葡萄膜炎的发展。

表2：抗IL-23p19治疗抑制EAU和炎性细胞因子在眼中的表达

[0099]还进行了比较用抗IL-23p19抗体治疗与用抗IL-12p40抗体治疗的另一组实验。在该实验中，免疫接种前一天开始，小鼠每隔一天接受500μg所指示的抗体，并在免疫接种后17天或对照组疾病发作后6-7天时收集眼睛和淋巴器官。数据表明抗IL-23p19抗体在阻断葡萄膜炎发作方面与抗IL-12p40抗体一样有效。数据显示在表3中。

[00100]另外，通过多重ELISA评价细胞因子蛋白在这些小鼠淋巴结的表达。这些数据显示，用抗IL-23拮抗剂治疗减少Th1和促炎性细胞因子的产生。数据显示在表3中。

表3：抗IL-23p19治疗抑制EAU和对葡萄膜炎抗原的系统性细胞因子应答

样品	个体动物眼睛的EAU评分	IL-2pg/ml	IL-4pg/ml	IL-5pg/ml	IL-6pg/ml	IL-10pg/ml	IFN-γpg/ml	TNF-αpg/ml	IL-12pg/ml	IL-17pg/ml
样品	个体动物眼睛的EAU评分	IL-2pg/ml	IL-4pg/ml	IL-5pg/ml	IL-6pg/ml	IL-10pg/ml	IFN-γpg/ml	TNF-αpg/ml	IL-12pg/ml	IL-17pg/ml	对照组	3，3，3，3，3，3，3，3，0，0.25	247.6	0.4	＜3.1	145.7	8.6	1295.3	46.5	2.7	72.9
抗IL-23p19	3，3，0，0，0，0，0，0，0，0	115.0	1.3	19.1	163.7	5.5	1453.3	87.5	2.1	37.0	对照组	3，3，3，3，3，3，3，3，0，0.25	247.6	0.4	＜3.1	145.7	8.6	1295.3	46.5	2.7	72.9
抗IL-23p19	3，3，0，0，0，0，0，0，0，0	115.0	1.3	19.1	163.7	5.5	1453.3	87.5	2.1	37.0	抗同种型	3，3，3，3，3，3，3，3，3，3	205.2	1.4	＜3.1	206.7	12.4	2759.6	51.2	3.1	198.0
抗IL-12p40	0，25，0，0，0，0，0，0，0，0，0	101.9	0.4	＜3.1	26.5	4.4	305.5	16.6	＜0.8	29.7	抗同种型	3，3，3，3，3，3，3，3，3，3	205.2	1.4	＜3.1	206.7	12.4	2759.6	51.2	3.1	198.0

[00101]该实验的第二部分检验其中需要IL-23的致病过程阶段。免疫接种后7天开始，小鼠每隔一天用500μg抗IL-23p19抗体治疗，并把疾病与自免疫接种前一天治疗(如以上)的小鼠相比较。可通过用抗-p19或抗-p40抗体早期治疗预防EAU。然而，当在免疫接种后7天开始治疗时，此时致葡萄膜炎效应器T细胞已经接触抗原并可自LN和脾脏分离，EAU发展不能中止，并且由所治疗小鼠呈现的疾病评分与对照组相似。这提示对IL-23的需求发生在发病机理的早期。数据显示在表4中。

表4：用抗-p19抗体治疗预防但不逆转EAU

[00102]总之，这些实验证明，在动物模型中，IL-23的抑制作用防止但不逆转葡萄膜炎，并且表明用IL-23拮抗剂治疗通过防止新的T细胞补充进入效应器库，从而减小疾病严重性和使进展中断，应对人慢性葡萄膜炎具有有益的作用。

[00103]为了试验IL-17缺乏是否可影响EAU发展，用IRBP的致葡萄膜炎方法接种免疫IL-17A^-/-小鼠(参见，例如Nakae等.(2002)免疫(Immunity)17：375-387)。通过遗传性IL-17缺乏抑制EAU仅是部分的(表5)。在IL-17^-/-小鼠中的EAU评分相对适当的减少，可通过以下事实解释：这些小鼠缺乏细胞因子的IL-17A同种型的，并且在先天性缺乏条件下可用通常更少量产生的IL-17F同种型补偿。

表5：遗传性IL-17缺乏减少但是不消除EAU敏感性

[00104]相反，在野生型小鼠中，或者在整个疾病过程中，或者仅贯穿在效应器期(开始7天)中，用IL-17A抗体拮抗IL-17A是具保护性的。重要的是，不象IL-23抑制作用，当免疫接种后7天开始给药时，当已经产生致葡萄膜炎效应器时，拮抗IL-17可抑制疾病。EAU评分减少与和免疫反应、迟发型超敏反应(DTH)及抗原特异性LN细胞增殖有关的减少相关。因此，IL-17对EAU发病机理起作用，并且不像IL-23，似乎参与疾病的效应器期。数据显示于表6中。

表6：用抗IL-17A抗体治疗预防并逆转EAU

部分II.材料与方法

A.通法

[00105]分子生物学的标准方法在(Maniatis等.(1982)分子克隆，实验室手册(Molecular Cloning，A Laboratory Manual)，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)，冷泉港(Cold SpringHarbor)，NY；Sambrook和Russell(2001)分子克隆(Molecular Cloning)，第3版，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY；Wu(1993)重组DNA(RecombinantDNA)，第217卷，学术出版社(Academic Press)，圣地亚哥(San Diego)，CA)中得到描述。标准方法也发表于Ausbel等.(2001)分子生物学中的现行方法(Current Protocols in Molecular Biology)，第1-4卷，John Wileyand Sons，Inc.纽约(New York)，NY，其中描述了在细菌细胞中克隆和DNA突变(第1卷)，在哺乳动物细胞和酵母中的克隆(第2卷)、糖缀合物与蛋白表达(第3卷)及生物信息学(第4卷)。

[00106]用于蛋白纯化的方法包括免疫沉淀法、色谱法、电泳法、离心法和结晶法，在(Coligan等.(2000)蛋白质科学中的现行方法(Current Protocols in Protein Science)，第1卷，John Wiley and Sons，Inc.，纽约(New York))中得到描述。化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白产生、蛋白糖基化得到描述(参见，例如Coligan等.(2000)蛋白质科学中的现行方法(Current Protocols in Protein Science)，第2卷，John Wiley and Sons，Inc.，纽约(New York)；Ausubel等.(2001)分子生物学中的现行方法(Current Protocols in Molecular Biology)，第3卷，John Wiley and Sons，Inc.，NY，NY，第16.0.5-16.22.17页；Sigma-Aldrich，Co.(2001)用于生命科学研究的产物(Products for LifeScience Research)，St.Louis，MO；第45-89页；Amersham PharmaciaBiotech(2001)BioDirectory，Piscataway，N.J.，第384-391页)。多克隆和单克隆抗体的产生、纯化和断裂得到描述(Coligan等.(2001)免疫学中的现行方法(Current Protcols in Immunology)，第1卷，John Wiley和Sons，Inc.，纽约(New York)；Harlow和Lane(1999)使用抗体(UsingAntibodies)，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor LaboratoryPress)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY；Harlow和Lane，上文)。用于鉴别配体/抗体相互作用的标准技术是可以得到的(参见，例如Coligan等.(2001)免疫学中的现行方法(Current Protcols in Immunology)，第4卷，John Wiley，Inc.，纽约(New York))。

[00107]用于流式细胞术的方法，包括荧光激活细胞分类术(FACS)的方法是可以得到的(参见，例如Owens等.(1994)用于临床实验室实践的流式细胞术原理(Flow Cytometry Principles for ClinicalLaboratory Practice)，John Wiley and Sons，Hoboken，NJ；Givan(2001)流式细胞术(Flow Cytometry)，第2版；Wiley-Liss，Hoboken，NJ；Shapiro(2003)实用流式细胞术(Practical Flow Cytometry)，John Wiley and Sons，Hoboken，NJ)。例如用作诊断试剂的、适用于修饰核酸的荧光试剂，包括核酸引物和探针、多肽和抗体是可以得到的(Molecular Probes(2003)产品目录，分子探针(Catalogue，Molecular Probes)，Inc.，Eugene，OR；Sigma-Aldrich(2003)产品目录(Catalogue)，St.Louis，MO)。

[00108]免疫系统的组织学标准方法得到描述(参见，例如Muller-Harmelink(编辑)(1986)人胸腺：组织病理学与病理学(HumanThymus：Histopathology and Pathology)，Springer Verlag，纽约，NY；Hiatt等.(2000)组织学的彩色图谱(Color Atlas of Histology)，Lippincott，Williams和Wilkins，Phila，PA；Louis等.(2002)基础组织学：正文与图谱(Basic Histology：Text and Atlas)，McGraw-Hill，纽约，NY)。

[00109]用于测定例如抗原片段、前导序列、蛋白折叠、功能域、糖基化位点和序列对比的软件包和数据库是可以得到的(参见，例如GenB ank，Vector NTI

Suite(Informax，Inc，Bethesda，MD)；GCGWisconsin Package(Accelrys，Inc.，圣地亚哥(San Diego)，CA)；DeCypher

(TimeLogic Corp.，Crystal Bay，Nevada)；Menne等.(2000)生物信息学(Bioinformatics)16：741-742；Menne等.(2000)生物信息学应用注解(Bioinformatics Applications Note)16：741-742；Wren等.(2002)计算机方法程序生物医学(Comput.Methods Programs Biomed).68：177-181；von Heijne(1983)欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem).133：17-21；von Heijne(1986)核酸研究(Nucleic Acids Res).14：4683-4690)。

B.动物

[00110]IL-23 KO(p19KO)在Cua等.(2003)自然(Nature)421：744-748中得到描述。IL-17^-/-小鼠如在Nakae等.(2002)免疫(Immunity)17：375-387中描述的那样产生。IL-12p35KO(P35KO)、IL-12p40KO(P40KO)、IFN-γKO(GKO)(全部基于C57BL/6背景)和C57BL/6及B1ORIII小鼠购自Jackson Laboratories。将动物保持在无特异性病原体的设施中，并让其自由取用水和标准实验室食物。动物照顾和使用符合特定的指南和视觉与眼科学研究协会对动物在眼和视觉研究中的用途的陈述。

C.EAU诱导与记分

[00111]CFA购自Sigma。结核分枝杆菌(MycobacteriumTuberculosis)株H37RA购自Thomas Scientific。纯化的Bordetella PT购自Sigma-Aldrich。如先前描述的那样，采用Con A-琼脂糖(Sepharose)亲和性层析法和快速液相层析法自牛视网膜分离IRBP(参见，例如Pepperberg等.(1991)光化学光生物学(Photochem Photobiol)54：1057-1060)。IRBP制品被等分并贮存于-70℃。人IRBP-衍生的肽161-180(Karabezekian，Z.等，(2005)Invest Ophthalmol Vis Sci.46(10)：3769-76)通过Fmoc化学(模型432A肽合成仪；应用生物系统，Foster City，CA)合成。

[00112]中和抗小鼠IL-23和抗小鼠IL-17A抗体由Schering-Plough Biopharma(Palo Alto，CA)提供。抗小鼠IL-23先前已有描述(参见，例如Langrish等.(2005)J Exp Med 201：233-240)。C17.8(抗-IL-12p40，大鼠IgG2a)杂交瘤由Wistar Institute，费城，PA提供。腹水中产生的并经离子交换HPLC纯化的单克隆抗体由HarlanBioproducts for Science(Indianapolis，IN)提供。FITC-标记的抗小鼠CD4(克隆-L3T4)、PE-标记抗小鼠IL-17(克隆-TC11-18H10)和APC标记抗-IFN-γ(克隆-XMG1.2)及细胞因子分泌阻断剂(GolgiStop^TM)购自Becton Dickinson(圣地亚哥，CA)。PMA、离子霉素(Ionomycin)购自LC实验室(Boston，MA)。

[00113]通过用150μg的IRBP自动免疫接种C57BL/6小鼠和用7μg IRBP肽161-180自动免疫接种B10RIII小鼠(Jackson Labs，Maine)诱导EAU。对于C57BL/6小鼠，在免疫接种同时，通过腹膜内注射含有2％正常小鼠血清的PBS中的百日咳杆菌毒素(0.5μg/小鼠)，而在一些实验中，IRBP中掺入(spiked)500μg的IRBP肽1-20(Avichezer，D.等.(2000)，Invest Ophthalmol Vis Sci 41(1)：127-31)以增强在该株可见的通常适当的疾病评分。用已经补充了结核分枝杆菌(MycobacteriumTuberculosis)株H37RA的CFA将抗原溶液以1∶1v/v乳化至2.5mg/ml。总计200μl乳剂被分成3个位点注射s.c.(尾底部和两条大腿)。

[00114]或者，通过过继转移致葡萄膜炎T细胞系诱导EAU(参见以下)。腹膜内注射用抗原新鲜刺激的1-2百万细胞。在扩张瞳孔后，于双目显微镜下经眼底镜检查，并采用基于炎性损伤程度的标准以0-4的评分评定等级评价临床EAU，所述标准如在别处详细描述(参见，例如Agarwal和Caspi，(2004)分子医学方法(Methods Mol Med)102：395-419和Chan等.(1990)自身免疫学杂志(J Autoimmun)3：247-255)。将在免疫接种后17-21天或在过继转移后14天收获的眼睛在4％磷酸盐缓冲的戊二醛中预固定1小时(以防止视网膜人为地脱离)，然后将其转移至10％磷酸盐缓冲的甲醛中直到加工处理。将固定并脱水的组织于甲基丙烯酸酯中包埋，并用标准H & E将4-至6-μm切片染色。以盲法对通过瞳孔-视觉神经平面切割的眼睛切片计分。基于损伤的类型、数目和大小，采用先前描述的标准，以半点增幅在0-4分基础上将EAU严重性划分等级(参见Agarwal和Caspi，上文；和Chan等.上文)。

D.免疫应答的测定

[00115]通过耳肿胀实验评价对IRBP的迟发型超敏反应(DTH)(参见例如Tarrant等.(1998)免疫学杂志(J Immunol)161：122-127)。为了原代培养物中的Ag-特异性淋巴细胞增殖和细胞因子产生，如所指出的那样，在每一个实验结束时收集脾脏和引流淋巴结(腹股沟和髂的)(每组5只)。淋巴样细胞在组内会集并基本上如所描述的那样用在三份0.2-ml培养物中分级的Ag剂量孵育(参见例如Avichezer等.(2000)Invest Ophthalmol Vis Sci 41：127-131)。通过[³H]胸苷摄取测定增殖。采用Pierce Multiplex SearchLight Arrays技术(参见例如Moody等.(2001)生物技术(Biotechniques)31：186-190，192-184)，定量48小时Ag-刺激的上清液中的细胞因子。

E.IL-23、IL-I2p40和IL-17的中和

[00116]如所指出的那样，用IRBP或IRBP致葡萄膜炎肽(161-180)免疫接种B10RIII小鼠。用每剂0.5mg的抗-p19、抗-p40或抗-IL-17腹膜内注射小鼠。在免疫接种后第1天开始至第15天，包括引发期和效应期(预防方案)，或者在第7天至第15天，仅包括效应期(治疗)，每隔1天给予治疗。给予对照组相同的同种型方案(大鼠IgG1)。在疾病发作后的第17、6-7天时收集眼睛和淋巴器官。

F.致葡萄膜炎T细胞系

[00117]对人IRBP(p16-180)肽特异性的致葡萄膜炎Th1细胞系已有描述(参见，例如Silver等.(1995)Invest Ophthalmol Vis Sci36：946-954)。简短地说，该细胞系衍生于用人IRBP肽161-180免疫接种的B10RIII小鼠的引流淋巴结，通过在抗原、IL-12和抗IL-4存在下培养体外向Th1表型极化。之后，通过改变在IL-2中的扩展周期保养细胞，并在同源脾细胞存在下每2-3周用1μg/ml的p161-180再刺激，用30000拉德照射，作为APCs。对于EAU诱导，用Ag刚刚刺激48小时的细胞i.p.注入初始同源接受者。

G.胞内IL-17和IFNγ的检测

[00118]短刺激：在经照射的APCs存在下，用1μg/ml的IRBP肽161-180刺激T细胞系24小时，并在最后4小时加入GolgiStop^TM蛋白转移抑制剂(BD Biosciences，San Jose，CA)。之后，在Ficoll上分离细胞，洗涤并进行针对胞外CD4的染色。然后洗涤细胞，固定，伴随Cytofix/Cytoperm^TM固定和透化缓冲液(BD Biosciences)透化处理，并用PE-共轭的抗IL-17和APC-共轭的抗IFN-γ染色用于FACS分析。

[00118]长刺激：在经照射的APCs存在下，用抗原(1μg/ml IRBP肽161-180)或抗原+rIL-23(10ng/ml)或抗原+IL-23+抗IFN-γ(10μg/ml)刺激T细胞系5天。在最后4小时孵育期间，伴随加入GolgiStop^TM蛋白转移抑制剂(BD Biosciences)，用PMA和离子霉素(Ionomycin)刺激细胞。之后，如以上提及的那样处理细胞并进行针对胞内IL-17和IFN-γ的染色。

H.IL-17和IFNγ实验

[00120]在经照射的APCs存在下，在用1μg/ml IRBP肽161-180刺激48小时后，将T细胞系过继转移(2×10⁶/小鼠)i.v.至首次用于实验的Thy1.1/.2杂合幼稚小鼠。90小时后收集脾脏，并在最后4小时，在PMA、离子霉素和GolgiStop^TM蛋白转移抑制剂(BD Biosciences)存在下，用IRBP肽161-180刺激脾细胞24小时。之后如以上提及的那样处理细胞并进行针对胞内IL-17和IFN-γ的染色。

I.统计分析

[00121]实验重复至少两次，并且通常为三次或更多次。表格显示自代表性实验汇编的数据。通过用于比例线性趋势构成比例的Snedecor和Cochran氏检验(非参数的、基于频率的)(参见，例如Snedecor和Cochran(1967)统计学方法(Statistical Methods)衣阿华洲立大学出版社(Iowa State University Press)，Ames，IA：第248页)对EAU评分进行统计分析。每只小鼠(两只眼睛的平均值)作为一个统计学事件处理。DTH和增殖经t-检验检测(双侧)。细胞因子应答对混合样本进行实验(通常每组5只小鼠)。

[00122]如同将对于本领域技术人员而言显而易见的那样，可在不背离其精神和范围下对本发明作出许多修改与变更。本文描述的具体实施方案，仅以实施例的方式提供，并且通过附加的权利要求书的条款以及授予这样的权利要求的等价物全部范围，对本发明加以限定；而且本发明不受已经在此通过实施例呈现的具体实施方案的限制。

[00123]本文的所有引用文献通过相同程度地参考结合于本文中，好像每一个单个出版物或专利文件被具体而各自地指明通过参考结合于本文。然而，任何出版物或专利文件在本文的引用并不意欲承认所引用的参考文献是有关的先有技术，也不构成对引用这些文献之日的内容或有效的现有技术的认可。

Claims

1.一种治疗患有自身免疫性眼部炎性疾病(AOID)的患者的方法，该方法包括给予所述患者IL-17拮抗剂。

2.权利要求1的方法，其中所述患者已经被诊断为患有由公认的自身免疫病因引起的眼部炎症。

3.权利要求1的方法，其中特定剂量的IL-17拮抗剂在第一个疗程期间以特定的时间间隔给予。

4.权利要求3的方法，其中第一个疗程在AOID的一种或多种症状消失后结束。

5.权利要求4的方法，其中第一个疗程在全部AOID症状消失后30天内结束。

6.权利要求4的方法，其中所给予IL-17拮抗剂的剂量在第一个疗程结束时开始的第二个疗程期间逐渐减少。

7.权利要求6的方法，其中第二个疗程的持续时间为至少1年。

8.权利要求1的方法，其中IL-17拮抗剂为单克隆抗体或单克隆抗体片段。

9.权利要求8的方法，其中IL-17拮抗剂为人源化单克隆抗体或完全人源单克隆抗体。

10.权利要求8的方法，其中IL-17拮抗剂为人源化单克隆抗体片段或完全人源单克隆抗体片段。

11.权利要求8的方法，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段是聚乙二醇化的。

12.权利要求8的方法，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段结合于IL-17并抑制IL-17的活性。

13.权利要求8的方法，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段结合于IL-17RA或IL-17RC并抑制IL-17RA或IL-17RC的活性。

14.权利要求1的方法，其中IL-17拮抗剂为双特异性抗体或双特异性抗体片段，其结合于：

a)IL-17和IL-23p19；或

b)IL-17和IL-23R；

并抑制它们的活性。

15.权利要求3的方法，该方法还包括在第一个疗程期间给予所述患者IL-23拮抗剂。

16.权利要求15的方法，其中特定剂量的IL-23拮抗剂在第一个疗程期间以特定的时间间隔给予。

17.权利要求16的方法，其中第一个疗程在AOID的一种或多种症状消失后结束。

18.权利要求16的方法，其中第一个疗程在全部AOID症状消失后30天内结束。

19.权利要求18的方法，其中IL-17拮抗剂和IL-23拮抗剂中每一种的剂量在第一个疗程结束时开始的第二个疗程期间逐渐减少。

20.权利要求18的方法，其中IL-17拮抗剂的剂量在第一个疗程结束时开始的第二个疗程期间逐渐减少，并且其中第二个疗程期间所给予IL-23拮抗剂的剂量与在第一个疗程中所给予的剂量相同，并且其中第二个疗程在停止使用IL-17拮抗剂的疗法时结束。

21.权利要求20的方法，其中第二个疗程的持续时间在1-3个月之间。

22.权利要求20的方法，该方法还包括在第二个疗程结束时开始的第三个疗程期间给予IL-23拮抗剂。

23.权利要求22的方法，其中第三个疗程的持续时间在6-12个月之间。

24.权利要求22的方法，其中IL-23拮抗剂的剂量在第三个疗程期间逐渐减少。

25.权利要求15的方法，其中IL-23拮抗剂为单克隆抗体或单克隆抗体片段。

26.权利要求25的方法，其中IL-23拮抗剂为人源化单克隆抗体或完全人源单克隆抗体。

27.权利要求25的方法，其中IL-23拮抗剂为人源化单克隆抗体片段或完全人源单克隆抗体片段。

28.权利要求25的方法，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段是聚乙二醇化的。

29.权利要求25的方法，其中IL-23拮抗剂结合于IL-23p19并抑制IL-23p19的活性。

30.权利要求25的方法，其中IL-23拮抗剂结合于IL-23R并抑制IL-23R的活性。

31.权利要求1的方法，其中AOID为葡萄膜炎。

32.权利要求1的方法，该方法还包括给予不拮抗IL-17或IL-23活性的治疗剂，其中所述治疗剂能够缓解AOID的至少一种症状或IL-17拮抗剂的至少一种副作用。

33.权利要求32的方法，其中所述治疗剂能够缓解AOID的至少一种症状并且为甾体、非甾体抗炎药或TNF抑制剂。

34.一种预防性治疗被诊断为易患自身免疫性眼部炎性疾病(AOID)的患者的方法，该方法包括给予所述患者选自IL-23拮抗剂、IL-17拮抗剂及IL-17和IL-23两者的拮抗剂的拮抗剂。

35.权利要求34的方法，其中易感性诊断基于之前已患有眼部炎症的患者。

36.权利要求34的方法，其中易感性诊断基于正在罹患全身性自身免疫疾病的患者。

37.权利要求36的方法，其中所述拮抗剂为单克隆抗体或单克隆抗体片段。

38.权利要求37的方法，其中所述拮抗剂为人源化单克隆抗体或完全人源单克隆抗体。

39.权利要求37的方法，其中所述拮抗剂为人源化单克隆抗体片段或完全人源单克隆抗体片段。

40.权利要求37的方法，其中所述抗体或抗体片段是聚乙二醇化的。

41.权利要求37的方法，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段结合于IL-23p19或IL-23R并抑制IL-23p19或IL-23R的活性。

42.权利要求41的方法，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段结合于IL-23p19并抑制IL-23p19的活性。

43.权利要求37的方法，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段结合于IL-17或IL-17RA并抑制IL-17或IL-17RA的活性。

44.权利要求43的方法，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段结合于IL-17并抑制IL-17的活性。

45.权利要求34的方法，其中特定剂量的拮抗剂在第一个疗程期间以特定的时间间隔给予。

46.权利要求45的方法，其中第一个疗程的持续时间在3个月-2年之间。

47.权利要求46的方法，其中第一个疗程的持续时间在6个月-1年之间。

48.权利要求45的方法，其中所述拮抗剂的剂量在第一个疗程结束时开始的第二个疗程期间逐渐减少。

49.权利要求48的方法，其中第二个疗程的持续时间在1-6个月之间。

50.一种治疗患者的自身免疫性眼部炎性疾病(AOID)的方法，该方法包括给予所述患者IL-23拮抗剂。

51.权利要求50的方法，其中IL-23拮抗剂为结合于IL-23p19或IL-23R并抑制IL-23p19或IL-23R的活性的单克隆抗体或单克隆抗体片段。

52.权利要求50的方法，其中特定剂量的IL-23拮抗剂在第一个疗程期间以特定的时间间隔给予。

53.权利要求50的方法，其中第一个疗程的持续时间在3个月-2年之间。

54.权利要求51的方法，其中第一个疗程的持续时间在6个月-1年之间。

55.权利要求50的方法，其中IL-23拮抗剂的剂量在第一个疗程结束时开始的第二个疗程期间逐渐减少。

56.IL-17拮抗剂在制备用于治疗患者的自身免疫性眼部炎性疾病(AOID)的药用组合物中的用途。

57.权利要求56的用途，其中所述药用组合物用于在第一个疗程期间以特定的时间间隔给予特定剂量的IL-17拮抗剂。

58.权利要求57的用途，其中第一个疗程在AOID的一种或多种症状消失后结束。

59.权利要求57的用途，其中第一个疗程在全部AOID症状消失后30天内结束。

60.权利要求57的用途，其中所述药用组合物中IL-17拮抗剂的剂量在第一个疗程结束时开始的第二个疗程期间逐渐减少。

61.权利要求60的用途，其中第二个疗程的持续时间为至少1年。

62.权利要求56-61中任何一项的用途，其中IL-17拮抗剂为单克隆抗体或单克隆抗体片段。

63.权利要求62的用途，其中IL-17拮抗剂为人源化单克隆抗体或完全人源单克隆抗体。

64.权利要求62的用途，其中IL-17拮抗剂为人源化单克隆抗体片段或完全人源单克隆抗体片段。

65.权利要求62的用途，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段是聚乙二醇化的。

66.权利要求62的用途，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段结合于IL-17并抑制IL-17的活性。

67.权利要求62的用途，其中所述单克隆抗体或单克隆抗体片段结合于IL-17RA或IL-17RC并抑制IL-17RA或IL-17RC的活性。

68.权利要求56-61中任何一项的用途，其中IL-17拮抗剂为双特异性抗体或双特异性抗体片段，其结合于：

a)IL-17和IL-23p19；或

b)IL-17和IL-23R；

并抑制它们的活性。

69.权利要求56-61中任何一项的用途，其中IL-23拮抗剂与药用组合物一起给予。

70.权利要求69的用途，其中所述药用组合物和IL-23拮抗剂同时或连续地给予。

71.权利要求70的用途，其中IL-23拮抗剂为人源化单克隆抗体、完全人源单克隆抗体、人源化单克隆抗体片段或完全人源单克隆抗体片段。

72.权利要求71的用途，其中IL-23拮抗剂结合于IL-23p19或IL-23R并抑制IL-23p19或IL-23R的活性。

73.IL-23拮抗剂在制备用于治疗患者的自身免疫性眼部炎性疾病(AOID)的药用组合物中的用途，其中所述药用组合物与IL-17拮抗剂一起给予。

74.权利要求73的用途，其中所述药用组合物用于在第一个疗程期间以特定的时间间隔给予特定剂量的IL-23拮抗剂。

75.权利要求74的用途，其中在第一个疗程结束时开始的第二个疗程期间还给予所述药用组合物，并且其中所给予的IL-17拮抗剂的剂量在第二个疗程期间逐渐减少。

76.权利要求75的用途，其中第二个疗程在停止使用IL-17拮抗剂的疗法时结束。

77.权利要求75的用途，其中第二个疗程的持续时间在1-3个月之间。

78.权利要求75的用途，其中在第二个疗程结束时开始的第三个疗程期间还给予所述药用组合物。

79.权利要求78的用途，其中第三个疗程的持续时间在6-12个月之间。

80.权利要求78的用途，其中所述药用组合物中IL-23拮抗剂的剂量在第三个疗程期间逐渐减少。

81.权利要求73-80中任何一项的用途，其中所述药用组合物与IL-17拮抗剂同时或连续地给予。

82.权利要求73-80中任何一项的用途，其中IL-23拮抗剂为人源化单克隆抗体、完全人源单克隆抗体、人源化单克隆抗体片段或完全人源单克隆抗体片段。

83.权利要求82的用途，其中IL-23拮抗剂结合于IL-23p19或IL-23R并抑制IL-23p19或IL-23R的活性。

84.权利要求73-80中任何一项的用途，其中IL-17拮抗剂为人源化单克隆抗体、完全人源单克隆抗体、人源化单克隆抗体片段或完全人源单克隆抗体片段。

85.权利要求82的用途，其中IL-17拮抗剂结合于IL-17、IL-17RA或IL-17RC并抑制IL-17、IL-17RA或IL-17RC的活性。

86.权利要求56或73的用途，其中AOID为葡萄膜炎。

87.权利要求56或73的用途，其中所述药用组合物还包含不拮抗IL-17或IL-23活性的治疗剂，其中所述治疗剂能够缓解AOID的至少一种症状或拮抗剂的至少一种副作用。

88.权利要求87的用途，其中所述治疗剂能够缓解AOID的至少一种症状，并且为甾体、非甾体抗炎药或TNF抑制剂。

89.选自IL-23拮抗剂、IL-17拮抗剂和IL-17与IL-23两者的拮抗剂的拮抗剂在制备用于预防性治疗被诊断为易患眼部自身免疫性炎症的患者的药用组合物中的用途。

90.权利要求89的用途，其中易感性诊断基于之前已患有眼部自身免疫性炎症的患者。

91.权利要求89的用途，其中易感性诊断基于患有全身性自身免疫疾病的患者。

92.权利要求89的用途，其中所述拮抗剂为IL-23拮抗剂。

93.权利要求92的用途，其中所述拮抗剂为人源化单克隆抗体、完全人源单克隆抗体、人源化单克隆抗体片段或完全人源单克隆抗体片段。

94.权利要求93的用途，其中所述抗体或抗体片段结合于IL-23或IL-23R并抑制IL-23或IL-23R的活性。

95.权利要求89-94中任何一项的用途，其中所述药用组合物用于在第一个疗程期间以特定的时间间隔给予特定剂量的拮抗剂。

96.权利要求95的用途，其中第一个疗程的持续时间在3个月-2年之间。

97.权利要求96的用途，其中第一个疗程的持续时间在6个月-1年之间。

98.权利要求97的用途，其中所述药用组合物中拮抗剂的剂量在第一个疗程结束时开始的第二个疗程期间逐渐减少。

99.权利要求98的用途，其中第二个疗程的持续时间在1-6个月之间。

100.一种用于治疗自身免疫炎性疾病(AOID)的制备的药品，所述药品包括

(a)含有IL-17拮抗剂的第一种药剂；和

(b)含有IL-23拮抗剂的第二种药剂。

101.权利要求100的制备的药品，所述药品还包含用于根据权利要求15-24中任何一项方法给予药剂的说明书。