CN101287736A - 用作syk抑制剂的吡咯并嘧啶衍生物 - Google Patents
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Abstract
式(I)的吡咯并嘧啶衍生物为脾酪氨酸激酶(Syk)抑制剂，因而对于异常Syk活性相关的疾病和病症的治疗，尤其是对于炎性和变应性疾病的治疗，具有潜在的治疗益处。
Description
发明领域
本发明涉及吡咯并嘧啶衍生物、含该衍生物的组合物和药物，以及制备和应用该化合物、组合物和药物的方法。这类吡咯并嘧啶衍生物对于与异常Syk活性相关的疾病或病症的治疗，尤其是对于炎性和变应性疾病的治疗，具有潜在的治疗益处。
背景技术
脾酪氨酸激酶(Syk)是一种蛋白质酪氨酸激酶，它被认为是包括肥大细胞、B细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞在内的炎性细胞宿主中免疫受体信号转导的关键介质。
这些免疫受体，包括Fc受体和B细胞受体，在变应性疾病和抗体介导的自身免疫病中发挥重要作用，因而可以想象，对Syk进行药理学干预可以治疗这类疾病。
变应性鼻炎和哮喘是与超敏反应和炎症事件相关的一类疾病，其中涉及多种细胞类型，包括肥大细胞、嗜曙红细胞、T细胞和树突细胞。在与变应原接触后，IgE(FcεRI)和IgG(FcεRI)的高亲和力免疫球蛋白受体成为交联的，并激活肥大细胞和其他类型细胞的下游过程，导致促炎介质和气管致痉原的释放。例如在肥大细胞中，由变应原引起的IgE受体交联导致从预形成的颗粒中释放介质，包括组胺，以及合成与释放新合成的脂质介质包括前列腺素和白三烯。
Syk激酶是一种非受体连接的酪氨酸激酶，在转导与FcεR1和/或FcεR1受体交联相关的下游细胞信号中发挥重要作用，它被定位在信号级联中的早期阶段。例如在肥大细胞中，受体-IgE复合物的变应原交联以后，FcεR1信号转导的早期顺序首先涉及Lyn(Src家族酪氨酸激酶)然后为Syk。因此预期Syk活性抑制剂能抑制所有下游信号转导级联，从而减轻速发型变应性应答和由促炎介质和致痉原释放引发的不良事件(Wong等人2004，Expert Opin.Investig.Drugs(2004)13(7)743-762)。
近期已经证明，在治疗变应性鼻炎的I/II期研究中，鼻内给药的Syk激酶抑制剂R112(Rigel)导致PGD2水平统计学显著性的降低，PGD2是与变应性鼻炎进展高度相关的关键性免疫介质，同时在多种指标中表现出安全性，因而首次提供了局部Syk激酶抑制剂的临床安全性和疗效的证据。(Meltzer，Eli O.；Berkowitz，Robert B.；Grossbard，Elliott B，Journal of Allergy and Clinical Immunology(2005)，115(4)，791-796)。在更近期的变应性鼻炎II期临床试验中(Clinical Trials.govIdentifier NCT0015089)，R112与安慰剂相比显示缺乏功效。
类风湿性关节炎(RA)是一种自身免疫病，影响约1％的人口。其特征是导致骨骼和软骨受损的关节炎症。最近应用能引起可逆的B细胞耗竭的利妥昔单抗(Rituximab)进行的临床研究(J.C.W.Edwards等人，2004，New Eng.J.Med.350：2572-2581)表明，靶向B细胞功能为自身免疫病如RA的可行的治疗策略。其临床益处与自身反应抗体(或类风湿因子)的减少相关，这些研究提示B细胞功能及实际上的自身抗体产生是疾病病理学的中心环节。
采用来自缺乏脾酪氨酸激酶(Syk)小鼠的细胞进行的研究证明了该激酶在B细胞功能中的非多余作用。Syk缺乏的特征是B细胞发展被阻断(M.Turner等人1995Nature 379：298-302和Cheng等人1995，Nature 378：303-306)。这些研究，加上对Syk缺乏的成熟B细胞的研究(Kurasaki等人2000，Immunol.Rev.176：19-29)，证明了B细胞的分化及活化均需要Syk。因此，抑制RA患者的Syk可能阻断B细胞功能，并由此减少类风湿因子的产生。除了Syk在B细胞功能中的作用，以及与RA的治疗进一步相关以外，Syk活性还是Fc受体(FcR)信号转导所需要的。在RA中由免疫复合物诱导的FcR活化被认为可促进多种促炎介质释放。
本发明涉及新的吡咯并嘧啶化合物，它们是Syk激酶活性抑制剂。因此这类吡咯并嘧啶衍生物对于与异常Syk活性相关的疾病的治疗，尤其是对于由Syk介导的疾病状态的治疗和预防，具有潜在的治疗益处。这些疾病状态包括炎性疾病、变应性疾病和自身免疫病，例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、支气管炎、皮炎、变应性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、类风湿性关节炎、多发性硬化症、癌症、HIV和狼疮。
发明简述
本发明一方面提供了式(I)的化合物或其盐或溶剂化物：
其中：
R1为H或C1-3烷基；
R2为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基或C1-3亚烷基C3-7环烷基，其中每个环烷基可由一个或多个独立选自C1-3烷基或卤素的取代基取代；
R3为：
(a)6元杂芳基基团，选自3-吡啶基、4-吡啶基、或5-嘧啶基(其中每一个任选地可由一个或多个独立选自OH、＝O、C1-3烷基、NHCOC1-3烷基、C1-6烷氧基、COC1-6烷基、C0-3亚烷基COOC1-3烷基的取代基取代)；
(b)基团
其中P和Q共同形成5-7元碳环、杂环或杂芳环，这些环任选地可被一个或多个独立选自下组的取代基取代；各个碳被可达两个C1-3烷基基团或氟取代或被＝O或OH、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C0-3亚烷基NR5R6取代，各个氮被C1-3烷基、COC1-3烷基、C1-3亚烷基C3- 7环烷基、苯基(任选地被氟取代)或C0-3亚烷基NR5R6取代，或者硫被＝O或(＝O)2取代；
R5和R6独立地为H或C1-3烷基；
(c)基团
其中R、S和T之一为H，其余取代基独立地选自：
H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、OH、C1-6羟烷基、CN、C3-7环烷基、O苯基、OCH2苯基、卤素、COOR7、C1-3亚烷基COOR7、XNR8R9、XCONR8R9、XSO2NR8R9、NR7COC1-6烷基、NR7SO2C1-6烷基、OCH2CONR8R9、SO2C1-3烷基、单环杂芳基(任选地被甲基取代)；
R7为H或-C1-3烷基；
X为键或C1-3亚烷基；
R8和R9独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基、苯基(任选地被一个或多个独立选自卤素、-C1-3烷基、CN或SO2CF3的取代基取代)、C1-3亚烷基苯基、C1-3亚烷基OC1-3烷基；或
R8和R9与相连的N一起形成4、5或6元杂环基团，其任选地含有另一选自O、S或N的杂原子，并且任选地各个碳被可达两个C1-6烷基或卤素取代、或被＝O或C1-6烷氧基取代，任意氮被C1-6烷基、COC1-3烷基或COOC1-6烷基取代，任意硫被＝O、(＝O)2取代；
R4为H或-C1-3烷基。
本发明另一方面提供了一种药物组合物，其包含式(I)的化合物或其盐或溶剂化物和一种或多种药物可接受的载体、稀释剂和赋形剂。
本发明另一方面提供了一种用于治疗的式(I)的化合物、或其盐或溶剂化物。
本发明另一方面提供了用于治疗由异常Syk活性介导的疾病或病症的式(I)的化合物或其盐或溶剂化物。
本发明另一方面提供了式(I)的化合物或其盐或溶剂化物在制备用于治疗由异常Syk活性介导的疾病或病症的药物中的用途。
发明详述
本文所用的术语“有效量”指药物或药剂能够引起(例如)研究者或医师所寻求的组织、系统、动物或人的生物或医学应答的量。并且，术语“治疗有效量”指与未接受该量的相应受试者相比，能够促进疾病、病症或副作用的治疗、治愈、预防或缓解、或疾病或病症进展率降低的任何量。该术语在其范围内还包括可有效增强正常生理功能的量。
本文所用的术语“烷基”指含有特定数量碳原子的直链或支链烃基。本文所用的术语“C1-C3烷基”和“C1-C6烷基”指如上述定义的分别含有至少1个、最多3或6个碳原子的烷基基团。本文使用的“烷基”的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基等。
本文所用的术语“亚烷基”是指含有特定数量碳原子的直链或支链二价烃基。本文所用的术语“C1-C3亚烷基”和“C1-C6亚烷基”指如上述定义的分别含有至少1个、最多3或6个碳原子的亚烷基基团。本文使用的“亚烷基”的实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、正亚丙基、正亚丁基等。
本文所用的术语“卤素”指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)，术语“卤代”指卤素基团：氟代(-F)、氯代(-Cl)、溴代(-Br)和碘代(-I)。
本文所用的术语“卤代烷基”指至少被一个本文定义的卤素基团取代的如上述定义的烷基基团。用于本发明的这种支链或直链卤代烷基基团的实例包括但不限于独立地被一个或多个卤素如氟、氯、溴和碘取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基。
本文所用的术语“环烷基”指含有特定数量碳原子的非芳香环烃环。同样地，术语“C3-7环烷基”指具有3至7个碳原子的非芳香环烃环。用于本发明的“环烷基”基团的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
本文所用的术语“碳环”指含碳原子和氢原子的饱和的或具有一个或多个不饱和度的非芳香环。
本文所用的术语“杂环的”或术语“杂环基”指饱和的或具有一个或多个不饱和度的非芳香杂环，其含有一个或多个选自S、S(O)、S(O)2、O或N的杂原子取代，并具有特定数量的环成员。
本文所用的术语“烷氧基”指RaO-基团，其中Ra为上述定义的烷基，术语“C1-C3烷氧基”和“C1-C6烷氧基”指本文定义的烷氧基基团，其中烷基部分含至少1个、最多3或6个碳原子。用于本发明的“C1-C3烷氧基”和“C1-C6烷氧基”的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和叔丁氧基。
本文所用的术语“卤代烷氧基”指RaO-基团，其中Ra为上述定义的卤代烷基，术语“C1-C6卤代烷氧基”指本文定义的卤代烷氧基基团，其中卤代烷基部分含至少1个、最多6个碳原子。用于本发明的C1-C6卤代烷氧基的实例包括但不限于三氟甲氧基。
本文所用的术语“羟基”指-OH基团。
术语“杂芳基”如无特殊说明均指具有特定数量的环成员(如碳原子和杂原子N、O和/或S)并含有1、2、3或4个选自N、O和S的杂原子的芳香单环基团和稠合双环芳香环。杂芳基基团的具体实例包括但不限于呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、三唑、四唑、噻唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、噻二唑、异噻唑、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并氮杂
苯并咪唑、苯并咪唑、吲哚、羟吲哚和吲唑。
本文所用的术语“羟烷基”指至少被一个本文定义的羟基取代的上述定义的烷基。用于本发明的支链或直链“C1-C6羟烷基”基团的实例包括但不限于独立地被一个或多个羟基基团取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基。
本文所用的术语“任选地”指后面描述的事件可能发生或者可能不发生，同时包括发生的事件和不发生的事件。
本文所用的术语“取代的”指被指定的一个或多个取代基取代，如无特别说明允许多度取代。
术语“Syk抑制剂”用于表示抑制Syk受体的化合物。
术语“Syk介导的疾病”或“由异常Syk活性介导的紊乱或疾病或病症”用于表示任何由Syk激酶机理介导或调节的疾病状态。该疾病状态可包括炎性、变应性和自身免疫性疾病，例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDs)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、支气管炎、皮炎、变应性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、类风湿性关节炎、多发性硬化症、癌症、HIV和狼疮，尤其是哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDs)、变应性鼻炎和类风湿性关节炎。
本文所用的“本发明的化合物”指式(I)的化合物或其盐、溶剂化物或生理功能衍生物。
本文所用的术语“溶剂化物”指由溶质(在本发明中是式(I)的化合物或其盐)和溶剂按不同化学计量形成的复合物。用于本发明的溶剂不会干扰溶质的生物学活性。适用的溶剂实例包括但不限于水、丙酮、甲醇、乙醇和醋酸。适用的药物可接受的溶剂的实例包括水、乙醇和醋酸。最优选的溶剂是水。
式(I)的化合物可能具有结晶为一种以上的形式的能力，该特征被称为同质多晶现象，应当理解这些多晶型形式(“多晶型物”)也在式(I)的范围之内。同质多晶现象通常响应于温度或压力或两者的变化而发生，也可能是由于结晶化步骤的变化而引起。多晶型物可根据本领域公知的各种物理性状加以区分，如x射线衍射图、溶解度和熔点。
本文描述的某些化合物可能含有一个或多个手性原子，或者可能以两种对映异构体存在。因此，本发明的化合物包括对映异构体的混合物及纯化的对映异构体或对映异构体富集的混合物。上述式(I)表示的化合物的各个异构体及其任意完全或部分平衡的混合物也包括在本发明的范围之内。本发明还包括上述通式表示的化合物的各个异构体与其中一个或多个手性中心颠倒的其异构体的混合物。
还要注意式(I)的化合物可能形成互变异构体。应当理解，本发明化合物的所有互变异构体和互变异构体的混合物包括在本发明化合物的范围之内。
在一种实施方案中，R1表示H或甲基。在另一实施方案中，R1表示H。
在一种实施方案中，R2表示C1-3烷基，例如1-甲基乙基。在另一实施方案中，R2表示C1-3卤代烷基，例如1-三氟乙基。
在一种实施方案中，R1表示H，R2为C1-3烷基，例如1-甲基乙基。在另一种实施方案中，R1表示H，R2为C1-3卤代烷基，例如1-三氟乙基。
在一种实施方案中，R4为H或CH3。在另一种实施方案中，R4为H。
在一种实施方案中，R3为基团
其中R、S和T中有一个为H，其余取代基独立地选自：
H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、OH、C1-6羟烷基、CN、C3-7环烷基、O苯基、OCH2苯基、卤素、COOR7、C1-3亚烷基COOR7、XNR8R9、XCONR8R9、XSO2NR8R9、NR7COC1-6烷基、NR7SO2C1-6烷基、OCH2CONR8R9、SO2C1-3烷基、单环杂芳基(任选地被甲基取代)；
R7为H或-C1-3烷基；
X为键或C1-3亚烷基；且
R8和R9如上文所定义。
在另一种实施方案中，R3为基团
其中R为H，S和T独立地选自：
H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、OH、C1-6羟烷基、CN、C3-7环烷基、O苯基、OCH2苯基、卤素、COOR7、C1-3亚烷基COOR7、XNR8R9、XCONR8R9、XSO2NR8R9、NR7COC1-6烷基、NR7SO2C1-6烷基、OCH2CONR8R9、SO2C1-3烷基、单环杂芳基(任选地被甲基取代)；
X为键或C1-3亚烷基；且
R7、R8和R9如上文所定义。
在另一种实施方案中，R3为基团：
其中R为H，S为XCONR8R9，X为键，T为氢或卤素；且
R8和R9如上文所定义。
在另一种实施方案中，R3为基团：
其中R和T均为氢，S为CONR8R9；且
R8和R9如上文所定义。
在一种实施方案中，R8和R9均为氢。
在一种实施方案中，R8为氢，R9为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3- 7环烷基或C1-3亚烷基C3-7环烷基，优选为正丙基。
在一种实施方案中，R8为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，R9为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基。
在一种实施方案中，R8和R9与相连的N共同形成4、5或6元杂环基团，其任选地含有另一选自O、S或N的杂原子，并且任选地任意氮被C1-6烷基取代，任意硫被＝O或(＝O)2取代。
在另一种实施方案中，本发明提供了式(IA)的化合物或其盐或溶剂化物：
其中：
R1表示H；
R2为C1-3卤代烷基；
R3为基团：
其中R和T均为氢，S为CONR8R9；
R8为氢，R9为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，优选为正丙基；或
R8为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，R9为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，或
R8和R9与相连的N共同形成4、5或6元杂环基团，其任选地含有另一个选自O、S或N的杂原子，并且任选地任意氮被C1-6烷基取代，任意硫被＝O或(＝O)2取代，且
R4为氢。
应当认识到，当插入了R1、R3和R4的值时，式(IA)也可表示为式(IB)：
尽管各个变量的实施方案已在前文分别列出，但是本发明还包括其中式(I)的几种或各种实施方案选自上述所列各实施方案的化合物。因此，本发明意图包括各个变量实施方案的全部组合。
本发明化合物的具体实例包括在下文实施例部分中描述的实施例1-52，特别是：
N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
或其药物可接受的盐或溶剂化物。
本发明的化合物可为药物可接受的盐的形式，和/或作为药物可接受的盐给药。关于适合的盐的综述参见Berge等人，J.Pharm.Sci.1977，66，1-19。
本发明的盐一般为药物可接受的盐。涵盖在术语“药物可接受的盐”范围内的盐是指非毒性的本发明化合物的盐。
适合的药物可接受的盐包括酸加成盐或碱加成盐。
药物可接受的酸加成盐可由式(I)的化合物与适合的无机酸或有机酸(如氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、甲酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、谷氨酸、天冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸如2-萘磺酸、或己酸)反应制得，任选地在适合的溶剂如有机溶剂中进行反应，得到盐，通常(例如)通过结晶和过滤进行分离。例如，式(I)化合物的药物可接受的酸加成盐可包括或为氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、萘磺酸盐(如2-萘磺酸盐)或己酸盐。
其他非药物可接受的盐，如草酸盐或三氟乙酸盐，也可用于(例如)本发明化合物的分离，因而也被包括在本发明范围之内。
本发明在其范围之内包括式(I)化合物的所有可能的化学计量和非化学计量形式。
式(I)的化合物及其盐、溶剂化物和生理功能性衍生物均被认为是Syk活性抑制剂，因而潜在地可用于治疗与异常Syk活性相关的疾病和病症。
因此本发明提供用于治疗，特别是用于治疗由异常Syk活性介导的疾病和病症的式(I)的化合物及其盐、溶剂化物和生理功能性衍生物。
本文所指的异常Syk活性是偏离了特定哺乳动物对象中预期的正常Syk活性的任意Syk活性。异常Syk活性的可能情形有，例如，活性异常升高，或Syk活性的时间和/或控制异常。例如，导致活化异常或失去控制的蛋白激酶过表达或突变可能导致这种异常活性。
在另一种实施方案中，本发明涉及为了预防和/或治疗与Syk活性失调相关的疾病而调节、调控或抑制Syk的方法。
在另一种实施方案中，本发明提供一种治疗患有由Syk活性介导的疾病的哺乳动物的方法，包括给所述对象施用有效量的式(I)化合物或其药物可接受的盐、溶剂化物或生理功能性衍生物。
在另一种实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物或生理功能性衍生物在制备用于治疗由Syk活性介导的疾病的药物中的用途。
在另一种实施方案中，由异常Syk活性介导的疾病或病症是类风湿性关节炎。
在另一种实施方案中，由异常Syk活性介导的疾病或病症是变应性鼻炎。
在另一种实施方案中，由异常Syk活性介导的疾病或病症是慢性阻塞性肺病(COPD)。
在另一种实施方案中，由异常Syk活性介导的疾病或病症是成人呼吸窘迫综合征(ARDs)。
尽管可以将式(I)化合物及其盐、溶剂化物或生理功能性衍生物以未加工化学药品形式给药用于治疗，但是也可将活性成分以药物组合物形式提供。因此，本发明还提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物及其盐、溶剂化物或生理功能性衍生物，以及一种或多种药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂。式(I)化合物及其盐、溶剂化物或生理功能性衍生物如上所述。载体、稀释剂或赋形剂在与制剂中其他成分配伍并且对其接受者无害方面必须是可接受的。根据本发明另一方面，还提供了一种制备药物组合物的方法，包括将式(I)化合物或其盐、溶剂化物和生理功能性衍生物与一种或多种药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。
本发明的药物组合物可以以单元剂量形式提供，每个单元剂量内含有预定量的活性成分。根据所治疗的病症、给药途径和年龄、体重及患者状况的不同，这种单元中可含有例如5μg-1g，优选1mg-700mg，更优选5mg-100mg的式(I)的化合物。因而这种单元剂量可能每天给药一次以上。优选的单元剂量组合物含有如上所述的每日剂量或亚剂量(每日给药一次以上)的活性成分，或者是所述剂量的适当分量。此外，可采用制药领域熟知的任意方法制备这种药物组合物。
本发明的药物组合物可以设计为用于经任何适当的途径给药，例如经口(包括含服或舌下)、吸入或经鼻途径。可采用制药领域公知的任意方法制备这种组合物，例如将活性成分与载体或赋形剂混合。
在另一种实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其适合通过经口途径给药，用于治疗例如类风湿性关节炎。
在另一种实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其适合通过经鼻途径给药，用于治疗例如变应性鼻炎。
在另一种实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其适合通过吸入途径给药，用于治疗例如COPD或ARDS。
适合经口给药的本发明的药物组合物可以作为不连续的单元形式提供，如胶囊或片剂；粉末或颗粒；在水或非水性液体中的溶液或混悬液；可食用的泡沫(foams或whips)；或水包油型乳液或油包水型乳液。
例如，为了以片剂或胶囊剂形式口服，活性药物成分可与无毒的口服药物可接受惰性载体如乙醇、甘油、水等混合。粉末的制备是将化合物研碎至合适的细小尺寸，再与同样被研碎的药物载体如食用碳水化合物例如淀粉或甘露醇混合。还可加入芳香剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
胶囊的制备是按上述方法制备粉末混合物，并填充入制成的明胶套中。在填充步骤之前，可向粉末混合物中加入助流剂和润滑剂，如胶体二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇。还可加入崩解剂或增溶剂如琼脂-琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以增进胶囊摄入后药物的利用度。
此外，当期望时或必要时，也可将适合的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入到混合物中。适合的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β乳糖、玉米甜味剂、天然的和合成的树胶如阿拉伯胶、西黄蓍胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂的配制包括，例如，制备粉末混合物、颗粒化或预压片、加入润滑剂和崩解剂并压制为片剂。制备粉末混合物是将已适当研碎的化合物与上述稀释剂或基质相混合，任选地加入粘合剂如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、或聚乙烯吡咯烷酮，缓速溶液如石蜡，吸收促进剂如季铵盐和/或吸收剂如膨润土、高岭土或磷酸二钙。粉末混合物的颗粒化可通过用粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶浆或纤维素或聚合材料溶液使之润湿，再强制过筛。除颗粒化以外，粉末混合物还可选择通过压片机，结果是成形不佳的预压片碎裂为颗粒。颗粒可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油的方法使之润滑，以防止粘附到片剂成形模具中。然后将润滑的混合物压制为片剂。本发明的化合物还可与自由流动的惰性载体组合，并且直接压制成片剂，而无需颗粒化或预压片的步骤。可提供透明或不透明的由虫胶密封层、糖或聚合材料包衣以及蜡抛光包衣组成的保护性包衣。可向这些包衣中加入染料以区分不同的单元剂量。
口服液体如溶液、糖浆和酏剂可制备为单元剂量形式，使得在指定的量中含有预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶于适当的芳香水溶液中而制备，而酏剂则采用无毒含醇媒液来制备。混悬剂可通过将化合物分散于无毒媒液中而制备。还可加入增溶剂和乳化剂如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、香味添加剂如薄荷油、或天然甜味剂、或糖精或其他人工甜味剂等。
用于口服的剂量单元组合物适当时可进行微囊化处理。制剂还可制备为延迟释放或持续释放，例如通过将颗粒物质包衣或包埋于聚合物、蜡等之中。
式(I)的化合物及其盐、溶剂化物和生理功能性衍生物也可采用脂质体运送系统的形式如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡来给药。脂质体可由多种磷脂制成，如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。
式(I)的化合物及其盐、溶剂化物和生理功能性衍生物还可采用与该化合物分子偶联的单克隆抗体作为单个载体进行运送。化合物也可偶联于作为可靶向药物载体的可溶性聚合物上。这类聚合物包括聚吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚、或棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷多聚赖氨酸。此外，化合物还可偶联到一类有助于实现药物控制释放的生物可降解聚合物上，例如聚乳酸、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
用于吸入给药的剂型可方便地制成气雾剂或干粉。
对于适合和/或适用于吸入给药的组合物，优选式(I)的化合物或盐为颗粒尺寸减小的形式，更优选尺寸减小的形式是通过微粉化获得或者可通过微粉化获得的。尺寸减小的(如微粉化)化合物或盐或溶剂化物的优选颗粒尺寸限定为D50值为约0.5微米-约10微米(例如采用激光衍射测定)。
如用于吸入给药的气溶胶制剂可包括活性物质在药物可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或微混悬液。气溶胶制剂可按单剂量或多剂量以无菌形式装入密封容器中，其形式可为借助雾化装置或吸入器使用的药筒型或可重装型。可选地，密封容器可为单发药装置，如单剂量鼻吸入器，或安装有计量阀的喷雾器(定量吸入器)，当容器内含物用尽后即弃用。
若剂型包括喷雾器，优选地含有适合的带压力推进剂，如压缩空气、二氧化碳或有机推进剂如氢氟碳化合物(HFC)。适合的HFC推进剂包括1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷和1，1，1，2-四氟乙烷。气溶胶剂型也可采用泵-喷雾器的形式。加压气溶胶可含有活性化合物的溶液或混悬液。此时可能需要加入其他赋形剂如共溶剂和/或表面活性剂以改善混悬制剂的分散性质和均匀性。溶液剂型也可能需要添加共溶剂如乙醇。还可能加入其他赋形调节剂以改进例如制剂的稳定性和/或口味和/或颗粒质量特性(量和/或分布)。
对于适合和/或适用于吸入给药的药物组合物，优选药物组合物为干粉可吸入性组合物。这种组合物可包括粉末基质如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇或淀粉，式(I)的化合物或其盐或溶剂化物(优选为颗微粒尺寸减小的形式，如微粉化形式)，和任选的性能调节剂如L-亮氨酸或其他氨基酸，和/或硬脂酸的金属盐如硬脂酸镁或硬脂酸钙。优选地，可吸入性干粉组合物包含乳糖和式(I)化合物或其盐的混合干粉。乳糖优选为水合乳糖，如一水合乳糖，和/或优选为吸入级和/或细微级乳糖。优选地，乳糖的颗微粒尺寸限定为至少90％(重量或体积百分比)的乳糖颗微粒的直径小于1000微米(如10-1000微米，如30-1000微米)，和/或至少50％的乳糖颗微粒的直径小于500微米(如10-500微米)。更优选地，乳糖的颗微粒尺寸限定为至少90％的乳糖颗微粒的直径小于300微米(如10-300微米，如50-300微米)，和/或至少50％的乳糖颗粒的直径小于100微米。任选地，乳糖的颗粒尺寸限定为至少90％的乳糖颗粒的直径小于100-200微米，和/或至少50％的乳糖颗粒的直径小于40-70微米。最为重要的是，优选约3％-约30％(如约10％)(重量或体积百分比)的颗粒的直径小于50微米或小于20微米。例如，而非限定性的，适合的吸入级乳糖是E9334乳糖(10％细粉)(Borculo Domo Ingredients，Hanzeplein 25，8017 JD Zwolle，Netherlands)。
任选地，尤其对于干粉吸入组合物，用于吸入给药的药物组合物可装入多个密封剂量容器中(如含有干粉组合物)，该容器纵向固定于适合的吸入装置内部的条或带上。该容器可根据需要而破裂或可剥开，其中所含的如干粉组合物的剂量则可通过装置如GlaxoSmithKline销售的DISKUSTM装置进行吸入给药。DISKUSTM吸入装置例如在GB 2242134A中有述，在该装置中，至少有一个装粉末形式药物组合物的容器(一个或数个容器优选为纵向固定于条或带上的多个密封剂量容器)置于两个彼此可剥开地固定的组件之间；该装置包括：定义上述容器开启位置的装置；在开启位置剥离组件打开容器的装置；连接开启容器的输出口，使用者可通过该口从开启容器中吸入粉末形式的药物组合物。
经鼻给药的剂型可方便地制成气雾剂、溶液剂、滴剂、凝胶剂或干粉。
适合吸入给药的药物组合物包括可以通过各种类型的计量的剂量加压气溶胶、喷雾器或吹入器产生的微粒粉末或雾。
对于适合和/或适用于鼻内给药的药物组合物，式(I)化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物可配制为采用液体投药器进行输送的液体制剂。这种液体投药器可包括例如投药喷嘴或投药喷孔，在使用者对液体投药器的泵机构施加力时通过它分配计量剂量的液体制剂。这种液体投药器通常设有多个计量剂量的液体制剂的存储器，剂量在连续泵致动时可以分配。投药喷嘴或投药喷孔可以构造为插入使用者鼻孔中以将液体制剂喷射投药于鼻腔。上述类型的液体投药器在WO-A-2005/044354中有描述和说明，其全部内容以引用方式并入本文。投药器具有容纳液体交换装置的外壳，其压缩泵固定在装有液体制剂的容器上。该外壳至少带有一个手指操作的侧杆，可相对于外壳向内移动，以凸轮控制容器在外壳内向上移动引起泵压缩，进而通过外壳的鼻喷嘴将计量剂量的制剂从泵杆中泵出。一种特别优选的液体投药器是在WO-A-2005/044354的图30-40中说明的通用类型。
应当理解，当本发明的化合物与其他通常通过吸入、静脉内、经口或鼻内途径给药的治疗药物联合用药时，这种药物组合物可以通过相同的途径给药。
应理解，除上述特别提及的成分以外，组合物还可包含本领域内所述制剂类型的其他常规成分，例如适合口服给药的组合物可包含芳香剂。
本发明化合物的治疗有效量依赖于一系列因素，包括例如动物的年龄和体重、需要治疗的确切的病症和其严重程度、制剂的特性和给药途径，最终决定于经治医师或兽医的判断。然而，式(I)的化合物治疗与异常Syk活性相关的疾病或病症时的有效剂量范围通常为每日5μg-100mg/kg受者体重(哺乳动物)，更常用的范围是每日5μg-10mg/kg体重。这一剂量可以每日一次给药，或者更常采用每日数次(如二、三、四、五或六次)亚剂量给药，以使每日总剂量相同。其盐或溶剂化物的有效量可以作为式(I)化合物本身的有效量的比例而确定。
本发明的化合物及其盐和溶剂化物及其生理功能性衍生物可以单独使用或与其他治疗药剂联用来治疗与异常酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶活性相关的疾病和病症。根据本发明的联合治疗包括施用至少一种式(I)的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物、或其生理功能性衍生物，以及至少一种其他药理活性剂。优选地，根据本发明的联合治疗包括施用至少一种式(I)的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物、及其生理功能性衍生物，和至少一种其他药理活性剂。式(I)的化合物和其他药理活性剂可一起给药或分开给药，若是分开给药，可以同时或以任何顺序序贯给药。选择式(I)的化合物和其他药理活性剂的剂量以及相对给药时机以获得预期的联合疗效。
本发明化合物及其盐和溶剂化物及其生理功能性衍生物还可与本领域公知的其他类型的治疗药剂联用。用于该联合用药的代表药剂类型包括，治疗哮喘的抗炎甾体化合物(特别是皮质类固醇类)、局部糖皮质激素激动剂、PDE4抑制剂、IKK2抑制剂、A2a激动剂、β2肾上腺素受体激动剂(包括短效和长效β2肾上腺素受体激动剂)、α4整合素抑制剂和抗蕈毒碱药物，治疗变态反应的上述药剂，和H1和H1/H3拮抗剂。用于联用治疗严重哮喘的代表性药剂包括局部作用的p38抑制剂和IKK2抑制剂。
抗炎皮质醇类固醇药剂为本领域所熟知。代表性实例包括氟替卡松丙酸酯(如参见美国专利4,335,121)、倍氯米松17-丙酸酯、倍氯米松17，21-二丙酸酯、地塞米松或其酯、莫米松或其酯(如莫米松糠酸酯)、环索奈德、布地奈德和氟尼缩松。其他抗炎皮质类固醇的实例在WO 02/12266 A1(Glaxo Group Ltd)中有述，特别是实施例1的化合物(6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯)和实施例41的化合物(6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯)，或其药物可接受的盐。
β2肾上腺素受体激动剂的实例包括沙美特罗(如作为外消旋物，或单一对映体如右旋-对映体)、沙丁胺醇、福莫特罗、沙甲胺醇、非诺特罗或特布他林及其盐，例如沙美特罗昔萘酸、沙丁胺醇的硫酸盐或游离碱，或福莫特罗延胡索酸盐。优选长效β2肾上腺素受体激动剂，尤其是疗效超过24小时的药物，如沙美特罗或福莫特罗。
抗组胺类药的实例包括氮卓斯汀、左卡巴斯汀、奥洛他定、美沙吡林、氯雷他定、西替利嗪、地氯雷他定或非索非那定。
抗胆碱能化合物的实例包括毒蕈碱(M)受体拮抗剂，特别是M1、M2、M1/M2或M3受体拮抗剂，尤其是(选择性)M3受体拮抗剂。抗胆碱能化合物的实例在WO 03/011274 A2和WO 02/069945 A2/US 2002/0193393 A1和US 2002/052312 A1中有述。毒蕈碱M3拮抗剂的实例包括异丙托溴铵、氧托溴铵或噻托溴铵。
可与本发明化合物联用的代表性PDE4或混合PDE3/4抑制剂包括AWD-12-281(Elbion)、PD-168787(Pfizer)、罗氟司特和西洛司特(GlaxoSmithKline)。另外的PDE4抑制剂的实例在WO2004/103998(Glaxo Group Ltd)中有述。
本发明还提供所谓的“三联”疗法，包括式(I)的化合物或其药物可接受的盐与β2肾上腺素受体激动剂和抗炎皮质类固醇。这种联用优选用于治疗和/或预防哮喘、COPD或变应性鼻炎。β2肾上腺素受体激动剂和/或抗炎皮质类固醇如上所述和/或如WO 03/030939 A1所述。这种“三”联用药的代表性实例包括式(I)的化合物或其药物可接受的盐、沙美特罗或其药物可接受的盐(如昔萘酸沙美特罗)和氟替卡松丙酸酯。
本领域技术人员知道，在适当情形下，其他治疗成分可以采用盐的形式，例如碱金属盐或胺盐或酸加成盐、或前药、或酯例如低级烷基酯、或溶剂化物例如水合物，来优化治疗成分的活性和/或稳定性和/或物理特性如溶解度。还应知道的是在适当情形下，治疗成分可使用光学纯形式。
上述联合用药可方便地以药物组合物的形式加以使用，因此包括上述的联用药物以及药物可接受的稀释剂或载体的药物组合物为本发明的另一方面。这类联合用药对于呼吸系统疾病尤其有意义，并能方便地适合吸入或鼻内给药。
类风湿性关节炎(RA)是另一种有望采用联合疗法治疗的炎性疾病。因此在另一方面，本发明提供了式(I)的化合物或其盐或溶剂化物与另一种可用于治疗类风湿性关节炎的治疗药剂的组合，上述组合可用于治疗类风湿性关节炎。
本发明的化合物和药物组合物可联合或包括一种或多种其他治疗药剂，例如选自NSAIDS、皮质类固醇、COX-2抑制剂、细胞因子抑制剂、抗TNF剂、制癌蛋白M抑制剂、抗疟药、免疫抑制剂和细胞抑制剂。
两类药剂有望用于治疗RA，其分类为“快作用”和“慢作用”或“二线”药物(也称为疾病缓解性抗风湿药或DMARDS)。一线药物如典型的NSAIDs(如阿司匹林、布洛芬、萘普生、依托度酸)、皮质类固醇(如泼尼松)。二线药物包括COX-2抑制剂和抗TNF药剂。COX-2抑制剂的实例有塞来考昔(Celebrex)、艾托考昔和罗非考昔(Vioxx)。
抗TNF药剂包括英夫利昔单抗(infliximab)(Remicade)、依那西普(etanercept)(Enbrel)和阿达木单抗(adalimumab)(Humira)。其他“生物学的”治疗措施包括阿那白滞素(anakinra)(Kineret)、利妥西单抗(Rituximab)、Lymphostat-B、BAFF/APRIL抑制剂和CTLA-4-Ig或其模拟物。其他细胞因子抑制剂包括来氟米特(leflunomide)(Arava)。其他二线药物包括金制剂(金诺芬(瑞得片剂)或金硫苹果酸(硫代苹果酸金钠注射剂))、用于疟疾的药物：羟氯喹(Plaquenil))、抑制免疫系统的药物(硫唑嘌呤(Imuran、Thioprine)、甲氨蝶呤(Methoblastin、Ledertrexate、Emthexate)、环孢菌素(Sandimmun、Neoral))、环磷酰胺(Cycloblastin、Cytoxan、Endoxan)、D-青霉胺(D-Penamine)、柳氮磺吡啶(Salazopyrin)、非甾体抗炎药(包括阿司匹林和布洛芬)。
这类联合药物中的各个化合物可以独立的或联合的药物组合物形式序贯或同时给药。优选地，各个化合物在联合的药物组合物中同时给药。本领域技术人员可轻松获知已知治疗药剂的适当剂量。
本发明的化合物可采用各种方法包括标准化学方法进行制备。如无特殊说明，前文所定义的所有变量继续保持其意义。以下描述了说明性的一般合成方法，本发明的具体化合物在工作实施例部分制备。
通式(I)的化合物可以采用有机合成领域所公知的方法进行合成，其中部分由以下合成方案所阐述。在以下描述的所有方案中，应充分理解在需要的情形下，可以依照化学的一般原则借助保护基来保护敏感基团或活性基团。根据有机合成的标准方法对保护基进行操作(T.W.Green和P.G.M.Wuts(1991)Protecting Groups in OrganicSynthesis，John Wiley & Sons)。这些基团在化合物合成的适当阶段采用本领域技术人员熟知的方法除去。对于反应步骤以及反应条件和操作顺序的选择应符合式(I)的化合物的制备。本领域技术人员会知道在式(I)的化合物中是否存在立体中心。因此，本发明包括两种可能的立体异构体，不仅包括消旋化合物而且包括单一的对映异构体。若希望化合物为单一对映异构体，可通过立体特异性合成、或者通过拆分终产物或任何适当的中间产物来获得。终产物、中间产物或起始物质的拆分可采用本领域公知的任何适当方法进行。参见例如Stereochemistry of Organic Compounds，E.L.Eliel，S.H.Wilen和L.N.Mander(Wiley-interscience，1994)。
路线1
(i)HNR1R2、IPA，微波100℃；(ii)R3NH2、Pd(dba)2、2-二环己基膦基-2’-(N，N’-二甲基氨基)联苯、Cs2CO3、DMF，微波150℃
路线2
(i)NaH，TsCl，DMF；(ii)HNR1R2、IPA，80℃；(iii)R3NH2、Pd(dba)3、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯、K2CO3、t-BuOH，80℃；(iv)NaOMe，MeOH
路线3(R4＝H)
(i)R3NH2，190℃；(ii)ClCH2CHO、NaOAc、IPA/H2O，80；(iii)(CF3SO2)2NPh、K2CO3、DMF，RT；(iv)HNR1R2、K2CO3、二噁烷，微波80℃；(v)2N NaOH。
路线4
(i)ClCHR4CHO、NaHCO3、H2O，50℃；(ii)(tBuCO)2O、DMAP，120℃；(iii)POCl3，110℃；(iv)2N NaOH，100℃；(v)TsCl、NaH、DMF，RT；(vi)tBuONO、CH2I2、CuI、I2、THF，80℃；(vii)HNR1R2、IPA，80℃；(viii)R3NH2、Pd2(dba)3、2-二环己基膦基-2’-(N，N’-二甲基氨基)联苯、Cs2CO3、DMF，90℃；(ix)NaOMe、MeOH
路线5
(i)ClCHR4CHO、NaHCO3、H2O，50℃；(ii)(tBuCO)2O、DMAP，120℃；(iii)POCl3，110℃；(iv)2N NaOH，100℃；(v)TsCl、NaH、DMF，RT；(vi)tBuONO、Me3SiCl、BnN(Et)3Cl、DCM；(vii)HNR1R2、IPA，80℃；(viii)R3NH2、Pd2(dba)3、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯、K2CO3、t-BuOH，微波120℃；(ix)NaOMe、MeOH
因此，本发明另一方面提供了一种制备式(I)化合物的方法，该方法包括：
(i)式(II)的化合物：
其中X为H或保护基如对甲苯磺酰基，与胺R3NH2反应，之后若有保护基则去除保护基；
(ii)若R4＝H，则式(III)的化合物：
其中Y为保护基如三氟甲磺酸(triflate)，与胺HNR1R2反应，之后去除保护基；
(iii)式(IV)的化合物：
其中Hal为Cl或I，与胺R3NH2反应，之后去除保护基。
现在仅举例说明了本发明的某些实施方案。给出的示例化合物的物理数据与这些化合物的指定结构相符。
实施例
本文在描述方法、方案和实施例中所用的符号和惯用语均符合当代科学文献中使用的常规用语，例如《美国化学学会杂志》(Journalof the American Chemical Society)或《生物化学杂志》(Journal ofBiological Chemistry)。标准单字母或三字母缩写通常用于指代氨基酸残基，如无特殊说明应为L-构型。如无特殊说明，所有起始物质均从商业供货商处获得，使用时不需要再纯化。具体地，下列缩写用于实施例和整个说明书中。
g(克)；
l(升)；
μl(微升)；
M(摩尔)；
MHz(兆赫兹)；
mmol(毫摩尔)；
min(分钟)；
Rt(保留时间)；
TFA(三氟乙酸)；
THF(四氢呋喃)；
DMSO(二甲基亚砜)；
DCM(二氯甲烷)；
DMF(N，N-二甲基甲酰胺)；
DMAP(4-二甲基氨基吡啶)；
ATP(三磷酸腺苷)；
DMEM(Dulbecco改进的Eagle培养基)；
HPLC(高压液相色谱)；
TBAF(四正丁基氟化铵)；
TsCl(甲苯磺酰氯)；
HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)；
EDTA(乙二胺四乙酸)；
TBTU(O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐)；
DIPEA(二异丙基乙基胺)；
Pd2(dba)3(二(二亚苄基丙酮)钯)；
LC/MS(液相色谱-质谱法)；
mg(毫克)；
ml(毫升)；
mM(毫摩尔/升)；
h(小时)；
IPA(异丙醇)；
atm(大气压)；
BSA(牛血清白蛋白)；
HRP(辣根过氧化物酶)；
MDAP(质量导向自动制备/制备型质量导向HPLC)；
所有醚均指二乙醚；盐水指饱和NaCl水溶液。如无特殊说明，所有温度均以℃(摄氏度)表示。如无特殊说明，所有反应均在室温惰性气体中进行。
1H NMR谱采用Bruker DPX 400MHz记录，参照物为四甲基硅烷。
LC/MS在Supelcosil LCABZ+PLUS柱(3.3cm×4.6mm ID)上进行，用0.1％HCO2H和0.01M乙酸铵水溶液(溶剂A)和0.05％HCO2H和5％水的乙腈溶液(溶剂B)洗脱，采用如下洗脱梯度0.0-7min 0％B、0.7-4.2min 100％B、4.2-5.3min 0％B、5.3-5.5min 0％B，流速为3ml/min。用Fisons VG Platform光谱仪以电喷射正负模式(ES+vs和ES-ve)记录质谱。
“质量导向自动制备”/“制备型质量导向HPLC”在如下系统中进行：Waters FractionLynx系统，包括带延长的泵头的Waters 600泵、Waters 2700自动采样器、Waters 996二极管阵列和在10cm 2.54cmID ABZ+柱上的Gilson 202级分收集器，用0.1％甲酸水溶液或三氟乙酸水溶液(溶剂A)和0.1％甲酸或三氟乙酸的乙腈溶液(溶剂B)采用适当的洗脱梯度进行洗脱。用Micromass ZMD质谱仪，采用电喷射正模式和负模式交替扫描记录质谱。使用的软件为带有OpenLynx和FractionLynx optio的MassLynx 3.5；或者采用相当的替代系统。
“疏水性过滤管(frit)”指Whatman售卖的过滤管。SPE(固相萃取)指使用International Sorbent Technology Ltd.售卖的萃取柱。
Flashmaster II是来自Argonaut Technologies Ltd的一种自动化多用户快速色谱系统，它使用一次性正相SPE柱(2g-100g)。它提供混合的四个一组的在线溶剂以使梯度方法能够实施。样本采用多功能开放获取软件排列，该软件控制溶剂、流速、梯度分布和收集条件。该系统配有一个Knauer可变波长紫外检测器和两个Gilson FC204级分收集器，能够进行自动化峰值剪切、收集和监测。
二氧化硅色谱技术包括应用预装柱(SPE)或手工填充的快速分离柱的自动化(Flashmaster)技术或手动色谱。
微波化学方法一般在密封容器中进行，采用适当的微波反应器系统进行照射，如Biotage InitiatorTM Microwave Synthesiser。
若在一种化合物或试剂名之后给出了商业供货商的名称，例如“化合物X(Aldrich)”或“化合物X/Aldrich)，则表示化合物X购自商业供货商，如所述的商业供货商。
同样地，若在一种化合物名称之后给出文献或专利文献，例如化合物Y(EP 0 123 456)，则表示该化合物的制备在所述文献中有述。
实施例的名称采用化合物命名程序“ACD Name Pro 6.02”获得。
实施例1：
4-({4-[(1-甲基乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺甲酸盐
向2-{[4-(氨羰基)苯基]氨基}-7-[(三氟甲基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基三氟甲磺酸酯(0.024g)于二噁烷(1.5ml)中的溶液中加入碳酸钾(15mg)和异丙胺(0.005g)。混悬液置于密封小瓶中通过微波照射于80℃加热10min。混合物用氢氧化钠水溶液(2M，0.75ml)处理并剧烈搅拌4h。混合物再用盐酸水溶液(2M，0.75ml)处理，上样到SCX-2柱(10g，甲醇预处理)上。该柱用甲醇洗涤，用10％氨的甲醇溶液洗脱。将主要级分真空浓缩，残留物采用MDAP纯化后得到白色固体4-({4-[(1-甲基乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺甲酸盐(0.010g)。LC/MS：Rt 2.37min，MH+311。
中间体1
2-{[4-(氨羰基)苯基]氨基}-7-[(三氟甲基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基三氟甲磺酸酯
向4-[(4-氧代-4，7-二氢-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺(0.077g)在DMF(3ml)中的混悬液中加入碳酸钾(0.097g)和N-苯基三氟甲磺酰胺(0.25g)。将混悬液于20℃搅拌1.5h。向混合物中另加一定量的N-苯基三氟甲磺酰胺(0.064g)和碳酸钾(0.024g)，20℃搅拌3.5h。所得混合液在乙酸乙酯(30ml)和水(20ml)之间分配。分离两相后，用水(2×15ml)洗涤有机相。合并的水洗液经乙酸乙酯(20ml)萃取，再用水(10ml)洗涤乙酸乙酯二次萃取物。合并的有机萃取物真空干燥(硫酸镁)、过滤并去除溶剂。残留物吸附于二氧化硅上，经二氧化硅柱(20g)色谱纯化，采用乙酸乙酯/环己烷梯度(0-100％)洗脱30min，对适当级分蒸发溶剂后得到2-{[4-(氨羰基)苯基]氨基}-7-[(三氟甲基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}三氟甲磺酸酯(0.050g)。LC/MS：Rt 3.50min，MH+534。
中间体2
4-[(4-氧代-4，7-二氢-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺
向4-[(4-氨基-6-氧代-1，6-二氢-2-嘧啶基)氨基]苯甲酰胺(0.325g)在IPA(3ml)和水(1ml)中的混悬液中加入乙酸钠(0.240g)。向混合液中加入氯乙醛(0.22ml，50％水溶液)。混悬液加热至80℃持续20min。室温下用水(30ml)稀释混合物，所得混悬液搅拌15min。将混悬液过滤，残留物经水(10ml)洗涤。粗产品再经二氧化硅柱(50g)色谱分离纯化，用甲醇/DCM梯度(0-30％)+1％三乙胺洗脱，对适当级分蒸发溶剂后得到白色固体4-[(4-氧代-4，7-二氢-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺(0.132g)。LC/MS：Rt 2.1min，MH+270。
中间体3
4-[(4-氨基-6-氧代-1，6-二氢-2-嘧啶基)氨基]苯甲酰胺
将6-氨基-2-(甲硫基)-4(1H)-嘧啶酮(1.023g，Salor)和4-氨基苯甲酰胺(1.0g，Acros)的混合液在室温下振摇后于190℃搅拌26h。采用DCM/甲醇(1∶1，100ml)将残余物吸附于二氧化硅上。粗产品通过二氧化硅柱(100g)色谱分离纯化，用甲醇/DCM梯度(0-25％)洗脱，接着再用含1％三乙胺的50％甲醇/DCM洗脱。对适当级分蒸发溶剂后得到黄色固体4-[(4-氨基-6-氧代-1，6-二氢-2-嘧啶基)氨基]苯甲酰胺(0.340g)。LC/MS：Rt 1.8min，MH+246。
中间体4
2-碘-N-(1-甲基乙基)-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
将4-氯-2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.3g)混悬于乙醇(20ml)中，加入异丙胺(360mg，Aldrich)和DIPEA(10mmol)处理，将混合物于80℃加热3h。将反应物浓缩至干，残留物采用二氧化硅柱色谱分离纯化，用乙酸乙酯/DCM梯度(0-100％)洗脱。合并适当级分并蒸发溶剂得到标题化合物(950mg)。LC/MS：Rt 3.88min，MH+456.9。
中间体5
2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
将4-氯-2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.3g)混悬于乙醇(20ml)中，加入2，2，2-三氟乙胺(600mg，Aldrich)和DIPEA(10mmol)处理，混合物于80℃加热6h。再加入2，2，2-三氟乙胺(2ml)和DIPEA(2ml)，于90℃继续加热18h。将反应物浓缩至干，残留物采用二氧化硅柱色谱分离纯化，用乙酸乙酯/DCM梯度(0-100％)洗脱。合并适当级分并蒸发溶剂得到标题化合物(1.21g)。LC/MS：Rt 3.80min，MH+496.9。
方法1
将4-氯-2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(310mg)混悬于乙醇(20ml)中，加入胺(2mmol)和DIPEA(3mmol)处理，混合物于80℃加热3h。将反应物浓缩至干，残留物采用二氧化硅柱色谱分离纯化，用乙酸乙酯/DCM梯度(0-100％)洗脱。合并适当级分并蒸发溶剂得到预期产物。
按方法1制备了下列化合物：
中间体8
N-乙基-2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
将4-氯-2-碘-7-[(4-甲苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(300mg)混悬于乙醇(5ml)中，加入乙胺(1ml，Aldrich)和DIPEA(1ml)处理，将混合物于80℃加热2h。使反应物浓缩至干，残留物采用二氧化硅柱(20g)色谱分离纯化，用乙酸乙酯/环己烷梯度(0-100％)洗脱。合并适当级分并蒸发溶剂得到标题化合物。LC/MS；Rt3.82min，MH+442.78。
方法2
吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺试剂，例如吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.1mmol，43mg)、4-氨基-N-甲基苯甲酰胺(29.8g，Asinex)、碳酸铯(96mg)、二(二亚苄叉基丙酮)钯(6mg，Acros)和2-二环己基膦基-2’-(N，N-二甲基胺基)联苯(6mg，Acros)混合于DMF(2.0ml)中。反应混合物于80℃加热3h。反应混合物冷却后通过Celite过滤，用DMF洗涤Celite，合并的滤液和洗液蒸发至干燥。残留物与甲醇钠溶液(2N，0.5ml)于80℃加热2h，冷却至室温。将溶液蒸发至干燥，残留物溶于DMSO中并采用MDAP纯化。将含产物的级分蒸发至于得到预期化合物。
按方法2制备了下列化合物：
方法3
将2-{[4-(氨羰基)苯基]氨基}-7-[(三氟甲基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基三氟甲磺酸酯(853mg)混悬于IPA(16ml)中，一份该混合物(1ml)用氨(0.15mmol)溶于IPA(1ml)和DIPEA(17μl)的溶液处理。反应液在80℃回流条件下搅拌过夜。将反应物浓缩，残留物溶于二噁烷(1ml)和氢氧化钠(2M，1ml)中，所得双相混合物在室温下剧烈搅拌约72h。反应液经盐酸(2N)中和后用乙酸乙酯(2ml)萃取。将有机相浓缩，残留物经MDAP纯化。将含产物的级分蒸发至干得到预期化合物。
按方法3制备了下列化合物：
方法4
将2-{[4-(氨羰基)苯基]氨基}-7-[(三氟甲基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基三氟甲磺酸酯(1190mg，60％纯度)混悬于IPA(17ml)中。一份该混合物(1ml)用氨(0.15mmol)溶于IPA(1ml)和DIPEA(17μl)的溶液处理。反应液在80℃回流条件下搅拌过夜。反应液在氮气流下浓缩，残留物溶于二噁烷(1ml)和氢氧化钠(2M，1ml)中，所得双相混合物在25℃下剧烈搅拌约72h。分离并浓缩二噁烷相。残留物经MDAP纯化。将适当级分蒸发干燥得到预期产物。
按方法4制备了下列化合物：
实施例12
4-({4-[(2，2-二氟丙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺三氟乙酸盐
将2-{[4-(氨羰基)苯基]氨基}-7-[(三氟甲基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基三氟甲磺酸酯(312mg)混悬于IPA(17ml)中。一份该混合物(1ml)用(2，2-二氟丙基)胺(14.3mg，Oakwood Products)溶于IPA(1ml)和DIPEA(17μl)的溶液处理。反应液在80℃回流条件下搅拌18h。将反应物浓缩，残留物溶于二噁烷(1ml)和氢氧化钠(2M，1ml)中，所得双相混合物于25℃剧烈搅拌约90h。分离并浓缩二噁烷相。残留物采用MDAP纯化。将适当级分蒸发干燥得到标题化合物。LC/MS；Rt 2.43min，MH+347。
实施例13
4-({4-[(3-甲基丁基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺三氟乙酸盐
将2-{[4-(氨羰基)苯基]氨基}-7-[(三氟甲基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基三氟甲磺酸酯(2.7g，不纯，约4.2mmol)混悬于IPA(42ml)中。一份该混合物(1ml)用(3-甲基丁基)胺(13.1mg，Aldrich)溶于IPA(1ml)和DIPEA(17μl)的溶液处理。反应液在80℃回流条件下搅拌约72h。将反应物浓缩(真空离心)，残留物溶于甲醇(1.5ml)中，用甲醇钠的甲醇溶液(0.5M，0.5ml)处理，所得溶液于80℃搅拌过夜。将反应物浓缩(真空离心)，残留物采用MDAP纯化。将含产物的级分蒸发干燥得到标题化合物(13.8mg)(纯化方法1)。LC/MS；Rt 2.63min，MH+339。
下列化合物按相同方法制备，并用上述纯化方法(纯化方法1)或纯化方法2(见下)纯化。
纯化方法2
在经甲醇钠脱保护后，向脱保护形式的转化不完全。将反应物浓缩，残留物溶于二噁烷(1ml)和氢氧化钠(2M，1ml)中。将反应物剧烈搅拌16h。分离并浓缩二噁烷相，残留物采用MDAP纯化。将适当级分蒸发干燥得到预期产物。
实施例19
4-({4-[(1-甲基乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺三氟乙酸盐
将2-碘-N-(1-甲基乙基)-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(45.8mg)、4-氨基苯甲酰胺(20.4mg，Aldrich)、碳酸铯(97.5mg)、2-二环己基膦基-2’-(N，N-二甲基氨基)联苯(5.8mg)和二(二亚苄叉基丙酮)钯(5.8mg)的混合物混悬于DMF(2ml)中，反应物在氮气中80℃搅拌4h。反应物通过Celite过滤，并浓缩滤出物。所得胶状物用4-氨基苯甲酰胺(20.4mg)、碳酸铯(130mg)、2-二环己基膦基-2’-(N，N-二甲基氨基)联苯(5.8mg)和二(二亚苄基丙酮)钯(5.8mg)溶于DMF(2ml)的溶液处理，反应物在氮气中80℃搅拌2h。反应物通过Celite过滤后浓缩。残留物溶于甲醇(1ml)中，用甲醇钠的甲醇溶液(0.5M，1ml)处理，于60℃搅拌过夜。将反应物浓缩，残留物采用MDAP纯化。将含产物的级分蒸发至干燥得到标题化合物(6.0mg)。LC/MS；Rt2.22min，MH+311。
方法5
将2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(992mg)混悬于DMF(20ml)中。一份该混合物(1ml)用苯胺(0.2mmol)的DMF溶液(1ml)、碳酸铯(97.5mg)、2-二环己基膦基-2’-(N，N-二甲基氨基)联苯(5.8mg)和二(二亚苄叉基丙酮)钯(5.8mg)进行处理。反应物在氮气中80℃搅拌3h。反应物通过Celite过滤后浓缩(真空离心)，残留物溶于甲醇(1ml)中，和甲醇钠的甲醇溶液(0.5M，500μl)处理，于60℃搅拌过夜。将反应物浓缩，并采用MDAP纯化。将适当级分浓缩至干得到标题化合物。
按方法5制备了以下化合物：
纯化：
(3)MDAP
(4)通过连续2次MDAP纯化
实施例22
N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
将4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)-N-丙基苯甲酰胺(550mg)和碳酸钾(414mg)溶于甲醇/水(4∶1，12.5ml)，在回流下加热5h。反应物冷却后用水稀释，通过过滤分离沉淀物。固体用乙醚洗涤，得到白色固体标题化合物(315mg)。LC/MS；Rt 3.10min，MH+393。
中间体9
4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)-N-丙基苯甲酰胺
将2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-胺(500mg)、4-氨基-N-丙基苯甲酰胺(267mg，Buttpark Screening Library)、三(二亚苄基丙酮)二钯(68mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’，-三异丙基联苯(30mg)和碳酸钾(222mg)在叔丁醇(10ml)中的混合物在氮气中回流加热过夜。反应物冷却后在乙酸乙酯和水之间分配，有机相用水和盐水洗涤。将有机相真空干燥(疏水性过滤管)并干燥。残留物经二氧化硅柱(50g)色谱分离纯化，用乙酸乙酯/环己烷梯度(1∶15-7∶1)洗脱。将产物级分蒸发溶剂后得到标题化合物(556mg)。LC/MS；Rt 3.5min，MH+547。
中间体10
2-氯-N-(1-甲基乙基)-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
向2，4-二氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(70g)在IPA(900ml)中的混悬液中加入异丙胺(70ml)。将混合物于100℃加热30min，然后真空浓缩。残留物在水(1.51)和乙酸乙酯(300ml)之间分配。分层，用乙酸乙酯(2×300ml)进一步萃取水相。合并的有机萃取物在硫酸钠上干燥并真空蒸发。残留物蒸发去乙醚后得到金色泡沫状标题混合物(72.2g)。NMR[CDCl3]；δH8.10，(2H，d)，7.43，(1H，d)，7.33，(2H，d)，6.39，(1H，d)，4.97，(1H，br s)，4.37，(1H，br m)，2.41，(3H，s)，1.27，(6H，d)。LC/MS；Rt 3.59min，MH+365，367。
中间体11
2，4-二氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
在氮气氛下，在20min的时间内，向4-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-胺(86.8g)、氯三甲硅烷(570ml)和氯化苄基三乙铵(127.2g)溶于DCM(1.11)的溶液中滴加亚硝酸叔丁酯(52ml)。搅拌15min后将混合物冷却至约20℃，在冰浴冷却混合物的同时小心加水(1.51)处理。分层，水相用DCM(2×500ml)进一步萃取。合并有机萃取物，干燥(硫酸钠)，并真空蒸发。残留物与乙醚一起研磨，得到浅黄色固体标题化合物(70.6g)。NMR[CDCl3]；δH 8.12，(2H，d)，7.76，(1H，d)，7.37，(2H，d)，6.68，(1H，d)，2.44，(3H，s)。LC/MS；Rt 3.54min，MH+342，344，346。
实施例23
N-甲基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
N-甲基-4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺(385mg)和甲醇钠的甲醇溶液(0.5M，5ml)在80℃下加热1.5h。将反应物冷却至室温过夜，真空蒸发甲醇，残留物与水研磨并过滤。固体残留物吸附于二氧化硅上，上样到二氧化硅柱(20g)，并用乙酸乙酯/环己烷梯度(30-100％)洗脱。将产物级分在真空下干燥，残留物与乙醚/乙酸乙酯研磨得到白色固体标题化合物(115mg)。LC/MS；Rt 2.65min，MH+365。
中间体12
N-甲基-4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(404mg)、4-氨基-N-甲基苯甲酰胺(180mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(91.6mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’，-三异丙基联苯(47.3mg)和碳酸钾(193mg)在叔丁醇(18ml)中的混合物除气后在氮气中80℃加热过夜。冷却的反应物用乙酸乙酯稀释，上样到SCX-2SPE(50g)上，用乙酸乙酯和甲醇洗柱，产物用甲醇/0.880氨洗脱。蒸发溶剂后得到浅褐色泡沫状标题化合物(385mg)。LC/MS；Rt 3.52min，MH+519。
中间体13
4-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-胺
将氢化钠(在油中的60％分散液，2.2g)在氮气下加入到搅拌冷却(冰浴)的4-氯-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-胺(8.0g，WO2004024082)溶于DMF(120ml)的溶液中。15min后，在10min的时间内加入4-甲苯磺酰氯(11g)溶于DMF(50ml)的溶液。混合物搅拌25min，倒入10％氯化铵溶液(800ml)中，再用乙酸乙酯萃取(3×200ml)。合并的萃取物用水(3×200ml)洗涤、干燥(硫酸钠)并真空蒸发，得到黄色固体标题化合物(15g)。LC/MS；Rt 3.34min，MH+325。
中间体14
4-氯-2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
将亚硝酸叔丁酯(23ml)在室温下加入到搅拌的4-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-胺(15mg)、碘化亚铜(10.6g)、碘(13.7g)和二碘甲烷(44ml)在THF(250ml)中的混合物中。将混合物在20min的时间内加热至80℃，保持该温度45min。将冷却的反应混合物倒入亚硫酸钠水溶液(1000ml)中，用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。合并的萃取物用水(2×300ml)洗涤、干燥(硫酸钠)并蒸发溶剂。残留物经二氧化硅(800g)快速色谱纯化，用环己烷/乙醚(3∶1)洗脱。将适当级分蒸发后得到灰白色固体标题化合物(8.5g)。LC/MS；Rt 3.74min，MH+435。
中间体15
2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
将2，4-二氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(4.0g)、2，2，2-三氟乙胺(1.49g，Aldrich)、DIPEA(3.23ml)和乙醇(100ml)的混合液在氮气中于95℃加热过夜。将反应混合液浓缩，残留物溶于乙酸乙酯(500ml)中，用水(5×300ml)洗涤，浓缩有机相。残留物溶于乙醇(100ml)中，加入2，2，2-三氟乙胺(1.49g，Aldrich)、DIPEA(3.23ml)，混合液在氮气中95℃加热过夜。将混合液浓缩，残留物溶于乙酸乙酯(450ml)中，用水(5×200ml)洗涤.有机相干燥(疏水性过滤管)并浓缩，得到标题化合物(4.43g)。LC/MS；Rt 3.64min，MH+405。
实施例24
N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
向4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)-N-丙基苯甲酰胺(101g)中加入甲醇(1500ml)，随后加入水(500ml)和固体碳酸钾(76.5g)。最初的溶液在加热回流时迅速变混。回流5h后冷却并过滤反应物。分离的白色固体用水(约1.51)洗涤并在滤纸上吸干。该固体混悬于含5％(体积)甲醇的水(500ml)中，再另加500ml甲醇/水，将混合液充分搅拌1h，真空过滤，用甲醇/水(250ml)洗涤。将固体吸干，在40℃高真空下进一步干燥，得到预期的白色固体产物(60.3g)。LC/MS；Rt 2.90min，MH+393。NMR[D6-DMSO]δH 11.22，(1H，s)，9.10，(1H，s)，8.19，(1H，t)，7.93-7.86，(3H，m)，7.73，(2H，d)，6.89，(1H，m)，6.51，(1H，m)，4.38，(2H，m)，3.20(2H，q)，1.53，(2H，m)，0.89，(3H，t)。
中间体16
4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)-N-丙基苯甲酰胺
向4-氨基-N-丙基苯甲酰胺(36.7g)中加入2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(69.4g)、固体碳酸钾(34.4g)和氮净化的叔丁醇(1700ml)。该混合物用氮气净化10min，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(3.14g)和2-二环己基膦基-2’，4’，6’，-三异丙基联苯(3.28g)。混合物在氮气中避光85℃加热过夜。冷却反应物，在乙酸乙酯和水之间分配，有机相用水和盐水洗涤、干燥并真空蒸发，得到深红色油/泡沫状物。该粗产物溶于温乙酸乙酯(500ml)中，逐步加入环己烷(500ml)。所得固体通过真空过滤分离，分离的浅褐色固体用环己烷洗涤。粘性固体溶于乙酸乙酯中，蒸发后得到固体，该固体采用二氧化硅(1.5kg)色谱分离纯化，用乙酸乙酯/DCM梯度(0-50％)洗脱。蒸发适当级分的溶剂得到预期白色泡沫状产物(70.76g)。LC/MS；Rt 3.54min，MH+547。NMR；[D6-DMSO]δH 9.51，(1H，s)，8.34-8.29，(2H，m)，7.99-7.96，(4H，m)，7.84，(2H，d)，7.37-7.36，(3H，m)，6.85，(1H，d)，4.36，(2H，m)，3.23(2H，q)，2.31，(3H，s)，1.55，(2H，m)，0.90，(3H，t)加乙酸乙酯。
中间体17
2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
向混悬于乙醇(1900ml)中的2，4-二氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(140g)中加入DIPEA(105.9g)，随后加入三氟乙胺(81.2g)。在水冷凝器顶部采用干冰冷凝器，将混合液加热回流。4.5h后加入三氟乙胺(33ml)。反应物于75℃搅拌过夜。稍微冷却后加入三氟乙胺(33ml)，继续加热。23.5h后冷却反应物，蒸发掉挥发性物。所得油状物溶于乙酸乙酯(1100ml)中，用水和盐水洗涤，干燥并蒸发得到褐色油状物，使其凝固过夜。将该微蜡状固体压碎，在乙醚(350ml)中充分搅拌15min。加入己烷(300ml)，将浆液在真空下过滤。固体用乙醚/己烷(1∶1，300ml)洗涤并吸干，接着在高真空下干燥，得到预期的浅黄色-浅褐色固体产物(111.4g)。LC/MS；Rt 3.56min，MH+405。NMR；[D6-DMSO]δH 8.90，(1H，m)，7.96，(2H，d)，7.65，(1H，d)，7.46(2H，d)，6.96，(1H，d)，4.30，(2H，m)，2.37，(3H，s)。
第一轮收获物的滤液蒸发后再按上述步骤操作(两遍)，得到第二轮产物(27.59g)。
中间体18
4-氨基-N-丙基苯甲酰胺
向碳载钯(10％，50％潮湿，4g)中先后加入乙酸乙酯(100ml)和硝基酰胺(100g，Butt Park)的乙酸乙酯(1600ml)溶液，混合物在室温和大气压下氢化过夜。过滤反应物，用乙酸乙酯洗涤催化剂，使滤液和洗液干燥(硫酸镁)、过滤并蒸发，得到预期的浅金色油状物，其进一步真空干燥1h。LC/MS；Rt 1.85min，MH+179。NMR；[D6-DMSO]δH 7.96，(1H，t)，7.56，(2H，d)，6.52，(2H，d)，5.56，(2H，br s)，3.15，(2H，q)，1.49，(2H，m)，0.86，(3H，t)。
实施例25
N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺4-甲基苯磺酸盐
将N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺(61.5g)混悬于干燥THF(1050ml)中，混合物在40℃氮气下搅拌。逐滴加入对甲苯磺酸一水合物(29.8g，Aldrich)在干燥THF(185ml)中的溶液。加入前50ml后，向混合物中种入少量N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺4-甲基苯磺酸盐。剩余的对甲苯磺酸在大约45min的时间内滴加，保持反应温度为大约40℃。滴加完毕后将反应混合物在40℃下再搅拌1h，在2h的时间内冷却至0℃，0℃维持0.5h，接着在0.5h的时间内升温至环境温度。滤出结晶，用THF(500ml)洗涤，在40℃下真空干燥过夜。结晶研磨后再次于40℃下干燥过夜，得到预期产物(87.5g)。NMR；[D6-DMSO]δH11.71，(1H，s)，9.78，(1H，br s)，8.94，(1H，br s)，8.35，(1H，t)，7.83，(2H，d)，7.74，(2H，d)，7.51，(2H，d)，7.13，(2H，d)，7.02，(1H，s)，6.68，(1H，s)，4.41，(2H，m)，3.31(2H，q)，2.29，(3H，s)，1.53，(2H，m)，0.89，(3H，t)。
实施例26
4-({4-[(1-甲基乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
向4-({4-[(1-甲基乙基)氨基]-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺(50.52g)的甲醇(1250ml)溶液中加入无水碳酸钾(45g)和水(250ml)。将混悬液加热至回流。4.75h后冷却反应物，真空蒸发甲醇，水性残留物用乙酸乙酯(11，然后3×100ml)萃取。合并的有机物用盐水洗涤、干燥(硫酸镁)、过滤并蒸发溶剂后得到褐色泡沫状物。采用二氧化硅(1kg)色谱分离纯化，用乙酸乙酯洗脱，然后用百分含量逐渐增加的甲醇(0-5％)洗脱，蒸发适当级分的溶剂后得到浅绿色泡沫状的预期产物(32.3g)。LC/MS；Rt 2.21min，MH+311。
该物质加温溶于丙酮(400ml)中，缓慢加入水直至混合物保持浑浊(总体积约为1.31)。摩擦引发结晶，混合物不加塞放置3天，在冰浴中冷却约2h，并通过过滤分离结晶物。固体用少量水洗涤，在40℃高真空下干燥过夜，得到浅黄色固体(27.8g)。LC/MS；Rt2.25min，MH+311。NMR；[D6-DMSO]δH 11.03，(1H，s)，8.93，(1H，s)，7.91，(2H，d)，7.74，(2H，d)，7.72，(1H，br s)，7.04，(2H，br s)，6.80，(1H，s)，6.47，(1H，s)，4.44，(1H，m)，1.25，(6H，d)和丙酮。
中间体19
4-({4-[(1-甲基乙基)氨基]-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
向2-氯-N-(1-甲基乙基)-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(45g)中加入4-氨基苯甲酰胺(20.1g)、氮净化的叔丁醇(1125ml)、无水碳酸钾(24.7g)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(2.35g)和三(二亚苄基丙酮)二钯(2.26g)。混合物在氮气中避光加热至回流。5.5h后混合物稍微冷却，蒸发溶剂得到红褐色油/泡沫状物。残留物用水(1000ml)稀释，用乙酸乙酯萃取。合并的有机物用盐水洗涤、干燥(硫酸镁)、通过Celite过滤，蒸发溶剂得到红褐色油/泡沫状物。该物质经二氧化硅(1600g)色谱柱分离纯化、用DCM/乙酸乙酯(2∶1-1∶1，最后为2∶3)洗脱。蒸发适当级分的溶剂后得到预期的浅粉红色-浅褐色固体化合物(42.1g)。LC/MS；Rt 3.32min，MH+465。NMR；[D6-DMSO]δH 9.31，(1H，s)，7.97，(4H，d)，7.83，(2H，d)，7.80，(1H，br s)，7.47，(1H，d)，7.38，(2H，d)，7.28，(1H，d)，7.11，(1H，br s)，6.80，(1H，d)，4.37，(1H，m)，2.31，(3H，s)，1.21，(6H，d)和乙酸乙酯。
实施例27
4-({4-[(1，1-二甲基乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基苯甲酰胺三氟乙酸盐
N-(1，1-二甲基乙基)-2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.8mmol)溶于DMF(16ml)中。一份该溶液(2ml)与二(二亚苄基丙酮)钯(10mol％，Aldrich)、2-二环己基膦基-2’-(N，N-二甲基氨基)联苯(15mol％)、碳酸铯(0.3mmol)和4-氨基-N-甲基苯甲酰胺(0.15mmol)混合。反应物于80℃加热2h，冷却、通过Celite过滤并浓缩。反应物溶于甲醇(1.5ml)中，用甲醇钠的甲醇溶液(0.5M，500μl)处理，于70℃搅拌2h，室温放置过夜。反应物再加热5h，浓缩并采用MDAP纯化。将含产物的级分蒸发干燥得到标题化合物(3mg)。LC/MS；Rt 2.58min，MH+339。
中间体20
N-(1，1-二甲基乙基)-2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
溶于乙醇(10ml)的4-氯-2-碘-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(500mg)用叔丁胺(610μl)和DIPEA(410μl)处理。反应物于80℃搅拌6.5h，在室温下放置过周末。加入叔丁胺(100μl)，反应物于80℃加热2h。反应物浓缩后，经二氧化硅柱(50g)色谱分离纯化，在30min内用乙酸乙酯/环己烷梯度(0-100％)洗脱。合并适当级分并干燥后得到标题化合物(0.4g)。LC/MS；Rt 4.01min，MH+471。
实施例28
N-(1-甲基乙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
溶于DMF(0.75ml)的4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸(60mg)、TBTU(42mg)和DIPEA(0.062ml)置于加塞烧瓶中室温搅拌。30min后加入异丙胺(0.101ml)，反应物搅拌1h。使反应物真空干燥，残留物与甲醇共沸。将溶于甲醇的残留物上样到用甲醇预洗过的预处理的SCX-2柱上，用2N氨的甲醇溶液洗脱产物。使基本级分干燥，残留物溶于水(0.5ml)和甲醇(1.5ml)中，加入碳酸钾(41mg)。混合物于85℃搅拌6h。加入碳酸钾(20mg)，反应物于85℃继续搅拌15h。过滤反应物，用水和乙醚洗涤固体，真空干燥，得到灰白色标题化合物(17mg)。LC/MS；MH+393，Rt 3.03min。
中间体21
4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸
溶于DCM(6ml)的4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸1，1-二甲基乙基酯(150mg)用TFA(1ml)处理，室温搅拌1.75h。真空蒸发掉挥发性物，固体残留物溶于乙酸乙酯(25ml)中。溶液用水(2×25ml)洗涤并干燥(疏水性过滤管)。溶剂蒸发后得到绿色固体标题化合物(130mg)。LC/MS；MH+506，Rt 3.72min。
中间体22
4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸1，1-二甲基乙基酯
将2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(200mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(11.8mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(45.2mg)、碳酸钾(95.6mg)和叔丁基4-氨基苯甲酸酯(114.5mg，Fluka)在叔丁醇(5ml)中的混合物进行除气。将容器密封，于120℃微波照射3h。使反应混合物干燥，残留物混悬于乙酸乙酯中。将混悬液上样到SCX-2柱(10g，先后用甲醇、乙酸乙酯预处理)上，用乙酸乙酯、甲醇和2N氨的甲醇溶液洗脱。浓缩氨级分，重溶于甲醇中，吸附于Florisil上。经二氧化硅柱(100g)色谱分离纯化，用乙酸乙酯/环己烷梯度(0-5％)洗脱。合并适当的级分、干燥、与乙醚共沸，得到黄色固体标题化合物。LC/MS；MH+562，Rt 4.00min。
实施例29
N-(2-甲基丙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
DMF(0.75ml)中的4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸(60mg)、TBTU(42mg)和DIPEA(0.062ml)置于加塞烧瓶中室温搅拌。30min后加入异丙胺(0.117ml)，将混合物搅拌1h。真空蒸发溶剂，残留物与甲醇共沸。将甲醇中的残留物上样到预处理的SCX-2柱(5g)上，该柱用甲醇洗涤，用2N氨的甲醇溶液洗脱产物。使基本级分干燥，残留物溶于水(0.5ml)和甲醇(1.5ml)中。加入碳酸钾(69mg)，混合物于85℃下搅拌7h。过滤混合物，用水和乙醚洗涤固体。重复洗涤，将乙醚级分与固体混合，进行干燥。残留固体溶于温甲醇中，上样到SCX-2柱(5g，用甲醇预处理)上。该柱用甲醇洗涤，用2N氨的甲醇溶液洗脱产物。氨级分干燥后得到白色固体标题化合物(23.2mg)。LC/MS；MH+407，Rt 3.09min。
实施例30
N-乙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
溶于甲醇(10ml)和水(5ml)的N-乙基-4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺(306mg)和碳酸钾(794mg)在85℃下搅拌2.5h。使反应物冷却至环境温度，真空蒸发掉溶剂。固体混悬于甲醇中，过滤，将滤液上样到SCX-2柱(20g，用甲醇预处理)上。该柱用甲醇洗涤，用2N氨的甲醇溶液洗脱产物。合并氨级分并干燥。残留固体溶于甲醇中并吸附于Florisil上。该物质经二氧化硅柱(50g)色谱分离纯化，用DCM/甲醇梯度(0-25％)洗脱30min。在洗脱的级分之一中形成沉淀，通过过滤分离，并用DCM洗涤。真空干燥后，得到白色/粉红色固体标题化合物(12mg)。LC/MS；MH+379，Rt 2.81min。
中间体23
N-乙基-4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
溶于叔丁醇(12ml)的2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(350mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(21mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(48mg)、碳酸钾(167mg)和4-(乙基氨甲酰基)苯胺(170mg，Butt Park)在氮气下80℃加热过夜。将反应物从热源上移开，将内含物转移至微波管中。使混合物除气，加入三(二苄叉丙酮)二钯(0)(48mg)。混合物在密封管中105℃微波照射2h。反应混合物在氮气中除气，再以微波105℃加热1.5h。真空浓缩反应混合物，残留固体混悬于乙酸乙酯中。通过Celite过滤后，滤液预吸附于Florisil上，经二氧化硅柱(100g)色谱分离纯化，用乙酸乙酯/环己烷梯度(0-100％)洗脱60min。合并适当级分并蒸发得到黄色油状标题化合物(306mg)。LC/MS；MH+533，Rt 3.61min。
实施例31
N，N-二甲基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
溶于IPA(3ml)的N，N-二甲基-4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺(114mg)用氢氧化钠水溶液(2N，0.64ml)处理，在80℃下加热6h。使温度降至70℃，搅拌反应物过夜。加热22h后使反应混合物冷却至室温，真空挥发溶剂。残留物混悬于乙酸乙酯中，上样到SCX-2柱(5g，用甲醇和乙酸乙酯预处理)上。该柱用乙酸乙酯、甲醇洗涤，用2N氨的甲醇溶液洗脱产物。蒸发氨级分的溶剂，残留油状物溶于甲醇中并吸附于Florisil上。该物质经二氧化硅柱(20g)色谱分离纯化、用环己烷中的乙酸乙酯/甲醇(1∶1)梯度(10-100％)洗脱。合并适当级分并蒸发溶剂，得到褐色固体。与乙醚研磨后在氮气中干燥，得到黄色/褐色固体标题化合物(37.2mg)。LC/MS；MH+379，Rt 2.64min。
中间体24
N，N-二甲基-4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
溶于叔丁醇(2ml)的2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(117mg)、4-(N，N-二甲基氨甲酰基)苯胺(57mg，Apollo Scientific Ltd)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(16mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(6.9mg)和碳酸钾(55.9mg)在密封管中通过微波照射于120℃加热1h。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过Celite垫过滤。将滤液上样到SCX-2柱(5g，用甲醇和乙酸乙酯预处理)上。该柱经乙酸乙酯和甲醇洗涤，用2N氨的甲醇溶液洗脱产物。使氨级分真空干燥，从甲醇吸附于Florisil上。经二氧化硅柱(20g)色谱分离纯化，用乙酸乙酯/环己烷梯度(25-100％)洗脱。合并适当级分，蒸发溶剂并与乙醚共沸，得到玻璃状固体标题化合物(114mg)。LC/MS；MH+533，Rt3.41min。
实施例32
N-(环丙基甲基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
将溶于叔丁醇(1.5ml)中的2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(100mg)、4-氨基-N-(环丙基甲基)苯甲酰胺盐酸盐(62.8mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(13.6mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(5.9mg)和碳酸钾(91.8mg)搅拌并置于密封管内120℃微波照射1h。混合物于150℃再加热1h。向反应液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(7mg)和碳酸钾(17mg)。管密封后，混合物在微波中150℃加热45min。反应混合物用乙酸乙酯(2ml)稀释并通过Celite过滤。将滤液上样到SCX-2柱(5g，用甲醇和乙酸乙酯预处理)上。该柱经乙酸乙酯和甲醇洗涤，用2N氨的甲醇溶液洗脱产物。使氨级分减压干燥，残留物溶于IPA(1.5ml)中。溶液用氢氧化钠水溶液(2N，1ml)处理，混合物在80℃下搅拌16h。在氮气流中蒸发溶剂，将残留物混悬于甲醇中。将混悬液上样到SCX-2柱(2g，用甲醇预处理)上。保留在柱顶部的固体在氮气下干燥，得到灰白色固体标题化合物(33mg)。LC/MS；MH+405，Rt 2.89min。
中间体25
4-氨基-N-(环丙基甲基)苯甲酰胺盐酸盐
N-(环丙基甲基)-4-硝基苯甲酰胺(23.8g)溶于乙醇中，在碳载钯(10％，1.8g)上进行氢化反应。将反应物过滤，真空蒸发乙醇，残留胶状物在乙酸乙酯和碳酸氢钠溶液之间分配。使有机相真空干燥，加入盐酸的二噁烷溶液(4N)。通过过滤分离白色固体，用乙醚洗涤，真空干燥，得到标题化合物(15.5g)。NMR；[D6-DMSO]δH 9-8，(3H，bm)，7.81，(2H，d)，7.11，(2H，d)，3.12，(2H，m)，1.01，(1H，m)，0.42，(2H，m)，0.22，(2H，m)。
中间体26
N-(环丙基甲基)-4-硝基苯甲酰胺
4-硝基苯甲酰氯(20g，Aldrich)溶于DCM(500ml)中，加入三乙胺(16.5ml)。加入环丙基甲胺(21ml，Aldrich)(产热)，反应物在氮气和室温下搅拌过夜。蒸发挥发物并真空干燥残留物，得到标题化合物。LC/MS；MH+221，Rt 2.7min。
实施例33
N2-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]苯基}-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
将溶于叔丁醇(1.5ml)的2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(100mg)、1-(4-氨基苯甲酰基)-4-甲基哌嗪(65.1mg，Butt Park Ltd)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(13.6mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(5.9mg)和碳酸钾(47.8mg)搅拌并置于密封管内120℃微波照射1h。混合物于150℃再加热30min。反应混合物用乙酸乙酯(2ml)稀释并通过Celite过滤。将滤液上样到SCX-2柱(5g，用甲醇和乙酸乙酯预处理)上。该柱经乙酸乙酯和甲醇洗涤，用2N氨的甲醇溶液洗脱产物。使氨级分真空干燥，残留物溶于IPA(1.5ml)中。溶液用氢氧化钠水溶液(2N，1ml)处理，于80℃搅拌16h。在氮气流中蒸发溶剂，残留物混悬于甲醇中。将混悬液上样到SCX-2柱(2g，用甲醇预处理)上。用甲醇洗脱产物并真空浓缩。残留物经MDAP纯化，合并适当级分并蒸发。样品从甲醇吸附于Florisil上，并上样到二氧化硅柱(20g)上。采用环己烷中的乙酸乙酯/甲醇(1∶1)梯度(10-100％)进行洗脱。合并适当级分并蒸发溶剂，得到标题化合物。LC/MS；MH+434，Rt 2.03min。
方法6：
将无水DMF(3.75ml)中的4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸(3.75ml)用DIPEA(0.78ml)和TBTU(530mg)处理，在室温下放置30min。将一份(0.302ml)该溶液加入到氨(0.20mM)在DMF(0.25ml)中的溶液中。反应混合物在氮气和室温下放置过夜。通过真空离心使混合物干燥，残留物经MDAP纯化。适当级分经真空离心蒸发后得到预期产物。
按方法6制备了下列化合物：
中间体27
4-{[4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸
将4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸乙酯(2.5g)混悬于乙醇(60ml)中，用氢氧化钠水溶液(2N，14.1ml)处理。混合物在80℃下搅拌3h，冷却至环境温度。反应混合物在冰浴中搅拌的同时用冰醋酸酸化。通过过滤分离沉淀物，溶于丙酮中，过滤并蒸发丙酮。残留物从乙酸乙酯中加数滴丙酮和水重结晶。沉淀的固体经过滤分离，得到标题化合物(1.0g)。LC/MS；MH+351.98，Rt 2.87min。
中间体28
4-({7-[(4-甲苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸乙酯
溶于叔丁醇(40ml)的2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(7.5g)、4-氨基苯甲酸乙酯(3.37g，Aldrich)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(510mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(142mg)和碳酸钾(3.59g)在氮气下110℃加热过夜。真空蒸发溶剂，残留物溶于乙酸乙酯中。溶液通过Celite过滤，干燥滤液。残留物从乙醇中结晶，通过过滤分离结晶物。该物质溶于煮沸的乙醇中，溶液首先冷却至室温，接着冷却至大约4℃5h。从所得结晶物中去除乙醇，然后在烧结物(sinter)上进一步干燥，得到标题化合物(4.7g)。LC/MS；MH+533.98，Rt3.84min。
方法7
将溶于无水DMF(6ml)的4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸(842mg)用TBTU(847.2mg)和DIPEA(1.7ml)处理，室温放置30min。将一份(0.32ml)该溶液加入到氨(0.20mM)在DMF(0.25ml)中的溶液中。反应混合物室温放置3.5天。再加入TBTU(32mg)和DIPEA(0.017ml)，反应物室温放置过夜。反应物经MDAP纯化，合并适当级分，蒸发，得到预期产物。
按方法7制备了下列化合物：
实施例43
4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
将4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺(229mg)溶于甲醇钠的乙醇溶液(0.5M，3ml)中，溶液在氮气下80℃加热约1h，然后室温放置过夜。反应物用水(约5ml)稀释，通过过滤分离沉淀物。用水洗涤固体，在烧结物上吸干，进一步在45℃下真空干燥，得到膏状固体预期产物(133mg)。LC/MS；MH+350.93，Rt 2.51min。
中间体29
4-({7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
将2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(200mg)、4-氨基苯甲酰胺(81mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(12mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(6mg)和碳酸钾(100mg)在叔丁醇(7.5ml)中混合，将混合物除气，在氮气下85℃加热大约20h。向反应物中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(12mg)和2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(6mg)，继续在85℃下加热3h，接着在95℃下加热约20h。反应物冷却后用乙酸乙酯稀释，吸附于二氧化硅上，并且上样到二氧化硅柱(20g)上。该柱经乙酸乙酯/环己烷梯度(0-100％)洗脱，合并适当级分，真空蒸发溶剂，得到预期浅黄色固体产物(230mg)。NMR；[D6-DMSO]δH 9.51，(1H，s)，8.32，(1H，t)，7.98-7.93，(4H，m)，7.86-7.84，(3H，m)，7.40-7.37，(3H，m)，7.15，(1H，bs)，6.85，(1H，d)，4.35，(2H，m)，2.32，(3H，s)。
实施例44
4-{[4-(甲基氨基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基]氨基}-N-丙基苯甲酰胺
将2-氯-N-甲基-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(100mg)、4-氨基-N-丙基苯甲酰胺(98mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(50.4mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(39.1mg)、碳酸钾(152mg)和叔丁醇(10ml)混合，置于密封管中用微波140℃加热40min。反应物用乙醇稀释并通过Celite过滤，使滤液在氮气流中干燥。残留物溶于DCM/甲醇中，上样到SCX-2柱(10g，用甲醇预处理)上。该柱经甲醇和2M氨的甲醇溶液洗脱。在氮气流下蒸发甲醇化氨级分的溶剂。残留物经二氧化硅柱(20g)色谱分离纯化，用甲醇/DCM(0-15％)+1％三乙胺梯度洗脱30min，得到标题化合物(41mg)。LC/MS；Rt 2.32min，MH+325。
中间体30
2-氯-N-甲基-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
将2，4-二氯-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(400mg，Pharma Lab ProductList)和甲胺的乙醇溶液(33％，10ml)置于密封管中用微波80℃加热10min。真空蒸发挥发物，残留固体混悬于水中，搅拌5min。通过过滤分离固体，在40℃下真空干燥过夜，得到标题化合物(311mg)。LC/MS；Rt 2.22min，MH+183，185。
实施例45
N2-{4-[(1，1-二氧化-4-硫代吗啉基)羰基]苯基}-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
将4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸(0.42g)混悬于DMF(3ml)中。混悬液先后用DIPEA(0.84ml)和TBTU(0.48g)处理，放置20min。硫代吗啉1，1-二氧化物(27.0mg，Syntech)混悬于DMF(0.25ml)中，加入十二分之一(约0.25ml)的活化酯混合物。反应混合物置于室温和氮气下。反应混合物经MDAP纯化，合并适当级分，通过真空离心蒸发溶剂。残留物溶于少量甲醇中，通过氨丙基柱(1g，用甲醇预处理)过滤。该柱经甲醇洗涤，真空蒸发合并的滤液和洗液中的溶剂，得到预期产物。LC/MS；MH+468.84，Rt 2.60min。
实施例46
N-乙基-N-甲基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
溶于DMF(0.5ml)的4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酸(35.1mg)和TBTU(35.3mg)用DIPEA(0.053ml)处理，混合物在室温下剧烈搅拌30min。加入N-乙基甲胺(0.086ml)，搅拌混合物1.25h。加入DIPEA(0.026ml)和TBTU(15.0mg)，搅拌混合物30min。接着加入N-乙基甲胺(0.042ml)，继续搅拌混合物1.25h。真空蒸发溶剂，残留物溶于少量甲醇中，上样到SCX-2柱(1g，用甲醇预处理)上。该柱和甲醇洗脱、接着用2M氨的甲醇溶液洗脱。收集适当级分，真空蒸发溶剂。残留物经MDAP进一步纯化，合并适当级分并真空蒸发溶剂后得到标题化合物(12mg)。LC/MS；Rt 2.76min，MH+393。
实施例47
N-(2，2，2-三氟乙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
将4-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)苯甲酰胺(64.7mg)、2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(100mg)、碳酸钾(47.8mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(5.9mg)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(13.6mg)在叔丁醇(2.5ml)中的搅拌混合物在密封瓶中微波照射加热120℃1h。混合物冷却至室温，上样到SCX-2SPE柱(20g)上。该柱经甲醇洗涤后，用2M氨的甲醇溶液洗脱产物。收集氨级分，真空蒸发溶剂。残留物用IPA(3ml)和氢氧化钠水溶液(2M，3ml)处理，将混合物于60℃加热过夜。减压蒸发溶剂，将残留物溶于甲醇中，溶液上样到SCX-2柱(20g)上。该柱经甲醇洗涤后，用2M氨的甲醇溶液洗脱产物。合并基本级分，真空蒸发溶剂。残留物经MDAP纯化，在合并适当级分并真空蒸发溶剂后，得到标题化合物(60mg)。LC/MS；Rt2.99min，MH+432.86。
中间体31
4-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)苯甲酰胺
将4-硝基-N-(2，2，2-三氟乙基)苯甲酰胺(550mg)在乙醇(30ml)中的溶液在碳载钯(10％，55mg)上氢化(1个大气压)过夜。混合物通过Celite垫过滤，用乙醇洗涤残留物。滤液再次通过Celite过滤，用乙醇洗涤Celite。真空蒸发合并的滤液和洗液中的溶剂，得到白色固体标题化合物(290mg)。LC/MS；Rt 1.91min，MH+219。
中间体32
4-硝基-N-(2，2，2-三氟乙基)苯甲酰胺
将4-硝基苯甲酰氯(750mg)和碳酸钾(606.6mg)在DCM(40ml)中的混合物用2，2，2-三氟乙胺(0.482ml)处理，该混合物在氮气下室温搅拌2h 40min。加入碳酸钾(606.6mg)和2，2，2-三氟乙胺(0.482ml)，继续在室温下搅拌混合物1.5h。加入水(40ml)，剧烈搅拌混合物15min。使溶液分层，分离有机相(疏水性过滤管)，真空蒸发溶剂，得到白色固体标题化合物(550mg)。LC/MS；Rt 2.63min，[M-H]-247。
实施例48
N2-[4-(1-哌啶基羰基)苯基]-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
将4-(1-哌啶基羰基)苯胺(100mg，Fluorochem)、2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(165mg)、碳酸钾(79mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(9.8mg)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(22.5mg)在叔丁醇(2.5ml)中的混合物在密封管中通过微波照射120℃加热1h。混合物冷却至室温，真空蒸发溶剂。将残留物溶解于少量甲醇中，并上样到SCX-2柱(5g，用甲醇预处理)上。该柱经甲醇洗涤，用2M氨的甲醇溶液洗脱产物。收集适当级分，真空蒸发溶剂。残留物溶于少量甲醇中，吸附于Florisil上，经二氧化硅柱(70g)色谱分离纯化，用乙酸乙酯/环己烷梯度(0-100％)洗脱60min。合并适当级分，真空蒸发溶剂，残留物溶于少量乙醚，真空蒸发溶剂，得到白色固体(194mg)。
固体用碳酸钾(340mg)、甲醇(2ml)和水(1ml)处理，将混合物在80℃下加热过夜。加入氢氧化钠水溶液(2N，1ml)并加热至80℃持续4.5h。混合物冷却至室温，在乙酸乙酯和水之间分配。水相用乙酸乙酯萃取(3×20ml)。合并有机相并真空蒸发。向残留物中加入甲醇钠的甲醇溶液(0.5M，3ml)，该搅拌的混合物于80℃加热3h。真空蒸发溶剂，残留物溶于最少量的甲醇中，将溶液上样到SCX-2柱(10g，用甲醇预处理)上。该柱经甲醇洗涤后，用2M氨的甲醇溶液洗脱产物。合并适当级分，真空蒸发溶剂。残留物经MDAP纯化，在合并适当级分并真空蒸发溶剂后，得到标题化合物(14mg)。LC/MS；Rt 2.96min，MH+419。
实施例49
N2-[4-(1-吡咯烷基羰基)苯基]-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
将4-(1-吡咯烷基羰基)苯胺(56.4mg)、2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(100mg)、碳酸钾(48mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(6mg)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(14mg)在叔丁醇(2.5ml)中的搅拌的混合物在密封瓶中通过微波照射120℃加热1h。混合物冷却至室温，加入碳酸钾(24mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(3mg)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(7mg)。该搅拌的混合物在密封管中通过微波照射120℃加热1h。将混合物冷却至室温，上样到SCX-2柱(20g)上。该柱经乙酸乙酯洗涤后，用2M氨的甲醇溶液洗脱产物。收集适当级分，真空蒸发溶剂。残留物混悬于IPA(3ml)中，用氢氧化钠水溶液(2M，3ml)处理，混合物于60℃加热过夜。真空蒸发溶剂，残留物溶于乙酸乙酯中，用盐酸洗涤两次。使有机相真空干燥。残留物经MDAP纯化，合并适当级分并真空蒸发溶剂，得到标题化合物(17mg)。LC/MS；Rt 2.83min，MH+405。
中间体33
4-(1-吡咯烷基羰基)苯胺
将1-[(4-硝基苯基)羰基]吡咯烷(500mg)在乙醇(30ml)中的溶液在碳载钯(5％，50mg)上氢化(1个大气压)过夜。混合物通过Celite过滤，用乙醇洗涤催化剂两次。真空蒸发溶剂，得到白色固体标题化合物(402mg)。LC/MS；Rt 1.86min，MH+191。
中间体34
1-[(4-硝基苯基)羰基]吡咯烷
将4-硝基苯甲酰氯(750mg)在DCM(50ml)中的混合物用吡咯烷(1.66ml)处理，混合物在氮气下室温搅拌5h。加入盐酸(1M，50ml)，剧烈搅拌混合物20min。待分层后，先后用碳酸氢钠溶液(50ml)和水洗涤有机相，真空干燥，得到标题化合物(500mg)。LC/MS；Rt 2.54min，MH+221。
实施例50
N2-[4-(1-吖丁啶基羰基)苯基]-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
将4-(1-吖丁啶基羰基)苯胺(52.2mg)、2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(100mg)、碳酸钾(47.8mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(6mg)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(13.6mg)在叔丁醇(2.5ml)中的搅拌混合物在密封瓶中通过微波照射120℃加热1h。混合物冷却至室温，上样到SCX-2SPE柱(20g)上。该柱经甲醇、乙酸乙酯洗涤后，用2M氨的甲醇溶液洗脱产物。收集基本级分，真空蒸发溶剂。残留物混悬于IPA(3ml)中，用氢氧化钠水溶液(2M，3ml)处理，混合物于60℃加热过夜。减压蒸发溶剂。将DCM加入到残留物中，通过过滤分离不溶性物质。将固体溶于甲醇(30ml)中，真空蒸发溶剂。残留物溶于氯仿中，将溶液上样到氨丙基SPE(10g)上，用氯仿、乙酸乙酯和甲醇洗脱。合并氯仿级分，真空蒸发溶剂。残留物经MDAP纯化，在合并适当级分并真空蒸发溶剂后，得到标题化合物(6mg)。LC/MS；Rt 2.73min，MH+391。
中间体35
4-(1-吖丁啶基羰基)苯胺
1-[(4-硝基苯基)羰基]吖丁啶(463mg)在乙醇(30ml)中的溶液在碳载钯(46.3mg)上氢化过夜。混合物通过Celite垫过滤，用乙醇洗涤Celite垫两次。真空蒸发溶剂，得到黄色固体标题化合物(340mg)。LC/MS；Rt 1.72min，MH+177。
中间体36
1-[(4-硝基苯基)羰基]吖丁啶
将4-硝基苯甲酰氯(750mg)和碳酸钾(607mg)在DCM(50ml)中的混合物用吖丁啶(0.408ml)处理，混合物在氮气下室温搅拌4h 20min。加入碳酸钾(606mg)和吖丁啶(0.408ml)，混合物继续在室温下搅拌40min。加入水(50ml)，剧烈搅拌混合物15min。待分层后分离有机相(疏水性过滤管)。真空蒸发溶剂，得到黄色固体标题化合物(463mg)。LC/MS；Rt 2.41min，MH+207。
实施例51
N-甲基-N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
将4-氨基-N-甲基-N-丙基甲酰胺(57mg)、2-氯-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(100mg)、碳酸钾(48mg)、2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯(6mg)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(14mg)在叔丁醇(2.5ml)中的搅拌混合物在密封瓶中通过微波照射于120℃加热1h。反应物冷却后上样到预处理的SCX-2柱(20g)上。该柱经甲醇洗涤后，用2M氨的甲醇溶液洗脱产物。收集氨级分，真空蒸发溶剂。残留物经碳酸钾(423.5mg)、甲醇(2ml)和水(1ml)处理，搅拌混合物并在80℃下加热过夜。加入水(5ml)，通过过滤分离沉淀物。滤液经乙酸乙酯(30ml)萃取，干燥有机相(疏水性过滤管)并真空蒸发溶剂。残留物和沉淀物溶于甲醇中，合并后真空干燥。所得残留物经MDAP纯化，在合并适当级分并真空蒸发溶剂后，得到标题化合物(19mg)。LC/MS；Rt 2.91min，MH+406.9。
中间体37
4-氨基-N-甲基-N-丙基甲酰胺
将N-甲基-4-硝基-N-丙基苯甲酰胺(330mg)在乙醇(15ml)中的溶液在碳载钯(10％，15.3mg)上氢化(1个大气压)过夜。混合物通过Celite垫过滤，用乙醇洗涤Celite垫两次。真空蒸发溶剂得到标题化合物(260mg)。LC/MS；Rt 2.02min，MH+193。
中间体38
N-甲基-4-硝基-N-丙基苯甲酰胺
将4-硝基苯甲酰氯(750mg)、N-甲基丙胺(0.622ml)和碳酸钾(836mg)在DCM(50ml)中的混合物在氮气下室温搅拌过夜。加入盐酸(1M，50ml)，搅拌混合物15min，相分离后，用水(100ml)洗涤有机相并干燥(疏水性过滤管)。真空蒸发溶剂得到残留物，将其溶于乙酸乙酯(25ml)中，用碳酸氢钠溶液(50ml)洗涤。通过疏水性过滤管收集有机相，真空蒸发溶剂，得到标题化合物(330mg)。LC/MS；Rt 2.58min，MH+223。
实施例52
N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺4-甲基苯磺酸盐
将N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺(350mg)经加热和超声处理溶于THF(7ml)中。对甲苯磺酸水合物(163mg)经加热溶于THF(1ml)中，将所得溶液加入到N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺中。混合物温和升温得到溶液，接着使之冷却至室温。混合物重新加热至40℃后使之冷却，重复加热冷却循环(×2)。混合物置于室温过周末，经过滤分离白色固体，用THF(1ml)洗涤并在烧结物上吸干。固体进一步在大约40℃下真空干燥2h，得到白色固体标题化合物(425mg)。NMR；[D6-DMSO]δH11.46，(1H，b)，9.44，(1H，b)，8.47，(1H，b)，8.28，(1H，t)，7.79，(4H，s)，7.48，(2H，d)，7.11，(2H，d)，6.96，(1H，m)，6.60，(1H，m)，4.40，(2H，m)，3.21(2H，q)，2.29，(3H，s)，1.53，(2H，m)，0.89，(3H，t)。
生物学试验方法
本发明的化合物按照以下试验方法进行体外活性测定：
1.酶测定-时间分辨荧光共振能量转移激酶测定
重组人Syk表达为His标签蛋白*。采用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)测定方法检测Syk活性。
方法A-将3μl在pH 7.4HEPES(终浓度40μM)中的含生物素化肽生物素-AAAEEIYGEI(终浓度0.5μM)、ATP(终浓度30μM)和MgCl2(终浓度10mM)的底物试剂加入到Greiner低容积黑色384孔板中含有0.2μl不同浓度的化合物或DMSO载体(终浓度3.3％)的孔中。加入3μl Syk(终浓度20nM)在pH 7.4HEPES(终浓度40mM)中的溶液引发反应。反应物在室温下孵育40min，然后加入3μl在40mM HEPES pH 7.4，0.03％BSA中含有60mM EDTA、150mMNaCl、50nM链亲和素APC(Prozyme，San Leandro，California，USA)、0.5nM W-1024螯合铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Wallac OY，Turku，Finland)的显示试剂终止反应。将反应物继续室温孵育60min。采用BMG Rubystar读板仪(BMG LabTechnologies Ltd，Aylesbury，UK)以特定665nm能量转移信号与620nm铕参比信号的比值检测生物素-AAAEEIYGEI的磷酸化程度。
方法B-在16.6mM MgCl2、8.3mM ATP存在下Syk在室温下预活化30min，接着用40mM Hepes pH 7.4，0.01％BSA稀释至4nM。将3μl在40mM HEPES pH 7.4，0.01％BSA中含有生物素化肽生物素-AAAEEIYGEI(终浓度0.5μM)、ATP(终浓度30μM)和MgCl2(终浓度10mM)的底物试剂加入到Greiner低容积黑色384孔板的含有0.1μl不同浓度的化合物或DMSO载体(终浓度1.7％)的孔中。加入3μl稀释的Syk(终浓度2nM)引发反应。反应物室温孵育60min，然后加入3μl在40mM HEPES pH 7.4，0.03％BSA中含有60mMEDTA、150mM NaCl、50nM链亲和素APC(Prozyme，SanLeandro，California，USA)、0.5nM W-1024螯合铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Wallac OY，Turku，Finland)的显示试剂终止反应。反应物继续室温孵育45min。采用BMG Rubystar读板仪(BMGLabTechnologies Ltd，Aylesbury，UK)以特定665nm能量转移信号与620nm铕参比信号的比值检测生物素-AAAEEIYGEI的磷酸化程度。
本发明的化合物按照该方法或相似的时间分辨荧光共振能量转移激酶测定法进行了测定，得到小于10μM的IC50值。
*
重组人全长脾酪氨酸激酶(Syk)Syk的制备
采用杆状病毒系统(Invitrogen，Paisley，Scotland)表达在N末端上带有6His标签的全长人Syk。采用杜恩斯匀浆器破裂细胞，离心去除碎片，裂解物与NiNTA Superflow(Qiagen，Crawley，UK)接触。将NiNTA填充到柱中，采用10倍柱体积的各缓冲液(20mMTris pH8.0、300mM NaCl、10mM βMcEtOH、10％甘油)、缓冲液+1M NaCl、缓冲液+20mM咪唑和缓冲液+300mM咪唑进行洗脱。合并300mM咪唑级分，采用G25M(Amersham Biosciences，Buckinghamshire，UK)将缓冲液替换为20mM MES pH 6.0、20mMNaCl、10mM βMcEtOH和10％甘油。将缓冲液交换的6His-Syk上样到Sourcel5S柱(Amersham Biosciences，Buckinghamshire，UK)上，采用50倍柱体积以上的NaCl梯度0-500mM洗脱。合并含6His-Syk的级分，经超滤浓缩。采用肽质谱指纹图谱和完整LC-MS确证6His-Syk的身份。
2.全细胞测定-cFms测定
测定原理
小鼠成纤维细胞系NIH-3T3的细胞用cFms-SYK嵌合体稳定转染。加入配体(MCSF)后导致嵌合体的二聚化，引起SYK激酶域的自磷酸化。细胞裂解后采用ELISA检测磷酸化的SYK。
MCSF刺激cFms-SYK细胞，方法A
细胞以1×105/孔的密度接种于胶原1包被的96孔组织培养板中体积为200μl的生长培养基(DMEM，含10％热灭活的胎牛血清、1％L-谷氨酰胺、400μg/ml遗传霉素和400μg/ml zeocin)中。在37℃、10％CO2下孵育20h后，去除细胞上清液，换为200μl含1％青霉素/链霉素的DMEM(无血清DMEM)。细胞在上述条件下孵育1小时。去除培养基，加入50μl适当稀释的化合物溶液，培养板继续孵育1小时。细胞用25μl MCSF(终浓度0.66μg/ml)在37℃下刺激20min。去除上清液后，细胞用冷PBS洗涤，再用100μl裂解缓冲液4℃裂解4h。
MCSF刺激cFms-SYK细胞，方法B
细胞以1×105/孔的密度接种于胶原1包被的96孔组织培养板中体积为200μl的生长培养基(DMEM，含10％热灭活的胎牛血清、1％L-谷氨酰胺、400μg/ml遗传霉素和400μg/ml zeocin)中。在37℃、10％CO2下孵育20h后，去除细胞上清液，加入50μl适当稀释的化合物溶液，培养板孵育1小时。细胞用25μl MCSF(终浓度0.66μg/ml)在37℃下刺激20min。去除上清液后，细胞用冷PBS洗涤，再用100μl裂解缓冲液4℃裂解4h。
cFms ELISA
将85μl细胞裂解液转移到包被了山羊抗人M-CSF R捕获抗体的96孔ELISA板中，于4℃孵育16小时。板经洗涤后，加入生物素化的抗磷酸酪氨酸检测抗体(100μl/孔)，在室温下2h。去除该溶液后，换为100μl链亲和素-HRP保持30min。采用100μl TMB底物显示捕获的磷酸化SYK。以50μl 1M硫酸终止反应，于450nm处检测吸光度。
化合物的准备
化合物配制为在DMSO中的10mM储液，并且应用连续9次5倍稀释在DMSO中配制系列稀释液。该系列稀释液用无血清DMEM以1∶333进一步稀释，得到1×10-5至1.54×10-11M的试验浓度范围。化合物稀释液采用Biomek 2000或Biomek Nx自动化机器人移液系统配制。
3.B细胞增殖测定
背景
在该测定中观测的B细胞群体为幼稚成熟的表达IgM/IgD的细胞群体。它们至少占纯化B细胞群体的70％(其余为转为记忆型B细胞的同种型)，也是在抗IgM刺激下唯一发生增殖的细胞。
抗IgM通过Syk依赖的B细胞受体引起信号发生。细胞增殖为B细胞信号发生的功能性检测指标，可通过观测氚化甲基胸苷向细胞中的掺入进行测定。
实验步骤
纯化的人扁桃体B细胞以浓度1.25×106ml重悬于Buckleys*培养基中。
将160μl重悬在Buckley培养基中的细胞加入96孔板的化合物和对照孔中。对照孔位于96孔板的第11、12列。背景孔位于第12列，加入20μl 10μM对照以提供适当的背景对照。将20μl 1％DMSO加入第11列孔中作为刺激对照。
化合物滴定位于第1-10列。每块板上三种化合物一式两份进行，A行和B行用于对照化合物滴定。
测定中DMSO的终浓度为0.1％。细胞放置45min，45min后向96孔板的前11个孔加入增殖刺激物，向第12列加入20μl培养基。抗人IgM的多克隆山羊抗血清F(ab’)2片段以终浓度15μg/ml使用，来刺激细胞(Biosource.目录号：AMI 4601)。
氚化甲基胸苷以每孔1μCi的浓度加入细胞中(Amersham，TRK758)。放射活性在初始刺激65小时后加入，于细胞上保持6至8小时。经甲基胸苷脉冲后，细胞采用Skatron96孔细胞收集器收集于玻璃纤维垫上。干燥后立即置于Wallac 1450 Microbeta闪烁计数器中计数。
结果下载为XL文件，IC50基于活性确定。
*Buckleys培养基：450ml Iscoves(I 3390)、50ml FCS、2.5gBSA、5ml青霉素/链霉素、5ml谷氨酰胺(200mM)、500μl Apo转铁蛋白(50mg/ml)Sigma(T1147)、100μl牛胰岛素(10mg/ml)Sigma(I 1882)。
化合物的准备
化合物配制为在DMSO中的10mM储液，并且用连续9次3倍稀释在DMSO中配制系列稀释液。该系列稀释液用Buckleys培养基以1∶100进一步稀释，得到100μM-5nM的试验浓度范围。化合物以20μl一式两份加样于96孔板中，每个试验化合物得到2个IC50值。每块板均包含对照化合物作为内标。
4.LAD2测定
测定原理
LAD2为干细胞因子(SCF)依赖的人肥大细胞系，是由NIH从肥大细胞肉瘤/白血病患者的骨髓抽出物建立的。LAD2细胞与人CD34+来源的肥大细胞相似，可表达功能性FcεRI。FcεRI在有IL-4、SCF和IgE存在时上调，然后细胞结合的IgE的交联导致脱颗粒，后者可通过己糖胺酶释放进行测定。
引发LAD2细胞上调FcεRI
LAD2细胞以1×105/ml重悬于完全stem pro-34SFM(Gibco货号10640-019)培养基中，该培养基含有Stem P ro-34营养添加剂(1∶40)、谷氨酰胺(2mM)、青霉素(100μg/ml)、链霉素(100μg/ml)，以及另外的人重组SCF(100ng/ml；R & Dsystems)、人重组白介素4(6ng/ml；R & D Systems)和IgE(100μg/ml；Calbiochem)添加物。细胞于37℃、5％CO2的潮湿气体中培养5天。
化合物的准备
化合物从100％DMSO中的2mM储液开始滴定，得到连续9次1∶3稀释(V 96孔板Nunc；Biomek 2000)。从该主板取3μl置于子板(平底96孔Nunc Biomek Fx)中，再用含2mM谷氨酰胺的RPMI1∶40稀释，将20μl稀释化合物转移到Greiner细胞板中。因此化合物在恒定0.05％DMSO中的终浓度范围是1×10-5M至5×10-10M。对照孔用0.05％DMSO处理。
用抗IgE激活LAD2细胞，方法A
将引发的LAD2细胞离心(300g，5min)，去除上清，细胞沉淀物以1×104细胞/ml重悬于添加有谷氨酰胺(2mM)的RPMI中。再次离心(300g，5min)后，将细胞重悬于含谷氨酰胺(2mM)的新鲜RPMI中，调整密度为2.85×105/ml，移至含20μl稀释化合物(按以上详述准备)的无菌V孔板中(70μl/孔；Greiner)。将细胞孵育1h(37℃、5％CO2的潮湿气体中)，接着采用亚最大浓度的抗IgE(体积10μl，得到最终测定稀释度为1∶2700；Sigma)激活细胞。孵育40min后(37℃、5％CO2的潮湿气体中)，将板离心(1200g，10min，4℃)，取出上清液进行己糖胺酶测定。细胞沉淀物用100μl/孔triton-X(0.5％于2mM谷氨酰胺RPMI中)37℃裂解30min。
用抗IgE激活LAD2细胞，方法B
将引发的LAD2细胞离心(400g，5min)，去除上清，细胞沉淀物以1×104细胞/ml重悬于添加有谷氨酰胺(2mM)的RPMI中。再次离心(400g，5min)后，细胞重悬于含谷氨酰胺(2mM)的新鲜RPMI中，调整密度为5.7×105/ml，移至含20μl稀释化合物(按以上详述准备)的无菌V孔板中(70μl/孔；Greiner)。细胞然后孵育1h(37℃、5％CO2的潮湿气体中)，接着采用亚最大浓度的抗IgE(体积10μl，得到最终测定稀释度为1∶2700；Sigma)激活细胞。孵育40min后(37℃、5％CO2的潮湿气体中)，将板离心(1200g，10min，4℃)，取出上清液进行己糖胺酶测定。细胞沉淀物用100μl/孔triton-X(0.5％于2mM谷氨酰胺RPMI中)37℃裂解30min。
β己糖胺酶测定
β己糖胺酶活性通过将4-甲基伞形基N-乙酰基-ε-D氨基葡萄糖苷(Sigma)转化为荧光产物进行测定。
上清液或裂解物(25μl)与等体积的4-甲基伞形基N-乙酰基-ε-D氨基葡萄糖苷(500μM，溶于0.2M柠檬酸钠缓冲液，pH 4.5)在黑色96孔板(Nunc)中37℃孵育1h。加入pH 9 Trizma(90μl)终止反应，采用激发波长356nm和发射波长450nm测定荧光产物(TecanSafire)。
有利的筛选策略包括测定1(酶测定(pKi))、测定2和测定3(B细胞增殖)或测定4(LAD2)。
由该说明书和权利要求书组成的本申请可以用作任何后续申请的优先权的基础。后续申请的权利要求可涉及本文所述的任意特征或特征的组合。其可以采用产品、组合物、方法或用途权利要求的形式，可通过非限制性实例的方式包括以下权利要求。
Claims (23)
1.式(I)的化合物或其盐或溶剂化物：
其中：
R1为H或C1-3烷基；
R2为C1-6烷基、C1-6卤代烷基，其中每个环烷基可被一个或多个独立选自C1-3烷基或卤素的取代基取代；
R3为基团：
其中R和T均为氢，S为CONR8R9；
R8和R9独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基、苯基(任选地被一个或多个独立选自卤素、-C1-3烷基、CN或SO2CF3的取代基取代)、C1-3亚烷基苯基、C1-3亚烷基OC1-3烷基；或
R8和R9与相连的N一起形成4、5或6元杂环基团，该杂环基团任选地含有另一选自O、S或N的杂原子，并且各个碳原子任选地被可达两个C1-6烷基或卤素取代、或被＝O或C1-6烷氧基取代，任选地氮原子被C1-6烷基、COC1-3烷基或COOC1-6烷基取代，任选地硫原子被＝O或(＝O)2取代；且
R4为H或-C1-3烷基。
2.如权利要求1所述的化合物，其中R1表示H或甲基。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中R1表示H。
4.如权利要求1-3任一项所述的化合物，其中R2表示C1-3烷基或C1-3卤代烷基。
5.如权利要求1-4任一项所述的化合物，其中R2表示C1-3烷基。
6.如权利要求1-5任一项所述的化合物，其中R2表示C1-3卤代烷基。
7.如权利要求1-6任一项所述的化合物，其中R2表示三氟乙基。
8.如权利要求1-7任一项所述的化合物，其中R4为H或CH3。
9.如权利要求1-8任一项所述的化合物，其中R4为H。
10.如权利要求1-9任一项所述的化合物，其中：
R1表示H；
R2为三氟乙基；
R3为基团：
其中R和T均为氢，S为CONR8R9；且
R4为H。
11.如权利要求1-10任一项所述的化合物，其中R8为氢，R9为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，优选为正丙基；或
R8为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，R9为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，或
R8和R9与相连的N共同形成4、5或6元杂环基团，该杂环基团任选地含有另一选自O、S或N的杂原子，并且任选地任意氮原子被C1-6烷基取代，任意硫原子被＝O或(＝O)2取代。
12.如权利要求1-11任一项所述的化合物，其为式(IA)的化合物或其盐或溶剂化物：
其中：
R1表示H；
R2为C1-3烷基或C1-3卤代烷基；
R3为基团：
其中R和T均为氢，S为CONR8R9；
R8为氢，R9为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，优选为正丙基；或
R8为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，R9为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、C1-3亚烷基C3-7环烷基，或
R8和R9与相连的N共同形成4、5或6元杂环基团，该杂环基团任选地含有另一选自O、S或N的杂原子，并且任选地任意氮原子被C1-6烷基取代，任意硫原子被＝O或(＝O)2取代，且
R4为H。
13.如权利要求1所述的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物，选自：
4-{[4-(乙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基]氨基}-N-甲基苯甲酰胺；
N-甲基-4-[(4-{[(1R)-1-甲基丙基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺；
N-甲基-4-{[4-[(2-甲基丙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-甲基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-甲基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[(2，2-二氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[(3，3，3-三氟丙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[(1，1-二甲基乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[(2-氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[(1-乙基丙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[(3-甲基丁基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-{[4-(乙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基]氨基}苯甲酰胺；
4-{[4-(丙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基]氨基}苯甲酰胺；
4-({4-[(2，2-二甲基丙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-[(4-{[(1R)-1-甲基丙基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基]苯甲酰胺；
4-({4-[(2-甲基丙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-{[4-(甲基氨基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基]氨基}苯甲酰胺；
N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺4-甲基苯磺酸盐；
4-({4-[(1-甲基乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N2-{4-[(1，1-二氧化-4-硫代吗啉基)羰基]苯基}-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺；
N，N-二乙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-[(1S)-1-环己基乙基]-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-(1-乙基-1-甲基丙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-(2，2-二甲基丙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-甲基-N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-环丁基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-(1，1-二甲基乙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-甲基-N-(1-甲基乙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-环戊基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-环己基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N2-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]苯基}-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺；
N-(环丙基甲基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-(2，2，2-三氟乙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N，N-二甲基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N2-[4-(1-哌啶基羰基)苯基]-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺；
N2-[4-(1-吡咯烷基羰基)苯基]-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺；
N2-[4-(1-吖丁啶基羰基)苯基]-N4-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺；
N-乙基-N-甲基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-乙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-(2-甲基丙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
N-(1-甲基乙基)-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[(1，1-二甲基乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基苯甲酰胺；和
4-({4-[(2，2-二氟丙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺。
14.如权利要求1所述的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物，选自：
N-丙基-4-({4-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺。
15.一种药物组合物，其包含如权利要求1-14任一项所述的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物，和一种或多种药物可接受的载体、稀释剂和赋形剂。
16.用于治疗的如权利要求1-14任一项所述的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物。
17.用于治疗由异常Syk活性介导的疾病或病症的如权利要求1-14任一项所述的式(I)的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物。
18.一种治疗哺乳动物中由异常Syk活性介导的疾病或病症的方法，包括给所述哺乳动物施用如权利要求1-14任一项所述的式(I)的化合物或其盐或溶剂化物。
19.如权利要求18所述的方法，其中由异常Syk活性介导的疾病或病症为类风湿性关节炎。
20.如权利要求18所述的方法，其中由异常Syk活性介导的疾病或病症为变应性鼻炎。
21.如权利要求18所述的方法，其中由异常Syk活性介导的疾病或病症为慢性阻塞性肺病(COPD)。
22.如权利要求18所述的方法，其中由异常Syk活性介导的疾病或病症为成人呼吸窘迫综合征(ARDs)。
23.如权利要求1-14任一项所述的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗由异常Syk活性介导的疾病或病症的药物中的用途。
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102858767A (zh) * | 2009-12-17 | 2013-01-02 | 默沙东公司 | 作为syk抑制剂的氨基嘧啶 |
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2008
- 2008-04-07 ZA ZA200803030A patent/ZA200803030B/xx unknown
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104744476A (zh) * | 2008-12-08 | 2015-07-01 | 吉利德康涅狄格股份有限公司 | 咪唑并吡嗪syk抑制剂 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20081015 |